Antimicrobial susceptibility of Clostridium perfringens isolated from domestic and wild animal species in Brazil / Susceptibilidade antimicrobiana de Clostridium perfringens isolados de animais domésticos e espécies silvestres no Brasil

Clostridium perfringens is a microorganism commonly found in the microbiota of humans and animals and a potential cause of enteric, muscle or nervous diseases. The treatment of these diseases is based on antimicrobial therapy and it is extremely important to know the antimicrobial susceptibility profile of the strains present in the region. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial susceptibility of C. perfringens isolated from domestic and wild animals in Brazil against seven different antimicrobials. Forty-one strains from the stool samples of cattle (n = 12), buffalo (n = 2), goat (n = 3), dogs (n = 12) and wild carnivores (n = 12) were examined. The minimum inhibitory concentration was determined by the agar dilution method using Brucella agar supplemented with 5% of sheep blood, 0.1% of vitamin K, 0.1% of hemin and concentrations ranging from 0,25 to 256,0 mg L-¹ of the following antibiotics: erythromycin, florfenicol, metronidazole, oxytetracycline, penicillin, tylosin, and vancomycin. All C. perfringens strains were susceptible to florfenicol, metronidazole, penicillin and vancomycin. Two strains (4.9%) were resistant to erythromycin and tylosin, while five (12.2%) were resistant to oxytetracycline, one of which (2.4%) from an ocelot.(AU)

Clostridium perfringens é um microrganismo comumente encontrado na microbiota de seres humanos e animais e potencial causador de enfermidades entéricas, musculares ou neurológicas. O tratamento das enfermidades é baseado em terapia antimicrobiana, sendo de extrema importância conhecer o perfil de susceptibilidade antimicrobiana das estirpes presentes na região em questão. O presente estudo teve como objetivo avaliar a susceptibilidade de estirpes de C. perfringens isolados de animais domésticos e carnívoros silvestres no Brasil frente a sete diferentes antimicrobianos. Foram utilizados 41 isolados originários de bezerros (n = 12), búfalos (n = 2), caprinos (n = 3), cães (n = 12) e espécies de carnívoros silvestres (n = 12). A concentração inibitória minima foi determinada pelo método de diluição seriada em agar, utilizando-se o agar Brucella suplementado com 5% de sangue ovino, 0,1% de vitamina K, 0,1% de hemina e concentrações variando de 0,25 a 256,0 mg L-¹ dos seguintes antimicrobianos: eritromicina, florfenicol, metronidazol, oxitetraciclina, penicilina, tilosina e vancomicina. Todas as estirpes de C. perfringens testadas foram sensíveis ao florfenicol, metronidazol, penicilina e vancomicina. Dois isolados (4,9 %) foram resistentes a eritromicina e a tilosina, enquanto que cinco (12,2 %) estirpes foram resistentes a oxitetraciclina, sendo uma delas (2,4 %) proveniente de uma jaguatirica.(AU)

Detection of toxins A/B and isolation of Clostridium difficile and Clostridium perfringens from dogs in Minas Gerais, Brazil

The objective of this study was to detect C. difficileA/B toxins and to isolate strains of C. perfringensand C. difficile from diarrheic and non-diarrheic dogs in Brazil. Stool samples were collected from 57 dogs, 35 of which were apparently healthy, and 22 of which were diarrheic. C. difficileA/B toxins were detected by ELISA, and C. perfringensand C. difficilewere identified by multiplex PCR. C. difficileA/B toxins were detected in 21 samples (36.8%). Of these, 16 (76.2%) were from diarrheic dogs, and five (23.8%) were from non-diarrheic dogs. Twelve C. difficile strains (21.1%) were isolated, of which ten were A+B+and two were A-B-. All non-toxigenic strains were isolated from non-diarrheic animals. The binary toxin gene cdtBwas found in one strain, which was A+B+and was derived from a non-diarrheic dog. C. perfringensstrains were isolated from 40 samples (70.2%). Of these, 18 (45%) were from the diarrheic group, and 22 (55%) belonged to the non-diarrheic group. All isolates were classified as C. perfringenstype A and there was an association between the detection of the cpegene and the presence of diarrhea. Interestingly, ten strains (25%) were positive for the presence of the cpb2gene. The high rate of detection of the A/B toxins in non-diarrheic dogs suggests the occurrence of subclinical disease in dogs or carriage of its toxins without disease. More studies are needed to elucidate the epidemiology of C. difficileand C. perfringensin dogs and to better our understanding of C. difficileas a zoonotic agent. This is the first study to report the binary toxin gene in C. difficilestrains isolated from dogs in Brazil.(AU)

Comparação entre as provas de 2-mercaptoetanol e de fixação de complemento para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina em animais com diferentes históricos vacinais / Comparison between 2-mercaptoethanol and complement fixation tests for the serological diagnosis of bovine brucellosis in animals with different vaccination histories

Foi realizada comparação entre os testes de 2-mercaptoetanol e fixação de complemento pelos testes kappa e qui-quadrado de McNemmar a partir dos resultados obtidos em 194 amostras de soro sanguíneo bovino enviadas ao LANAGRO/MG para confirmação do diagnóstico da brucelose. Obtiveram-se 87,76% de resultados concordantes, com kappa igual a 0,75 (p < 0,05) variando de 0,655 a 0,843 (95% de confiabilidade). Não foi observada discordância estatisticamente significativa entre as provas ao teste de qui-quadrado de McNemmar. Os resultados obtidos contribuem nas recomendações do PNCEBT quanto ao uso destes dois testes, no entanto, fica clara a necessidade de uma avaliação mais profunda dos mesmos em função dos resultados discordantes encontrados notadamente entre os soros de títulos mais baixos. Recomenda-se a construção de um banco de soros de referência que permitiria a validação dos mesmos de modo a reduzir a possibilidade de falso-negativos, mais danosos ao PNCEBT.(AU)

Botulismo tipo C em perus em Minas Gerais, Brasil / Type C botulism in turkeys in Minas Gerais, Brazil

O botulismo é uma intoxicação causada pela ingestão das toxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, que acomete mamíferos e aves e é caracterizado por um quadro de paralisia flácida. Neste trabalho, é descrito um surto de botulismo em perus, ocorrido no município de Santa Luzia, região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais. Os animais apresentavam incoordenação motora, paralisia flácida das patas, asas e pescoço. Em um intervalo de 24 horas, todos os 29 animais do plantel vieram a óbito. Na necropsia, observou-se a presença de larvas de mosca no inglúvio. Nos soros coletados, foi identificada a toxina botulínica tipo C pelo teste de soroneutralização em camundongos.(AU)

Botulism is an intoxication caused by the ingestion of toxins produced by Clostridium botulinum. It affects mammals and birds, and is characterized by flaccid paralysis of the limbs. This report describes an outbreak of botulism in turkeys of various ages in the city of Santa Luzia, state of Minas Gerais, Brazil. The animals showed incoordination followed by flaccid paralysis involving the muscles of the legs, wings and neck. Within 24 hours, all 29 (100 percent) turkeys died. The post-mortem examination revealed the presence of fly larvae in the crop and the C. botulinum type C toxin was demonstrated in the sera of two affected animals by serum neutralization test.(AU)

Produção e caracterização de anticorpos monoclonais contra toxina épsilon de Clostridium perfringens Tipo D / Production and characterization of monoclonal antibodies against Clostridium perfringens Type D epsilon toxin

Clostridium perfringens tipo D é o agente etiológico da enterotoxemia em ruminantes, causada pela toxina épsilon e caracterizada por edema cardíaco, pulmonar, renal e cerebral. Anticorpos monoclonais contra toxina épsilon de C. perfringens tipo D foram produzidos a partir da fusão da linhagen de mieloma P3-X63-Ag8 653 com células do baço de camundongos Balb/c imunizados com o toxóide épsilon. Seis linhagens de híbridos secretores de anticorpos monoclonais das classes e IgM e IgG foram estabelecidas.(AU)

Clostridium perfringens type D is the aetiological agent of enterotoxemia in ruminants. The disease is caused by epsilon toxin characterized by cardiac, pulmonary, kidney and brain edema. Monoclonal antibodies were produced by using myeloma cell line P3-X63-Ag8 653 fused with spleen cells from Balb/c mice, immunized with epsilon toxoid of C. perfringens type D. Six hybrids were established secreting monoclonal antibodies of the IgM class and IgG3 subclass.(AU)

Botulismo tipo C em ganso ocorrido em Minas Gerais, Brasil / Type C botulism in a goose at Minas Gerais, Brazil

Botulismo é uma intoxicação causada pela ingestão das toxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, que acomete mamíferos e aves, caracterizando-se por um quadro de paralisia flácida. Neste trabalho, é descrito um caso de botulismo em ganso, ocorrido no município de Santa Luzia, região metropolitana de Belo Horizonte, no Estado de Minas Gerais. Ao exame clínico, o animal apresentava-se com um quadro de paralisia flácida dos músculos do pescoço, das pernas e asas, além de apresentar ainda desprendimento de penas. A necropsia não revelou lesões significativas. Foi colhido o soro do animal e submetido ao teste de soroneutralização em camundongo, que identificou a toxina de C. botulinum tipo C.(AU)

Botulism is an intoxication caused by the ingestion of toxins produced by Clostridium botulinum, that affects mammals and birds, characterized by a flaceid paralysis. This report describes a case of botulism in a goose in Santa Luzia, Minas Gerais State, Brazil. Clinical examinations showed dropping feathers and flaccid paralysis involving the muscles of the wings, legs and neck. post-mortem examination showed no significant gross or macroscopic lesions C. botulinum type C toxin was demonstrated in the serum of the affected animal through serum neutralization test in mice.(AU)

Botulismo em ruminantes causado pela ingestão de cama-de-frango / Botulism in ruminants being fed with poultry litter

Botulismo é uma intoxicação causada pela ingestão das toxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, que acomete mamíferos e aves. Neste trabalho é descrito um surto de botulismo em ruminantes, ocorrido em duas propriedades localizadas no município de Patos, no Estado da Paraíba, Brasil. Em uma das propriedades, de um total de 88 bovinos, 85 (96,6 por cento) vieram a óbito. Na segunda, morreram 145 ovinos (96,7 por cento), 233 caprinos (57,8 por cento) e 30 bovinos (96,8 por cento). Os animais acometidos apresentavam paralisia progressiva, dificuldade de locomoção, sialorréia e dispnéia. A morte ocorreu entre 24 e 48 horas após o início dos sinais, por parada cardio-respiratória. Nenhuma alteração significativa foi observada no exame post-mortem. O diagnóstico de botulismo foi confirmado pela demonstração das toxinas C e D no conteúdo intestinal e na cama-de-frango utilizada na alimentação dos animais, pela técnica de soroneutralização em camundongos.(AU)

Botulism is a poisoning caused by the ingestion of toxins produced by Clostridium botulinum, that infects mammals and birds. This article reports an outbreak of botulism in two different flocks of ruminants at Paraíba, Brazil. In one, 85 out of 88 (96.6 percent) cattles died. In the other, 145 (96.7 percent) sheeps, 233 (57.8 percent) goats and 30 (96.8 percent) cattles died. Clinical signs were progressive paralysis, difficulties in moving, sialorrhoe and dyspnoe. Death occurred 24 to 48 hours after the beginning of clinic signs and at post-mortem examination no noteable changes were observed. Type C and D toxins were demonstrated in the intestinal contents and poultry litter by neutralization test in mice.(AU)

Concentração inibitória mínima (CIM) de oito antimicrobianos frente isolados de Streptococcus suis / Mininum inhibitory concentration of eigth antibiotics toward isolates of Streptococcus suis

Avaliou-se a concentração inibitória mínima (CIM) de 75 isolados de Streptococcus suis frente a oito antimicrobianos freqüentemente utilizados no controle da infecção por esse microrganismo. A CIM foi realizada em placas previamente preparadas com ágar sangue, contendo concentrações variando de 0,25 a 256 μg/ml dos seguintes antimicrobianos: amoxicilina, ampicilina, penicilina, ceftiofur sódico, florfenicol, lincomicina, penicilina, sulfametoxazol-trimetoprim e tetraciclina. A amoxicilina nas concentrações de 1 e 2 μg/ml, o florfenicol a 1 μg/ml e o sulfametoxazol-trimetoprim nas concentrações de 2 e 8 μg/ml, foram os antimicrobianos frente aos quais os microrganismos apresentaram menor resistência. Em contraste, a ampicilina, tetraciclina, ceftiofur sódico e lincomicina, foram menos efetivos, apresentando CIM de (64 e 128 μg/ml), (64 e 128 μg/ml), (128 e 256 μg/ml) e (>256 μg/ml), respectivamente. Os resultados deste estudo demonstram que a amoxicilina e o florfenicol são os antibióticos de escolha para o tratamento de infecções pelo S. suis em suínos.(AU)

The minimun inhibitory concentration (MIC) was determined toward amoxicilin, ampicilin, penicillin, ceftiofur, florfenicol, lincomycin, trimethoprim-sulfadiazine and tetracycline for 75 strains of Streptococcus suis. The MIC was performed on sheep blood agar plates containing concentrations varying from 0,25 to 256 μg/ml of the antibiotic described above. The amoxicilin in the concentrations of 1 and 2 μg/ml, florfenicol in the concentration of 1 μg/ml and trimethoprim-sulfadiazine in the concentrations of 2 e 8 μg/ml, were the antibiotics that presented minor resistance. In contrast, the ampicilin, tetracycline, ceftiofur and lincomycin, presented MIC of 64 and 128 μg/ml, 64 and 128 μg/ml, 128 and 256 μg/ml and >256 μg/ml, respectively. The results of this study show that the amoxicilin and florfenicol are the antibiotics of choice for the treatment of diseases by S. suis in swine.(AU)

Ocurrencia de clostrídios aislados entre 1988 a 2007 / Clostrídios isolates determination between 1988 and 2007. / Ocorrência de clostrídios isolados entre 1988 a 2007

El objetivo de este estudio es la determinación de la ocurrencia del aislamiento de clostrídios a partir de materiales derivados de diversos municipios del estado de Rio Grande do Sul, entre 1988 a 2007. Durante el periodo analizado, el género Clostridium se aisló en 123 protocolos, 61% de los aislados fueron Clostridium perfringens, 28,45% Clostridium chauvoei, 13,8% Clostridium septicum y 0,8% Clostridium sp. La toxina botulínica fue indentificada en suero y contenido intestinal de 10 casos analizados. Los aislamientos se refieren principalmente a casos de enterotoxemia, gangrena gaseosa, botulismo y pierna negra. Los resultados demostraron la significativa ocurrencia de clostrídios. Hacemos hincapié en la importancia de la supervisión de clostridios debido principalmente al fuerte impacto económico que estas enfermedades pueden desencadenar.

The aim of this study was to determinate the occurrence of Clostridium. The samples were from cities of Rio Grande do Sul state, between 1988 and 2007. During the analyzed period, Clostridium were isolates in 123 protocols. Clostridium perfringens were isolates in 61% of cases, 28.45% Clostridium chauvoei, 13.8% Clostridium septicum and 0.8% Clostridium sp. Botulinum toxin was detected in samples from intestinal contents and serum of 10 analyzed cases. The cases with clostridiuns isolates were related, mainly, enterotoxemia, gas gangrene, blackleg and botulism. Thus, this work demonstrated a significative clostridios occurrence. Is important the nationwide monitoring of clostridial, due mainly to strong economic impact that these diseases can trigger.

Este estudo objetivou investigar a ocorrência de clostrídios, a partir de materiais provenientes de municípios do estado do Rio Grande do Sul, entre 1988 a 2007, encaminhados para análise microbiológica. Durante o período analisado, o gênero Clostridium foi isolado em 123 protocolos, destes, 61% foram caracterizados como Clostridium perfringens, 28,45% Clostridium chauvoei, 13,8% Clostridium septicum e 0,8% Clostridium sp. Toxina botulínica foi identificada em soros e conteúdo intestinal de 10 casos analisados. Os isolados foram relacionados, principalmente, a casos de enterotoxemia, gangrena gasosa, carbúnculo sintomático e botulismo. Os resultados demonstram significativo número de isolamento de clostrídios. Ressaltamos a importância do monitoramento das clostridioses em nível nacional devido principalmente, ao forte impacto econômico que estas enfermidades podem desencadear.

Outbreak of type C botulism in chickens in Pancas city, Espírito Santo state, Brazil / Surto de botulismo tipo C em frangos na cidade de Pancas, Espírito Santo, Brasil

This work aims to describe an outbreak of botulism in poultry (Gallus gallus domesticus), in Pancas City, Espírito Santo State, Brazil. The birds were derived from a subsistence property with approximately 150 domestic fowls. The owner reported finding some birds lying on the floor and others exhibiting limited mobility. Ten animals in agony were euthanized, necropsied and had their blood serum collected. About 72 hours after the onset of clinical signs, 144 (96%) animals of the creation had already died. No postmortem changes were found at necropsies. Clostridium botulinum type C toxins were detected in the sera of euthanized chickens by mice neutralization tests. The observation of clinical signs, absence of post-mortem lesions and the result of mouse neutralization tests confirmed the diagnosis of botulism caused by C. botulinum type C. Unfortunately, the source of toxins was not found.

O presente trabalho tem como objetivo descrever um surto de botulismo em aves domésticas (Gallus gallus domesticus), ocorrido na cidade de Pancas, estado do Espírito Santo, Brasil. As aves eram oriundas de uma propriedade de subsistência com aproximadamente 150 frangos domésticos. O proprietário relatou encontrar algumas aves caídas no chão e outras apresentando dificuldade de locomoção. Dez animais em estado agônico foram eutanasiados, submetidos à necropsia e coleta de soro sanguíneo. Em 72 horas após o início dos sinais clínicos, 144 (96%) animais da criação já haviam vindo a óbito. Nenhuma alteração post-mortem foi encontrada durante a necropsia. Foi possível detectar a toxina botulínica tipo C por soroneutralização em camundongos no soro dos animais eutanasiados. A observação da sintomatologia clínica, ausência de lesões à necropsia e o resultado da soroneutralização permitem confirmar o diagnóstico de botulismo por Clostridium botulinum tipo C.

Antimicrobial susceptibility of Clostridium perfringens isolated from domestic and wild animal species in Brazil / Susceptibilidade antimicrobiana de Clostridium perfringens isolados de animais domésticos e espécies silvestres no Brasil

Clostridium perfringens is a microorganism commonly found in the microbiota of humans and animals and a potential cause of enteric, muscle or nervous diseases. The treatment of these diseases is based on antimicrobial therapy and it is extremely important to know the antimicrobial susceptibility profile of the strains present in the region. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial susceptibility of C. perfringens isolated from domestic and wild animals in Brazil against seven different antimicrobials. Forty-one strains from the stool samples of cattle (n = 12), buffalo (n = 2), goat (n = 3), dogs (n = 12) and wild carnivores (n = 12) were examined. The minimum inhibitory concentration was determined by the agar dilution method using Brucella agar supplemented with 5% of sheep blood, 0.1% of vitamin K, 0.1% of hemin and concentrations ranging from 0,25 to 256,0 mg L-¹ of the following antibiotics: erythromycin, florfenicol, metronidazole, oxytetracycline, penicillin, tylosin, and vancomycin. All C. perfringens strains were susceptible to florfenicol, metronidazole, penicillin and vancomycin. Two strains (4.9%) were resistant to erythromycin and tylosin, while five (12.2%) were resistant to oxytetracycline, one of which (2.4%) from an ocelot.

Clostridium perfringens é um microrganismo comumente encontrado na microbiota de seres humanos e animais e potencial causador de enfermidades entéricas, musculares ou neurológicas. O tratamento das enfermidades é baseado em terapia antimicrobiana, sendo de extrema importância conhecer o perfil de susceptibilidade antimicrobiana das estirpes presentes na região em questão. O presente estudo teve como objetivo avaliar a susceptibilidade de estirpes de C. perfringens isolados de animais domésticos e carnívoros silvestres no Brasil frente a sete diferentes antimicrobianos. Foram utilizados 41 isolados originários de bezerros (n = 12), búfalos (n = 2), caprinos (n = 3), cães (n = 12) e espécies de carnívoros silvestres (n = 12). A concentração inibitória minima foi determinada pelo método de diluição seriada em agar, utilizando-se o agar Brucella suplementado com 5% de sangue ovino, 0,1% de vitamina K, 0,1% de hemina e concentrações variando de 0,25 a 256,0 mg L-¹ dos seguintes antimicrobianos: eritromicina, florfenicol, metronidazol, oxitetraciclina, penicilina, tilosina e vancomicina. Todas as estirpes de C. perfringens testadas foram sensíveis ao florfenicol, metronidazol, penicilina e vancomicina. Dois isolados (4,9 %) foram resistentes a eritromicina e a tilosina, enquanto que cinco (12,2 %) estirpes foram resistentes a oxitetraciclina, sendo uma delas (2,4 %) proveniente de uma jaguatirica.

Outbreak of type C botulism in chickens in Pancas city, Espírito Santo state, Brazil / Surto de botulismo tipo C em frangos na cidade de Pancas, Espírito Santo, Brasil

This work aims to describe an outbreak of botulism in poultry (Gallus gallus domesticus), in Pancas City, Espírito Santo State, Brazil. The birds were derived from a subsistence property with approximately 150 domestic fowls. The owner reported finding some birds lying on the floor and others exhibiting limited mobility. Ten animals in agony were euthanized, necropsied and had their blood serum collected. About 72 hours after the onset of clinical signs, 144 (96%) animals of the creation had already died. No postmortem changes were found at necropsies. Clostridium botulinum type C toxins were detected in the sera of euthanized chickens by mice neutralization tests. The observation of clinical signs, absence of post-mortem lesions and the result of mouse neutralization tests confirmed the diagnosis of botulism caused by C. botulinum type C. Unfortunately, the source of toxins was not found.

O presente trabalho tem como objetivo descrever um surto de botulismo em aves domésticas (Gallus gallus domesticus), ocorrido na cidade de Pancas, estado do Espírito Santo, Brasil. As aves eram oriundas de uma propriedade de subsistência com aproximadamente 150 frangos domésticos. O proprietário relatou encontrar algumas aves caídas no chão e outras apresentando dificuldade de locomoção. Dez animais em estado agônico foram eutanasiados, submetidos à necropsia e coleta de soro sanguíneo. Em 72 horas após o início dos sinais clínicos, 144 (96%) animais da criação já haviam vindo a óbito. Nenhuma alteração post-mortem foi encontrada durante a necropsia. Foi possível detectar a toxina botulínica tipo C por soroneutralização em camundongos no soro dos animais eutanasiados. A observação da sintomatologia clínica, ausência de lesões à necropsia e o resultado da soroneutralização permitem confirmar o diagnóstico de botulismo por Clostridium botulinum tipo C.

Mionecroses: estudos epidemiológicos e moleculares

Realizaram-se estudos de casos de mionecroses causados por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum e Clostridium sordelli, utilizando diferentes métodos laboratoriais. Fez-se estudo retrospectivo, empregando o complexo imunoenzimático estreptavidina-biotina peroxidase, em amostras clínicas parafinizadas de 33 casos de bovinos e suinos com suspeita clínica de mionecroses. padronizou-se uma técnica de PCR multiplex para detecção de C. chauvoei e C.septicum e, realizaram-se sequenciamento e análise filogenética de cinco isolados de campo e quatro sementes vacinais de C. septicum. No estudo retrospectivo, detectaram-se: C. Chauvoei, C. septicum, C.chauvoei mais Clostridium novyi tipo A e C. chauvoei mais C. sordellii em 21. oito, doi, um e um casos, respectivamente. A técnica de PCR multiplex amplificou eficientemente sequencias gênicas de C. chauvoei e C. septicum, apresentando sensibilidade de 45pg/uL e 30pg/uL, respectivamente. Não foram observadas reações cruzadas com outras espécies de clostridios, outras espécies bacterianas e, entre ambos os agentes. Pelo sequenciamento e análise filogenética, observou-se a existência de dois diferentes grupos de C. septicum

A study of natural cases of myonecroses by Clostridium chauvoei, Clostridium septicum and Clostridium sordellii was performed. In addition, a retrospective study employing the streptavidin-biotin peroxidase technique was made on formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of 33 field cases from cattle and swine suspected of myonecrosis. A multiplex PCR tecnique for detection of C. chauvoei and C. septicum was standardized, and sequencing and phylogenetic analyses of five isolates and four vaccine strains of C. septicum was made. The results of the retrospective study revealed the presence of C. chauvoei, C. septicum, C. chauvoei plus C. septicum, C. chauvoei plus Clostridium novyi type A and C. chauvoei plus C. sordelli in 21, eight, two one and one cases, respectively. The multiplex PCR technique showed to be efficient for amplifyng genomic sequences of C. chauvoei and C. septicum isolates presenting a sensitivity of 45pg/uL, respectively. No cross reactions were observed toi other Clostridia, other bacterial species or between both agents. By the sequencing and phylogenetic analyses, the existence of two different genotypic groups of C. septicum was determined