Efeito de diferentes formas de cultivo na ação do óxido nítrico na maturação e na integridade da membrana plasmática de complexos cumulus-oócito em bovinos / Influence of different forms of culture on the nitric oxide action on maturation and membrane integrity on bovine cumulus-oocyte complex

O objetivo do presente estudo foi avaliar se diferentes formas de cultivo interferem no efeito do óxido nítrico (NO)sobre a maturação e a integridade da membrana plasmática do complexo cumulus-oócito de bovinos. Para tanto,realizou-se cultivo em gotas sob óleo mineral ou em placas de quatro poços com a adição de diferentes concentraçõesde nitroprussiato de sódio (SNP, doador de óxido nítrico). Não foi observada diferença (P > 0,05) entre as formas decultivo quando se avaliou a integridade de membrana plasmática e a expansão das células do cumulus (CC). Contudo,os oócitos dos grupos controle e os cultivados na presença de 10-3 M de SNP, ambos cultivados em placa, apresentarammaior porcentagem de membrana íntegra do que os mesmos tratamentos cultivados em óleo mineral (P < 0,05).Observou-se que a adição de 10-3 M de SNP diminuiu o grau de expansão das CC e de integridade da membranaplasmática dos oócitos, tanto no cultivo em gota sob óleo quanto em placa, diferindo dos outros grupos (P < 0,05).Semelhante à expansão, a forma de cultivo não interferiu na extrusão do primeiro corpúsculo polar, sendo que a adiçãode 10-3 M de SNP inibiu a extrusão em ambos os sistemas (P < 0,05). Houve um efeito dose-resposta na concentraçãode NO no meio de maturação em ambos os tipos de cultivo (P < 0,05), sendo que esta foi maior no meio de cultivo sobóleo, exceção feita quando se adicionou 10-3 M de SNP, tratamento no qual não houve diferença nos tipos de cultivoempregados. Estes dados mostram que o sistema de cultivo não interferiu na ação do NO na maturação in vitro de COCbovinos, mas interfere na integridade da membrana plasmática do oócito.(AU)

The aim of the present study was to evaluate the influence of different forms of in vitro culture on the nitric oxide actionin maturation and membrane integrity on bovine cumulus-oocyte complex. No significant effect was observed betweendifferent forms of culture (mineral oil vs plate; P > 0.05), as much for membrane integrity as for expansion of the CC.However, it was observed that oocytes of the groups control and 10-3 M of SNP, cultivated in plate, had presented greaterpercentage of cell with maintenance of membrane integrity than same treatments cultivated in drop. The addition of10-3 M of SNP showed an inhibitory effect on the expansion and membrane integrity of CC and oocytes in both, culturein drops under oil and plate (P < 0.05). The culture form did not intervene with the extrusion of the first polar corpuscleand the addition of 10-3 M of SNP inhibited this extrusion in the both systems (P < 0.05). There was a dose-responseeffect on the concentration of NO in the maturation medium in both types of cultivation (P < 0,05), and this was higherin the culture medium under oil, except when added 10-3 M of SNP, treatment in which there was no difference in thetypes of cultivation employed. (P<0.05). These data demonstrate that the culture system did not intervene with theaction of the NO in the maturation in vitro of bovine COC, but intervened with the integrity of the plasmatic membrane of the oocyte.(AU)

Efeito da adição de óxido nítrico na maturação in vitro de oócitos bovinos

O óxido nítrico (NO) é um radical livre altamente reativo, que está envolvido na sinalização intra e intercelular de várias etapas da reprodução. O objetivo do presente estudo foi de avaliar o efeito da adição de nitroprussiato de sódio (SNP), um doador de NO, na maturação nuclear e citoplasmática in vitro de oócitos bovinos. Ovários de vacas mestiças cíclicas foram obtidos em matadouros da região. Os complexos cumulus-oócito (COCs) foram aspirados de folículos com 3 a 5 mm. Os COCs foram classificados de acordo com a transparência, número das camadas de células e aspecto compacto do cumulus. Concentrações crescentes de SNP foram adicionadas ao meio de maturação (10-9,10-7, 10-5, 10-3 M de SNP). A maturação nuclear foi avaliada pela coloração com orceína acética a 2% e a maturação citoplasmática, pela observação da migração dos grânulos corticais (coloração com FITC-lectina) e pela taxa de desenvolvimento embrionário in vitro. Foi realizada análise de variância e as máedias foram comparadas pelo teste t a 5% de probabilidade. Concentrações baixas de SNP (10-7 e 10-9 M) não tiveram efeito significativo na maturação nuclear, contudo, quando foi adicionada concentração alta de SNP (10-3 M) no meio, ocorreu retardo/inibição da maturação nuclear (P<0,05), onde os oócitos permaneceram em metáfase I (MI) após 24 h de cultivo. Para se avaliar se este efeito era reversível e se havia ocorrido um retardo ou inibição da progressão de MI para MII, oócitos foram maturados em presença de 10-3 M de SNP por 48 h com mudança de meio (sem SNP) ou não. Foi observado que mesmo após 48h, os oócitos permaneceram em MI quando se mudou o meio as 24 h sem SNP ou não. Foi realizada a cinética da maturação nuclear para se avaliar se houve ou não retardo na progressão da meiose com a cencentração de 10-3 M de SNP. Observou-se que esta concentração retardou o rompimento da vesícula germinativa às 8 h de cultivo (P<0,05) e as 12 h., não houve diferença significativa entre o controle e o tratamento. Os oócitos tratados com as concentrações que não apresentaram alteração na maturação nuclear, foram avaliados quanto a maturação citoplasmática. A concentração 10-5 M melhorou a percentagem de migração total dos grânulos corticais (P<0,05), mas não teve efeito significativo na percentagem de clivagem e produção de blastocistos. Estes resultados mostram que o óxido nítrico pode ter tanto um efeito inibitório quanto estimulatório na maturação de oócitos bovinos in vitro, dependendo da sua concentração