Resumo
A produção in vitro de embriões é uma técnica importante para facilitar a reprodução de animais com elevado mérito genético. O maior desafio para a reprodutibilidade desta técnica é a qualidade do oócito destinado à maturação in vitro. O objetivo deste trabalho foi avaliar as características ultra-estruturais de oócitos provenientes de folículos com diferentes diâmetros por microscopia eletrônica de transmissão. Os animais foram divididos em dois grupos e receberam uma única injeção im de 250 UI de FSH (Pluset, Serono, Itália). Para sincronizar o crescimento folicular, todos os folículos > 2 mm foram aspirados durante o ciclo estral, que foi considerado o dia zero (D0). O Grupo 1 (G1, n = 4) recebeu FSH no dia 1 (D1), e os folículos de 2 a 5 mm foram aspirados no dia 2 (D2). Os animais do grupo 2 (G2, n= 5) receberam FSH no dia 2 (D2), e os folículos de 10 a 15 mm foram aspirados no dia 5 (D5). Após a aspiração, os oócitos de ambos os grupos foram fixados e preparados para análise ultra-estrutural. Os oócitos analisados de ambos os grupos apresentaram características ultra-estruturais semelhantes. A presença e distribuição de organelas no citoplasma dos oócitos não diferiram entre os grupos, sugerindo que, em relação às características ultra-estruturais, oócitos oriundos de folículos de 2-5 mm e 10-15 mm são similares.
In vitro embryo production is an important technique for facilitating the reproduction of animals with high genetic merit. The greatest challenge for the reproducibility of this technique is the quality of the oocyte that is submitted for in vitro maturation. The aim of this work was to evaluate the ultrastructural characteristics of oocytes from follicles of different diameters using transmission electron microscopy. The animals were divided into 2 groups and were given a single i.m. injection of 250 IU FSH (Pluset, Serono, Italy). To synchronize the follicular growth, all follicles > 2 mm were aspirated during the estrous cycle, which was considered day zero (D0). Group 1 (G1; n = 4) received FSH on day 1 (D1), and the 2- to 5-mm follicles were aspirated on day 2 (D2). The animals in group 2 (G2; n = 5) received FSH on day 2 (D2), and their 10- to 15-mm follicles were aspirated on day 5 (D5). After aspiration, the oocytes from both groups were fixed and prepared for ultrastructural analysis. The oocytes analyzed from both groups had similar ultrastructural characteristics. The presence and distribution of organelles in the cytoplasm of the oocytes did not differ between groups, suggesting that, in relation to the ultrastructural characteristics, oocytes from 2 to 5 mm and 10 to 15 mm follicles are similar.
Resumo
There are no efficient fixatives for histological analyses of ovarian tissue that permit an appropriate morphological analysis of ovary and their cells. The correct processing of the tissue is essential to avoid misinterpretation between follicular degeneration due to the physiological process of follicular atresia with signs of degeneration signals due to poor tissue fixation. This study aimed to identify the best fixative and better fixation period for morphological analysis of the functional unit of the ovary: follicle. Ovaries (n = 5) from five adult cows were collected from local abattoirs. Each ovary was divided into 12 fragments and submitted to six different fixatives in two different times (12 and 24h). It was analyzed 150 follicles per treatment. The best results were obtained with Carnoy and Bouins fixatives which had higher (P 0.05) proportion of viable follicles after fixation for 12 or 24h (88 and 83% for Carnoys fixative vs. 79 e 73% for Bouin). It was concluded that Carnoy and Bouin fixatives are the best options to preserve for up to 24 h the morphology of preantral follicles in bovine ovaries.
Na rotina de avaliação histológica, os fixadores mais adequados para o tecido ovariano para que se obtenha uma adequada análise morfológica do ovário e de suas células ainda não foram determinados. O correto processamento do tecido é fundamental para evitar erros de interpretação, como confundir degeneração folicular devido ao processo fisiológico de atresia folicular com sinais de degeneração devido à má fixação do tecido. Este estudo teve como objetivo identificar qual o melhor fixador e melhor período de fixação para análise morfológica da unidade funcional do ovário: o folículo. Para isso foram utilizados ovários (n=5) de cinco vacas adultas. Cada ovário foi divido em 12 fragmentos e submetidos a seis diferentes fixadores em dois tempos (12 e 24h). Foram analisados 150 folículos ovarianos por tratamento. Os melhores resultados foram obtidos com os fixadores Carnoy e Bouin, que apresentaram maior (P 0,05) proporção de folículos viáveis após fixação por 12 ou 24h (88 e 83% para o fixador Carnoy vs. 79 e 73% para Bouin respectivamente). Conclui-se neste estudo que os fixadores Carnoy e Bouin são as melhores opções para preservar por até 24 h a morfologia de folículos pré-antrais em ovários bovinos.
Resumo
There are no efficient fixatives for histological analyses of ovarian tissue that permit an appropriate morphological analysis of ovary and their cells. The correct processing of the tissue is essential to avoid misinterpretation between follicular degeneration due to the physiological process of follicular atresia with signs of degeneration signals due to poor tissue fixation. This study aimed to identify the best fixative and better fixation period for morphological analysis of the functional unit of the ovary: follicle. Ovaries (n = 5) from five adult cows were collected from local abattoirs. Each ovary was divided into 12 fragments and submitted to six different fixatives in two different times (12 and 24h). It was analyzed 150 follicles per treatment. The best results were obtained with Carnoy and Bouins fixatives which had higher (P 0.05) proportion of viable follicles after fixation for 12 or 24h (88 and 83% for Carnoys fixative vs. 79 e 73% for Bouin). It was concluded that Carnoy and Bouin fixatives are the best options to preserve for up to 24 h the morphology of preantral follicles in bovine ovaries.
Na rotina de avaliação histológica, os fixadores mais adequados para o tecido ovariano para que se obtenha uma adequada análise morfológica do ovário e de suas células ainda não foram determinados. O correto processamento do tecido é fundamental para evitar erros de interpretação, como confundir degeneração folicular devido ao processo fisiológico de atresia folicular com sinais de degeneração devido à má fixação do tecido. Este estudo teve como objetivo identificar qual o melhor fixador e melhor período de fixação para análise morfológica da unidade funcional do ovário: o folículo. Para isso foram utilizados ovários (n=5) de cinco vacas adultas. Cada ovário foi divido em 12 fragmentos e submetidos a seis diferentes fixadores em dois tempos (12 e 24h). Foram analisados 150 folículos ovarianos por tratamento. Os melhores resultados foram obtidos com os fixadores Carnoy e Bouin, que apresentaram maior (P 0,05) proporção de folículos viáveis após fixação por 12 ou 24h (88 e 83% para o fixador Carnoy vs. 79 e 73% para Bouin respectivamente). Conclui-se neste estudo que os fixadores Carnoy e Bouin são as melhores opções para preservar por até 24 h a morfologia de folículos pré-antrais em ovários bovinos.