Produção e caracterização parcial de proteases a partir de Mucor hiemalis URM3773 / Production and partial characterization of proteases from Mucor hiemalis URM3773

Foi avaliada a produção de proteases por 11 espécies fúngicas pertencentes aos gêneros Mucor, Rhizomucor e Absidia, obtidas da Coleção de Culturas URM do Departamento de Micologia-UFPE, Brasil. A melhor espécie produtora foi Mucor hiemalis URM3773 (1,689 U mL-1). A metodologia de planejamento Plackett-Burman foi empregada para selecionar o parâmetro mais efetivo para a produção de proteases através de 11 componentes do meio, incluindo: concentração do filtrado de soja, glicose, período de incubação, extrato de levedura, triptona, pH, aeração, rotação, NH4Cl, MgSO4 e K2HPO4. A variável significante sobre a variável-resposta, atividade proteásica específica, foi a concentração do filtrado de soja. O extrato enzimático bruto apresentou atividade ótima ao pH 7,5 a 50ºC. A enzima foi estável em uma ampla variação de pH de 5,88,0 em tampão fosfato 0,1M e termicamente estável a uma variação de 40- 70C, durante 180 minutos. Os íons FeSO4, NaCl, MnCl2, MgCl2 e KCl estimularam a atividade proteásica, enquanto que o íon ZnCl2 inibiu 2,27% da atividade. O inibidor de proteases que teve maior ação foi o ácido iodoacético a 1mM. Os resultados obtidos indicam que a enzima estudada tem grande potencial de aplicação industrial.(AU)

The current study evaluated the proteases production from 11 fungal species belonging to the genera Mucor, Rhizomucor and Absidia. The species were obtained from the Collection of Cultures URM at the Mycology Department-UFPE, Brazil. The best producing species was Mucor hiemalis URM 3773 (1.689 U mL-1). Plackett-Burman design methodology was employed to select the most effective parameter for protease production out of 11 medium components, including: concentration of filtrate soybean, glucose, incubation period, yeast extract, tryptone, pH, aeration, rotation, NH4Cl, MgSO4 and K2HPO4. Filtrated soybean concentration was the significant variable over the response variable, which was the specific protease activity. The crude enzyme extract showed optimal activity in pH 7.5 and at 50ºC. The enzyme was stable within a wide pH range from 5.8 to 8.0, in the phosphate buffer 0.1M and in stable temperature variation of 40-70ºC, for 180 minutes. The ions FeSO4, NaCl, MnCl2, MgCl2 and KCl stimulated the protease activity, whereas ZnCl2 ion inhibited the activity in 2.27%. Iodoacetic acid at 1mM was the proteases inhibitor that presented greater action.The results indicate that the studied enzyme have great potential for industrial application.(AU)

Diagnóstico laboratorial e fatores de patogenicidade de fungo isolado naturalmente de lhamas (Lama glama -Linnaeus 1758) do Parque Zoológico de Dois Irmãos, Recife-PE / Laboratory diagnosis and pathogenic factors of fungi isolated naturally of Lhamas (Lama glama Linnaeus 1758) of the Parque Zoológico Dois Irmãos, Recife-PE

No meio ambiente, tanto fungos filamentosos quanto leveduras podem desencadear micoses em humanos, e em outros animais. Com o objetivo de verificar a ocorrência e fatores de patogenicidade de fungos em lesões de animais do Parque Zoológico de Dois Irmãos foram coletados espécimes clínicos da região superior das patas traseiras das lhamas (Lama glama). De cada lhama foram realizadas seis coletas, três dos pelos e três das escamas epidérmicas. Para o exame direto, os espécimes clínicos foram clarificados com hidróxido de potássio a 20%. Para isolamento dos agentes etiológicos, as amostras clínicas foram semeadas em duplicata em pontos eqüidistantes na superfície do meio ágar Sabouraud adicionado de cloranfenicol (50 mg/L) contido em placas de Petri, as quais foram mantidas a temperatura ambiente (28º±1ºC) e a 37ºC. A identificação dos fungos foi realizada utilizando-se as características macroscópicas, microscópicas. O exame direto dos espécimes clínicos da Lama glama não revelou estruturas fúngicas. Nacultura, em todos os pontos de inoculo foi detectado Paecilomyces farinosus. Pode-se observar com o teste de caracterização de patogenicidade o crescimento nas temperaturas ambiente37º e 42ºC que é um fator de patogenicidade. Nenhuma das culturas foi positiva para atividade fosfolipásica. Quanto à atividade proteásica o diâmetro da colônia foi de 6 cm e o halo da expressão enzimática foi ZA = 0,7 mm, considerado forte (+++). O diagnóstico laboratorial micológico nos casos relatados é de grande importância para o tratamento e cura, levando consequentemente a uma melhor qualidade de vida dos animais.

In the environment, both filamentous fungi and yeast may trigger fungal infections in humans and other animals. In order to assess the occurrence and pathogenicity factors of fungal lesions in the Park Zoo animals Brothers clinical specimens were collected from the upper hind legs of the two Llamas (Lama glama). In each one six collections were performed, three from the hair and three from the epidermal scales. For direct examination, clinical specimens were cleared with potassium hydroxide to 20%. For isolation of the etiologic agents, clinical specimens were plated in duplicate at equidistant points on the surface of Sabouraud agar supplemented with chloramphenicol (50 mg / L) contained in Petri dishes, which were kept at room temperature (28 º ± 1 º C) and 37 ° C. Identification of fungi was performed using the macroscopic, microscopic. In the Lama's clinical specimes direct examination no fungal structures were revealed. In culture, in all points of inoculum, was detected Paecilomyces farinosus. With the characterization test of pathogenic growth with the environment temperatures, 37 and 42 C was possible to observe the growing of Paecilomyces farinosus which is a sign of a pathogenicity factor. None of the cultures were positive for phospholipase activity. In the protease activity of the colony the diameter was 06 cm and theenzymatic expression halo was ZA = 0.7 mm, what can be considered as a strong one (+++). The mycological laboratory diagnosis in reported cases is of great importance for the treatment and cure, thus leading to a better quality of life of animals.

Ocorrência de fungos filamentosos de importância médica em água de bebedouros / Filamentous fungi of medical importance in drinking water

No presente trabalho foi investigada a ocorrência de fungos de importância médica na água, torneira e pia dos bebedouros do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil. De cada bebedouro foram coletados 100 mL de água, e das superfícies da torneira e pia as amostras foram obtidas com swab. As amostras foram semeadas em meio ágar Sabouraud adicionado de 50mg/L de cloranfenicol, em placas de Petri. Das amostras de água, 10 culturas de fungos filamentosos foram isoladas e estas foram identificadas como Aspergillus flavus (5), A. niger (3) e Cladosporium cladosporioides (2). Das torneiras foram obtidos 21 isolados de fungos filamentosos e 164 das amostras das pias. O número de unidades formadoras de colônias (UFCs) (48h) variou de 12 a 56 em amostras de água, de 115 a 228 em amostras coletadas das torneiras e de 204 a 690 das pias. A presença de fungos com capacidade de produzir micotoxinas foi detectada nas amostras de água, bem como das torneiras. Com a finalidade de preservar a saúde dos consumidores, o monitoramento e a manutenção de equipamentos de purificação da água são práticas essenciais para garantir a qualidade microbiana e química da água.(AU)

This study aimed to assess the occurrence of fungi in water sample, tap and sink from drinking fountains atthe university center, Recife-PE, Brazil. From each fountain, 100mL of water were collected, and the samplesfrom the tap and sink surfaces were obtained by using swabs. The samples were cultivated on Sabouraud agarmedium containing 50mg/L of chloramphenicol in Petri dishes. Of water samples, 10 isolates of filamentousfungi were found and identified as Aspergillus flavus (5), A. niger (3) and Cladosporium cladosporioides (2).Twenty-one strains of filamentous fungi were isolated from tap samples and 164 from sink samples. Thenumber of colony forming units (CFU) (48h) ranged from 12 to 56 in water samples, from 115 to 228 insamples collected from taps, and 204 to 690 in sink samples. Fungi capable of producing mycotoxins weredetected in both water and taps samples. Monitoring the microbial and chemical quality of water and themaintenance of water purification equipment are crucial to guarantee the consumers safety.Key-words. filamentous fungi, water, drinking fountain, microbial water quality, mycotoxins.(AU)