Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

ABSTRACT: Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

RESUMO: Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of Campylobacter spp. isolated from different animal species in Minas Gerais / Perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de amostras Campylobacter spp isoladas de diferentes espécies animais em Minas Gerais

Susceptibility pattern of 45 Campylobacter spp.isolates ­ 16 C. jejuni, eight C. coli, and 21 C. fetus isolated from different animal species in Brazil ­ to twelve antimicrobial agents was determined. All Campylobacter spp. isolates were susceptible to gentamicin, sulfadiazine, and sulfamethoxazole. C. jejuni and C. coli were also sensitive to chloramphenicol, whereas all C. fetus strains were susceptible to kanamycin. Cefoperazone showed the highest percentage of resistance among C. jejuni (68.75%), followed by nalidixic acid (31.25%), ampicillin (37.50%), tetracycline (37.50%), erythromycin (12.50%), and kanamycin (6.25%). Likewise, cefoperazone exhibited the highest percentage of resistance among C. coli (75.00%), followed by nalidixic acid (50.00%), tetracycline (50.00%), erythromycin (37.50%), ampicillin (12.50%), and kanamycin (12.50%). Among C. fetus strains, nalidixic acid showed the highest resistance rate (85.71%), followed by cefoperazone (71.43%), tetracycline (42.86%), ampicillin (19.05%), chloramphenicol (9.52%), and erythromycin (4.76%). Therefore, it was found that the majority of Campylobacter spp. isolated from animals was sensitive to gentamycin, chloramphenicol, kanamacyn, and sulfonamides; however, a high proportion of the strains showed reduced susceptibility to nalidixic acid, ampicillin, cefoperazone, and tetracycline. Moreover, C. coli and C. fetus isolates showed a high percentage of multidrug resistant strains.(AU)

O padrão de sensibilidade de 45 amostras de Campylobacter spp, incluindo 16 amostras de C. jejuni, 8 de C. coli e 21 C. fetus, isoladas de diferentes espécies de animais do Brasil, foi determinado para doze antimicrobianos. Todas as amostras de Campylobacter spp foram sensíveis à gentamicina, sulfadiazina e sulfametoxazol. C. jejuni e C. coli foram também sensíveis ao cloranfenicol, enquanto todas as amostras de C. fetus foram sensíveis à canamicina. Cefoperazona mostrou o maior percentual de resistência entre C. jejuni (68,75%), seguido pelo ácido nalidíxico (31,25%), ampicilina (37,50%), tetraciclina (37,50%), eritromicina (12,50%) e canamicina (6,25%). Similarmente, cefoperazona também exibiu o maior percentual de resistência entre as amostras de C. coli (75,00%), seguido pelo ácido nalidíxico (50,00%), tetraciclina (50,00%), eritromicina (37,50%), ampicilina (12,50%) e canamicina (12,50%). Entre os isolados de C. fetus, ácido nalidíxico apresentou maior taxa de resistência (85,71%), seguido de cefoperazona (71,43%), tetraciclina (42,86%), ampicilina (19,05%), cloranfenicol (9,52%) e eritromicina (4,76%). Assim, os nossos resultados mostraram que a maioria das amostras de Campylobacter spp isolados de animais foram sensíveis à gentamicina, cloranfenicol, canamicina e sulfonamidas. No entanto, uma proporção elevada das amostras apresentou susceptibilidade reduzida ao ácido nalidíxico, ampicilina, cefoperazona e tetraciclina. Além disso, C. coli e C. fetus mostraram uma alta porcentagem de amostras resistentes a múltiplas drogas.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of Campylobacter spp. isolated from different animal species in Minas Gerais / Perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de amostras Campylobacter spp isoladas de diferentes espécies animais em Minas Gerais

Susceptibility pattern of 45 Campylobacter spp.isolates ­ 16 C. jejuni, eight C. coli, and 21 C. fetus isolated from different animal species in Brazil ­ to twelve antimicrobial agents was determined. All Campylobacter spp. isolates were susceptible to gentamicin, sulfadiazine, and sulfamethoxazole. C. jejuni and C. coli were also sensitive to chloramphenicol, whereas all C. fetus strains were susceptible to kanamycin. Cefoperazone showed the highest percentage of resistance among C. jejuni (68.75%), followed by nalidixic acid (31.25%), ampicillin (37.50%), tetracycline (37.50%), erythromycin (12.50%), and kanamycin (6.25%). Likewise, cefoperazone exhibited the highest percentage of resistance among C. coli (75.00%), followed by nalidixic acid (50.00%), tetracycline (50.00%), erythromycin (37.50%), ampicillin (12.50%), and kanamycin (12.50%). Among C. fetus strains, nalidixic acid showed the highest resistance rate (85.71%), followed by cefoperazone (71.43%), tetracycline (42.86%), ampicillin (19.05%), chloramphenicol (9.52%), and erythromycin (4.76%). Therefore, it was found that the majority of Campylobacter spp. isolated from animals was sensitive to gentamycin, chloramphenicol, kanamacyn, and sulfonamides; however, a high proportion of the strains showed reduced susceptibility to nalidixic acid, ampicillin, cefoperazone, and tetracycline. Moreover, C. coli and C. fetus isolates showed a high percentage of multidrug resistant strains.(AU)

O padrão de sensibilidade de 45 amostras de Campylobacter spp, incluindo 16 amostras de C. jejuni, 8 de C. coli e 21 C. fetus, isoladas de diferentes espécies de animais do Brasil, foi determinado para doze antimicrobianos. Todas as amostras de Campylobacter spp foram sensíveis à gentamicina, sulfadiazina e sulfametoxazol. C. jejuni e C. coli foram também sensíveis ao cloranfenicol, enquanto todas as amostras de C. fetus foram sensíveis à canamicina. Cefoperazona mostrou o maior percentual de resistência entre C. jejuni (68,75%), seguido pelo ácido nalidíxico (31,25%), ampicilina (37,50%), tetraciclina (37,50%), eritromicina (12,50%) e canamicina (6,25%). Similarmente, cefoperazona também exibiu o maior percentual de resistência entre as amostras de C. coli (75,00%), seguido pelo ácido nalidíxico (50,00%), tetraciclina (50,00%), eritromicina (37,50%), ampicilina (12,50%) e canamicina (12,50%). Entre os isolados de C. fetus, ácido nalidíxico apresentou maior taxa de resistência (85,71%), seguido de cefoperazona (71,43%), tetraciclina (42,86%), ampicilina (19,05%), cloranfenicol (9,52%) e eritromicina (4,76%). Assim, os nossos resultados mostraram que a maioria das amostras de Campylobacter spp isolados de animais foram sensíveis à gentamicina, cloranfenicol, canamicina e sulfonamidas. No entanto, uma proporção elevada das amostras apresentou susceptibilidade reduzida ao ácido nalidíxico, ampicilina, cefoperazona e tetraciclina. Além disso, C. coli e C. fetus mostraram uma alta porcentagem de amostras resistentes a múltiplas drogas.(AU)

Produção e caracterização de anticorpos monoclonais contra Campylobacter fetus subsp. Venerealis

Para a produção de anticorpos monoclonais contra Campylobacter fetus subsp. venerealis foram utilizadas as linhagens de células de mieloma Sp2/0-Ag14 e células de baço de camundongos BALB/c imunizados com sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A detecção dos anticorpos monoclonais foi realizada por ELISA indireto utilizando antígeno sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A clonagem foi realizada por diluição limitante e os clones foram caracterizados por ELISA indireto utilizando um painel de bactérias sonicada escolhidas em função da prevalência e habitats: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352 e Arcobacter skirrowii LMG 6621; e no "western blotting" utilizando antígenos sonicados de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. Foram obtidos 15 clones produtores de anticorpos anti C. fetus subsp. venerealis das classes IgM (1) e IgG (14). Quatro clones dentre os 15 clones obtidos foram produtores de anticorpos monoclonais espécie-específicos: dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp venerealis NCTC 10354 e dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp fetus ADRI 1812. Nenhum dos clones reagiu contra C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, comprovando a especificidade dos anticorpos monoclonais testados. Todos os clones reconheceram uma proteína de massa molecular de aproximadamente 148 kDa no sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354

Myeloma cells Sp2/0-Ag14 and spleen cells from BALB/c mouse immunized with sonicated Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354 were fused with polyethylene glycol (PEG) for the production of monoclonal antibodies (MAb s). Clones were obtained by limiting dilution and screened for specific MAb s to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 by indirect ELISA and western blot against a panel of bacteria: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352, and Arcobacter skirrowii LMG 6621 for the ELISA and C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 and C. sputorum biovar sputorum LMG 6647 for the western blotting. Fifteen clones producing MAb s anti C. fetus subsp. venerealis of the IgM (1) and IgG (14) classes were further screened for species-specificity. Four clones of the 15 obtained were producers of species-specific MAb s, 2 were specific for C. fetus subsp venerealis and 2 specific for C. fetus subsp fetus. None of the clones were reactive against C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. All clones recognized a protein with molecular mass of approximately 148 kDa from lised C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354