Use of glutathione peroxidase and cysteine in Botu-Sêmen® and ACP-105® diluents on integrity of chilled equine spermatozoa / Uso de glutationa peroxidase e cisteína aos diluentes botusêmen® e ACP-105® na integridade de espermatozoides equinos refrigerados

Aiming to study the effect of glutathione peroxidase (GPx) and cysteine (Cis) addition in Botu-Sêmen® and ACP-105® diluents on integrity of equine spermatozoa, semen samples were cooling (14 C) and analyzed for total motility (TM), vigor, membrane integrity (iM) and acrosome (iAC), and mitochondrial membrane potential (MMP), after 0 (T0), 12 (T12) and 24 (T24) hours of cooling. Analysis of TM in T12 demonstrated that semen samples diluted in Botu-sêmen® (G1) and Botu-sêmen®+GPx+ Cis (G7) had higher (P 0.05) percentage than those diluted in ACP-105®+ Cis (G6). At T24, samples diluted in G7 had higher MT (P 0.05) than those in G2 and G6. Sperm vigor in T12 was higher (P<0.05) in samples diluted at G7 than in G2 and G6. At T24, the vigor of samples diluted G4 and G7 was higher (P<0.05) than inG2 and G6. No significant difference were observed to iM and MMP among groups, except to MMP at T0 was higher (P<0.05) in G1 than G7 and G8. At T24 the iAC parameter was higher (P<0.05) in the G6 than in G1. It can be concluded that GPx (5U) and Cis (5mM) in association preserves equine spermatozoa diluted in Botu-sêmen® at 14C during 24 hours.(AU)

Visando estudar o efeito da adição de glutationa peroxidase (GPx) e cisteína (Cis) aos diluentes Botu-Sêmen® e ACP-105® na viabilidade de espermatozoides equinos, amostras de sêmen foram refrigeradas (14 ºC) e analisadas quanto à motilidade total (MT), vigor, integridade de membrana (iM) e de acrossoma (iAc), e potencial da membrana mitocondrial (PMM), após0 (T0), 12 (T12) e 24 (T24) horas de refrigeração. A análise da MT evidenciou no T12 que as amostras de sêmen dos grupos Botu-sêmen® (G1) e Botu-sêmen®+GPx+Cist (G7) apresentaram maiores (P<0,05) percentuais do que no grupo ACP-105®+Cist (G6). No T24, as amostras do G7 apresentaram maior (P 0,05) MT do que as diluídas em ACP-105® (G2) e ACP-105®+- Cist (G6). O vigor espermático no T12 foi maior (P<0,05) no G7 do que no G2 e G6. No T24, o vigor das amostras do G4 e G7 foi maior (P<0,05) do que nas do G2 e G6. A iM e o PMM não diferiram (P>0,05) entre grupos, com exceção do PMM que no T0 foi maior (P<0,05) no G1 do que no G7 e no G8. A iAc no T24 foi maior (P<0,05) no G6 do que no G1. Conclui-se que a associação de GPx (5 U) e Cist (5 mM) preserva espermatozoides equinos diluídos em Botu-sêmen® refrigerados (14 oC) durante 24 horas.(AU)

Use of glutathione peroxidase and cysteine in Botu-Sêmen® and ACP-105® diluents on integrity of chilled equine spermatozoa / Uso de glutationa peroxidase e cisteína aos diluentes botusêmen® e ACP-105® na integridade de espermatozoides equinos refrigerados

Aiming to study the effect of glutathione peroxidase (GPx) and cysteine (Cis) addition in Botu-Sêmen® and ACP-105® diluents on integrity of equine spermatozoa, semen samples were cooling (14 C) and analyzed for total motility (TM), vigor, membrane integrity (iM) and acrosome (iAC), and mitochondrial membrane potential (MMP), after 0 (T0), 12 (T12) and 24 (T24) hours of cooling. Analysis of TM in T12 demonstrated that semen samples diluted in Botu-sêmen® (G1) and Botu-sêmen®+GPx+ Cis (G7) had higher (P 0.05) percentage than those diluted in ACP-105®+ Cis (G6). At T24, samples diluted in G7 had higher MT (P 0.05) than those in G2 and G6. Sperm vigor in T12 was higher (P<0.05) in samples diluted at G7 than in G2 and G6. At T24, the vigor of samples diluted G4 and G7 was higher (P<0.05) than inG2 and G6. No significant difference were observed to iM and MMP among groups, except to MMP at T0 was higher (P<0.05) in G1 than G7 and G8. At T24 the iAC parameter was higher (P<0.05) in the G6 than in G1. It can be concluded that GPx (5U) and Cis (5mM) in association preserves equine spermatozoa diluted in Botu-sêmen® at 14C during 24 hours.

Visando estudar o efeito da adição de glutationa peroxidase (GPx) e cisteína (Cis) aos diluentes Botu-Sêmen® e ACP-105® na viabilidade de espermatozoides equinos, amostras de sêmen foram refrigeradas (14 ºC) e analisadas quanto à motilidade total (MT), vigor, integridade de membrana (iM) e de acrossoma (iAc), e potencial da membrana mitocondrial (PMM), após0 (T0), 12 (T12) e 24 (T24) horas de refrigeração. A análise da MT evidenciou no T12 que as amostras de sêmen dos grupos Botu-sêmen® (G1) e Botu-sêmen®+GPx+Cist (G7) apresentaram maiores (P0,05) entre grupos, com exceção do PMM que no T0 foi maior (P<0,05) no G1 do que no G7 e no G8. A iAc no T24 foi maior (P<0,05) no G6 do que no G1. Conclui-se que a associação de GPx (5 U) e Cist (5 mM) preserva espermatozoides equinos diluídos em Botu-sêmen® refrigerados (14 oC) durante 24 horas.

Efeito da adição de Trolox e Glutationa reduzida na viabilidade in vitro de espermatozoides de cães / Effect of Trolox and Glutathione reduced (GSH) addition on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm

Com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozoides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), por meio de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica e microscópica e divisão do volume de sêmen em alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais, utilizando-se diferentes concentrações de Trolox (200 e 300 µM/L) ou GSH (2 e 5 µM/L). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC (60 seg) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de motilidade, vigor e espermatozoides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. 2, a adição de 2 e 5 µM/L de GSH (G2 e G3) determinou maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Concluiu-se que GSH, nas concentrações de 2 e 5 µM/L, pode ser adicionada ao diluente de criopreservação do sêmen de cães.

In order to evaluate the effect of adding Trolox and Glutathione reduced antioxidants on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) and Rottweiler (n=1) breeds, through digital manipulation. After macroscopic and microscopic evaluation, the volume of semen was divided in aliquots, according to the experiments and experimental groups, using different concentrations of Trolox (200 and 300 µM/L) or GSH (2 and 5 µM/L). The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine and stored in liquid nitrogen. After thawing at 37ºC (60 sec) and incubation during 60 minutes, we verified that motility, vigor and sperm with intact acrosomes showed significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In Exp. 2, the addition of 2 and 5 µM/L of GSH (G2 and G3) determined higher (P<0.05) percentage of sperm without oxidative stress. Therefore, we could conclude that GSH, on the concentration of 2 and 5 µM/L, can be added to diluent of dog semen cryopreservation.

Efeito da adição de Trolox e Glutationa reduzida na viabilidade in vitro de espermatozoides de cães / Effect of Trolox and Glutathione reduced (GSH) addition on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm

Com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozoides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), por meio de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica e microscópica e divisão do volume de sêmen em alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais, utilizando-se diferentes concentrações de Trolox (200 e 300 µM/L) ou GSH (2 e 5 µM/L). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC (60 seg) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de motilidade, vigor e espermatozoides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. 2, a adição de 2 e 5 µM/L de GSH (G2 e G3) determinou maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Concluiu-se que GSH, nas concentrações de 2 e 5 µM/L, pode ser adicionada ao diluente de criopreservação do sêmen de cães.(AU)

In order to evaluate the effect of adding Trolox and Glutathione reduced antioxidants on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) and Rottweiler (n=1) breeds, through digital manipulation. After macroscopic and microscopic evaluation, the volume of semen was divided in aliquots, according to the experiments and experimental groups, using different concentrations of Trolox (200 and 300 µM/L) or GSH (2 and 5 µM/L). The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine and stored in liquid nitrogen. After thawing at 37ºC (60 sec) and incubation during 60 minutes, we verified that motility, vigor and sperm with intact acrosomes showed significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In Exp. 2, the addition of 2 and 5 µM/L of GSH (G2 and G3) determined higher (P<0.05) percentage of sperm without oxidative stress. Therefore, we could conclude that GSH, on the concentration of 2 and 5 µM/L, can be added to diluent of dog semen cryopreservation.(AU)