THE ROLE OF Nicotiana glauca GRAHAM (PARAGUAYAN HERBS) AS AN ADJUVANT IN IMMUNOMODULATION OF NEWCASTLE DISEASE VACCINE FOR BROILERS / ESTUDO DA AÇÃO DE Nicotiana glauca GRAHAM (ERVA PARAGUAIA) COMO COADJUVANTE EM VACINA CONTRA A DOENÇA DE NEWCASTLE EM FRANGOS DE CORTE

The Nicotiana glauca is a native plant species from Argentina, but found all over South América, being used against headaches, rheumatism, injuries, ulcers, and so on. Researchers have considered it as having immunomodulation effect. This study was conducted to investigate the use of a aqueous extract of Nicotiana glauca Graham as an immunomodulator (adjuvant) of a Newcastle disease vaccine.. A total of 56 broilers were distributed into 4 experimental groups. Each one of them received 3 dosages of this vaccine with or without the addition of different concentrations of the extract Using hemmoaglutination inhibition techniques , the results have shown differences (P 0.05) in the third sera collection. An increase in the antibody titer with the inclusion of 5 mg/dosage of the extract (Treatment 3) as compared to 1 mg/dosage (Treatment 2) and 10 mg/dosage of the extract (Treatment 4) was observed, However, birds from Treatment 3 did not differ (P> 0.05) from Treatment 1. These results indicated that further investigations are required, including the use of cytotoxicity tests in vitro, to evaluate the immunomodulation effect of this extract.  KEY WORDS: Immunomodulation effect, Nicotiana glauca Graham, vaccine.

A Nicotiana glauca Graham é uma espécie nativa da Argentina, bem distribuída na América do Sul, sendo empregada, popularmente, contra dores de cabeça, dores reumáticas, cicatrização de feridas e úlceras, entre outros. Pesquisas têm avaliado a sua ação na potencialização da resposta imune. Assim, com este estudo, buscou-se avaliar a ação de um extrato aquoso de Nicotiana glauca Graham como coadjuvante imunológico em uma vacina contra a doença de Newcastle (DNC). Utilizaram-se 56 frangos de corte, distribuídos em quatro grupos experimentais, que receberam três doses da vacina, com ou sem adição de diferentes quantidades do extrato. Os resultados sorológicos, obtidos através do teste de inibição da hemaglutinação, demonstraram diferença estatística (P 0,05) aos 60 dias de idade dos frangos, com incremento dos níveis de anticorpos contra a DNC, quando houve a inclusão de 5 mg/dose (Tratamento 3) do extrato, em relação à inclusão de 1 mg/dose (Tratamento 2) e 10 mg/dose (Tratamento 4), do mesmo extrato, porém sem diferir estatisticamente do controle (Tratamento 1). Estes resultados estimulam a realização de outros trabalhos, incluindo a realização do teste de citotoxicidade in vitro deste extrato, a fim de avaliar a sua ação efetiva como um coadjuvante imunológico. PALAVRAS-CHAVES: Coadjuvante imunológico, Nicotiana glauca Graham, vacina.

Evaluation of blood on filter paper to detection and quantification of the antibo¬dies to newcastle disease virus / Avaliação do uso de sangue em papel-filtro para detecção e quantificação de anticorpos para o vírus da doença de newcastle

The present study describes the evaluation of a filter paper blood sampling technique for assessment of the level of antibodies against the Newcastle disease virus (NDV) by hemagglutination inhibition (HI) test. Blood samples were collected from ninety eigth chickens with a known history of vaccination against NDV and analyzed by HI method. The blood was impregnated onto Whatman no. 1 filter paper with 3cm2 and also collected in tubes for obtaining serum. The papers were stored at room temperature and tested within fourty five days. The resulting sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of the filter paper HI compared to serum HI was 89%, 73%, 76% and 87%, respectively. It was found index precision of the 80% and the correlation coefficient r = 0.81%. The overall average geometrical titer of antibodies was 33.1 and 33.6 in eluates and in sera, respectively. Association between the two methods was found to be highly significant (p 0.001) when analyzed by Fishers test. The results indicate the potential use of filter paper blood sampling technique as an alternative to serum for detection of the antibodies against NDV. KEY-WORDS: Chicken, hemagglutination inhibition, serology.

O presente trabalho descreve a utilização de sangue total em papel-filtro para avaliação dos níveis de anticorpos específicos contra o vírus da doença de Newcastle (NDV) através da técnica de inibição da hemaglutinação (HI). Coletaram-se e analisaram-se por HI amostras de sangue de noventa e oito galinhas, com um histórico conhecido de vacinação contra o NDV HI. O sangue foi impregnado em papel-filtro Wathman n 1 com 3cm2 e também coletado em tubos para a obtenção de soro. Armazenaram-se os papéis à temperatura ambiente e procedeu-se a sua análise num período de até quarenta e cinco dias. A sensibilidade, a es¬pecificidade, o valor preditivo positivo e o valor preditivo negativo do HI mediante o uso de papel-filtro, comparado com o HI em que se utilizou soro, foram de 89%, 73%, 76% e 87 %, respectivamente. Detectaram-se um índice de pre¬cisão de 80% e um coeficiente de correlação r = 0,81%. O título médio geométrico de anticorpos foi 33,1% e 33,6 para eluídos de papel-filtro e os soros, respectivamente. A asso¬ciação entre os dois métodos foi altamente significativa (p 0.001) quando analisada pelo teste de Fisher. Os resultados indicam o potencial da utilização do sangue em papel-filtro como uma alternativa ao soro para detecção de anticorpos contra o NDV. PALAVRAS-CHAVES: Galinha, inibição da hemaglutinação, sorologia.

Xantana como adjuvante em vacina contra herpes suíno tipo 1 / Xantana as an adjuvant in swine herpes vaccine type 1

Vacinação tem sido uma prática comum para prevenir ou minimizar os sintomas de doenças causadas por agentes infecciosos. Vacinas têm sido desenvolvidas utilizando-se microrganismos atenuados ou inativados. Recentemente peptídeos sintéticos e proteínas recombinantes constituem a base da nova geração de vacinas. Entretanto, ainda há necessidade de associação destes antíg¬enos a adjuvantes para potencializar seu efeito imunológico. Embora várias substâncias tenham sido avaliadas para sua utilização em vacinas de uso veterinário, a produção de vacinas continua atrelada à utilização dos sais de alumínio ou de emulsões oleosas. O polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. é uma nova alternativa para utilização como adjuvante vacinal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação adjuvante da Xantana na resposta humoral de camundongos a uma vacina de herpes suíno tipo 1 (SuHV-1). Os animais foram divididos em cinco grupos, utilizando adjuvantes diferentes para cada grupo. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA, utilizando como antígeno a respectiva cepa vacinal. O adjuvante à base de Xantana apresentou a maior soroconversão dentre os adjuvantes todos adjuvantes testados. Este efeito foi mais pro¬nunciado quando a via subcutânea foi utilizada. Baseado nos resultados obtidos, conclui-se que o polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. possui ação adjuvante superior ou igual aos adjuvantes utilizados em vacinas comerciais

Vaccination has been a common practice to prevent or minimize the symptoms of diseases caused by infectious agents. Vaccines have been developed using an attenuated or inactivated microorganisms. Recently, synthetic peptides and recombinant proteins form the basis of the new generation of vaccines. However, there is need the association of these antigens wich adjuvants to increase its immunological effect. Although several substances have been evaluated for use in vaccines for veterinary use the production of vaccine remains tied to the use of aluminum salts or oily emulsions. The polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. is a new alternative for use as an adjuvant vaccine. This study aimed to evaluate the effect of adjuvant xanthan in humoral response of mice to a vaccine for pig herpes type 1 (SuHV-1). The animals were divided into five groups, using different adjuvants for each group. The titles of antibodies were determined by ELISA, using as antigen the vaccine strain. The adjuvant-based xanthan had the highest seroconversion among all tested adjuvants. This effect was more pronounced when subcutaneous via was used. Based on the results, we conclude that the adjuvant action of the polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. has greater than or equal to the adjuvant used in commercial vaccines

Xantana como adjuvante em vacina contra herpes suíno tipo 1 / Xantana as an adjuvant in swine herpes vaccine type 1

Vacinação tem sido uma prática comum para prevenir ou minimizar os sintomas de doenças causadas por agentes infecciosos. Vacinas têm sido desenvolvidas utilizando-se microrganismos atenuados ou inativados. Recentemente peptídeos sintéticos e proteínas recombinantes constituem a base da nova geração de vacinas. Entretanto, ainda há necessidade de associação destes antíg¬enos a adjuvantes para potencializar seu efeito imunológico. Embora várias substâncias tenham sido avaliadas para sua utilização em vacinas de uso veterinário, a produção de vacinas continua atrelada à utilização dos sais de alumínio ou de emulsões oleosas. O polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. é uma nova alternativa para utilização como adjuvante vacinal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação adjuvante da Xantana na resposta humoral de camundongos a uma vacina de herpes suíno tipo 1 (SuHV-1). Os animais foram divididos em cinco grupos, utilizando adjuvantes diferentes para cada grupo. Os títulos de anticorpos foram determinados por ELISA, utilizando como antígeno a respectiva cepa vacinal. O adjuvante à base de Xantana apresentou a maior soroconversão dentre os adjuvantes todos adjuvantes testados. Este efeito foi mais pro¬nunciado quando a via subcutânea foi utilizada. Baseado nos resultados obtidos, conclui-se que o polissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas sp. possui ação adjuvante superior ou igual aos adjuvantes utilizados em vacinas comerciais(AU)

Vaccination has been a common practice to prevent or minimize the symptoms of diseases caused by infectious agents. Vaccines have been developed using an attenuated or inactivated microorganisms. Recently, synthetic peptides and recombinant proteins form the basis of the new generation of vaccines. However, there is need the association of these antigens wich adjuvants to increase its immunological effect. Although several substances have been evaluated for use in vaccines for veterinary use the production of vaccine remains tied to the use of aluminum salts or oily emulsions. The polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. is a new alternative for use as an adjuvant vaccine. This study aimed to evaluate the effect of adjuvant xanthan in humoral response of mice to a vaccine for pig herpes type 1 (SuHV-1). The animals were divided into five groups, using different adjuvants for each group. The titles of antibodies were determined by ELISA, using as antigen the vaccine strain. The adjuvant-based xanthan had the highest seroconversion among all tested adjuvants. This effect was more pronounced when subcutaneous via was used. Based on the results, we conclude that the adjuvant action of the polysaccharide produced by the bacterium Xanthomonas sp. has greater than or equal to the adjuvant used in commercial vaccines(AU)

Herpes bovino tipo 1 (BHV 1): I. Sorologia de rebanhos com problemas reprodutivos

Serum antibodies against BHV-1 were studied, by the serum neutralization test, in cattle from Southem Brazil. Samples were collected from 2341 cattie from 112 farms that had reprodution problems. Positive results were obtained in 747 (31.9) cattie from 80 (71.31%) farms, given evidence of the expressivo vírus dissemination in cattie from this region.

A presença de anticorpos neutralizantes contra o BHV-1, foi pesquisada pelo teste de soroneutralização (SN) em 2.341 soros, dos quais 747 apresentaram resultado positivo, representando 31,9% de bovinos infectados pelo BHV-1. Os soros foram enviados de 112 propriedades da Região Sul, sendo na maioria rebanhos de gado de corte com problemas reprodutivos. Foram detectados bovinos sorologicamente positivos em 80 propriedades, representando 71,3%, demonstrando a expressiva disseminação do vírus nos rebanhos desta região.

Herpes bovino tipo 1 (BHV 1): I. Sorologia de rebanhos com problemas reprodutivos

Serum antibodies against BHV-1 were studied, by the serum neutralization test, in cattle from Southem Brazil. Samples were collected from 2341 cattie from 112 farms that had reprodution problems. Positive results were obtained in 747 (31.9) cattie from 80 (71.31%) farms, given evidence of the expressivo vírus dissemination in cattie from this region.

A presença de anticorpos neutralizantes contra o BHV-1, foi pesquisada pelo teste de soroneutralização (SN) em 2.341 soros, dos quais 747 apresentaram resultado positivo, representando 31,9% de bovinos infectados pelo BHV-1. Os soros foram enviados de 112 propriedades da Região Sul, sendo na maioria rebanhos de gado de corte com problemas reprodutivos. Foram detectados bovinos sorologicamente positivos em 80 propriedades, representando 71,3%, demonstrando a expressiva disseminação do vírus nos rebanhos desta região.

EVALUATION OF BLOOD ON FILTER PAPER TO DETECTION AND QUANTIFICATION OF THE ANTIBO¬DIES TO NEWCASTLE DISEASE VIRUS / AVALIAÇÃO DO USO DE SANGUE EM PAPEL-FILTRO PARA DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE ANTICORPOS PARA O VÍRUS DA DOENÇA DE NEWCASTLE

The present study describes the evaluation of a filter paper blood sampling technique for assessment of the level of antibodies against the Newcastle disease virus (NDV) by hemagglutination inhibition (HI) test. Blood samples were collected from ninety eigth chickens with a known history of vaccination against NDV and analyzed by HI method. The blood was impregnated onto Whatman no. 1 filter paper with 3cm2 and also collected in tubes for obtaining serum. The papers were stored at room temperature and tested within fourty five days. The resulting sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of the filter paper HI compared to serum HI was 89%, 73%, 76% and 87%, respectively. It was found index precision of the 80% and the correlation coefficient r = 0.81%. The overall average geometrical titer of antibodies was 33.1 and 33.6 in eluates and in sera, respectively. Association between the two methods was found to be highly significant (p 0.001) when analyzed by Fishers test. The results indicate the potential use of filter paper blood sampling technique as an alternative to serum for detection of the antibodies against NDV. KEY-WORDS: Chicken, hemagglutination inhibition, serology.

O presente trabalho descreve a utilização de sangue total em papel-filtro para avaliação dos níveis de anticorpos específicos contra o vírus da doença de Newcastle (NDV) através da técnica de inibição da hemaglutinação (HI). Coletaram-se e analisaram-se por HI amostras de sangue de noventa e oito galinhas, com um histórico conhecido de vacinação contra o NDV HI. O sangue foi impregnado em papel-filtro Wathman n 1 com 3cm2 e também coletado em tubos para a obtenção de soro. Armazenaram-se os papéis à temperatura ambiente e procedeu-se a sua análise num período de até quarenta e cinco dias. A sensibilidade, a es¬pecificidade, o valor preditivo positivo e o valor preditivo negativo do HI mediante o uso de papel-filtro, comparado com o HI em que se utilizou soro, foram de 89%, 73%, 76% e 87 %, respectivamente. Detectaram-se um índice de pre¬cisão de 80% e um coeficiente de correlação r = 0,81%. O título médio geométrico de anticorpos foi 33,1% e 33,6 para eluídos de papel-filtro e os soros, respectivamente. A asso¬ciação entre os dois métodos foi altamente significativa (p 0.001) quando analisada pelo teste de Fisher. Os resultados indicam o potencial da utilização do sangue em papel-filtro como uma alternativa ao soro para detecção de anticorpos contra o NDV. PALAVRAS-CHAVES: Galinha, inibição da hemaglutinação, sorologia.

Imunogenicidade do herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) em vacinas inativadas de diferentes formulações

Four inactivated vaccines formulated with a bovine herpesvirus tipe 5 (BHV-5) strain isolated from an outbreak of bovine meningoencephalitis in Rio Grande do Sul, Brazil, were administred in forty cattle as to evaluate its immunogenicity. The vaccines A and B used mineral oil and vaccines C and D used aluminum hydroxide (Al2(OH)3) as adjuvant. The titer of the viral suspension used in all vaccines was 10(7.50) TCID50 / 25 mul. Immunostin®, a Mycobacterium derived immunostimulant, was added to vaccines B and D. After receiving three doses of vaccines, at 30 days intervals, only the animals of the groups A (90%) and B (100%) developed significant antibody titers. The responses to these vaccines were adjusted to linear regression, showing that the antiboby titers increased progressively with the number of immunizations. The use of Immunostin® enhanced the immunogenicity of the vaccine with aluminum hidroxide but was ineffective when associated with oil adjuvants. It was concluded that inactivated BHV-5 vaccines prepared with high titer viral suspensions and oil adjuvants induce adequate levels of antibodies in a high proportion of the vaccinees after the third dose.

Quatro vacinas inativadas, produzidas com uma amostra do herpesvírus bovino tipo 5 ( BHV-5) isolada de um surto de meningoencefalite no Rio Grande do Sul, foram administradas em quarenta bovinos visando a avaliar a sua capacidade imunogênica. As vacinas A e B foram formuladas com adjuvante oleoso e as vacinas C e D com hidróxido de alumínio [ Al2 (OH)3] . O título da suspensão viral utilizada nas vacinas foi de 10(7,5) DICT 50 / 25miL. Immunostin®, um imunoestimulante derivado de Mycobacterium, foi adicionado às vacinas B e D. Após receberem três doses de vacina com intervalos de 30 dias, somente os animais dos grupos A (90%) e B (100%) desenvolveram uma resposta sorológica significativa. As respostas sorológicas às vacinas A e B foram ajustadas por regressão linear, demonstrando que os títulos de anticorpos aumentaram significativamente à medida que foram repetindo-se as aplicações das vacinas. O Immunostin® potencializou a capacidade imunogênica da vacina D mas, aparentemente, não foi eficiente na vacina B. Concluiu-se que as vacinas inativadas, produzidas a partir de suspensões virais de BHV-5 com títulos altos e com adjuvante oleoso induzem a produção de níveis consideráveis de anticorpos neutralizantes em mais de 80% dos animais vacinados após a terceira dose.

Peste suína clássica: ação térmica da amostra chinesa Porto Alegre (CPA) em coelhos

Rectal temperatures of normal rabbits inoculated with different dilutions of a vaccine prepared with Chinese-Porto Alegre (CPA) strain of classical swine fever virus, were evaluated under 3 different environmental temperatures. Temperatures of normal un-vaccinated rabbits increased significantly when environmental temperature increased (P 0.001). At environmental temperatures of 12.82 ± 1.29°C, 20.65 ± 1.79°C, and 28.24 ± 2.09°C me mean rectal temperatures were 39.53°C, 39.65°C and 39.92°C, respectively. Temperatures of me vaccinated rabbits also increased significantly when environmental temperature increased (P 0.001), but did not vary with different vaccine dilutions. At environmental temperatures of 12.82 ± 1.29°C, 20.65 ±1.79°C and 28.24 ± 2.09°C, the mean higher rectal temperature were 41.17°C, 41.24°C and 41.47°C, respectively. Within a 95% confidence interval was determined that, under the 3 environmental temperatures, the rectal temperatures equal to 40.60°C, 40.67°C and 40.90°C or higher, indicated a thermal reaction to the vaccine. In vaccinated rabbits, the mean thermic rise was of 1.59°C and there were no significant differences at different environmental temperatures or virus dilutions. Within a 95% confidence interval was determined that a rise of 1.06°C or higher indicated a specific reaction to the vaccine. The rise in temperature started 24 hours after the inoculation. This time was delayed when virus dilutions decreased (P 0.001), but did not vary with different environmental temperatures. The sensitivity and specificity of the thermic reaction was evaluated by the challenge test. By regression analysis was concluded that a temperature of 40.6°C, associated with a rise in at least 1.06°C, could be considered a specific reaction of the rabbits to the CPA strain.

Foram avaliadas a temperatura normal do coelho e sua reação térmica após inoculação com a amostra Chinesa Porto Alegre (CPA) do vírus da Peste Suína Clássica (PSC), sob três condições de temperatura ambiental. Os resultados mostraram que a temperatura normal do coelho aumenta com a elevação da temperatura ambiental (P 0,001). As médias das temperaturas normais dos coelhos foram de 39,53°C; 39,65°C e 39,92°C, nas temperaturas ambientais de 12,82 ± 1,29°C; 20,65 ± 1,79°C e 28,24 ± 2,09°C respectivamente. Os coelhos inoculados tiveram seu pique térmico também aumentado com a elevação da temperatura ambiental (P 0,001), mas não sofreram influência da diluição do vírus. As médias dos piques térmicos observados foram de 41,17°C; 41,24°C e 41,47°C. Para um intervalo de confiança de 95%, estabeleceram-se as temperaturas de 40,60°C; 40,67°C e 40,90°C como limites, a partir dos quais a reação térmica foi considerada específica, em cada uma das temperaturas ambientais utilizadas. A elevação térmica não sofreu influência da temperatura ambiental nem da diluição do vírus, apresentando uma média global de 1,59°C. Para um intervalo de confiança a nível de 95%, estabeleceu-se o limite de 1,06°C como o mínimo de elevação térmica para uma reação específica. O pique térmico iniciou a partir de 24h após inoculação. Seu início foi retardado com o aumento da diluição do vírus (P 0,001), mas não com a temperatura ambiental. A sensibilidade e especificidade da reação térmica foi avaliada pelo teste de desafio. A análise de regressão permitiu concluir que um pique térmico mínimo de 40,6°C, associado a uma elevação térmica mínima de 1,06°C, pode ser considerada reação específica dos coelhos inoculados com a amostra CPA.

DOENÇA DE AUJESZKY: PROTEÇÃO CONFERIDA POR TRÊS VACINAS INATIVADAS

SUMMARY The efficacy of three different formulations of vaccines against Aujeszky's disease was tested. Vacine I was formulated with antigen in oil, simple emulsion; vaccine II in oil, with a coadjuvam of cell immunity; vaccine III with the antigen plus DEAE-dextran (DEAE-d) as the adjuvant. Efficacy tests were conducted in 48 piglets, Landrace and Large White, divided in four groups of 12 animais. Each vaccine was applied in one group and another served as the control group. The piglets received two doses of 1ml of the vaccines, intramuscular, with 15 days interval. Twenty-one days after the second shot, the piglets were challenged with crescent doses of the vírus, log 10/ml (6.25, 7.25. 8.25 for the vaccinated and 4.25, 5.25, 6.25 for the controls) and four animais per dilution. The three vaccines conferred protection against the different concentrations of virus utilized: vaccine I protected 96.1%; vaccine II 90.9% and vaccine III protected 83.3%. The differences were statistically analyzed and not significant (p 0.05). The animais in the control group presented the clinical symptons of Aujeszky's disease although they had the smallest dose in the challenge test. There were also four tests conducted with rabbits and none of the vaccines conferred protection to them.

RESUMO Foi testada a eficiência de três diferentes formulações de vacina contra a doença de Aujeszky (DA). A vacina I foi formulada com antígeno em óleo com emulsão simples; a vacina II em óleo, acrescida de coadjuvante de imunidade celular e a vacina III constituída de antígeno e DEAE-dextran (DEAE-D) como adjuvante. Os testes de eficiência foram conduzidos em 48 leitões das raças Landrace e Large White, divididos em quatro grupos de 12 animais. Cada vacina foi aplicada em um grupo, ficando um como testemunha. Os leitões receberam duas doses de vacina no volume de 1ml, via intramuscular, com intervalo de 15 dias. Vinte e um dias após a segunda dose, foram desafiados com doses crescentes de vírus, log 10/ml (6,25; 7,25 e 8,25 para os vacinados e 4,25; 5,25 e 6,25 para os testemunhas) em 4 animais por diluição. As três vacinas conferiram proteção frente às diferentes concentrações de vírus utilizadas. A vacina l protegeu 96,1%, a vacina II, 90,9% e vacina III, protegeu 83,3%. Essas diferenças analisadas estatisticamente (p 0,05) não foram significativas. Os animais do lote testemunha, adoeceram com o quadro da DA, apesar da menor dose de desafio. Foram realizados quatro testes em coelhos. Nenhuma das três vacinas conferiu proteção aos coelhos.

Doença de aujeszky: proteção conferida por três vacinas inativadas

SUMMARY The efficacy of three different formulations of vaccines against Aujeszky's disease was tested. Vacine I was formulated with antigen in oil, simple emulsion; vaccine II in oil, with a coadjuvam of cell immunity; vaccine III with the antigen plus DEAE-dextran (DEAE-d) as the adjuvant. Efficacy tests were conducted in 48 piglets, Landrace and Large White, divided in four groups of 12 animais. Each vaccine was applied in one group and another served as the control group. The piglets received two doses of 1ml of the vaccines, intramuscular, with 15 days interval. Twenty-one days after the second shot, the piglets were challenged with crescent doses of the vírus, log 10/ml (6.25, 7.25. 8.25 for the vaccinated and 4.25, 5.25, 6.25 for the controls) and four animais per dilution. The three vaccines conferred protection against the different concentrations of virus utilized: vaccine I protected 96.1%; vaccine II 90.9% and vaccine III protected 83.3%. The differences were statistically analyzed and not significant (p 0.05). The animais in the control group presented the clinical symptons of Aujeszky's disease although they had the smallest dose in the challenge test. There were also four tests conducted with rabbits and none of the vaccines conferred protection to them.

RESUMO Foi testada a eficiência de três diferentes formulações de vacina contra a doença de Aujeszky (DA). A vacina I foi formulada com antígeno em óleo com emulsão simples; a vacina II em óleo, acrescida de coadjuvante de imunidade celular e a vacina III constituída de antígeno e DEAE-dextran (DEAE-D) como adjuvante. Os testes de eficiência foram conduzidos em 48 leitões das raças Landrace e Large White, divididos em quatro grupos de 12 animais. Cada vacina foi aplicada em um grupo, ficando um como testemunha. Os leitões receberam duas doses de vacina no volume de 1ml, via intramuscular, com intervalo de 15 dias. Vinte e um dias após a segunda dose, foram desafiados com doses crescentes de vírus, log 10/ml (6,25; 7,25 e 8,25 para os vacinados e 4,25; 5,25 e 6,25 para os testemunhas) em 4 animais por diluição. As três vacinas conferiram proteção frente às diferentes concentrações de vírus utilizadas. A vacina l protegeu 96,1%, a vacina II, 90,9% e vacina III, protegeu 83,3%. Essas diferenças analisadas estatisticamente (p 0,05) não foram significativas. Os animais do lote testemunha, adoeceram com o quadro da DA, apesar da menor dose de desafio. Foram realizados quatro testes em coelhos. Nenhuma das três vacinas conferiu proteção aos coelhos.

Peste suína clássica: ação térmica da amostra chinesa Porto Alegre (CPA) em coelhos

Rectal temperatures of normal rabbits inoculated with different dilutions of a vaccine prepared with Chinese-Porto Alegre (CPA) strain of classical swine fever virus, were evaluated under 3 different environmental temperatures. Temperatures of normal un-vaccinated rabbits increased significantly when environmental temperature increased (P 0.001). At environmental temperatures of 12.82 ± 1.29°C, 20.65 ± 1.79°C, and 28.24 ± 2.09°C me mean rectal temperatures were 39.53°C, 39.65°C and 39.92°C, respectively. Temperatures of me vaccinated rabbits also increased significantly when environmental temperature increased (P 0.001), but did not vary with different vaccine dilutions. At environmental temperatures of 12.82 ± 1.29°C, 20.65 ±1.79°C and 28.24 ± 2.09°C, the mean higher rectal temperature were 41.17°C, 41.24°C and 41.47°C, respectively. Within a 95% confidence interval was determined that, under the 3 environmental temperatures, the rectal temperatures equal to 40.60°C, 40.67°C and 40.90°C or higher, indicated a thermal reaction to the vaccine. In vaccinated rabbits, the mean thermic rise was of 1.59°C and there were no significant differences at different environmental temperatures or virus dilutions. Within a 95% confidence interval was determined that a rise of 1.06°C or higher indicated a specific reaction to the vaccine. The rise in temperature started 24 hours after the inoculation. This time was delayed when virus dilutions decreased (P 0.001), but did not vary with different environmental temperatures. The sensitivity and specificity of the thermic reaction was evaluated by the challenge test. By regression analysis was concluded that a temperature of 40.6°C, associated with a rise in at least 1.06°C, could be considered a specific reaction of the rabbits to the CPA strain.

Foram avaliadas a temperatura normal do coelho e sua reação térmica após inoculação com a amostra Chinesa Porto Alegre (CPA) do vírus da Peste Suína Clássica (PSC), sob três condições de temperatura ambiental. Os resultados mostraram que a temperatura normal do coelho aumenta com a elevação da temperatura ambiental (P 0,001). As médias das temperaturas normais dos coelhos foram de 39,53°C; 39,65°C e 39,92°C, nas temperaturas ambientais de 12,82 ± 1,29°C; 20,65 ± 1,79°C e 28,24 ± 2,09°C respectivamente. Os coelhos inoculados tiveram seu pique térmico também aumentado com a elevação da temperatura ambiental (P 0,001), mas não sofreram influência da diluição do vírus. As médias dos piques térmicos observados foram de 41,17°C; 41,24°C e 41,47°C. Para um intervalo de confiança de 95%, estabeleceram-se as temperaturas de 40,60°C; 40,67°C e 40,90°C como limites, a partir dos quais a reação térmica foi considerada específica, em cada uma das temperaturas ambientais utilizadas. A elevação térmica não sofreu influência da temperatura ambiental nem da diluição do vírus, apresentando uma média global de 1,59°C. Para um intervalo de confiança a nível de 95%, estabeleceu-se o limite de 1,06°C como o mínimo de elevação térmica para uma reação específica. O pique térmico iniciou a partir de 24h após inoculação. Seu início foi retardado com o aumento da diluição do vírus (P 0,001), mas não com a temperatura ambiental. A sensibilidade e especificidade da reação térmica foi avaliada pelo teste de desafio. A análise de regressão permitiu concluir que um pique térmico mínimo de 40,6°C, associado a uma elevação térmica mínima de 1,06°C, pode ser considerada reação específica dos coelhos inoculados com a amostra CPA.

Imunogenicidade do herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) em vacinas inativadas de diferentes formulações

Four inactivated vaccines formulated with a bovine herpesvirus tipe 5 (BHV-5) strain isolated from an outbreak of bovine meningoencephalitis in Rio Grande do Sul, Brazil, were administred in forty cattle as to evaluate its immunogenicity. The vaccines A and B used mineral oil and vaccines C and D used aluminum hydroxide (Al2(OH)3) as adjuvant. The titer of the viral suspension used in all vaccines was 10(7.50) TCID50 / 25 mul. Immunostin®, a Mycobacterium derived immunostimulant, was added to vaccines B and D. After receiving three doses of vaccines, at 30 days intervals, only the animals of the groups A (90%) and B (100%) developed significant antibody titers. The responses to these vaccines were adjusted to linear regression, showing that the antiboby titers increased progressively with the number of immunizations. The use of Immunostin® enhanced the immunogenicity of the vaccine with aluminum hidroxide but was ineffective when associated with oil adjuvants. It was concluded that inactivated BHV-5 vaccines prepared with high titer viral suspensions and oil adjuvants induce adequate levels of antibodies in a high proportion of the vaccinees after the third dose.

Quatro vacinas inativadas, produzidas com uma amostra do herpesvírus bovino tipo 5 ( BHV-5) isolada de um surto de meningoencefalite no Rio Grande do Sul, foram administradas em quarenta bovinos visando a avaliar a sua capacidade imunogênica. As vacinas A e B foram formuladas com adjuvante oleoso e as vacinas C e D com hidróxido de alumínio [ Al2 (OH)3] . O título da suspensão viral utilizada nas vacinas foi de 10(7,5) DICT 50 / 25miL. Immunostin®, um imunoestimulante derivado de Mycobacterium, foi adicionado às vacinas B e D. Após receberem três doses de vacina com intervalos de 30 dias, somente os animais dos grupos A (90%) e B (100%) desenvolveram uma resposta sorológica significativa. As respostas sorológicas às vacinas A e B foram ajustadas por regressão linear, demonstrando que os títulos de anticorpos aumentaram significativamente à medida que foram repetindo-se as aplicações das vacinas. O Immunostin® potencializou a capacidade imunogênica da vacina D mas, aparentemente, não foi eficiente na vacina B. Concluiu-se que as vacinas inativadas, produzidas a partir de suspensões virais de BHV-5 com títulos altos e com adjuvante oleoso induzem a produção de níveis consideráveis de anticorpos neutralizantes em mais de 80% dos animais vacinados após a terceira dose.

Effect of pigpel extender on the boar semen quality stored at different temperatures / Efeito do diluente pigpel na qualidade do sêmen suíno refrigerado em diferentes temperaturas

This study aim to evaluate the quality of boar semen stored at different temperatures  and media on PIGPEL5 extender, using egg yolk as an external membrane protector, and on PIGPEL5Plus, containing low density lipoprotein (LDL) as protector. In the experiment 1, the semen doses were stored in a semen container at 5 and 17 C and the results were compared with semen stored at 17 C in BTS extender. In the experiment 2, the doses with the PIGPEL5 and PIGPEL5Plus extenders were stored in a commercial refrigerator and in semen container, both at 5 C. The use of extenders with extracellular cryoprotectant (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) showed higher (p 0.05) motility values in comparison to BTS until 48 h. Furthermore, the use of extracellular cryoprotectant was good to maintenance of membrane integrity and normal morphology at 5 oC similarly to 17 oC extenders. There was no difference (p > 0.05) in the motility, membrane integrity and morphology for the substitution of egg yolk (PIGPEL5) for LDL (PIGPEL5Plus). In experiment 2, also there was no difference (p > 0.05) in motility, membrane integrity and morphology between extenders and type of container until 72 h. The conservation of semen on PIGPEL5 extender and commercial refrigerator (5 ºC) allowed patterns of sperm quality according recommended for AI.

Este estudo avaliou a qualidade do sêmen suíno preservado em diferentes temperaturas e meios de conservação no diluente PIGPEL5, utilizando gema de ovo como protetor externo de membrana, e no diluente PIGPEL5Plus, utilizando lipoproteína de baixa densidade (LDL) como protetor. No experimento 1, as doses de sêmen foram conservadas em refrigerador de sêmen a 5 e 17 C nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus e comparadas ao diluente BTS a 17 C. Já no experimento 2, foi comparada a conservação do sêmen nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus em geladeira convencional ou em refrigerador de sêmen a 5 ºC. Observou-se que o uso de diluidores com crioprotetor extracelular (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) apresentou maiores (p 0,05) resultados de motilidade com relação ao BTS até 48 h. Além do mais, o uso de crioprotetor extracelular foi benéfico para a manutenção da integridade e morfologia normais a temperatura de 5 ºC em níveis similares aos diluidores a 17 ºC. Não houve diferença (p > 0,05) na motilidade, integridade de membrana e morfologia para a substituição da gema de ovo (PIGPEL5) pela LDL (PIGPEL5Plus). No experimento 2, também não houve diferença na motilidade, integridade de membrana e morfologia espermática entre os diluentes e formas de acondicionamento testados até 72 h (p > 0,05). O acondicionamento do sêmen no diluente PIGPEL5 em geladeira doméstica (5 ºC) proporcionou  padrõ

Prevalence and factors associated with bovine viral diarrhea virus infection in South of Rio Grande do Sul / Prevalência e fatores associados à infecção pelo vírus da diarréia viral bovina na região Sul do Rio Grande do Sul

This study was performed in order to estimate the prevalence of bovine viral diarrhea virus (BVDV), and to determine the main factors related to the prevalence of the infection in cattle of Santa Vitória do Palmar and Chuí counties, in Rio Grande do Sul State. Sera were submitted to the serum neutralization test and an epidemiological questionnaire was filled out in each herd to investigate variables that could be associated with this infection. The sera samples were collected in 85 farms, with or without clinical signs of BVDV infection. From 1.734 serum samples examined, 1.150 (66.32%) in 70 (82.35%) herds were positive. Variables that were identified as risk factors to seropositivity were mixed (dairy and beef) herds, extensive production, use of mechanical milking, use of artificial insemination or artificial insemination associated with natural service, use of the maternity unit at calving and absence of veterinarian assistance (P 0.05). The results demonstrate the expressive dissemination of the BVDV in cattle of this region in Rio Grande do Sul.

O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência e determinar os principais fatores associados à infecção pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) no rebanho bovino dos municípios de Santa Vitória do Palmar e Chuí, na região sul do estado do Rio Grande do Sul. Amostras de soro foram submetidas à prova de soroneutralização e, em cada propriedade avaliada, aplicou-se um questionário epidemiológico para investigar fatores que poderiam estar associados à infecção. As amostras de soro foram coletadas em 85 propriedades, cujos animais apresentavam ou não sinais clínicos de infecção pelo BVDV. Das 1.734 amostras de soro analisadas, 1.150 (66,32%) foram positivas com a detecção de bovinos sorologicamente positivos em 70 (82,35%) propriedades. Dentre os fatores avaliados, exploração mista, criação extensiva, realização de ordenha mecânica, uso de inseminação artificial ou de inseminação artificial associada à monta natural, uso de piquete de parição e ausência de assistência veterinária, apresentaram significância estatística (p 0,05) associada à soropositividade. Os resultados obtidos demonstram a expressiva disseminação do BVDV no rebanho bovino dessa região do Rio Grande do Sul.

Effect of pigpel extender on the boar semen quality stored at different temperatures / Efeito do diluente pigpel na qualidade do sêmen suíno refrigerado em diferentes temperaturas

This study aim to evaluate the quality of boar semen stored at different temperatures  and media on PIGPEL5 extender, using egg yolk as an external membrane protector, and on PIGPEL5Plus, containing low density lipoprotein (LDL) as protector. In the experiment 1, the semen doses were stored in a semen container at 5 and 17 C and the results were compared with semen stored at 17 C in BTS extender. In the experiment 2, the doses with the PIGPEL5 and PIGPEL5Plus extenders were stored in a commercial refrigerator and in semen container, both at 5 C. The use of extenders with extracellular cryoprotectant (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) showed higher (p 0.05) motility values in comparison to BTS until 48 h. Furthermore, the use of extracellular cryoprotectant was good to maintenance of membrane integrity and normal morphology at 5 oC similarly to 17 oC extenders. There was no difference (p > 0.05) in the motility, membrane integrity and morphology for the substitution of egg yolk (PIGPEL5) for LDL (PIGPEL5Plus). In experiment 2, also there was no difference (p > 0.05) in motility, membrane integrity and morphology between extenders and type of container until 72 h. The conservation of semen on PIGPEL5 extender and commercial refrigerator (5 ºC) allowed patterns of sperm quality according recommended for AI.

Este estudo avaliou a qualidade do sêmen suíno preservado em diferentes temperaturas e meios de conservação no diluente PIGPEL5, utilizando gema de ovo como protetor externo de membrana, e no diluente PIGPEL5Plus, utilizando lipoproteína de baixa densidade (LDL) como protetor. No experimento 1, as doses de sêmen foram conservadas em refrigerador de sêmen a 5 e 17 C nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus e comparadas ao diluente BTS a 17 C. Já no experimento 2, foi comparada a conservação do sêmen nos diluentes PIGPEL5 e PIGPEL5Plus em geladeira convencional ou em refrigerador de sêmen a 5 ºC. Observou-se que o uso de diluidores com crioprotetor extracelular (PIGPEL5 e PIGPEL5Plus) apresentou maiores (p 0,05) resultados de motilidade com relação ao BTS até 48 h. Além do mais, o uso de crioprotetor extracelular foi benéfico para a manutenção da integridade e morfologia normais a temperatura de 5 ºC em níveis similares aos diluidores a 17 ºC. Não houve diferença (p > 0,05) na motilidade, integridade de membrana e morfologia para a substituição da gema de ovo (PIGPEL5) pela LDL (PIGPEL5Plus). No experimento 2, também não houve diferença na motilidade, integridade de membrana e morfologia espermática entre os diluentes e formas de acondicionamento testados até 72 h (p > 0,05). O acondicionamento do sêmen no diluente PIGPEL5 em geladeira doméstica (5 ºC) proporcionou  padrõ

THE ROLE OF Nicotiana glauca GRAHAM (PARAGUAYAN HERBS) AS AN ADJUVANT IN IMMUNOMODULATION OF NEWCASTLE DISEASE VACCINE FOR BROILERS / ESTUDO DA AÇÃO DE Nicotiana glauca GRAHAM (ERVA PARAGUAIA) COMO COADJUVANTE EM VACINA CONTRA A DOENÇA DE NEWCASTLE EM FRANGOS DE CORTE

The Nicotiana glauca is a native plant species from Argentina, but found all over South América, being used against headaches, rheumatism, injuries, ulcers, and so on. Researchers have considered it as having immunomodulation effect. This study was conducted to investigate the use of a aqueous extract of Nicotiana glauca Graham as an immunomodulator (adjuvant) of a Newcastle disease vaccine.. A total of 56 broilers were distributed into 4 experimental groups. Each one of them received 3 dosages of this vaccine with or without the addition of different concentrations of the extract Using hemmoaglutination inhibition techniques , the results have shown differences (P 0.05) in the third sera collection. An increase in the antibody titer with the inclusion of 5 mg/dosage of the extract (Treatment 3) as compared to 1 mg/dosage (Treatment 2) and 10 mg/dosage of the extract (Treatment 4) was observed, However, birds from Treatment 3 did not differ (P> 0.05) from Treatment 1. These results indicated that further investigations are required, including the use of cytotoxicity tests in vitro, to evaluate the immunomodulation effect of this extract.  KEY WORDS: Immunomodulation effect, Nicotiana glauca Graham, vaccine.

A Nicotiana glauca Graham é uma espécie nativa da Argentina, bem distribuída na América do Sul, sendo empregada, popularmente, contra dores de cabeça, dores reumáticas, cicatrização de feridas e úlceras, entre outros. Pesquisas têm avaliado a sua ação na potencialização da resposta imune. Assim, com este estudo, buscou-se avaliar a ação de um extrato aquoso de Nicotiana glauca Graham como coadjuvante imunológico em uma vacina contra a doença de Newcastle (DNC). Utilizaram-se 56 frangos de corte, distribuídos em quatro grupos experimentais, que receberam três doses da vacina, com ou sem adição de diferentes quantidades do extrato. Os resultados sorológicos, obtidos através do teste de inibição da hemaglutinação, demonstraram diferença estatística (P 0,05) aos 60 dias de idade dos frangos, com incremento dos níveis de anticorpos contra a DNC, quando houve a inclusão de 5 mg/dose (Tratamento 3) do extrato, em relação à inclusão de 1 mg/dose (Tratamento 2) e 10 mg/dose (Tratamento 4), do mesmo extrato, porém sem diferir estatisticamente do controle (Tratamento 1). Estes resultados estimulam a realização de outros trabalhos, incluindo a realização do teste de citotoxicidade in vitro deste extrato, a fim de avaliar a sua ação efetiva como um coadjuvante imunológico. PALAVRAS-CHAVES: Coadjuvante imunológico, Nicotiana glauca Graham, vacina.