Highly Pathogenic and Multidrug Resistant Avian Pathogenic Escherichia Coli in Free-Range Chickens from Brazil

Avian pathogenic Escherichiacoli (APEC) virulence mechanism has been continuously studied and it is believed to be multifactorial and because of this, this work aimed to characterize potentially APEC strains isolated from free-range hens. Isolates were submitted to PCR for the detection of virulence genes, which were of high prevalence. In vivo inoculation of day-old chicks revealed that 49 of these strains were of high and intermediate pathogenicity. In addition, isolates were submitted to antimicrobials susceptibility test with the majority of the strains presenting multiresistance. Phylogenetic analysis showed a greater presence of potentially APEC isolates in-group B2. In addition, high heterogeneity was detected among the isolates byXbaI enzyme. Fifteen serogroups were identified, being the O8 the most frequent. These results strengthen the fact that a combination of diverse factors are associated with the pathogenicity APEC strains, as well as to highlight its importance to public health and that free-range hens can act as a reservoirs of potentially zoonoticbacteria.(AU)

Highly Pathogenic and Multidrug Resistant Avian Pathogenic Escherichia Coli in Free-Range Chickens from Brazil

Avian pathogenic Escherichiacoli (APEC) virulence mechanism has been continuously studied and it is believed to be multifactorial and because of this, this work aimed to characterize potentially APEC strains isolated from free-range hens. Isolates were submitted to PCR for the detection of virulence genes, which were of high prevalence. In vivo inoculation of day-old chicks revealed that 49 of these strains were of high and intermediate pathogenicity. In addition, isolates were submitted to antimicrobials susceptibility test with the majority of the strains presenting multiresistance. Phylogenetic analysis showed a greater presence of potentially APEC isolates in-group B2. In addition, high heterogeneity was detected among the isolates byXbaI enzyme. Fifteen serogroups were identified, being the O8 the most frequent. These results strengthen the fact that a combination of diverse factors are associated with the pathogenicity APEC strains, as well as to highlight its importance to public health and that free-range hens can act as a reservoirs of potentially zoonoticbacteria.

Desenvolvimento de elisa competitivo com concanavalina a (c-con a-elisa) para o sorodiagnóstico da doença de newcastle em pombos de vida-livre / development of concanavalin a competitive elisa (c-con a-elisa) for serodiagnosis of newcastle disease in ..

A Doença de Newcastle é uma enfermidade viral e de rápido poder de disseminação, acometendo uma ampla gama de espécies de aves domésticas e silvestres, em adição às da espécie Gallus gallus. Numerosos testes sorológicos foram desenvolvidos para detectar anticorpos contra o vírus da doença de Newcastle (VDN), como o teste de inibição da hemaglutinação (HI), que apresenta dificuldades de padronização para análise de soros de algumas espécies de aves silvestres e o método indireto de ELISA. Este último, entretanto, não é adequado para a detecção de anticorpos da maioria das espécies de aves não galiformes, uma vez que as imunoglobulinas dessas aves não reagem de forma cruzada com conjugados imunoenzimáticos anti-IgG de galinha, usados nos kits comerciais de ELISA para o VDN. Como ensaio sorológico alternativo, o método de C-CON A-ELISA foi desenvolvido nesse estudo para a detecção e quantificação de anticorpos contra VDN em soros de pombos de vida livre. Na compara&c

Análise filogenética de isolados do vírus da bronquite infecciosa aviária (vbi) no brasil com base na sequência 3’-terminal do gene da nucleoproteína / Phylogenetic analysis of isolates of avian infectious bronchitis virus (ibv)in brazil based on the 3'-terminal sequence of the nucleoprotein gene

A bronquite infecciosa é causada pelo VBI, que é classificado no gênero Gammacoronavirus da Família Coronaviridae. Essa enfermidade está distribuída mundialmente e destaca-se como um dos mais importantes problemas sanitários para o plantel avícola industrial. Recentemente tem sido identificado no Brasil um número elevado de variantes do VBI, diferindo na análise filogenética com base no gene S1 de estirpes Americanas, Europeias, Asiáticas e Australianas. No entanto, pouco tem sido investigado com relação a outros genes codificadores de proteínas importantes como a nucleoproteina (N), que é fator chave nos processos de replicação e montagem de novas partículas virais, e contém epítopos importantes para interação com as células T e B. O objetivo do presente estudo foi determinar as seqüências 3’-terminal do gene da proteina N de isolados do VBI no Brasil e compará-las com as de estirpes do VBI de outras regiões do mundo. Para tanto, foram submetidos à análise molecular, 15 isolados do VBI obtidos durante o período de 1988 a 2000, de surtos à campo da Bronquite Infecciosa (BI), em aves de corte ou de postura das regiões Sul e Sudeste do Brasil. A análise filogenética de sequências parciais do gene N resultou na segregação dos 15 isolados brasileiros do VBI em cinco grupos diferentes, sendo que três desses grupos são relacionados a estirpes do genótipos Massachusetts, enquanto que os outros dois grupos são associados aos genótipos Connecticut ou Variante Brasileira. Esses grupos genotípicos coincidiram na sua maior parte com os que foram previamente determinados pela análise filogenética com base no gene S1. Concluindo, a análise filogenética do gene N é capaz de diferenciar estirpes brasileiras do VBI e avaliar a sua evolução, especialmente nos casos em que a amplificação do gene S1 é mais difícil por causa da sua variabilidade entre estirpes muito diferentes do VBI.

Infectious bronchitis is caused by IBV, which is classified in the genus Gammacoronavirus, Family Coronaviridae. This disease is distributed worldwide and stands as one of the most important health problems for the poultry industry. Recently, researchers in Brazil have identified a large number of IBV variants, the phylogenetic analysis based on the S1 gene shows that they differ from the American, European, Asian and Australian strains. However, little research has been conducted about other encoding genes of important proteins such as the nucleoprotein (N), which is a key factor in replication and assembly processes of new viral particles, and contains epitopes important for interaction with T and B cells. The aim of this study was to determine the 3'-terminal sequences of the N protein gene isolated from IBV in Brazil and compare them with those of IBV strains from other regions of the world. So, 15 IBV isolates obtained from 1988 to 2000, during outbreaks of Infectious Bronchitis (IB) in broilers or laying birds in Southern and Southeastern Brazil, were submitted to molecular analysis. Phylogenetic analysis of partial sequences of the N gene resulted in the separation of the 15 Brazilian IBV isolates in five different groups while three of these groups are related to strains of the Massachusetts genotypes, whereas the other two groups are associated with the Connecticut genotypes or a Brazilian variant. These genotypic groups mostly coincided with those previously determined by phylogenetic analysis based on the S1 gene. In conclusion, the phylogenetic analysis of the N gene can differentiate Brazilian strains of IBV and evaluate its development, especially in cases where the S1 gene amplification is more difficult due to wide variability between different IBV strains.

Respostas imunes humorais homóloga e heteróloga induzidas por estirpes vacinal h120 e variante de campo do vírus da bronquite infecciosa aviária (vbi) / homologous and heterologous humoral immune responses induced by h120 vaccine and field variant ..

A proteção contra as cepas homólogas de IBV é geralmente obtida pela imunização com vacinas contendo cepas atenuadas. No entanto, a variação em algumas proteínas estruturais do IBV resulta em falha da vacina contra cepas heterólogas circulantes no campo. Neste estudo, foram medidas as respostas imunitárias humorais, utilizando um teste ELISA em aves vacinadas e não vacinadas com a cepa Massachusetts H120 e desafiados com uma cepa virulenta de Massachusetts, ou com uma cepa variante. Os grupos experimentais de galinhas SPF vacinadas ou não com a cepa Massachusetts no dia 2 e desafiados no dia 21 com a cepa variante, ou com a cepa virulenta de Massachusetts, foram testadas. Amostras de sangue e lágrimas foram coletadas aos 4, 7, 11, 14 e 21 dias pós-infecção (dpi), para medir os níveis de IgM, IgA e anticorpos anti-IBV IgG. Os resultados mostraram que a IgM sérica e lacrimal, começou a aumentar no quarto dpi, atingindo o pico de concentração no sétimo dpi e em seguida diminuído para os níveis basais até 21 dpi. A IgA foi detectada somente na lágrima, alcançando seu pico aos 14

Análise filogenética de isolados do vírus da bronquite infecciosa aviária (vbi) no brasil com base na sequência 3-terminal do gene da nucleoproteína / Phylogenetic analysis of isolates of avian infectious bronchitis virus (ibv)in brazil based on the 3'-terminal sequence of the nucleoprotein gene

A bronquite infecciosa é causada pelo VBI, que é classificado no gênero Gammacoronavirus da Família Coronaviridae. Essa enfermidade está distribuída mundialmente e destaca-se como um dos mais importantes problemas sanitários para o plantel avícola industrial. Recentemente tem sido identificado no Brasil um número elevado de variantes do VBI, diferindo na análise filogenética com base no gene S1 de estirpes Americanas, Europeias, Asiáticas e Australianas. No entanto, pouco tem sido investigado com relação a outros genes codificadores de proteínas importantes como a nucleoproteina (N), que é fator chave nos processos de replicação e montagem de novas partículas virais, e contém epítopos importantes para interação com as células T e B. O objetivo do presente estudo foi determinar as seqüências 3-terminal do gene da proteina N de isolados do VBI no Brasil e compará-las com as de estirpes do VBI de outras regiões do mundo. Para tanto, foram submetidos à análise molecular, 15 isolados do VBI obtidos durante o período de 1988 a 2000, de surtos à campo da Bronquite Infecciosa (BI), em aves de corte ou de postura das regiões Sul e Sudeste do Brasil. A análise filogenética de sequências parciais do gene N resultou na segregação dos 15 isolados brasileiros do VBI em cinco grupos diferentes, sendo que três desses grupos são relacionados a estirpes do genótipos Massachusetts, enquanto que os outros dois grupos são associados aos genótipos Connecticut ou Variante Brasileira. Esses grupos genotípicos coincidiram na sua maior parte com os que foram previamente determinados pela análise filogenética com base no gene S1. Concluindo, a análise filogenética do gene N é capaz de diferenciar estirpes brasileiras do VBI e avaliar a sua evolução, especialmente nos casos em que a amplificação do gene S1 é mais difícil por causa da sua variabilidade entre estirpes muito diferentes do VBI.(AU)

Infectious bronchitis is caused by IBV, which is classified in the genus Gammacoronavirus, Family Coronaviridae. This disease is distributed worldwide and stands as one of the most important health problems for the poultry industry. Recently, researchers in Brazil have identified a large number of IBV variants, the phylogenetic analysis based on the S1 gene shows that they differ from the American, European, Asian and Australian strains. However, little research has been conducted about other encoding genes of important proteins such as the nucleoprotein (N), which is a key factor in replication and assembly processes of new viral particles, and contains epitopes important for interaction with T and B cells. The aim of this study was to determine the 3'-terminal sequences of the N protein gene isolated from IBV in Brazil and compare them with those of IBV strains from other regions of the world. So, 15 IBV isolates obtained from 1988 to 2000, during outbreaks of Infectious Bronchitis (IB) in broilers or laying birds in Southern and Southeastern Brazil, were submitted to molecular analysis. Phylogenetic analysis of partial sequences of the N gene resulted in the separation of the 15 Brazilian IBV isolates in five different groups while three of these groups are related to strains of the Massachusetts genotypes, whereas the other two groups are associated with the Connecticut genotypes or a Brazilian variant. These genotypic groups mostly coincided with those previously determined by phylogenetic analysis based on the S1 gene. In conclusion, the phylogenetic analysis of the N gene can differentiate Brazilian strains of IBV and evaluate its development, especially in cases where the S1 gene amplification is more difficult due to wide variability between different IBV strains.(AU)

CLASSIFICAÇÃO FILOGENÉTICA E CARACTERIZAÇÃO GENOTÍPICA DOS ISOLADOS DE Escherichia coli PATOGÊNICA AVIÁRIA (APEC) PROVENIENTES DE GALINHAS CAIPIRAS

A Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é incriminada por uma variedade de doenças extra-intestinais em aves, que podem causar tanto infecções localizadas, quanto generalizadas denominadas colibacilose. Os mecanismos de virulência têm sido continuamente estudados e considerados multifatoriais, assim sendo, o conhecimento da genética bacteriana capaz de gerar tais mecanismos, pode auxiliar na identificação de cepas patogênicas isoladas de aves. O presente trabalho foi delineado com o objetivo de investigar a distribuição de 17 genes de virulência em 72 cepas isoladas de galinhas caipiras pela PCR-multiplex e classificar-las nos grupos filogenéticos A, B1, B2 e D pela detecção de três marcadores de patogenicidade: chuA, yjaA e um fragmento anônimo de DNA designado TSPE4.C2. Todos os isolados apresentaram os genes iss (resistência sérica), ompT (protease de membrana externa) e hlyF (hemolisina F). A freqüência dos demais genes foi 66,7% cvaC, 87,5% iroN, 88,9% iutA, 88,9% sitA, 29,2% tsh, 58,3% iucC, 83,3% traT, 72,2% iucD, 81,9% fimH, 38,9% fyuA, 77,8% irp2, 16,7% vat, 15,3% astA e 1,4% papC. A análise filogenética revelou que a maioria dos isolados pertence ao grupo filogenético B2 (39/72), seguido pelo grupo A (17/72), grupo B1 (14/72) e grupo D (2/72). Os isolados dos grupos filogenéticos B2 e D estiveram associados a um maior número de genes de virulência, apresentando

DESENVOLVIMENTO DE ELISA COMPETITIVO COM CONCANAVALINA A (C-CON A-ELISA) PARA O SORODIAGNÓSTICO DA DOENÇA DE NEWCASTLE EM POMBOS DE VIDA-LIVRE / DEVELOPMENT OF CONCANAVALIN A COMPETITIVE ELISA (C-CON A-ELISA) FOR SERODIAGNOSIS OF NEWCASTLE DISEASE IN ...

A Doença de Newcastle é uma enfermidade viral e de rápido poder de disseminação, acometendo uma ampla gama de espécies de aves domésticas e silvestres, em adição às da espécie Gallus gallus. Numerosos testes sorológicos foram desenvolvidos para detectar anticorpos contra o vírus da doença de Newcastle (VDN), como o teste de inibição da hemaglutinação (HI), que apresenta dificuldades de padronização para análise de soros de algumas espécies de aves silvestres e o método indireto de ELISA. Este último, entretanto, não é adequado para a detecção de anticorpos da maioria das espécies de aves não galiformes, uma vez que as imunoglobulinas dessas aves não reagem de forma cruzada com conjugados imunoenzimáticos anti-IgG de galinha, usados nos kits comerciais de ELISA para o VDN. Como ensaio sorológico alternativo, o método de C-CON A-ELISA foi desenvolvido nesse estudo para a detecção e quantificação de anticorpos contra VDN em soros de pombos de vida livre. Na compara&c

IMUNIDADE INDUZIDA PELA USO COMBINADO DE VACINA ATENUADA (ESTIRPE MASSACHUSETTS) E VACINA INATIVADA EXPERIMENTAL (VARIANTE BR-I) CONTRA O DESAFIO COM ESTIRPE VARIANTE BRASILEIRA DO VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA AVIÁRIA

Há atualmente no Brasil, uma predominância de infecções causadas por estirpes do VBI classificadas no genótipo variante (BR-I), que revelam diferenças marcantes de antigenicidade com relação à estirpe vacinal Massachusetts, rotineiramente usada em nosso país. Isso resulta em uma baixa imunidade-cruzada e consequentemente em um menor nível de proteção contra isolados desse genótipo. O propósito deste trabalho foi testar uma vacina inativada contendo uma estirpe variante do VBI pertencente ao genótipo BR-I, e avaliar o estado de proteção induzido por esta vacina em combinação com a vacina atenuada Massachusetts em aves desafiadas com estirpe homóloga. Foram testadas aves SPF distribuídas em três grupos: grupo A (aves vacinadas ao 1º dia de idade com vacina atenuada comercial, revacinadas com 14 dias de idade com vacina inativada experimental e desafiadas aos 35 dias de idade); grupo B (aves não vacinadas e desafiadas aos 35 dias de idade); grupo C (controle). As aves de cada grupo foram sacrificadas aos 3, 7 e 11 dias pós-infecção, para colheita de amostras de traquéia, rins, soro e lágrima, e posteriormente avaliação histopatológica e das respostas imunes humoral(RIH) pelo ELISA e celular(RIC) pela expressão de genes de RIC. Os resultados deste estudo demonstraram que esse esquema imunoprofilático induziu aumentos significativos nos níveis de anticorpos lacrimais e séricos do i

RESPOSTAS IMUNES HUMORAIS HOMÓLOGA E HETERÓLOGA INDUZIDAS POR ESTIRPES VACINAL H120 E VARIANTE DE CAMPO DO VÍRUS DA BRONQUITE INFECCIOSA AVIÁRIA (VBI) / HOMOLOGOUS AND HETEROLOGOUS HUMORAL IMMUNE RESPONSES INDUCED BY H120 VACCINE AND FIELD VARIANT ...

A proteção contra as cepas homólogas de IBV é geralmente obtida pela imunização com vacinas contendo cepas atenuadas. No entanto, a variação em algumas proteínas estruturais do IBV resulta em falha da vacina contra cepas heterólogas circulantes no campo. Neste estudo, foram medidas as respostas imunitárias humorais, utilizando um teste ELISA em aves vacinadas e não vacinadas com a cepa Massachusetts H120 e desafiados com uma cepa virulenta de Massachusetts, ou com uma cepa variante. Os grupos experimentais de galinhas SPF vacinadas ou não com a cepa Massachusetts no dia 2 e desafiados no dia 21 com a cepa variante, ou com a cepa virulenta de Massachusetts, foram testadas. Amostras de sangue e lágrimas foram coletadas aos 4, 7, 11, 14 e 21 dias pós-infecção (dpi), para medir os níveis de IgM, IgA e anticorpos anti-IBV IgG. Os resultados mostraram que a IgM sérica e lacrimal, começou a aumentar no quarto dpi, atingindo o pico de concentração no sétimo dpi e em seguida diminuído para os níveis basais até 21 dpi. A IgA foi detectada somente na lágrima, alcançando seu pico aos 14