Controle da antracnose em maracujá-amarelo por derivados de capim-limão (Cymbopogon citratus)

The yellow passion fruit is a major fruit crop in Brazil. The post-harvest preservation of yellow passion fruits has deserved great attention since the fruit is perishable and subject to a fast deterioration and incidence of pathogenic microorganisms. The aim of this work was to evaluate the in vitro antifungal activity of lemon grass derivatives on the mycelial growth, sporulation, spore germination and length of germ tubes of Colletotrichum gloeosporioides and the effect of essential oil, extract, hydrolate and citral lemon grass (Cymbopogon citratus) for control of anthracnose on the yellow passion fruits. The treatments for the in vitro assay were essential oil (OE) (0.5, 1, 5, 10, 15, 25, 50 and 60 µL mL-1), autoclaved crude aqueous extract (EAA), filtered crude aqueous extract (EAF), hydrolate and citral (1, 5, 10, 20 and 25%). For the in vivo assay the fruits were treated with: OE (0.025, 0.05 and 0.1%), hydrolate (5 and 10%), EAA (10%) and citral (0.1%). Distilled water was used as a control. The anthracnose incidence and severity were evaluated every three days. The in vitro test verified that the 4 evaluated derivatives of lemon grass inhibited the mycelial growth, sporulation and spore germination. The higher the concentration of the derivatives, the higher the inhibition, which for the mycelia growth reached 55.8; 54.5; 30.0 and 19.9% for OE, EAF, EAA and hydrolate, respectively. In vivo tests showed that the OE 0.1% and EAA 10% promoted a reduction in the anthracnose severity.

O maracujá-amareloé uma das principais frutíferas cultivadas no Brasil. A conservação pós-colheita de frutos de maracujá tem merecido grande atenção visto que o fruto é perecível e está sujeito à rápida deterioração e incidência de micro-organismos patogênicos. Este trabalho teve por objetivo avaliar a atividade antifúngica in vitro de derivados de capim-limão (Cymbopogon citratus) sobre o crescimento micelial, esporulação, germinação de esporos e tamanho de tubos germinativos de Colletotrichum gloeosporioides e in vivo no controle da antracnose sobre frutos de maracujá-amarelo em pós-colheita. Os tratamentos para o ensaio in vitro foram óleo essencial (OE) (0,5, 1, 5, 10, 15, 25, 50 e 60 µL mL-1), extrato bruto aquoso autoclavado (EAA), extrato bruto aquoso filtrado (EAF), hidrolato e citral (1, 5, 10, 20 e 25%) e no ensaio in vivo, os frutos foram tratados com: OE (0,025; 0,05 e 0,1%), hidrolato (5 e 10%), EAA (10%) e citral (0,1%). Água destilada foi utilizada como testemunha. Foram avaliadas a incidência e a severidade da antracnose a cada três dias. Os quatro derivados de capim-limão inibiram o crescimento micelial, a esporulação e a germinação de esporos, sendo que maiores valores de inibição foram obtidos nas maiores concentrações testadas e, no crescimento micelial, atingiram 55,8; 54,5; 30,0 e 19,9% para OE, EAF, EAA e hidrolato, respectivamente. Na avaliação in vivo, OE 0,1% e EAA 10% promoveram significativa redução na severidade da antracnose.

Controle da antracnose em maracujá-amarelo por derivados de capim-limão (Cymbopogon citratus) / Control of anthracnose in yellow passion fruit by lemon grass (Cymbopogon citratus) derivatives

O maracujá-amarelo é uma das principais frutíferas cultivadas no Brasil. A conservação póscolheita de frutos de maracujá tem merecido grande atenção visto que o fruto é perecível e está sujeito à rápida deterioração e incidência de micro-organismos patogênicos. Este trabalho teve por objetivo avaliar a atividade antifúngica in vitro de derivados de capim-limão (Cymbopogon citratus) sobre o crescimento micelial, esporulação, germinação de esporos e tamanho de tubos germinativos de Colletotrichum gloeosporioides e in vivo no controle da antracnose sobre frutos de maracujá-amarelo em pós-colheita. Os tratamentos para o ensaio in vitro foram óleo essencial (OE) (0,5, 1, 5, 10, 15, 25, 50 e 60 μL mL-1), extrato bruto aquoso autoclavado (EAA), extrato bruto aquoso filtrado (EAF), hidrolato e citral (1, 5, 10, 20 e 25%) e no ensaio in vivo, os frutos foram tratados com: OE (0,025; 0,05 e 0,1%), hidrolato (5 e 10%), EAA (10%) e citral (0,1%). Água destilada foi utilizada como testemunha. Foram avaliadas a incidência e a severidade da antracnose a cada três dias. Os quatro derivados de capim-limão inibiram o crescimento micelial, a esporulação e a germinação de esporos, sendo que maiores valores de inibição foram obtidos nas maiores concentrações testadas e, no crescimento micelial, atingiram 55,8; 54,5; 30,0 e 19,9% para OE, EAF, EAA e hidrolato, respectivamente. Na avaliação in vivo, OE 0,1% e EAA 10% promoveram significativa redução na severidade da antracnose.

CONTROL OF ANTHRACNOSE IN YELLOW PASSION FRUIT BY LEMON GRASS (CYMBOPOGON CITRATUS) DERIVATIVES. The yellow passion fruit is a major fruit crop in Brazil. The post-harvest preservation of yellow passion fruits has deserved great attention since the fruit is perishable and subject to a fast deterioration and incidence of pathogenic microorganisms. The aim of this work was to evaluate the in vitro antifungal activity of lemon grass derivatives on the mycelial growth, sporulation, spore germination and length of germ tubes of Colletotrichum gloeosporioides and the effect of essential oil, extract, hydrolate and citral lemon grass (Cymbopogon citratus) for control of anthracnose on the yellow passion fruits. The treatments for the in vitro assay were essential oil (OE) (0.5, 1, 5, 10, 15, 25, 50 and 60 μL mL-1), autoclaved crude aqueous extract (EAA), filtered crude aqueous extract (EAF), hydrolate and citral (1, 5, 10, 20 and 25%). For the in vivo assay the fruits were treated with: OE (0.025, 0.05 and 0.1%), hydrolate (5 and 10%), EAA (10%) and citral (0.1%). Distilled water was used as a control. The anthracnose incidence and severity were evaluated every three days. The in vitro test verified that the 4 evaluated derivatives of lemon grass inhibited the mycelial growth, sporulation and spore germination. The higher the concentration of the derivatives, the higher the inhibition, which for the mycelia growth reached 55.8; 54.5; 30.0 and 19.9% for OE, EAF, EAA and hydrolate, respectively. In vivo tests showed that the OE 0.1% and EAA 10% promoted a reduction in the anthracnose severity.

Controle da antracnose em maracujá-amarelo por derivados de capim-limão (Cymbopogon citratus) / Control of anthracnose in yellow passion fruit by lemon grass (Cymbopogon citratus) derivatives

O maracujá-amarelo é uma das principais frutíferas cultivadas no Brasil. A conservação póscolheita de frutos de maracujá tem merecido grande atenção visto que o fruto é perecível e está sujeito à rápida deterioração e incidência de micro-organismos patogênicos. Este trabalho teve por objetivo avaliar a atividade antifúngica in vitro de derivados de capim-limão (Cymbopogon citratus) sobre o crescimento micelial, esporulação, germinação de esporos e tamanho de tubos germinativos de Colletotrichum gloeosporioides e in vivo no controle da antracnose sobre frutos de maracujá-amarelo em pós-colheita. Os tratamentos para o ensaio in vitro foram óleo essencial (OE) (0,5, 1, 5, 10, 15, 25, 50 e 60 μL mL-1), extrato bruto aquoso autoclavado (EAA), extrato bruto aquoso filtrado (EAF), hidrolato e citral (1, 5, 10, 20 e 25%) e no ensaio in vivo, os frutos foram tratados com: OE (0,025; 0,05 e 0,1%), hidrolato (5 e 10%), EAA (10%) e citral (0,1%). Água destilada foi utilizada como testemunha. Foram avaliadas a incidência e a severidade da antracnose a cada três dias. Os quatro derivados de capim-limão inibiram o crescimento micelial, a esporulação e a germinação de esporos, sendo que maiores valores de inibição foram obtidos nas maiores concentrações testadas e, no crescimento micelial, atingiram 55,8; 54,5; 30,0 e 19,9% para OE, EAF, EAA e hidrolato, respectivamente. Na avaliação in vivo, OE 0,1% e EAA 10% promoveram significativa redução na severidade da antracnose. (AU)

CONTROL OF ANTHRACNOSE IN YELLOW PASSION FRUIT BY LEMON GRASS (CYMBOPOGON CITRATUS) DERIVATIVES. The yellow passion fruit is a major fruit crop in Brazil. The post-harvest preservation of yellow passion fruits has deserved great attention since the fruit is perishable and subject to a fast deterioration and incidence of pathogenic microorganisms. The aim of this work was to evaluate the in vitro antifungal activity of lemon grass derivatives on the mycelial growth, sporulation, spore germination and length of germ tubes of Colletotrichum gloeosporioides and the effect of essential oil, extract, hydrolate and citral lemon grass (Cymbopogon citratus) for control of anthracnose on the yellow passion fruits. The treatments for the in vitro assay were essential oil (OE) (0.5, 1, 5, 10, 15, 25, 50 and 60 μL mL-1), autoclaved crude aqueous extract (EAA), filtered crude aqueous extract (EAF), hydrolate and citral (1, 5, 10, 20 and 25%). For the in vivo assay the fruits were treated with: OE (0.025, 0.05 and 0.1%), hydrolate (5 and 10%), EAA (10%) and citral (0.1%). Distilled water was used as a control. The anthracnose incidence and severity were evaluated every three days. The in vitro test verified that the 4 evaluated derivatives of lemon grass inhibited the mycelial growth, sporulation and spore germination. The higher the concentration of the derivatives, the higher the inhibition, which for the mycelia growth reached 55.8; 54.5; 30.0 and 19.9% for OE, EAF, EAA and hydrolate, respectively. In vivo tests showed that the OE 0.1% and EAA 10% promoted a reduction in the anthracnose severity. (AU)

Avaliação do potencial da planta Adiantum capillus-veneris (L) no controle de fitopatógenos / Evaluation of the potential of the medicinal plant Adiantum capillus veneris (L) for the control of phytopathogens

O uso de compostos secundários de plantas medicinais, com propriedades antimicrobianas, pode ser uma alternativa para o controle de fitopatógenos. Diante disso, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de derivados obtidos da planta Adiantum capillus-veneris (avenca) contra fungos e bactérias fitopatogênicos. Os derivados, obtidos do pó de folhas de avenca secas ao ar, foram preparados por infusão, maceração e decocção, autoclavados ou não, nas concentrações de 0,1%, 0,25%, 0,5%, 1%, 1,25%, 2,5%, 5%, 10% e 20%. Foram avaliadas a germinação de esporos dos fungos Phakopsora euvitis e Pseudocercospora vitis, o crescimento micelial dos fungos Colletotrichum musae e Sclerotium rolfsii e a multiplicação das bactérias Erwinia sp. e Bacillus subtilis. O extrato obtido por maceração não autoclavado foi o que apresentou maior efeito sobre P. euvitis e P. vitis com reduções de 75% e 99% na germinação de esporos na concentração de 20%, respectivamente. O menor crescimento micelial de C. musae e S. rolfsii foi obtido pelo macerado autoclavado, com redução de 39% e 83%, respectivamente. Para Erwinia sp., o maior efeito inibitório foi obtido com o macerado autoclavado que, na concentração de 25%, inibiu 99% a multiplicação bacteriana. Para B. subtilis, não houve inibição significativa. Esses resultados indicam o potencial de derivados de avenca para o controle de fitopatógenos.

The use of secondary compounds of medicinal plants, with antimicrobial properties, can be an alternative for the control of phytopathogens. The aim of the present study was to evaluate the antimicrobial activity of derivatives obtained from the medicinal plant Adiantum capillus-veneris (maidenhair fern) against phytopathogenic fungi and bacteria. The derivatives, obtained from the powder of shadow-dried maidenhair fern leaves, were prepared by infusion, maceration and decoction, autoclaved and non-autoclaved, in the concentration of 0.1%, 0.25%, 0.5%, 1%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, and 20%. The germination of Phakopsora euvitis and Pseudocercospora vitis spores, the mycelial growth of Colletotrichum musae and Sclerotium rolfsii, and the multiplication of Erwinia sp. and Bacillus subtilis bacteria were evaluated. The extract obtained by non-autoclaved maceration presented the best effect against P. euvitis, with reduction of 75% on uredospores germination in the concentration of 20%. Against P. vitis, the derivative obtained by non-autoclaved maceration was more effective, presenting 99% of reduction on conidia germination in the concentration of 20%. The smallest mycelial growth of C. musae and S. rolfsii was obtained by autoclaved maceration with 39% and 83% reduction, respectively. For Erwinia sp., the greatest inhibitory effect was obtained with the 25% autoclaved maceration that inhibited the bacterial growth at 99%. For B. subtilis, there was no significant inhibition. These results indicate the potential of maidenhair fern derivatives for the control of phytopathogens.

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL DA PLANTA ADIANTUM CAPILLUS-VENERIS (L.) NO CONTROLE DE FITOPATÓGENOS

ABSTRACT The use of secondary compounds of medicinal plants, with antimicrobial properties, can be an alternative for the control of phytopathogens. The aim of the present study was to evaluate the antimicrobial activity of derivatives obtained from the medicinal plant Adiantum capillus-veneris (maidenhair fern) against phytopathogenic fungi and bacteria. The derivatives, obtained from the powder of shadow-dried maidenhair fern leaves, were prepared by infusion, maceration and decoction, autoclaved and non-autoclaved, in the concentration of 0.1%, 0.25%, 0.5%, 1%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, and 20%. The germination of Phakopsora euvitis and Pseudocercospora vitis spores, the mycelial growth of Colletotrichum musae and Sclerotium rolfsii, and the multiplication of Erwinia sp. and Bacillus subtilis bacteria were evaluated. The extract obtained by non-autoclaved maceration presented the best effect against P. euvitis, with reduction of 75% on uredospores germination in the concentration of 20%. Against P. vitis, the derivative obtained by non-autoclaved maceration was more effective, presenting 99% of reduction on conidia germination in the concentration of 20%. The smallest mycelial growth of C. musae and S. rolfsii was obtained by autoclaved maceration with 39% and 83% reduction, respectively. For Erwinia sp., the greatest inhibitory effect was obtained with the 25% autoclaved maceration that inhibited the bacterial growth at 99%. For B. subtilis, there was no significant inhibition. These results indicate the potential of maidenhair fern derivatives for the control of phytopathogens.

RESUMO O uso de compostos secundários de plantas medicinais, com propriedades antimicrobianas, pode ser uma alternativa para o controle de fitopatógenos. Diante disso, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de derivados obtidos da planta Adiantum capillus-veneris (avenca) contra fungos e bactérias fitopatogênicos. Os derivados, obtidos do pó de folhas de avenca secas ao ar, foram preparados por infusão, maceração e decocção, autoclavados ou não, nas concentrações de 0,1%, 0,25%, 0,5%, 1%, 1,25%, 2,5%, 5%, 10% e 20%. Foram avaliadas a germinação de esporos dos fungos Phakopsora euvitis e Pseudocercospora vitis, o crescimento micelial dos fungos Colletotrichum musae e Sclerotium rolfsii e a multiplicação das bactérias Erwinia sp. e Bacillus subtilis. O extrato obtido por maceração não autoclavado foi o que apresentou maior efeito sobre P. euvitis e P. vitis com reduções de 75% e 99% na germinação de esporos na concentração de 20%, respectivamente. O menor crescimento micelial de C. musae e S. rolfsii foi obtido pelo macerado autoclavado, com redução de 39% e 83%, respectivamente. Para Erwinia sp., o maior efeito inibitório foi obtido com o macerado autoclavado que, na concentração de 25%, inibiu 99% a multiplicação bacteriana. Para B. subtilis, não houve inibição significativa. Esses resultados indicam o potencial de derivados de avenca para o controle de fitopatógenos.

Indução de fitoalexinas em soja e sorgo por preparações de Saccharomyces boulardii / Induction of phytoalexins in soybean and sorghum by Saccharomyces boulardii

O gênero Saccharomyces tem sido usado como indutor de resistência ou para controle biológico em muitos patossistemas. Neste trabalho objetivou-se a indução de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo e cotilédones de soja pela levedura Saccharomyces boulardii na forma do produto comercial Floratil (Merck) (com 2 x 106 células/mg produto comercial - pc) e massa de células obtidas de meio líquido YEPG (primeiramente com 14 dias de cultivo e, posteriormente, com 7, 14, 21, 28 e 35 dias) ambos em concentrações de 0,005; 0,05; 0,5; 5; 15 e 25 mg/mL, além de filtrado desse meio nas concentrações de 0,01; 0,1; 1; 5; 10 e 20%. Como tratamentos controle utilizou-se água e S. cerevisiae (25 mg/mL de pc) para soja e água e acibenzolar-S-metil (ASM) (125 mg i.a./L) para sorgo. Em soja os três produtos apresentaram efeito dose-dependente, com ajustes de equações de 1° grau e R2 de 0,64; 0,94 e 0,98 não tendo efeito do tempo de cultivo da levedura na indução de fitoalexinas. Em sorgo apenas o filtrado e Floratil tiveram efeito dose-dependente com equação de 1° grau e R2 de 0,63 e 0,94 respectivamente e obteve-se nos diferentes dias de cultivo R2 de 0,62 com a massa de células somente. Portanto, pode-se evidenciar o potencial indutor de fitoalexinas dos produtos a base de S. boulardii para ensaios com indução de resistência em patossistemas envolvendo sorgo e soja.

Saccharomyces yeast compounds have been used as a resistance elicitor or for biological control in many pathosystems. Thus, the aim of this research was to verify the induction of phytoalexins in sorghum mesocotyls and soybean cotyledons by using Saccharomyces boulardii in the form of the commercial product Floratil (Merck) (with 2 x 106 cells/mg) and yeast-cell mass obtained from liquid culture in YEPG medium (with 7, 14, 21, 28 and 35 days old), both at concentrations of 0.005, 0.05, 0.5, 5, 15 and 25 mg/mL, as well as the filtrate of this medium in concentrations of 0.01, 0.1, 1, 5, 10 and 20%. The control treatments consisted of distilled water and S. cerevisiae (25 mg of commercial product per mL) for the soybean tests and distilled water and acibenzolar-S-methyl (125 mg of active ingredient per L) for the sorghum tests. In soybeans the three tested S. boulardii products presented a dose-dependent effect with R2 of 0.64, 0.94 and 0.98 for the culture filtrate, cell suspension and commercial product of S. boulardii, respectively, with no effect of culture time of yeasts on phytoalexin induction. In sorghum, only the culture filtrate and Floratil presented a dose-dependent effect, with R2 of 0.63 and 0.94, respectively, and the cell suspension of S. boulardii showed dependence of culture time with R2 of 0.62. Thus, S. boulardii and its derivates induce phytoalexins and have potential to be used as an elicitor for assays with induction resistance in pathosystems involving sorghum and soybean plants.

INDUÇÃO DE FITOALEXINAS EM SOJA E SORGO POR PREPARAÇÕES DE SACCHAROMYCES BOULARDII

ABSTRACT Saccharomyces yeast compounds have been used as a resistance elicitor or for biological control in many pathosystems. Thus, the aim of this research was to verify the induction of phytoalexins in sorghum mesocotyls and soybean cotyledons by using Saccharomyces boulardii in the form of the commercial product Floratil (Merck) (with 2 x 106 cells/mg) and yeast-cell mass obtained from liquid culture in YEPG medium (with 7, 14, 21, 28 and 35 days old), both at concentrations of 0.005, 0.05, 0.5, 5, 15 and 25 mg/mL, as well as the filtrate of this medium in concentrations of 0.01, 0.1, 1, 5, 10 and 20%. The control treatments consisted of distilled water and S. cerevisiae (25 mg of commercial product per mL) for the soybean tests and distilled water and acibenzolar-S-methyl (125 mg of active ingredient per L) for the sorghum tests. In soybeans the three tested S. boulardii products presented a dose-dependent effect with R2 of 0.64, 0.94 and 0.98 for the culture filtrate, cell suspension and commercial product of S. boulardii, respectively, with no effect of culture time of yeasts on phytoalexin induction. In sorghum, only the culture filtrate and Floratil presented a dose-dependent effect, with R2 of 0.63 and 0.94, respectively, and the cell suspension of S. boulardii showed dependence of culture time with R2 of 0.62. Thus, S. boulardii and its derivates induce phytoalexins and have potential to be used as an elicitor for assays with induction resistance in pathosystems involving sorghum and soybean plants.

RESUMO O gênero Saccharomyces tem sido usado como indutor de resistência ou para controle biológico em muitos patossistemas. Neste trabalho objetivou-se a indução de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo e cotilédones de soja pela levedura Saccharomyces boulardii na forma do produto comercial Floratil (Merck) (com 2 x 106 células/mg produto comercial - pc) e massa de células obtidas de meio líquido YEPG (primeiramente com 14 dias de cultivo e, posteriormente, com 7, 14, 21, 28 e 35 dias) ambos em concentrações de 0,005; 0,05; 0,5; 5; 15 e 25 mg/mL, além de filtrado desse meio nas concentrações de 0,01; 0,1; 1; 5; 10 e 20%. Como tratamentos controle utilizou-se água e S. cerevisiae (25 mg/mL de pc) para soja e água e acibenzolar-S-metil (ASM) (125 mg i.a./L) para sorgo. Em soja os três produtos apresentaram efeito dose-dependente, com ajustes de equações de 1° grau e R2 de 0,64; 0,94 e 0,98 não tendo efeito do tempo de cultivo da levedura na indução de fitoalexinas. Em sorgo apenas o filtrado e Floratil tiveram efeito dose-dependente com equação de 1° grau e R2 de 0,63 e 0,94 respectivamente e obteve-se nos diferentes dias de cultivo R2 de 0,62 com a massa de células somente. Portanto, pode-se evidenciar o potencial indutor de fitoalexinas dos produtos a base de S. boulardii para ensaios com indução de resistência em patossistemas envolvendo sorgo e soja.

Controle de crestamento bacteriano comum (Xanthomonas axonopodis Ppv. phaseoli) e alterações bioquímicas em feijoeiro induzidas por Pycnoporus sanguineus / Control of bacterial blight (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli) and biochemical analyses of bean resistance treated with Pycnoporus sanguineus extracts

O objetivo deste trabalho foi verificar as atividades antibacteriana e indutora de resistência de extratos de Pycnoporus sanguineus para controle do crestamento bacteriano comum, causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, em feijoeiro. In vitro foram utilizados extratos aquosos de basidiocarpo, micélio e filtrado de cultura de P. sanguineus nas concentrações de 1, 5, 10, 15 e 20%, além das testemunhas água, acibenzolar-S-metil (ASM - 125 mg i.a. L-1) e antibiótico (22,5 mg L-1 de oxitetraciclina + 225 mg L-1 de estreptomicina). In vivo foram realizadas avaliações de severidade e atividade de peroxidase, polifenoloxidase, ß-1,3 glucanase e fenilalanina amônia-liase, com o uso de extrato aquoso de micélio e de basidiocarpo e filtrado de cultura de P. sanguineus a 5% e 10%. Verificou-se atividade antibacteriana apenas para o filtrado de cultura em concentrações acima de 15% e para o extrato de basidiocarpo nas concentrações de 1 a 20%. In vivo, os resultados indicaram o potencial de extratos de basidiocarpos de P. sanguineus para o controle de X. axonopodis pv. phaseoli em feijoeiro, com redução média de 56% na severidade, o que pode ter ocorrido tanto por atividade antimicrobiana direta quanto por indução de resistência, envolvendo principalmente a ativação das enzimas de defesa vegetal peroxidase e polifenoloxidase.

The aim of this work was to verify the antimicrobial and resistance induction activities of Pycnoporus sanguineus extracts for the control of common bacterial blight caused by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. In vitro assays were performed using aqueous extracts from basidiocarp, mycelium and culture filtrate of P. sanguineus in concentrations of 1, 5, 10, 15 and 20%, with water, acibenzolar-S-methyl (ASM - 125 mg a.i. L-1) and antibiotic (oxytetracycline 22.5 mg L-1 + streptomycin 225 mg L-1) as control treatments. For the in vivo assays the disease severity and the activities of peroxidase, polyphenol oxidase, ß-1,3 glucanase and phenylalanine ammonia-lyase were evaluated using extracts of mycelium, basidiocarp and culture filtrate of P. sanguineus at 5% and 10%. Antibacterial activity was verified only for culture filtrate in concentrations above 15% and for concentrations of 1% to 20% of basidiocarp extract. The results of the in vivo assays indicated the potential of basidiocarps extracts from P. sanguineus for the control of X. axonopodis pv. phaseoli in beans, with an average severity reduction of 56%, which may have been due either to direct antimicrobial activity or to resistance induction involving mainly the activation of the plant defense enzymes peroxidase and polyphenol oxidase.

Efeito de extrato bruto e óleo essencial de Achillea millefolium em desenvolvimento in vitro de Corynespora cassiicola e proteção de pepino à mancha de corinespora / Effect of crude extract and essential oil of Achillea millefolium L. on the in vitro development of Corynespora cassiicola and protection of cucumber against corinespora leaf spot

Medidas de controle de doenças por meio do uso de extratos e óleos essenciais vêm sendo investigadas como alternativa aos fungicidas convencionais. Este trabalho objetivou estudar o efeito antimicrobiano de extratos brutos aquosos e óleo essencial de Achillea millefolium no crescimento micelial (CM), na esporulação e na germinação de conídios de Corynespora cassiicola bem como a atividade de peroxidase em plantas de pepino. Para isto, o extrato bruto aquoso (EBA) (1; 5; 10; 20 e 25%) foi incorporado ao meio de cultura BDA (batata-dextrose-ágar) e o óleo essencial (OE) (20, 40, 60, 100 e 200 mL) foi distribuído sobre a superfície do meio de cultura. Disco de micélio foi repicado para os diferentes meios e o crescimento micelial avaliado, diariamente, por 7 dias. Para os ensaios in vivo, plantas de pepino foram pulverizadas com EBAs nas concentrações 1, 10 e 25%, Saccharomyces cereviseae 20% e água, aos quatro e dois dias antes e concomitantemente à inoculação com C. cassiicola. Foi avaliada a severidade da doença e a atividade da enzima peroxidase. Para EBA, não houve inibição do crescimento micelial, da germinação e da esporulação em todas as concentrações testadas. Entretanto, nos tratamentos com OE, houve inibição de até 63% do crescimento micelial. Na esporulação e germinação, a inibição foi de 100% e 98%, respectivamente, na alíquota de 200 ?L para OE. No controle da doença, o tratamento mais efetivo foi EBA a 25% quando realizado concomitante à inoculação. No intervalo de tempo avaliado, não se constatou atividade da enzima peroxidase.

The control of diseases by using crude extracts (CE) and essential oils (EO) are being investigated as an alternative to conventional fungicides. The objective of this work was to evaluate the antimicrobial effect of aqueous extracts and essential oil of Achillea millefolium on mycelial growth, sporolution and spores germination of Corynespora cassiicola, as well as peroxidase activity in cucumber plants. For this, crude extract (1; 5; 10; 20 and 25%) was incorporated into potato dextrose agar medium (PDA), and essential oil (20, 40, 60, 100 and 200 mL) was distributed over the surface of the PDA. The mycelial growth was measured daily for 7 days. In the in vivo test, cucumber plants were sprayed with crude extracts at concentrations 1; 10 and 25%, and Saccharomyces cereviseae 20% (control), 4 and 2 days before and the same time as inoculation with C. cassiicola. The severity of disease and peroxidase activity were evaluated. For crude extract, neither mycelial growth nor spore germination and sporulation was inhibited at any of the tested concentrations. In the treatments with essential oil there was inhibition up to 63% of the mycelial growth. In the sporulation and spores germination the inhibition was 100% and 98%, respectively, for 200uL of EO. In the control of the disease the mosteffective treatment was the crude extract 25% when carried out at the same time as the inoculation. In the evaluated period, no peroxidase activity was found.

Efeito in vitro do óleo essencial e extrato aquoso de Ocimum gratissimum colhido nas quatro estações do ano sobre fitopatógenos / In vitro effect on phytopathogens of essential oil and aqueous crude extract of Ocimum gratissimum harvested in the four seasons

O trabalho foi desenvolvido para verificar o efeito do óleo essencial e do extrato bruto de alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum), coletado nas quatro estações do ano, no crescimento micelial in vitro dos fungos Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Phytophthora sp. e Alternaria alternata. Para avaliar o efeito do óleo essencial no crescimento micelial dos fungos, alíquotas de 20 ?L, 40 ?L e 60 ?L de óleo esterilizado foram distribuídas na superfície de meio BDA (batata-dextrose-ágar) antes da repicagem dos fungos. O extrato bruto aquoso (EBA) foi filtrado e incorporado em BDA nas concentrações de 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% e 50%. Os resultados indicaram que houve inibição total do crescimento micelial dos fungos nas diferentes alíquotas de óleo essencial. O EBA das plantas colhidas no outono proporcionou os melhores resultados, sendo que nesta estação do ano o EBA na concentração de 5% foi suficiente para promover 100% de inibição do crescimento micelial dos fitopatógenos A. alternata e S. rolfsii.

The present >work aimed to evaluate the effects of the essential oil and crude extract of wild basil (Ocimum gratissimum), harvested in different seasons, on the in vitro mycelia growth of Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Phytophthora sp. and Alternaria alternata. To evaluate the effect of the essential oil, sterilized oil aliquots of 20 ?L, 40 ?L and 60 ?L were distributed on the surface of potato-dextroseagar (PDA). The aqueous crude extracts (ACE) were filtrated and incorporated in PDA at 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% and 50%. The results showed total inhibition of mycelial growth in the different aliquots of essential oil. The ACE collected from plants in autumn had better results; in this season the ACE at 5% was enough to provide 100% of mycelia growth inhibition of A. alternata and S. rolfsii.

EFEITO IN VITRO DO ÓLEO ESSENCIAL E EXTRATO AQUOSO DE OCIMUM GRATISSIMUM COLHIDO NAS QUATRO ESTAÇÕES DO ANO SOBRE FITOPATÓGENOS

ABSTRACT The present >work aimed to evaluate the effects of the essential oil and crude extract of wild basil (Ocimum gratissimum), harvested in different seasons, on the in vitro mycelia growth of Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Phytophthora sp. and Alternaria alternata. To evaluate the effect of the essential oil, sterilized oil aliquots of 20 ?L, 40 ?L and 60 ?L were distributed on the surface of potato-dextroseagar (PDA). The aqueous crude extracts (ACE) were filtrated and incorporated in PDA at 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% and 50%. The results showed total inhibition of mycelial growth in the different aliquots of essential oil. The ACE collected from plants in autumn had better results; in this season the ACE at 5% was enough to provide 100% of mycelia growth inhibition of A. alternata and S. rolfsii.

RESUMO O trabalho foi desenvolvido para verificar o efeito do óleo essencial e do extrato bruto de alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum), coletado nas quatro estações do ano, no crescimento micelial in vitro dos fungos Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Phytophthora sp. e Alternaria alternata. Para avaliar o efeito do óleo essencial no crescimento micelial dos fungos, alíquotas de 20 ?L, 40 ?L e 60 ?L de óleo esterilizado foram distribuídas na superfície de meio BDA (batata-dextrose-ágar) antes da repicagem dos fungos. O extrato bruto aquoso (EBA) foi filtrado e incorporado em BDA nas concentrações de 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% e 50%. Os resultados indicaram que houve inibição total do crescimento micelial dos fungos nas diferentes alíquotas de óleo essencial. O EBA das plantas colhidas no outono proporcionou os melhores resultados, sendo que nesta estação do ano o EBA na concentração de 5% foi suficiente para promover 100% de inibição do crescimento micelial dos fitopatógenos A. alternata e S. rolfsii.

EFEITO DE EXTRATO BRUTO E ÓLEO ESSENCIAL DE ACHILLEA MILLEFOLIU. EM DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE CORYNESPORA CASSIICOLA E PROTEÇÃO DE PEPINO À MANCHA DE CORINESPORA

ABSTRACT The control of diseases by using crude extracts (CE) and essential oils (EO) are being investigated as an alternative to conventional fungicides. The objective of this work was to evaluate the antimicrobial effect of aqueous extracts and essential oil of Achillea millefolium on mycelial growth, sporolution and spores germination of Corynespora cassiicola, as well as peroxidase activity in cucumber plants. For this, crude extract (1; 5; 10; 20 and 25%) was incorporated into potato dextrose agar medium (PDA), and essential oil (20, 40, 60, 100 and 200 mL) was distributed over the surface of the PDA. The mycelial growth was measured daily for 7 days. In the in vivo test, cucumber plants were sprayed with crude extracts at concentrations 1; 10 and 25%, and Saccharomyces cereviseae 20% (control), 4 and 2 days before and the same time as inoculation with C. cassiicola. The severity of disease and peroxidase activity were evaluated. For crude extract, neither mycelial growth nor spore germination and sporulation was inhibited at any of the tested concentrations. In the treatments with essential oil there was inhibition up to 63% of the mycelial growth. In the sporulation and spores germination the inhibition was 100% and 98%, respectively, for 200uL of EO. In the control of the disease the mosteffective treatment was the crude extract 25% when carried out at the same time as the inoculation. In the evaluated period, no peroxidase activity was found.

RESUMO Medidas de controle de doenças por meio do uso de extratos e óleos essenciais vêm sendo investigadas como alternativa aos fungicidas convencionais. Este trabalho objetivou estudar o efeito antimicrobiano de extratos brutos aquosos e óleo essencial de Achillea millefolium no crescimento micelial (CM), na esporulação e na germinação de conídios de Corynespora cassiicola bem como a atividade de peroxidase em plantas de pepino. Para isto, o extrato bruto aquoso (EBA) (1; 5; 10; 20 e 25%) foi incorporado ao meio de cultura BDA (batata-dextrose-ágar) e o óleo essencial (OE) (20, 40, 60, 100 e 200 mL) foi distribuído sobre a superfície do meio de cultura. Disco de micélio foi repicado para os diferentes meios e o crescimento micelial avaliado, diariamente, por 7 dias. Para os ensaios in vivo, plantas de pepino foram pulverizadas com EBAs nas concentrações 1, 10 e 25%, Saccharomyces cereviseae 20% e água, aos quatro e dois dias antes e concomitantemente à inoculação com C. cassiicola. Foi avaliada a severidade da doença e a atividade da enzima peroxidase. Para EBA, não houve inibição do crescimento micelial, da germinação e da esporulação em todas as concentrações testadas. Entretanto, nos tratamentos com OE, houve inibição de até 63% do crescimento micelial. Na esporulação e germinação, a inibição foi de 100% e 98%, respectivamente, na alíquota de 200 ?L para OE. No controle da doença, o tratamento mais efetivo foi EBA a 25% quando realizado concomitante à inoculação. No intervalo de tempo avaliado, não se constatou atividade da enzima peroxidase.

CONTROLE DE CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM (XANTHOMONA. AXONOPODIS PV. PHASEOLI) E ALTERAÇÕES BIOQUÍMICAS EM FEIJOEIRO INDUZIDAS POR PYCNOPORUS SANGUINEUS

ABSTRACT The aim of this work was to verify the antimicrobial and resistance induction activities of Pycnoporus sanguineus extracts for the control of common bacterial blight caused by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. In vitro assays were performed using aqueous extracts from basidiocarp, mycelium and culture filtrate of P. sanguineus in concentrations of 1, 5, 10, 15 and 20%, with water, acibenzolar-S-methyl (ASM - 125 mg a.i. L-1) and antibiotic (oxytetracycline 22.5 mg L-1 + streptomycin 225 mg L-1) as control treatments. For the in vivo assays the disease severity and the activities of peroxidase, polyphenol oxidase, -1,3 glucanase and phenylalanine ammonia-lyase were evaluated using extracts of mycelium, basidiocarp and culture filtrate of P. sanguineus at 5% and 10%. Antibacterial activity was verified only for culture filtrate in concentrations above 15% and for concentrations of 1% to 20% of basidiocarp extract. The results of the in vivo assays indicated the potential of basidiocarps extracts from P. sanguineus for the control of X. axonopodis pv. phaseoli in beans, with an average severity reduction of 56%, which may have been due either to direct antimicrobial activity or to resistance induction involving mainly the activation of the plant defense enzymes peroxidase and polyphenol oxidase.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi verificar as atividades antibacteriana e indutora de resistência de extratos de Pycnoporus sanguineus para controle do crestamento bacteriano comum, causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, em feijoeiro. In vitro foram utilizados extratos aquosos de basidiocarpo, micélio e filtrado de cultura de P. sanguineus nas concentrações de 1, 5, 10, 15 e 20%, além das testemunhas água, acibenzolar-S-metil (ASM - 125 mg i.a. L-1) e antibiótico (22,5 mg L-1 de oxitetraciclina + 225 mg L-1 de estreptomicina). In vivo foram realizadas avaliações de severidade e atividade de peroxidase, polifenoloxidase, -1,3 glucanase e fenilalanina amônia-liase, com o uso de extrato aquoso de micélio e de basidiocarpo e filtrado de cultura de P. sanguineus a 5% e 10%. Verificou-se atividade antibacteriana apenas para o filtrado de cultura em concentrações acima de 15% e para o extrato de basidiocarpo nas concentrações de 1 a 20%. In vivo, os resultados indicaram o potencial de extratos de basidiocarpos de P. sanguineus para o controle de X. axonopodis pv. phaseoli em feijoeiro, com redução média de 56% na severidade, o que pode ter ocorrido tanto por atividade antimicrobiana direta quanto por indução de resistência, envolvendo principalmente a ativação das enzimas de defesa vegetal peroxidase e polifenoloxidase.

Controle de cladosporium fulvum em tomateiro por extratos de plantas medicinais

ABSTRACT There have been various recent studies concerning the use of medicinal extracts of medicinal plants for the control of phytopathogens. The present study was therefore aimed to evaluate, in vitro, fungitoxicity of aqueous crude extracts (ACEs) of Achillea millefolium, Artemisia camphorata, Cymbopogon citratus and Rosmarinus officinalis against Cladosporium fulvum, and the protective effect of these extracts in tomato plants under greenhouse conditions. To evaluate antifungical activity, ACEs were incorporated to PDA (potato-dextrose-agar), with observation of inhibition of mycelial growth, sporulation and spores germination. The plant protection was verified by preventive spraying 72 hours before inoculation of ACEs, in 10% and 20% concentration, in the first pair of leaves. The severity was evaluated 20 days after inoculation, which occurred in both the first and second pair of leaves. Theactivity of the plant-defense enzyme peroxidase was evaluated spectrophotometrically in leaves 72 hours after treatments. It was verified that ACEs inhibit the mycelial growth and had significant reduction in sporulation and spore germination, mainly by ACEs of A. camphorata and R. officinalis, in concentration of 20% and 40%, which reduced the sporulation 85.72% and 93.49%, respectively. In relation to the in-vivo treatments there was observed a reduction in the number of lesions along with a possible resistance induction, mainly to A. camphorata and R. officinalis extracts. The peroxidase activity had no significant increment in relation to the control treatment.

RESUMO Atualmente, tem-se estudado a utilização de extratos de plantas medicinais no controle de fitopatógenos. Assim, este trabalho objetivou avaliar a fungitoxidade in vitrodos extratos brutos aquosos (EBAs) de Achillea millefolium, Artemisia camphorata, Cymbopogon citratus e Rosmarinus officinalis contra Cladosporium fulvum e o efeito protetor destes extratos para a cladosporiose em plantas de tomateiro em casa-de-vegetação. Para avaliar a atividade antifúngica, os EBAs foram incorporados ao meio de cultura BDA (batata-dextrose e ágar) e avaliada a inibição do crescimento micelial, a esporulação e a germinação de esporos. O efeito protetor em plantas foi verificado através da pulverização preventiva dos EBAs, 72h antes da inoculação, nas concentrações de 10% e 20%, no primeiro par de folhas. A severidade da doença foi verificada 20 dias após a inoculação, que ocorreu no 1 o e 2o par de folhas. A atividade ativação da enzima de defesa peroxidase foi avaliada por método espectrofotométrico direto em folhas coletadas 72h após a inoculação. Verificou-se que os EBAs inibiram o crescimento micelial e tiveram efeitos significativos na redução da esporulação e da germinação de esporos, principalmente os EBAs de A. camphorata e R. officinalis, que nas concentrações de 20% e 40% reduziram 85,72% e 93,49% a esporulação, respectivamente. Verificou-se, in vivo, uma redução no número de lesões e uma possível indução resistência dos EBAs, principalmente para A. camphorata e R. officinalis. A atividade de peroxidase não teve incrementos significativos em relação à testemunha, no tempo analisado.

Indução de fitoalexinas e atividade de peroxidases em sorgo e soja tratados com extratos de basidiocarpos de pycnoporus sanguineus

ABSTRACT This work aimed to verify the phytoalexin induction and the peroxidase activities in sorghum and soybean treated with extracts of P. sanguineus basidiocarp. To this end, dichloromethane, hexane and ethanol extracts, in concentrations of 100, 250, 500 and 750 mg/L were texted for phytoalexin induction and peroxidase activity in soybean cotyledons and sorghum etiolated mesocotyls. Acybenzolar-Smethyl (ASM) (200 mg/L of commercial product) and distilled water + Tween 20 (0.5%) were used as positive and negative control treatments, respectively. For the phytoalexin assay in sorghum mesocotyls, the hexanic extract in the concentration 750 mg/L provided the highest induction, however without differing significantly from ASM. For the phytoalexin assay in the soybean cotyledons, P. sanguineus extracts did not induce activity significantly different from the positive and negative control treatments, and showed a suppression of glyceollin synthesis for the dichloromethane extract. In relation to peroxidases, the dichloromethane extracts for sorghum and soybean and ethanol extract for soybean inhibited the enzymatic activity. The induction verified for the hexanic extract in sorghum was not different from the ASM control. The specific activity of peroxidase in soybeans was inhibited by the ethanol extract and it was induced by the hexanic, but with no differences in relation to the treatment with ASM. These results indicate the weak potential of these extracts for the induction of resistance in pathosystems involving sorghum and soybeans.

RESUMO Este trabalho objetivou avaliar a indução de fitoalexinas e a atividade de peroxidases em sorgo e soja tratados com extratos de basidiocarpos de Pycnoporus sanguineus. Os extratos diclorometânico, hexânico e etanólico com 100, 250, 500 e 750 mg/L foram testados em relação à indução da produção de fitoalexinas e atividade de peroxidases em cotilédones de soja e mesocótilos estiolados de sorgo. Acibenzolar-S-metil (200 mg/L do produto comercial) e água destilada + Tween 20 foram utilizados como tratamentos controles positivo e negativo, respectivamente. Parafitoalexinas em mesocótilos de sorgo, o extrato hexânico (750 mg/L) proporcionou a maior indução, porém sem diferir significativamente do ASM. Para fitoalexinas em cotilédones de soja, os extratos de P. sanguineus não induziram atividade significativamente diferente dos tratamentos controles positivo e negativo, havendo uma tendência de supressão da síntese de gliceolina pelo extrato diclorometânico. Em relação às peroxidases, os extratos diclorometânico para sorgo e soja e etanólico para soja inibiram a atividade enzimática. A indução verificada para o extrato hexânico em sorgo não diferiu do controle ASM. A atividade específica de peroxidase em soja foi inibida pelo extrato etanólico e induzida pelo hexânico, mas sem diferença do tratamento com ASM. Esses resultados indicam o pequeno potencial destes extratos para a indução de resistência em patossistemas envolvendo sorgo e soja.