Classification of Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) and Human Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) in Phylogenetic Groups and Association with Pathogenicity In Vivo

Background: Avian pathogenic E. coli (APEC) and uropathogenic E. coli (UPEC) are responsible, respectively, for avian colibacillosis and for 80% of urinary tract infections in humans. E. coli control is difficult due to the absence of a reliable method to differentiate pathogenic and commensal strains. Genetic similarity between APEC and UPEC suggests a common ancestral origin and the capability of potentially pathogenic strains to affect human health. The classification in phylogenetic groups facilitates the identification of pathogenic strains. The objective of this work was to classify APEC and UPEC E. coli strains into phylogenetic groups and to associate it with in vivo pathogenicity.Materials, Methods & Results: 460 APEC and 450 UPEC strains, stored in BHI with glycerol at -80C, were selected. APEC strains were isolated from cellulitis, respiratory tract and poultry litter of broiler flocks from Southern Brazil. The UPEC strains from urinary tract infection were provided by a hospital in Porto Alegre. After DNA extraction, APEC and UPEC strains were classified into four phylogenetic groups (A, B1, B2 and D) by a multiplex-PCR protocol for the detection of the chuA and yjaA genes and the TspE4.C2 DNA fragment. Phylogenetic groups were associated with pathogenicity indexes (PI), presented on a scale of 0 to 10, which were previously obtained through the inoculation of

Simulação de condições de uso de quaternário de amônio frente amostras de italic>Salmonella /italic> Hadar isoladas de carcaças de frango

p>Biosafety measures are adopted in order to avoid the spreading of pathogenic microorganisms along the poultry chain, with disinfection being a mandatory procedure and the chemical compound benzalkonium chloride (quaternary ammonium) widely used for this purpose. Due to the fact that part of the farming in Brazil is located in areas with a great thermal amplitude, which is also the case among the different areas and sections of slaughterhouses, we performed an experiment to verify the activity of this disinfectant, simulating conditions of use with 33 italic>Salmonella /italic> Hadar isolates. Using the test suspension, the inactivation of the bacteria was monitored under different concentrations (100 and 200 ppm), temperatures (20 ± 2 ºC and 8 ± 2 ºC), organic matter loading (1 and 3 %) and contact times (5, 10 and 20 minutes). As a result, all isolates in the two concentrations and organic loading were inactivated at 20 ± 2 ºC after a contact time of 5 minutes. At a temperature of 8 ± 2 ºC, the disinfectants activity was affected, with bacterial isolates surviving under all adverse variables (33,3% in front of 100 ppm and 6,1% in front of 200 ppm). Under the conditions of the experiment, our conclusion is that benzalkonium chloride was able to inactivate all isolates of the italic>Salmonella /italic> serovars found and, therefore, it can be used in disinfection procedures. However, a low room temperature is a factor that limits indicating its use. /p>

p>Para impedir a dispersão de microrganismos patogênicos ao longo da cadeia avícola medidas de biosseguridade são adotadas, sendo a desinfecção procedimento obrigatório e o composto químico cloreto de benzalcônio (quaternário de amônio) largamente usado para essa finalidade. Devido ao fato de que parte das criações brasileiras localizam-se em regiões com grande amplitude térmica, o mesmo ocorrendo entre as diferentes áreas e secções de matadouros-frigoríficos, executou-se este experimento para verificar a atividade desse desinfetante simulando condições de uso frente a 33 isolados de italic>Salmonella /italic>Hadar. Pelo teste de suspensão observou-se a inativação bacteriana sob as variáveis concentração (100 e 200 ppm), temperatura (20 ± 2 ºC e 8 ± 2 ºC), carga de matéria orgânica (1 e 3 %) e tempos de contato (5, 10 e 20 minutos). Como resultados, a 20 ± 2 ºC todos os isolados foram inativados nas duas concentrações e cargas orgânicas após 5 minutos de contato. Sob temperatura de 8 ± 2 ºC o desinfetante teve sua atividade comprometida, tendo isolados bacterianos sobrevivido sob todas as variáveis de confronto (33,3% frente 100 ppm e 6,1% frente 200 ppm). Quanto menor a concentração do desinfetante e maior carga orgânica, maior o número de isolados viáveis. Conclui-se que, nas condições do experimento, o cloreto de benzalcônio foi capaz de inativar todos os isolados do sorovar de italic>Salmonella /italic> confrontados, podendo ser empregado nos procedimentos de desinfecção. No entanto, a baixa temperatura ambiente é fator de limitação na indicação de seu uso. /p>

Simulação de condições de uso de quaternário de amônio frente amostras de italic>Salmonella /italic> Hadar isoladas de carcaças de frango

p>Biosafety measures are adopted in order to avoid the spreading of pathogenic microorganisms along the poultry chain, with disinfection being a mandatory procedure and the chemical compound benzalkonium chloride (quaternary ammonium) widely used for this purpose. Due to the fact that part of the farming in Brazil is located in areas with a great thermal amplitude, which is also the case among the different areas and sections of slaughterhouses, we performed an experiment to verify the activity of this disinfectant, simulating conditions of use with 33 italic>Salmonella /italic> Hadar isolates. Using the test suspension, the inactivation of the bacteria was monitored under different concentrations (100 and 200 ppm), temperatures (20 ± 2 ºC and 8 ± 2 ºC), organic matter loading (1 and 3 %) and contact times (5, 10 and 20 minutes). As a result, all isolates in the two concentrations and organic loading were inactivated at 20 ± 2 ºC after a contact time of 5 minutes. At a temperature of 8 ± 2 ºC, the disinfectants activity was affected, with bacterial isolates surviving under all adverse variables (33,3% in front of 100 ppm and 6,1% in front of 200 ppm). Under the conditions of the experiment, our conclusion is that benzalkonium chloride was able to inactivate all isolates of the italic>Salmonella /italic> serovars found and, therefore, it can be used in disinfection procedures. However, a low room temperature is a factor that limits indicating its use. /p>

p>Para impedir a dispersão de microrganismos patogênicos ao longo da cadeia avícola medidas de biosseguridade são adotadas, sendo a desinfecção procedimento obrigatório e o composto químico cloreto de benzalcônio (quaternário de amônio) largamente usado para essa finalidade. Devido ao fato de que parte das criações brasileiras localizam-se em regiões com grande amplitude térmica, o mesmo ocorrendo entre as diferentes áreas e secções de matadouros-frigoríficos, executou-se este experimento para verificar a atividade desse desinfetante simulando condições de uso frente a 33 isolados de italic>Salmonella /italic>Hadar. Pelo teste de suspensão observou-se a inativação bacteriana sob as variáveis concentração (100 e 200 ppm), temperatura (20 ± 2 ºC e 8 ± 2 ºC), carga de matéria orgânica (1 e 3 %) e tempos de contato (5, 10 e 20 minutos). Como resultados, a 20 ± 2 ºC todos os isolados foram inativados nas duas concentrações e cargas orgânicas após 5 minutos de contato. Sob temperatura de 8 ± 2 ºC o desinfetante teve sua atividade comprometida, tendo isolados bacterianos sobrevivido sob todas as variáveis de confronto (33,3% frente 100 ppm e 6,1% frente 200 ppm). Quanto menor a concentração do desinfetante e maior carga orgânica, maior o número de isolados viáveis. Conclui-se que, nas condições do experimento, o cloreto de benzalcônio foi capaz de inativar todos os isolados do sorovar de italic>Salmonella /italic> confrontados, podendo ser empregado nos procedimentos de desinfecção. No entanto, a baixa temperatura ambiente é fator de limitação na indicação de seu uso. /p>

Infestação simultânea por Cytodites nudus e Laminosioptes cysticola e seus aspectos patológicos em galinhas de subsistência

The occurrence of Cytodites nudus and Laminosioptes cysticola mites is rare and there is no report of this simultaneous infestation in Brazilian scientific literature. C. nudus is known as the air sacs mite and may cause respiratory signs as well as pneumonia and weight loss when present in large numbers in the host. L. cysticola is found in connective tissue of galliforms and causes formation of small calcified subcutaneous nodules that can be confused with the characteristic nodules found in avian tuberculosis. In this paper are discussed the pathological findings of lesions caused by C. nudus and L. cysticola and their morphological characterization.

Cytodites nudus e Laminosioptes cysticola são ácaros cuja ocorrência é pouco relatada e cuja infestação simultânea nunca foi descrita na literatura científica brasileira. C. nudus é conhecido como ácaro dos sacos aéreos e pode provocar sinais respiratórios, pneumonia e emagrecimento, quando presente em grande número no hospedeiro. L. cysticola parasita o tecido conjuntivo de galiformes e provoca a formação de pequenos nódulos subcutâneos calcificados, que podem ser confundidos com nódulos de tuberculose aviária. No presente trabalho, são discutidos os aspectos patológicos das lesões causadas pelos ácaros C. nudus e L. cysticola e a caracterização morfológica desses parasitas.

Infestação simultânea por Cytodites nudus e Laminosioptes cysticola e seus aspectos patológicos em galinhas de subsistência

The occurrence of Cytodites nudus and Laminosioptes cysticola mites is rare and there is no report of this simultaneous infestation in Brazilian scientific literature. C. nudus is known as the air sacs mite and may cause respiratory signs as well as pneumonia and weight loss when present in large numbers in the host. L. cysticola is found in connective tissue of galliforms and causes formation of small calcified subcutaneous nodules that can be confused with the characteristic nodules found in avian tuberculosis. In this paper are discussed the pathological findings of lesions caused by C. nudus and L. cysticola and their morphological characterization.

Cytodites nudus e Laminosioptes cysticola são ácaros cuja ocorrência é pouco relatada e cuja infestação simultânea nunca foi descrita na literatura científica brasileira. C. nudus é conhecido como ácaro dos sacos aéreos e pode provocar sinais respiratórios, pneumonia e emagrecimento, quando presente em grande número no hospedeiro. L. cysticola parasita o tecido conjuntivo de galiformes e provoca a formação de pequenos nódulos subcutâneos calcificados, que podem ser confundidos com nódulos de tuberculose aviária. No presente trabalho, são discutidos os aspectos patológicos das lesões causadas pelos ácaros C. nudus e L. cysticola e a caracterização morfológica desses parasitas.

Infestação simultânea por Cytodites nudus e Laminosioptes cysticola e seus aspectos patológicos em galinhas de subsistência

The occurrence of Cytodites nudus and Laminosioptes cysticola mites is rare and there is no report of this simultaneous infestation in Brazilian scientific literature. C. nudus is known as the air sacs mite and may cause respiratory signs as well as pneumonia and weight loss when present in large numbers in the host. L. cysticola is found in connective tissue of galliforms and causes formation of small calcified subcutaneous nodules that can be confused with the characteristic nodules found in avian tuberculosis. In this paper are discussed the pathological findings of lesions caused by C. nudus and L. cysticola and their morphological characterization.

Cytodites nudus e Laminosioptes cysticola são ácaros cuja ocorrência é pouco relatada e cuja infestação simultânea nunca foi descrita na literatura científica brasileira. C. nudus é conhecido como ácaro dos sacos aéreos e pode provocar sinais respiratórios, pneumonia e emagrecimento, quando presente em grande número no hospedeiro. L. cysticola parasita o tecido conjuntivo de galiformes e provoca a formação de pequenos nódulos subcutâneos calcificados, que podem ser confundidos com nódulos de tuberculose aviária. No presente trabalho, são discutidos os aspectos patológicos das lesões causadas pelos ácaros C. nudus e L. cysticola e a caracterização morfológica desses parasitas.

Behavior of Salmonella heidelberg and Salmonella enteritidis strains following broiler chick inoculation: evaluation of cecal morphometry, liver and cecum bacterial counts and fecal excretion patterns

Over the years, Salmonella Heidelberg (SH) has gained prominence in North America poultry production and in the poultry production of other countries. Salmonella Heidelberg has been isolated and reported from poultry and poultry products in Brazil since 1962, whereas Salmonella Enteritidis (SE) has only emerged as a serious problem in poultry and public health since 1993. These strains of Salmonella can cause intestinal problems in newly hatched chicks, and infection may persist until adulthood. Upon slaughter of chickens, Salmonella can contaminate carcasses, a condition that poses a threat to human health. The aim of this study was to compare the fecal excretion of Salmonella Enteritidis and Salmonella Heidelberg in newly hatched chicks (orally inoculated with 10(5)ufc/mL each) until 20 days of age. In addition, the ratio of cecal villus height:crypt depth (morphometry) and liver and cecum cell counts was analyzed in chicks ranging from 0 to 3 days of age and infected with these two Salmonella strains. One hundred seventeen chicks were separated into one of three experimental groups: a control group, an SE-infected group and an SH-infected group. Eight chicks per group were euthanized at 6, 12 and 72 hours post-inoculation (pi) to allow for Salmonella isolation from the liver and cecum and for the collection of the cecum for villi and crypt analysis. Other birds were allowed to mature to 20 days of age and cloacal swabs were taken at 2, 6, 13 and 20 days pi to compare the fecal excretion of inoculated strains. The Salmonella Enteritidis group had a higher number of cells excreted during the trial. Both strains were isolated from the liver and cecum by 6h pi. At 12h pi the Salmonella Heidelberg group had high cell counts in the cecum. No difference was found in liver cell counts. Both strains showed lower villus height:crypt depth ratio than the control group post-infection.

Número mais provável de Salmonella isoladas de carcaças de frango resfriadas

Salmonella in poultry remains an important worldwide problem, and among foodborne pathogens, the Salmonella appears as one of the most important outbreaks agents. To assess the risks of acquiring infection via undercooked poultry or cross contamination from chickens, it is important to determine the extent of the contamination on raw poultry with this pathogen. In this study, 180 refrigerated broiler carcasses, obtained from local stores, were assessed to recover Salmonella by the most probable number (MPN) method to quantify bacterias cells onto brilliant green agar with novobiocin (BGN) and xylose lysin tergitol 4 agar (XLT4). The results showed 12,2% occurrence of Salmonella by conventional microbiological method from refrigerated broiler carcasses. The MPN per ml rates was 2,7 cells on XLT4 agar and 1,3 cells on BGN agar plate. The Salmonella serovars isolated from broiler carcasses were S. Enteritidis, S. Agona, S. Rissen, S. Heidelberg and S. Livingstone. Results analysis showed that could be a variable number of cells contaminating refrigerated broiler carcasses, which have been selling to the consumer.

A Salmonella permanece um importante problema na avicultura e, considerando os patógenos transmitidos por alimentos, aparece como um dos agentes principais em surtos de toxinfecções alimentares. Para auxiliar na avaliação de riscos em adquirir infecção alimentar via carne de frangos que sofreram cocção inadequada, ou através de contaminação cruzada a partir desses animais, torna-se importante determinar a extensão de contaminação por patógenos em carne crua. No presente trabalho, foram analisadas 180 carcaças de frangos resfriadas, adquiridas em varejos, para pesquisa de Salmonella com determinação do número de células da bactéria. Foi utilizado o método do número mais provável (NMP) nos ágares para isolamento verde brilhante com novobiocina (BGN) e xilose-lisina tergitol 4 (XLT4). Os resultados mostraram 12,2% de ocorrência de Salmonella nas carcaças de frangos resfriadas e a média de NMP de Salmonella por mL, na leitura pelo ágar XLT4 foi de 2,7 células e no ágar BGN foi de 1,3 células. Os sorovares de Salmonella isolados das carcaças de frangos no estudo foram S. Enteritidis, S. Agona, S.Rissen, S. Heidelberg e S. Livingstone. A análise dos resultados demonstrou existir um número variável de células de Salmonella contaminando as carcaças de frango resfriadas que estão à venda ao consumidor.

Número mais provável de Salmonella isoladas de carcaças de frango resfriadas

Salmonella in poultry remains an important worldwide problem, and among foodborne pathogens, the Salmonella appears as one of the most important outbreaks agents. To assess the risks of acquiring infection via undercooked poultry or cross contamination from chickens, it is important to determine the extent of the contamination on raw poultry with this pathogen. In this study, 180 refrigerated broiler carcasses, obtained from local stores, were assessed to recover Salmonella by the most probable number (MPN) method to quantify bacterias cells onto brilliant green agar with novobiocin (BGN) and xylose lysin tergitol 4 agar (XLT4). The results showed 12,2% occurrence of Salmonella by conventional microbiological method from refrigerated broiler carcasses. The MPN per ml rates was 2,7 cells on XLT4 agar and 1,3 cells on BGN agar plate. The Salmonella serovars isolated from broiler carcasses were S. Enteritidis, S. Agona, S. Rissen, S. Heidelberg and S. Livingstone. Results analysis showed that could be a variable number of cells contaminating refrigerated broiler carcasses, which have been selling to the consumer.

A Salmonella permanece um importante problema na avicultura e, considerando os patógenos transmitidos por alimentos, aparece como um dos agentes principais em surtos de toxinfecções alimentares. Para auxiliar na avaliação de riscos em adquirir infecção alimentar via carne de frangos que sofreram cocção inadequada, ou através de contaminação cruzada a partir desses animais, torna-se importante determinar a extensão de contaminação por patógenos em carne crua. No presente trabalho, foram analisadas 180 carcaças de frangos resfriadas, adquiridas em varejos, para pesquisa de Salmonella com determinação do número de células da bactéria. Foi utilizado o método do número mais provável (NMP) nos ágares para isolamento verde brilhante com novobiocina (BGN) e xilose-lisina tergitol 4 (XLT4). Os resultados mostraram 12,2% de ocorrência de Salmonella nas carcaças de frangos resfriadas e a média de NMP de Salmonella por mL, na leitura pelo ágar XLT4 foi de 2,7 células e no ágar BGN foi de 1,3 células. Os sorovares de Salmonella isolados das carcaças de frangos no estudo foram S. Enteritidis, S. Agona, S.Rissen, S. Heidelberg e S. Livingstone. A análise dos resultados demonstrou existir um número variável de células de Salmonella contaminando as carcaças de frango resfriadas que estão à venda ao consumidor.

OCURRENCE OF Campylobacter sp IN BROILER FLOCKSAND CORRESPONDING CARCASSES / OCORRÊNCIA DE Campylobacter sp EM LOTES DE FRANGOS DE CORTE E NAS CARCAÇAS CORRESPONDENTES

The aim of the present study was to assess the dissemination and levels of Campylobacter contamination in broiler flocks and related carcasses. Twenty-two flocks aged 3 weeks or older were assessed, and 110 cecal droppings and 96 carcasses (38 carcasses after defeathering and 58 after the last chilling operation) were enumerated. Bolton selective enrichment broth was used for enumeration of the organism. Additionally, the carcasses were submitted to pre-enrichment for the detection of the agent at low levels of contamination. Was noted that 18.18% of broiler flocks (4/22) was not colonized by Campylobacter; however, their carcasses were found to be contaminated after defeathering. The mean levels of colonization of positive flocks were 7.00 log10 cfu/g of cecal droppings, 5.15 log10 cfu per carcass after defeathering and 4.24 log cfu per carcass after the last chilling operation. The prevalence of Campylobacter in carcasses after defeathering and chilling were positively correlated, whereas a reduction of around 1 log10 was observed in the contamination initially found in the carcasses, showing that current measures, such as Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) and Good Production Practices, are useful but insufficient for thoroughly eliminating Campylobacter from the end product. Key words: Chicken, contamination, slaughterhouse.

O presente trabalho teve por objetivo verificar a ocorrência de Campylobacter em lotes de frango de corte durante a criação e nas carcaças correspondentes após o abate. Foram avaliados 22 lotes a partir das três semanas de idade, com a análise de 110 conteúdos cecais e 96 carcaças (38 após a depenadeira e 58 após o último chiller). Para a enumeração do Campylobacter, utilizou-se o caldo Bolton, analisando-se as carcaças pré-enriquecimento. Quatro (18,18%) dos lotes analisados não estavam colonizados por Campylobacter, mas, após a depenadeira, carcaças correspondentes estavam contaminadas. Os níveis médios de colonização dos lotes positivos foram de 7 log10ufc/g de conteúdo cecal, 5,15 log10 ufc/carcaça após a depenadeira e 4,24 log10 ufc/carcaça após o último chiller. Os níveis de Campylobacter nas carcaças após a depenadeira e chiller tiveram correlação positiva. Observou-se redução de cerca de 1 log10 na contaminação inicial, demonstrando que medidas atuais, como análise de perigos e pontos críticos de controle e boas práticas de produção, são úteis, mas insuficientes para eliminar completamente Campylobacter do produto final. Palavras-chaveS: Abatedouro, aves, colonização bacteriana.

Antimicrobial resistance in Campylobacter spp isolated from broiler flocks

The aim of this study was to assess the antimicrobial susceptibility of 62 Campylobacter spp. strains obtained from broiler flocks using the agar diffusion method. The Campylobacter spp strains were isolated from 22 flocks aged between 3 and 5 weeks of life, isolated from cloacae swabs, stools and cecal droppings in the farm and from the carcass rinsing in the slaughterhouse. Campylobacter spp strains were tested on Mueller-Hilton (MH) agar (27 samples) and MH plus TTC agar (35 samples). The antimicrobial susceptibility test revealed a 62.5% resistance to at least one drug, especially to enrofloxacin (71%), neomycin (50%), lincomycin (50%), tetracycline (43%), penicillin (42%), ceftiofur (33%) amoxicillin (27%), spiramycin (20%), ampicillin (18%) and norfloxacin (14%), whereas a lower percentage of strains was resistant to erythromycin (10%) and doxycycline (10%). All strains were sensitive to gentamicin and lincomycin-spectinomycin and 80% of them to colistin. These results indicate that it is necessary to reduce the use of antimicrobials in veterinary and human medicine.

O objetivo deste estudo foi verificar a susceptibilidade antimicrobiana de 62 amostras de Campylobacter spp. em amostras isoladas de 22 lotes de frango de corte, pelo método de difusão em Agar. As amostras de Campylobacter spp foram isoladas de frangos com idade entre 3 e 5 semanas, isoladas a partir de swabs cloacais, fezes e descarga cecal obtidos nas granjas e de rinsagem de carcaças no abatedouro. Das 62 amostras avaliadas, 27 foram testadas em ágar MH e 35 no ágar MH com TTC. O perfil de susceptibilidade antimicrobiana apresentou 62,5% de resistência para, no mínimo, uma droga, sobretudo para enrofloxacina (71%), neomicina (50%), lincomicina (50%), tetraciclina (43%), penicilina (42%), ceftiofur (33%) amoxicilina (27%), espiramicina (20%), ampicilina (18%) e norfloxacina (14%), enquanto uma percentagem menor foi observada frente eritromicina (10%) e doxiciclina (10%). Todas as amostras foram sensíveis a gentamicina e linco-espectinomicina e 80% à colistina. Pelo exposto, faz-se necessária a redução do uso dos antimicrobianos na medicina veterinária e em humanos.

Pré-enriquecimento e isolamento direto para identificação de Campylobacter em swabs cloacais e carcaças de frango

Campylobacter   são microorganismos patogênicos associados com aves ou alimentos de origem avícola e sua importância está relacionada à alta prevalência de Campylobacter nos frangos de corte e suas carcaças, correlacionados com gastroenterite em humanos. Neste estudo, monitorou-se 22 lotes de frango de corte com idades entre 3 a 5 semanas na granja e 35 dias no abate e avaliou-se os métodos de pré-enriquecimento (PE) e isolamento direto (ID) para identificação de Campylobacter em swabs cloacais e carcaças de frango. Realizaram-se 22 análises de swabs cloacais pelo PE e pelo ID, 96 análises de carcaças pelo ID e, destas, 95 pelo PE. Para o isolamento direto a partir de swabs utilizou-se o ágar mCCDA acrescido de suplemento seletivo, acondicionado em embalagem não permeável e microaerofilia com mistura de gases (5% O2, 10% CO2 e 85% N2). Para o PE, os swabs foram inoculados em pool no caldo Bolton suplementado com antibióticos e 200 mg/L de TTC, seguido de inoculação em ágar mCCDA, também em microaerofilia. As carcaças também foram analisadas para ambos os métodos, utilizando-se caldo Bolton no pré-enriquecimento, seguido de inoculação em mCCDA ou isolamento direto em ágar Bolton com TTC, sempre em microaerofilia. Não houve diferença significativa (p=1,00) entre os métodos de pré-enriquecimento e isolamento direto nas amostras de swabs e carcaças. Identificou-se 81,8% lotes posit

Antibiotic resistance in Salmonella Enteritidis isolated from broiler carcasses

Eighty Salmonella Enteritidis strains isolated from broiler carcasses between May 1995 and April 1996 in the State of Rio Grande do Sul, Brazil, were tested for antibiotic susceptibility using the disk diffusion method. Resistance to colistin, novobiocin, erythromycin and tetracycline was observed in 100% of the isolates. The strains showed intermediate resistance at different levels to kanamycin (1.25%), enrofloxacin (3.75%), neomycin (3.75%), fosfomycin (20%), sulphonamides (86.25%) and nitrofurantoin (90%). Resistance to ciprofloxacin, norfloxacin, gentamicin, polymyxin B, sulphametrim and sulphazotrim was not found. Since resistance to antibiotics especially those introduced in the last decades, was detected, it is recommended that their use must be based on the results of resistance tests or minimum inhibitory concentration tests.

Oitenta amostras de Salmonella Enteritidis isoladas de carcaças de frango no período entre maio de 1995 a abril de 1996 no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil foram testados para susceptibilidade antimicrobiana pelo método de antibiograma. O antibiograma das amostras apresentou 100% de resistência a colistina, novobiocina, eritromicina e tetraciclina. Tiveram resistência em diferentes níveis a canamicina (1,25%), enrofloxacina (3,75%), neomicina (3,75%), fosfomicina (20%), sulfonamida (86,25%) e nitrofurantoína (90%) e por outro lado não apresentaram resistência a ciprofloxacina, norfloxacina, gentamicina, polimixina B, sulfametrim e sulfazotrim. A constatação de resistência a antibióticos, inclusive àqueles introduzidos na última década, enfatiza a necessidade de uso responsável de antibióticos, e com base em antibiograma ou concentração inibitória mínima.

OCURRENCE OF Campylobacter sp IN BROILER FLOCKSAND CORRESPONDING CARCASSES / OCORRÊNCIA DE Campylobacter sp EM LOTES DE FRANGOS DE CORTE E NAS CARCAÇAS CORRESPONDENTES

The aim of the present study was to assess the dissemination and levels of Campylobacter contamination in broiler flocks and related carcasses. Twenty-two flocks aged 3 weeks or older were assessed, and 110 cecal droppings and 96 carcasses (38 carcasses after defeathering and 58 after the last chilling operation) were enumerated. Bolton selective enrichment broth was used for enumeration of the organism. Additionally, the carcasses were submitted to pre-enrichment for the detection of the agent at low levels of contamination. Was noted that 18.18% of broiler flocks (4/22) was not colonized by Campylobacter; however, their carcasses were found to be contaminated after defeathering. The mean levels of colonization of positive flocks were 7.00 log10 cfu/g of cecal droppings, 5.15 log10 cfu per carcass after defeathering and 4.24 log cfu per carcass after the last chilling operation. The prevalence of Campylobacter in carcasses after defeathering and chilling were positively correlated, whereas a reduction of around 1 log10 was observed in the contamination initially found in the carcasses, showing that current measures, such as Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) and Good Production Practices, are useful but insufficient for thoroughly eliminating Campylobacter from the end product. Key words: Chicken, contamination, slaughterhouse.

O presente trabalho teve por objetivo verificar a ocorrência de Campylobacter em lotes de frango de corte durante a criação e nas carcaças correspondentes após o abate. Foram avaliados 22 lotes a partir das três semanas de idade, com a análise de 110 conteúdos cecais e 96 carcaças (38 após a depenadeira e 58 após o último chiller). Para a enumeração do Campylobacter, utilizou-se o caldo Bolton, analisando-se as carcaças pré-enriquecimento. Quatro (18,18%) dos lotes analisados não estavam colonizados por Campylobacter, mas, após a depenadeira, carcaças correspondentes estavam contaminadas. Os níveis médios de colonização dos lotes positivos foram de 7 log10ufc/g de conteúdo cecal, 5,15 log10 ufc/carcaça após a depenadeira e 4,24 log10 ufc/carcaça após o último chiller. Os níveis de Campylobacter nas carcaças após a depenadeira e chiller tiveram correlação positiva. Observou-se redução de cerca de 1 log10 na contaminação inicial, demonstrando que medidas atuais, como análise de perigos e pontos críticos de controle e boas práticas de produção, são úteis, mas insuficientes para eliminar completamente Campylobacter do produto final. Palavras-chaveS: Abatedouro, aves, colonização bacteriana.

MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE DNA PARA A DETECÇÃO DE Salmonella EM OVOS DE GALINHAS, COM E SEM CASCA, ATRAVÉS DA REAÇÃO EM CADEIA PELA POLIMERASE

The Salmonella sp detection in feed samples is time consuming, it has five stages and requires 120 hours for final results. The use of polimerase chain reaction technique can reduce this time considerably, however it can be affected by substances from the sample. This study had the objective of comparing two methods of DNA extraction, by heating process and by phenol-chloroform in samples of 100 chicken eggs experimentally infected with a sample of Salmonella enterica sorovar typhimurium in stationary phase. After the two extraction methods a PCR was done using a pair of oligonucleotides that amplifies a fragment of 284pb in the InvA gene de Salmonella sp. Comparing the extraction methods it was noted a difference of 12% favorably to the phenol-chloroform method when the extraction was done from eggs with shell. The same method using just the egg internal part resulted in a difference of 26% with high significance (P 0.003), showing that the method used was determinant to improve the technique efficiency. However, comparing the positive percentage independent of the DNA extraction method a significant difference (P 0.047) was noted for outshell eggs. This fact suggests that for Salmonella egg analysis, only the egg internal part should be used because the shell can determine interference in technique.

O diagnóstico microbiológico de Salmonella sp em amostras de alimentos é demorado, com cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilização da técnica da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) pode diminuir esse período, porém sofre influência de substâncias presentes na amostra que afetam a reação. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extração de DNA, a extração por tratamento térmico e a pelo fenol-clorofórmio, em amostras de 100 ovos de galinhas domésticas artificialmente contaminados com uma cepa de Salmonella enterica sorovar typhimurium em fase estacionária. O material obtido com as extrações foi submetido à PCR, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam um fragmento de 284pb do gene InvA de Salmonella sp. Comparando os métodos de extração, observou-se uma diferença na capacidade de detecção de 12% a favor do método do fenol-clorofórmio, quando a extração foi realizada a partir do ovo com casca. No momento em que a mesma metodologia foi usada apenas com a parte interna dos ovos, essa diferença subiu para 26% o que foi significativo (P 0,003), demonstrando que a metodologia de extração foi determinante para melhorar a sensibilidade da técnica. No entanto, ao comparar-se a percentagem de positivos independente da técnica de extração do DNA, observou-se diferença significativa (P 0,047) a favor das amostras de ovos sem casca. Isso sugere que para a detecção de Salmonella por PCR deve-seutilizar apenas a parte interna dos ovos, pois a casca pode determinar interferência na técnica.

Classification of Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) and Human Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) in Phylogenetic Groups and Association with Pathogenicity In Vivo

Background: Avian pathogenic E. coli (APEC) and uropathogenic E. coli (UPEC) are responsible, respectively, for avian colibacillosis and for 80% of urinary tract infections in humans. E. coli control is difficult due to the absence of a reliable method to differentiate pathogenic and commensal strains. Genetic similarity between APEC and UPEC suggests a common ancestral origin and the capability of potentially pathogenic strains to affect human health. The classification in phylogenetic groups facilitates the identification of pathogenic strains. The objective of this work was to classify APEC and UPEC E. coli strains into phylogenetic groups and to associate it with in vivo pathogenicity.Materials, Methods & Results: 460 APEC and 450 UPEC strains, stored in BHI with glycerol at -80C, were selected. APEC strains were isolated from cellulitis, respiratory tract and poultry litter of broiler flocks from Southern Brazil. The UPEC strains from urinary tract infection were provided by a hospital in Porto Alegre. After DNA extraction, APEC and UPEC strains were classified into four phylogenetic groups (A, B1, B2 and D) by a multiplex-PCR protocol for the detection of the chuA and yjaA genes and the TspE4.C2 DNA fragment. Phylogenetic groups were associated with pathogenicity indexes (PI), presented on a scale of 0 to 10, which were previously obtained through the inoculation of

Detecção de aflatoxina B1 no organismo de frangos de corte através do emprego de ensaio imuno-enzimático utilizando anticorpos monoclonais(ELISA)

As aflatoxinas prejudicam os parâmetros de produção, causam imunodepressão humoral e celular e afetam o mecanismo de coagulação. No sul do Brasil, a aflatoxicose representou de 15 a 29% dos casos examinados em laboratório de 1985 a 1991, sendo uma das principais enfermidades diagnosticadas no período em questão.Frangos de corte com 42 dias de idade, fêmeas, com peso médio de 1.800 g foram inoculados diretamente no inglúvio com 360 mg de aflatoxina B 1 através de dose única. Aos 30 minutos, 1, 2, 5, 8, 12 e 24 horas após a inoculação, cinco animais tratados e quatro controles foram sacrificados e coletados 40g de fígado, de cada um, para serem processados individualmente. Usou-se o kit comercial Veratox da Neogen Co. que emprega o ensaio imunoenzimático utilizando anticorpos monoclonais (ELISA). Nos fígados, houve diferenças significativas (P

Pré-enriquecimento e isolamento direto para identificação de Campylobacter em swabs cloacais e carcaças de frango

Campylobacter   são microorganismos patogênicos associados com aves ou alimentos de origem avícola e sua importância está relacionada à alta prevalência de Campylobacter nos frangos de corte e suas carcaças, correlacionados com gastroenterite em humanos. Neste estudo, monitorou-se 22 lotes de frango de corte com idades entre 3 a 5 semanas na granja e 35 dias no abate e avaliou-se os métodos de pré-enriquecimento (PE) e isolamento direto (ID) para identificação de Campylobacter em swabs cloacais e carcaças de frango. Realizaram-se 22 análises de swabs cloacais pelo PE e pelo ID, 96 análises de carcaças pelo ID e, destas, 95 pelo PE. Para o isolamento direto a partir de swabs utilizou-se o ágar mCCDA acrescido de suplemento seletivo, acondicionado em embalagem não permeável e microaerofilia com mistura de gases (5% O2, 10% CO2 e 85% N2). Para o PE, os swabs foram inoculados em pool no caldo Bolton suplementado com antibióticos e 200 mg/L de TTC, seguido de inoculação em ágar mCCDA, também em microaerofilia. As carcaças também foram analisadas para ambos os métodos, utilizando-se caldo Bolton no pré-enriquecimento, seguido de inoculação em mCCDA ou isolamento direto em ágar Bolton com TTC, sempre em microaerofilia. Não houve diferença significativa (p=1,00) entre os métodos de pré-enriquecimento e isolamento direto nas amostras de swabs e carcaças. Identificou-se 81,8% lotes posit

Utilização de inteligência artificial (redes neurais artificiais) para a classificação do comportamento bioquímico de amostras de Escherichia coli isoladas de frangos de corte

A  Escherichia coli é comumente encontrada na avicultura e muitas vezes sua presença no organismo dos animais e/ou contaminando as camas de aviários não causa estranheza. Por outro lado, a utilização de inteligência artificial, especificamente redes neurais artificiais, está sendo crescentemente empregada como ferramenta para medir relações não lineares entre variáveis. Neste trabalho foram usados os dados disponíveis referentes a 261 amostras da bactéria oriundas de camas de aviários, lesões de celulite e quadros respiratórios de frangos de corte. O diagnóstico laboratorial envolveu o isolamento do agente, a caracterização dos genes associados à virulência, as lesões provocadas pela inoculação em pintos, o Índice de Patogenicidade das amostras e a resistência antimicrobiana a 14 antibióticos que foram as entradas das redes neurais e sete provas bioquímicas as saídas. A principal conclusão deste artigo foi de que as redes neurais foram capazes de realizar a classificação correta do comportamento das amostras com amplitude de 87,80% a 98,37%. A sensibilidade e a especificidade das classificações obtidas variaram de 59,32% a 99,47% e de 80,00% a 98,54%, respectivamente.

MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE DNA PARA A DETECÇÃO DE Salmonella EM OVOS DE GALINHAS, COM E SEM CASCA, ATRAVÉS DA REAÇÃO EM CADEIA PELA POLIMERASE

The Salmonella sp detection in feed samples is time consuming, it has five stages and requires 120 hours for final results. The use of polimerase chain reaction technique can reduce this time considerably, however it can be affected by substances from the sample. This study had the objective of comparing two methods of DNA extraction, by heating process and by phenol-chloroform in samples of 100 chicken eggs experimentally infected with a sample of Salmonella enterica sorovar typhimurium in stationary phase. After the two extraction methods a PCR was done using a pair of oligonucleotides that amplifies a fragment of 284pb in the InvA gene de Salmonella sp. Comparing the extraction methods it was noted a difference of 12% favorably to the phenol-chloroform method when the extraction was done from eggs with shell. The same method using just the egg internal part resulted in a difference of 26% with high significance (P 0.003), showing that the method used was determinant to improve the technique efficiency. However, comparing the positive percentage independent of the DNA extraction method a significant difference (P 0.047) was noted for outshell eggs. This fact suggests that for Salmonella egg analysis, only the egg internal part should be used because the shell can determine interference in technique.

O diagnóstico microbiológico de Salmonella sp em amostras de alimentos é demorado, com cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilização da técnica da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) pode diminuir esse período, porém sofre influência de substâncias presentes na amostra que afetam a reação. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extração de DNA, a extração por tratamento térmico e a pelo fenol-clorofórmio, em amostras de 100 ovos de galinhas domésticas artificialmente contaminados com uma cepa de Salmonella enterica sorovar typhimurium em fase estacionária. O material obtido com as extrações foi submetido à PCR, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam um fragmento de 284pb do gene InvA de Salmonella sp. Comparando os métodos de extração, observou-se uma diferença na capacidade de detecção de 12% a favor do método do fenol-clorofórmio, quando a extração foi realizada a partir do ovo com casca. No momento em que a mesma metodologia foi usada apenas com a parte interna dos ovos, essa diferença subiu para 26% o que foi significativo (P 0,003), demonstrando que a metodologia de extração foi determinante para melhorar a sensibilidade da técnica. No entanto, ao comparar-se a percentagem de positivos independente da técnica de extração do DNA, observou-se diferença significativa (P 0,047) a favor das amostras de ovos sem casca. Isso sugere que para a detecção de Salmonella por PCR deve-seutilizar apenas a parte interna dos ovos, pois a casca pode determinar interferência na técnica.