Primary culture of fibrocondrocytes from rabbit knee joint meniscus / Cultura primária de fibrocondrócitos de menisco de coelho

The present study describes a primary culture of meniscus fibrocartilaginous tissue cultivated in high density technique. Cells were isolated from menisci fibrocartilaginous from 120 days-old New Zealand white rabbits. Menisci were finely minced , and treated with 2mg/mL collagenase in DMEM (Dulbecco"s modified Eagle"s medium) containing 10% FSC (fetal calf serum) in a shaker for three hours at 37ºC. Fibrochondrocyte cells were seeded at high density (1x105 cells /cm2) in T25 flasks containing DMEM supplemented with 10% FCS. Nearly 80% of cells attached to the flask , and after culturing for five days the cells were uniformly displayed as an elongated, fibroblastic-like morphology. The cells showed confluence after approximately 15 days of culture ,and produced sufficient extracellular matrix which could be evidenced by the appearance of toluidine blue metachromasia. No morphological changes were observed in fibrochondrocytes during cells growing. The fibrochondrocytes cells growth rate increased 2.5 fold, and attained to the stationary phase. During seven days, the newly glycosaminglycans synthesizing cells, the rate of total synthesis of glycosaminglycan was high, and it remained stable after monolayer cells confluency. Ultrastructural morphology of monolayer cells after culturing for eight days was identical to typical fibrochondrocyte in vivo.

Estudos envolvendo a obtenção de fibrocondrócitos em cultura no Brasil são escassos. Este trabalho descreve a cultura primária de fibrocondrócitos de menisco cultivados em alta densidade com algumas modificações nos métodos de extração já descritos na literatura, com o intuito de obter um maior número de células viáveis para cultivo celular. Foram utilizados meniscos de coelhos New Zealand com 120 dias. Os meniscos foram cortados e tratados com 2mg/ml de colagenase diluída em meio DMEM (meio de Eagle modificado por Dulbeccos) contendo 10% de SFB sob agitação durante três horas a 37ºC. Os fibrocondrócitos foram cultivados em alta densidade (1x105/cm2) em frascos de cultura T25 em meio DMEM suplementado com 10% de SFB. As células atingiram a confluência celular após o 15º dia de cultivo e sintetizaram sua matrix extracelular evidenciada pela coloração com azul de toluidina. A curva de crescimento mostrou que os fibrocondrócitos duplicaram 2,5 vezes. A cinética de incorporação de sulfato radioativo nos glicosaminoglicanos sintetizados pelos fibrocondrócitos "in vitro" foi constante. Os fibrocondrócitos cultivados em alta densidade celular apresentaram aspectos ultra-estruturais semelhante as células " in vivo".

Sensitivity of rabbit fibrochondrocytes to mycoplasmas

Primary cell culture from rabbit meniscus (fibrochondrocytes-FcrC) was infected for 24 hours with different inocula (10² to 10(7) Colony Forming Units-CFU) of Mycoplasma hominis PG-21, M. pneumoniae FH and 1428 or M. arthritidis PG-6. The severity of the different obtained cytophatic effects-CPE was inoculum, Mycoplasma species and strain dependant. These bacteria were recovered from all infected FcrC and the SP4 medium for mycoplasmas also caused toxic effect on the FcrC. It was concluded that rabbit fibrochondrocytes were sensitive to mycoplasma infection, as well as to the SP4 mycoplasma medium.

Cultura primária de menisco de coelho (Fibrocondrócito-FcrC) foi infectada por 24 horas com diferentes inóculos (10² to 10(7) Unidade Formadoras de Colonias-UFC) de Mycoplasma hominis PG-21, M. pneumoniae FH e 1428 ou M. arthritidis PG-6. A severidade dos diferentes efeitos citopáticos-EC foram dependentes do inóculo, espécie e cepa de micoplasma. Estas bactérias foram reisoladas de todos os FcrC infectados e o meio SP4 para micoplasmas também causou efeito tóxico para os FcrC. Concluiu-se que os fibrocondrócitos de coelho foram sensíveis à infecção por micoplasmas e também ao meio SP4.

Growth of rubella virus into SIRC (rabbit cornea cell line) using various culture media / Cultivo do vírus da rubéola em SIRC (linhagem cellular de cornea de Coelho) em vários meios de cultura

The present study evaluated the efficacy of various culture media for performing the isolation and growth of the rubella virus inoculated into SIRC cells. Rubella virus RA-27/3 strain and RVi/SãoPaulo/BRA99wild type strain (GenBank number DQ458965) were inoculated into SIRC cell line and cultivated in 199, DMEM, MEM and RPMI media. The inoculated cells when examined on phase contrast microscopy showed the characteristic rounded and multipolar cells. The CPE was observed at the first 48 hours cultivation in the respective tested media. The curve of the infectivity increase was higher in the cultures maintained in DMEM and RPMI media. Hence, the SIRC cellular lineage cultivated in DMEM or RPMI media is an excellent substratum for performing the rubella virus isolation. These findings are relevant since the SIRC has been one of the few cell lines described in the literature which presents a cytopathic effect, and on that account it can be useful for carrying out the virus isolation from clinical specimens.

O presente estudo avaliou a eficiência de vários meios de cultura no isolamento e crescimento do vírus da rubéola inoculado na linhagem celular SIRC. O vírus da rubéola padrão RA27/3 e o vírus selvagem RVi/SãoPaulo/BRA99 (GenBank número DQ458965) foram inoculados na linhagem celular SIRC e cultivada nos meios de cultura 199, DMEM, MEM e RPMI. As células inoculadas observadas em microscopia de fase apresentaram aspecto arredondado, com produção de células multinucleadas. O efeito citopático foi observado após 48 horas de cultivo nos respectivos meios de cultura testados e a curva do crescimento da infectividade do vírus foi maior nas células cultivadas em meios DMEM e RPMI. Os resultados obtidos indicam que SIRC é um ótimo substrato para crescimento do vírus da rubéola, uma vez que poucas linhagens celulares descritas na literatura apresentam efeito citopático considerável e mostram que o potencial dessa linhagem celular ser utilizadas para efetuar o isolamento do vírus da rubéola em amostras clínicas.

Molecular surveillance of an imported measles virus infection in Sao Paulo, Brazil / Vírus do sarampo: vigilância molecular de um caso importado em São Paulo, Brasil

Owing to the efficient strategies for measles virus (MV) surveillance in São Paulo State, Brazil, no circulation of native measles virus was registered during the period from 2001 to 2007. In Sao Paulo State the imported measles cases were registered, being one in 2001, one in 2002, and in 2005 an unvaccinated 18-month-old child presenting fever and exanthema admitted to a private hospital was the target of epidemiological study. The Center of Epidemiological Surveillance found out that a brother of this child had had a similar disease one week before. The measles virus infection was confirmed at Adolfo Lutz Institute by detecting the MV-specific IgM antibody, by virus isolation on Vero/hSLAM cells culture, and by means of MV-RNA amplification on RT-PCR technique. A region of nucleoprotein gene from isolated virus was amplified. The phylogenetic analysis data showed that the isolated virus corresponded to genotype D5. This genotype circulates in the Asian continent, and it had circulated before in Sao Paulo State.

No estado de São Paulo, Brasil, em função da eficiente estratégia para a vigilância do vírus do sarampo (VS), não houve registro de casos nativos de sarampo no período de 2001 a 2007. No estado de São Paulo foram registrados casos de sarampo importados, sendo 01 paciente em 2001, outro em 2002 e em 2005 foi alvo de investigação uma criança não vacinada, de 18 meses de idade com exantema e febre, que foi admitida em hospital privado. O Centro de Vigilância Epidemiológica descobriu que o irmão desta criança teve uma doença semelhante uma semana antes. A infecção pelo vírus do sarampo foi confirmada no Instituto Adolfo Lutz pela detecção de anticorpo IgM anti-VS, isolamento do vírus por meio de cultivo em células Vero/hSLAM e amplificação de RNA viral por RT-PCR. A região do gene da nucleoproteína do vírus isolado foi amplificada. O resultado da análise filogênica mostrou que o vírus isolado correspondeu ao genótipo D5. Este genótipo circula no continente da Ásia e há relatos sobre sua anterior circulação em São Paulo.

Surveillance epidemiological: parvovirus B19 genotype 1 / Vigilância epidemiológica: parvovirus B19 genótipo 1

Human parvovirus B19 was identified and characterized in sample collected from a patient who was infected in Japan, and the symptoms as fever and rash appeared after arriving to Brazil. The occurrence of virus infection was confirmed by both assays: Elisa parvovirus B19-specific IgM antibody detection and polymerase chain reaction (PCR). A fragment of NS1-VP1 region was directly submitted to nucleotide sequencing. Partial phylogenetic analysis of B19 sequences, including several sequences available in GenBank, indicated that the isolated HPV B19 corresponded to genotype 1.

O parvovirus humano B19 foi isolado e caracterizado de amostra clínica de um paciente, infectado no Japão, e que apresentou os sintomas de febre e erupção cutânea após sua chegada ao Brasil. A infecção por parvovírus foi confirmada por meio de seguintes ensaios: Elisa para detecção de anticorpos IgM antiparvovirus B19 e técnica de polymerase chain reaction (PCR). Um fragmento da região NS1-VP1 foi diretamente submetido ao seqüenciamento do nucleotídeo. A análise filogenética parcial do B19, frente às várias seqüências disponíveis no GenBank, indicou que PV B19 isolado correspondeu ao genótipo 1.