Giardiasis in children and dogs, and the first report of assemblage E in dogs from northeastern Brazil / Giardíase em crianças e cães, e o primeiro relato de infecção por assemblage E em cães do nordeste brasileiro

Diagnosis is crucial for controlling giardiasis. We determined the prevalence and genetically characterize isolates of Giardia duodenalis of children and dogs from rural communities in northeastern Brazil. G. duodenalis cysts were concentrated by centrifugal flotation/sedimentation. Molecular characterization was carried out using the loci ssu-rRNA, bg, tpi, and gdh. By parasitological techniques, Giardia spp. infection was detected in 72/192 children (37.5%; 95% CI: 30.6%-44.7%) and 24/139 dogs (17.3%; 95% CI: 11.4%-24.6%). By molecular analysis, infection was detected in 60/141 children (42.5%; 95% CI: 34.3%-51.2%) and 26/92 dogs (28.3%; 95% CI: 19.4%-38.6%). The total prevalence of giardiasis was 54.9% in children (106/193; 95% CI: 47.1%-61.6%) and 32.9% in dogs (47/143; 95% CI: 25.2%-41.2%). Zoonotic assemblages A and B of G. duodenalis were detected in children, and assemblage E of G. duodenalis was detected in one child and two dogs. Parallel use of parasitological and molecular techniques proved to be a more effective strategy for detecting giardiasis in children and dogs from endemic areas.(AU)

O diagnóstico é crucial para o controle da giardíase. Foram determinadas as prevalências e as características genéticas isoladas de Giardia duodenalis, em crianças e cães de comunidades rurais do nordeste brasileiro. Os cistos de G. duodenalis foram concentrados por centrífugo-flutuação/sedimentação. A caracterização molecular foi realizada utilizando-se os loci ssu-rRNA, bg, tpi e gdh. Pelas técnicas parasitológicas, a infecção por Giardia spp. foi detectada em 72/192 crianças (37,5%; IC 95%: 30,6%-44,7%) e 24/139 cães (17,3%; IC 95%: 11,4%-24,6%). Molecularmente, a infecção foi detectada em 60/141 crianças (42,5%; IC 95%: 34,3%-51,2%) e 26/92 cães (28,3%; IC 95%: 19,4%-38,6%). A prevalência total de giardíase foi de 54,9% em crianças (106/193; IC 95%: 47,1%-61,6%) e 32,9% em cães (47/143; IC 95%: 25,2%-41,2%). Os assemblages zoonóticos A e B de G. duodenalis foram detectados em crianças, e o assemblage E de G. duodenalis foi detectado nas duas populações. O uso paralelo de técnicas parasitológicas e moleculares mostra-se uma estratégia mais eficaz para detecção de giardíase em crianças e cães de áreas endêmicas.(AU)

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in dogs with and without neurological signs / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em cães com e sem sinais neurológicos

This study investigated the association between neurological signs as well as plausible risk factors and the seroprevalence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum infection in dogs of the Campo Grande region of Mato Grosso do Sul, Brazil. In this study, the dogs were divided into two groups based on the presence and the absence of neurological signs (n=30 in each group). Serological diagnosis was performed using the indirect fluorescent antibody test. In the group with neurological disorders, 23.3% and 30% of the dogs had anti-T. gondii and anti-N. caninum antibodies, respectively. Moreover, three dogs from this group showed co-infection with both protozoa. In the group without neurological signs, 16.7% and 13.3% of the dogs were seropositive for T. gondii and N. caninum, respectively. Although presence of neurological signs was not associated with T. gondii and N. caninum infections (P = 0.747 and P = 0.21, respectively), there was a statistical association between T. gondii seropositivity and peripheral neurological alteration (P = 0.016) among dogs with neurological signs. Raw meat ingestion was the only risk factor associated with the presence of anti-N. caninum antibodies (P = 0.041). Results revealed evidence of exposure to N. caninum and T. gondii in dogs irrespective of the presence of neurological signs. Moreover, this study highlighted the need for serological investigation of T. gondii in dogs with disturbances in peripheral nervous systems and not offering raw meat to animals to avoid the risk of N. caninum infection.

Este estudo teve como objetivo investigar a associação entre sinais neurológicos, assim como possíveis fatores de risco e soroprevalência de Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães de Campo Grande, região de Mato Grosso do Sul, Brasil. Nesse estudo, os cães foram divididos em dois grupos, baseado na presença ou ausência de sinais neurológicos (n = 30 em cada grupo). O diagnóstico sorológico foi realizado por meio do teste imunofluorescência indireta (RIFI). No grupo com distúrbios neurológicos, 23.3% e 30% dos cães tinham anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum, respectivamente. Além disso, três cães deste grupo estavam coinfectados com ambos os protozoários. No grupo sem sinais neurológicos, 16.7% e 13.3% dos cães foram soropositivos para T. gondii e N. caninum, respectivamente. Apesar da presença de sinais neurológicos não ter sido associado a infecção por T. gondii ou N. caninum ( P = 0.747 e P = 0.21, respectivamente), houve associação estatística entre soropositividade para T. gondii e alteração neurológica periférica (P = 0.016) entre os cães com sinais neurológicos. A ingestão de carne crua foi o único fator de risco que apresentou associação com a presença de anticorpos para N. caninum (P = 0.041). Estes resultados mostraram evidência de que a exposição a N. caninum e T. gondii em cães independe da presença de sinais neurológicos. Além disso, este estudo destaca a necessidade de investigação sorológica para T. gondii em cães com distúrbios neurológicos periféricos, e o oferecimento de carne crua aos animais deve ser evitada devido ao risco de infecção por neosporose.

Prevalence and risk factors of Eimeria spp. natural infection in sheep from northern Paraná, Brazil / Prevalência e fatores de risco da infecção natural por Eimeira spp. em ovinos na região norte do Paraná, Brasil

Abstract The present study aimed to perform an epidemiological and morphological identification of Eimeria infection in sheep in Brazil. Fecal samples from sheep were collected from 20 farms in northern Paraná, Brazil. An epidemiological questionnaire was used to evaluate the risk factors. Fecal samples containing oocysts per gram of feces (OoPG) ≥1000 were subjected to the modified Willis-Mollay method to perform oocyst identification. Sporulated oocysts were observed microscopically for morphological identification. A total of 807 fecal samples were collected. Based on the morphological characteristics of the sporulated oocysts, 10 species of Eimeria were identified, with main species observed: Eimeira ovinoidalis (98.1%), Eimeria crandallis (87.6%), Eimeria parva (79.1%), and Eimeria bakuensis (60.8%). Only 2.6% (7/268) of the sheep were infected with a single species, 4.8% (13/268) contained two different species, and 92.5% (248/268) were infected with three or more species. The analysis of risk factors showed that an intensive rearing, no rotation of pasture, dirt, and slatted floors, and age up to 12 months were associated with infection. This study showed a high prevalence of Eimeria natural infection in sheep from northern Paraná, Brazil. Furthermore, based on the risk factors, good management and hygiene practices must be employed to avoid infection.

Resumo O presente estudo teve como objetivo realizar uma avaliação epidemiológica e morfométrica da infecção por Eimeria em ovinos no Brasil. Amostras fecais de ovinos foram coletadas em 20 fazendas no sul do Brasil. Um questionário epidemiológico foi utilizado para avaliar os fatores de risco. Amostras fecais, contendo oocistos por grama de fezes (OoPG) ≥1000, foram submetidas ao método de Willis-Mollay modificado para realizar a identificação de oocistos. Oocistos esporulados foram observados microscopicamente para identificação morfológica. Foram coletadas 807 amostras fecais. Com base nas características morfológicas e morfométricas dos oocistos esporulados, foram identificadas 10 espécies de Eimeria, com as principais espécies observadas: Eimeria ovinoidalis (98,1%), Eimeria crandallis (87,6%), Eimeria parva (79,1%) e Eimeria bakuensis (60,8%). Apenas 2,6% (7/268) dos ovinos estavam infectados com uma única espécie, 4,8% (13/268) continham duas espécies diferentes e 92,5% (248/268) estavam infectados com três ou mais espécies. A análise dos fatores de risco mostrou que uma criação intensiva, sem rotação de pasto, terra, piso de ripa e idade até 12 meses foram associadas à infecção. Este estudo mostrou uma alta prevalência de infecção natural por Eimeria em ovinos do norte do Paraná, Brasil. Além disso, com base nos fatores de risco, boas práticas de manejo e higiene devem ser empregadas para evitar infecções.

Evaluation of quantitative polymerase chain reaction for the detection of Toxoplasma gondii oocysts shed by cats / Avaliação da reação em cadeia da polimerase quantitativa para a detecção de oocistos de Toxoplasma gondii eliminados por gatos

Abstract Felines are definitive hosts of Toxoplasma gondii and can shed oocysts in their feces, contaminating the environment. Sporulated oocysts are highly resistant to the environment and have higher infectivity, which are attributed to many toxoplasmosis outbreaks. The aim of the present study was to evaluate a quantitative polymerase chain reaction (qPCR) technique for the detection of T. gondii oocysts shed by cats. Twelve cats from a previous vaccine experiment were challenged orally with 600 cysts of the TgDoveBr8 strain on day 72. Fecal samples were collected daily using the centrifugal flotation technique, with microscopic examination (Sheather technique) and qPCR for 20 days after the challenge. Cats from all groups shed oocysts in their feces. Five negative cats in the Sheather were positive according to qPCR on the 3rd day post-inoculation (dpi). Oocysts were detected on the 4th dpi using the Sheather; however, there was no statistical difference between the two methods (p=0.1116). In addition, there was no statistically significant difference in oocyst shedding between the groups according to the Sheather technique (p=0.6534) and qPCR (p=0.9670). In conclusion, these results demonstrate that qPCR can be used as an alternative to the Sheather to detect and quantify T. gondii oocysts.

Resumo Felinos são hospedeiros definitivos do Toxoplasma gondii e podem eliminar oocistos nas fezes, contaminando o meio ambiente. Oocistos esporulados são altamente resistentes ao meio ambiente com elevada infectividade, sendo atribuído a muitos surtos de toxoplasmose. O objetivo do estudo foi avaliar a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para a detecção de oocistos de T. gondii eliminados por gatos. Doze gatos de um experimento prévio de vacina foram desafiados por via oral com 600 cistos da cepa TgDoveBr8 no dia 72. Amostras fecais foram coletadas diariamente pela técnica de centrifugo-flutuação seguida de exame microscópico (técnica de Sheather) e qPCR por 20 dias após desafio. Gatos de todos os grupos eliminam oocistos nas fezes. Cinco gatos negativos na técnica Sheather foram positivos de acordo com a qPCR no 3º dia pós-inoculação (dpi). Oocistos foram detectados no 4º dpi no Sheather; entretanto, não houve diferença estatística entre os dois métodos (p=0,1116). Não houve diferença estatisticamente significativa na eliminação de oocistos entre os grupos de acordo com a técnica de Sheather (p = 0,6534) e qPCR (p = 0,9670). Em conclusão, esses resultados demonstram que qPCR pode ser usada como uma alternativa ao Sheather para detectar e quantificar oocistos de T. gondii.

Seroprevalence of Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leishmania spp. in hunting dogs from Mato Grosso do Sul, Brazil / Soroprevalência de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp. em cães de caça do Mato Grosso do Sul, Brasil

Toxoplasmosis, neosporosis, and leishmaniasis are important diseases of worldwide distribution and can affect both pets and humans. Hunting dogs have been trained to hunt domestic and wild animals, which makes them more exposed to parasitic infections. The present study aimed to evaluate the seroprevalence of Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leishmania spp. in hunting dogs from a rural area in Mato Grosso do Sul, Brazil. Serum samples were collected from 39 American Foxhound dogs, and the sex and age variables were recorded. Serum samples were subjected to an indirect fluorescent antibody test (IFAT) to detect antibodies. Seroprevalence was 35.9%, 15.4%, and 2.6% for Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp., respectively. There was no statistical difference between genders for these diseases (P>0.05). Results demonstrated a circulation of these protozoa in hunting dogs in a rural area of the state of Mato Grosso do Sul, which can contribute to the epidemiology of these diseases.(AU)

Toxoplasmose, neosporose e leishmaniose são importantes doenças de distribuição mundial e podem afetar tanto os animais de companhia quanto os humanos. Os cães de caça têm sido treinados para caçar animais domésticos e selvagens, o que torna esses animais mais expostos a infecções parasitárias. O presente estudo teve como objetivo avaliar a soroprevalência de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp. em cães de caça de área rural do Mato Grosso do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de soro de 39 cães da raça Foxhound-americano e as variáveis sexo e idade foram registradas. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção dos anticorpos. A soroprevalência foi de 35,9%, 15,4% e 2,6% para Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp., respectivamente. Não foi observado diferença estatística entre os sexos para todas as doenças (P>0.05). Os resultados demonstram circulação desses protozoários em cães de caça de uma área rural do estado do Mato Grosso do Sul, o que pode contribuir para a epidemiologia dessas doenças.(AU)

Toxoplasmosis outbreak in sheep in northern-central Paraná, Brazil / Surto de toxoplasmose em ovinos na Região Norte Central do Paraná, Brasil

In this study, we aimed to investigate an outbreak of abortion in a herd of beef sheep on a property in Ivaiporã, north central Paraná, Brazil. A total of 64 blood samples were collected from the sheep, 33 of which were mothers with reports of abortion or stillbirth, and 7 with weak lamb birth. For epidemiological investigation of the parasite, fourteen samples were collected from different sources on the property, six from water, three from soil, one from trough, and four from feed. Indirect immunofluorescence (IFI) analysis and polymerase chain reaction were performed for detecting anti-Toxoplasma gondii antibodies in the sheep and molecular identification of the protozoan in the environment, respectively. The IFI results showed that 95.3% of the sheep were seropositive for anti-T. gondii antibodies; however, the environmental samples tested negative. During the visit to the property and interview with the owner, free-roaming cats were observed on the property for biological control of rodents that had access to the food deposits. This type of management may have triggered the outbreak, which reinforces the importance of preventive management and veterinary medical monitoring on sheep farms.(AU)

Esse estudo teve como objetivo investigar um surto de aborto em um rebanho de ovinos de corte em uma propriedade de Ivaiporã, região norte central do Paraná, Brasil. Foram coletados 64 amostras de sangue dos ovinos, sendo, que destes, eram 33 matrizes com relato de abortamento ou natimortos, sete com nascimento de descendentes fracos. Para investigação ambiental do parasito, foram coletadas seis amostras de diferentes fontes de água da propriedade, duas de solo, duas de cocho e duas de ração. Realizou-sea imunofluorescência indireta (RIFI) para a detecção de anticorpos anti- Toxoplasma gondii e reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação molecular do protozoário no ambiente. Os resultados da RIFI demostraram que 95,3% (61/64) dos ovinos eram soropositivos ao T. gondii, contudo, as amostras ambientais foram negativas. Durante a visita à propriedade e entrevista com o proprietário, foi observado presença de gatos de forma livre na propriedade, inclusive com acesso ao depósito de ração para controle biológico de roedores, é possível que esse tipo de manejo tenha desencadeado o surto, o que reforça a importância do manejo preventivo e acompanhamento médico veterinário em propriedades de ovinocultura.(AU)

Epidemiology of canine visceral leishmaniasis in a vulnerable region in Brazil / Soroepidemiologia da leishmaniose visceral canina em uma região vulnerável do Brasil

Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected and endemic zoonosis that occurs throughout Brazil; nevertheless, few studies have focused on the early detection of the disease. The municipality of Ourinhos is a non-receptive, silent and vulnerable area for VL, where the seroprevalence of this disease has so far not been investigated. The present study aimed to determine the seroprevalence of canine VL in Ourinhos-SP, and to identify the presence of risk factors. Blood samples were obtained from 604 dogs during a rabies vaccination campaign together with application of a socioeconomic questionnaire, environmental and animal characteristics and tutor's knowledge about the disease. The samples were subjected to indirect ELISA and new samples were collected from reactive and suspect animals, including whole blood and lymph node aspiration evaluated by parasitological method, complete blood count and PCR. No animal was diagnosed as positive based on the combination of direct and indirect tests and the tutors' answers indicated little knowledge about leishmaniasis, being often confused with other diseases transmitted by arthropods; hence, according to the proposed methods, the presence of canine leishmaniasis in the city of Ourinhos was not confirmed and health education campaigns about the disease should be carried out.(AU)

A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose negligenciada e endêmica presente em todas as regiões do Brasil, mas mesmo assim poucos estudos têm objetivado a detecção inicial da doença. O município de Ourinhos - SP é uma área não receptiva, silenciosa e vulnerável à LV, não havendo até o momento estudos que tenham investigado a soroprevalência no município. Nesse sentido, o presente estudo objetivou determinar a soroprevalência da LV canina em Ourinhos-SP, bem como associar a presença de fatores de risco. Amostras sanguíneas de 604 cães foram obtidas juntamente com a aplicação de questionário socioeconômico, características ambientais e dos animais e conhecimento sobre a doença. As amostras foram submetidas à sorologia por ELISA e novas amostras coletadas de cães reagentes ou suspeitos foram analisadas por método parasitológico direto, hemograma e PCR. Nenhum animal foi considerado positivo na combinação de testes direto e indireto, e as respostas dos tutores indicaram pouco conhecimento sobre a leishmaniose, sendo muitas vezes confundida com outras doenças transmitidas por artrópodes. Dessa forma, de acordo com os métodos propostos, a presença de leishmaniose canina, na cidade de Ourinhos, não foi confirmada. Por isso campanhas de educação em saúde sobre a doença deveriam ser realizadas.(AU)

Epidemiology of canine visceral leishmaniasis in a vulnerable region in Brazil / Soroepidemiologia da leishmaniose visceral canina em uma região vulnerável do Brasil

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected and endemic zoonosis that occurs throughout Brazil; nevertheless, few studies have focused on the early detection of the disease. The municipality of Ourinhos is a non-receptive, silent and vulnerable area for VL, where the seroprevalence of this disease has so far not been investigated. The present study aimed to determine the seroprevalence of canine VL in Ourinhos-SP, and to identify the presence of risk factors. Blood samples were obtained from 604 dogs during a rabies vaccination campaign together with application of a socioeconomic questionnaire, environmental and animal characteristics and tutor's knowledge about the disease. The samples were subjected to indirect ELISA and new samples were collected from reactive and suspect animals, including whole blood and lymph node aspiration evaluated by parasitological method, complete blood count and PCR. No animal was diagnosed as positive based on the combination of direct and indirect tests and the tutors' answers indicated little knowledge about leishmaniasis, being often confused with other diseases transmitted by arthropods; hence, according to the proposed methods, the presence of canine leishmaniasis in the city of Ourinhos was not confirmed and health education campaigns about the disease should be carried out.

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose negligenciada e endêmica presente em todas as regiões do Brasil, mas mesmo assim poucos estudos têm objetivado a detecção inicial da doença. O município de Ourinhos - SP é uma área não receptiva, silenciosa e vulnerável à LV, não havendo até o momento estudos que tenham investigado a soroprevalência no município. Nesse sentido, o presente estudo objetivou determinar a soroprevalência da LV canina em Ourinhos-SP, bem como associar a presença de fatores de risco. Amostras sanguíneas de 604 cães foram obtidas juntamente com a aplicação de questionário socioeconômico, características ambientais e dos animais e conhecimento sobre a doença. As amostras foram submetidas à sorologia por ELISA e novas amostras coletadas de cães reagentes ou suspeitos foram analisadas por método parasitológico direto, hemograma e PCR. Nenhum animal foi considerado positivo na combinação de testes direto e indireto, e as respostas dos tutores indicaram pouco conhecimento sobre a leishmaniose, sendo muitas vezes confundida com outras doenças transmitidas por artrópodes. Dessa forma, de acordo com os métodos propostos, a presença de leishmaniose canina, na cidade de Ourinhos, não foi confirmada. Por isso campanhas de educação em saúde sobre a doença deveriam ser realizadas.

First molecular detection of Eimeria spp. in eared doves (Zenaida auriculata) from Brazil / Primeira detecção molecular de Eimeria spp. em pombos (Zenaida auriculata) do Brasil

The aim of the present study was to detect Eimeria spp. in eared doves (Zenaida auriculata) from Brazil. Two hundred and fourteen birds were trap-capture in different regions of Londrina city, Paraná state, Southern Brazil. Fecal samples were collected, and DNA extraction was performed. A nested PCR based on the subunit I of the cytochrome c oxidase gene of the Eimeria mitochondrial genome was used to detect the DNA presence of this coccidian in eared dove feces. From 214 birds, 171 (79.9%) were positive for Eimeria spp. There was significantly difference of positivity between the site of capture. When analyzing the genders, the numbers of positive males were 84/103 (81.5%) and females 87/111 (78.4%). To the best of the authors' knowledge, this is the first study with molecular prevalence of Eimeria sp. in Z. auriculata. Further studies should be done to identify the species of Eimeria that infect eared doves Z. auriculata.(AU)

O objetivo do presente estudo foi detectar Eimeria spp. em pombos (Zenaida auriculata) do Brasil. Duzentos e quatorze pombos foram capturados em diferentes regiões da cidade de Londrina, estado do Paraná, Sul do Brasil. Amostras fecais foram coletadas e realizada a extração de DNA. Uma nested-PCR baseada na subunidade I do gene oxidase do citocromo c oxidase do genoma mitocondrial de Eimeria spp. foi utilizada para detectar a presença de DNA deste coccídeo nas amostras fecais dos pombos. Das 214 aves, 171 (79,9%) foram positivas para Eimeria spp. Houve uma diferença significativa de positividade entre o local de captura. Quando analisado o gênero, o número de machos positivos foi 84/103 (81,5%) e fêmeas 87/111 (78,4%). Para o conhecimento, este é o primeiro estudo com prevalência molecular de Eimeria spp. em Z. auriculata. Novos estudos devem ser conduzidos para identificar as espécies de Eimeria que infectam pombos Z. auriculata.(AU)

Development of a qPCR to diagnose the genus Eimeria in bovines / Desenvolvimento de uma qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria em bovinos

Bovine coccidiosis is caused by protozoa of the genus Eimeria. These protozoa mainly affect young animals, causing a decrease in production and consequent economic losses. The routine diagnosis is made through morphological observation of the oocysts, which has several limitations. The objective of the present study was to develop a qPCR technique for the diagnose of Eimeria spp. in cattle. For this purpose, the 18S rRNA region of the DNA of these parasites was selected, since it is a region with low variability among the species. The qPCR was developed using the SYBR Green, resulting in a PCR with a high sensitivity, able to amplify samples containing only one oocyst of Eimeria spp. of bovines. The feasibility of using qPCR in the diagnosis of the Eimeria Genus is demonstrated in this study, once this technique shows to be less laborious and needs less skills for diagnostic training when compared to the technique conventionally used in theroutine (micromorphometry).

A coccidiose em bovinos é causada por protozoários do gênero Eimeria. Estes protozoários acometem principalmente animais jovens, causando diminuição de produção e consequente perdas econômicas. O diagnóstico de rotina é realizado através de observação morfológica dos oocistos, que possui várias limitações. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma técnica de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos. Para isto foi selecionada a região 18S rRNA do DNA destes parasitas, pois a mesma é uma região com pouca variabilidade entre as espécies. A qPCR foi desenvolvida com a utilização de SYBR Green, tendo como resultado uma PCR com uma alta sensibilidade, capaz de amplificar amostras contendo apenas um oocisto de Eimeria spp de bovinos. Demonstra-se nesse estudo a viabilidade na utilização da qPCR no diagnóstico do gênero Eimeria, sendo esta técnica menos laboriosa e com menos necessidade de treinamento para diagnóstico quando comparada com a técnica convencionalmente utilizada em rotina (micromorfometria).

Development of a qPCR to diagnose the genus Eimeria in bovines / Desenvolvimento de uma qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria em bovinos

Bovine coccidiosis is caused by protozoa of the genus Eimeria. These protozoa mainly affect young animals, causing a decrease in production and consequent economic losses. The routine diagnosis is made through morphological observation of the oocysts, which has several limitations. The objective of the present study was to develop a qPCR technique for the diagnose of Eimeria spp. in cattle. For this purpose, the 18S rRNA region of the DNA of these parasites was selected, since it is a region with low variability among the species. The qPCR was developed using the SYBR Green, resulting in a PCR with a high sensitivity, able to amplify samples containing only one oocyst of Eimeria spp. of bovines. The feasibility of using qPCR in the diagnosis of the Eimeria Genus is demonstrated in this study, once this technique shows to be less laborious and needs less skills for diagnostic training when compared to the technique conventionally used in theroutine (micromorphometry).(AU)

A coccidiose em bovinos é causada por protozoários do gênero Eimeria. Estes protozoários acometem principalmente animais jovens, causando diminuição de produção e consequente perdas econômicas. O diagnóstico de rotina é realizado através de observação morfológica dos oocistos, que possui várias limitações. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma técnica de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos. Para isto foi selecionada a região 18S rRNA do DNA destes parasitas, pois a mesma é uma região com pouca variabilidade entre as espécies. A qPCR foi desenvolvida com a utilização de SYBR Green, tendo como resultado uma PCR com uma alta sensibilidade, capaz de amplificar amostras contendo apenas um oocisto de Eimeria spp de bovinos. Demonstra-se nesse estudo a viabilidade na utilização da qPCR no diagnóstico do gênero Eimeria, sendo esta técnica menos laboriosa e com menos necessidade de treinamento para diagnóstico quando comparada com a técnica convencionalmente utilizada em rotina (micromorfometria).(AU)

First molecular detection of Haemoproteus spp. and Plasmodium spp. in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil / Primeira detecção molecular de Haemoproteus spp. e Plasmodium spp. em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil

The aim of this study was to verify the presence and identify the species of haemosporidian parasites in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil. Two hundred and eleven male and female eared doves were trap-captured in four different regions of Londrina city, in southern Brazil. Whole blood was collected in EDTA tubes through heart puncture after euthanasia in a CO2 chamber. A nested PCR targeting the mitochondrial cytochrome b gene (cyt b) of Haemoproteus spp./Plasmodium spp. was performed, followed by an enzymatic digestion to identify the genus. Phylogenetic trees were constructed to determine the closely related species. Out of 211 eared doves, 209 (99.05%) were positive for Haemoproteus spp. and/or Plasmodium spp. RFLP analysis showed that 72.72% (152/209) of eared doves were positive only for Haemoproteus spp., 6.22% (13/209) were positive only for Plasmodium spp., and 21.05% (44/209) of eared doves had mixed infections. Genetic analysis found four samples that were homologous with Haemoproteus multipigmentatus and one that was homologous with Plasmodium sp. This is the first molecular study of hemoparasites from eared doves in Brazil, and it is also the first description of H. multipigmentatus and Plasmodium spp. infection in eared doves in Brazil.(AU)

O objetivo deste estudo foi verificar a presença e a identificação espécies de parasitas hemosporídeos em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil. Duzentos e onze pombos machos e fêmeas foram capturados em quatro regiões diferentes de Londrina, sul do Brasil. Amostra de sangue foi coletada em tubos contendo EDTA por meio de punção cardíaca, após eutanásia em câmara de CO2. Uma nested PCR com alvo no gene mitocondrial citocromo b (cyt b) de Haemoproteus spp./Plasmodium spp. foi realizada, seguida de digestão enzimática para identificar o gênero. A árvore filogenética foi construída para determinar a relação com outras espécies. Das 211 pombas, 209 (99,05%) foram positivas para Haemoproteus spp./Plasmodium spp. A análise RFLP demonstrou que 72,72% (152/209) das pombas foram positivas somente para Haemoproteus spp.; 6,22% (13/209) foram positivas somente para Plasmodium e 21,05% (44/209) das pombas tiveram infecções mistas. A análise genética mostrou quatro amostras homólogas com H. multipigmentatus e uma com Plasmodium spp. Este é o primeiro estudo molecular de hemoparasitas em pombos no Brasil. E é também a primeira descrição da infecção por H. multipigmentatus e Plasmodium spp. em pombos Z. auriculata no Brasil.(AU)

Protection against Toxoplasma gondii cysts in pigs immunized with rROP2 plus Iscomatrix / Proteção contra cistos de Toxoplasma gondii em suínos imunizados com rROP2 associado à Iscomatrix

This study aimed to evaluate the humoral immune response in pigs immunized intranasally and intramuscularly with recombinant Toxoplasma gondii rROP2 protein in combination with the adjuvant Iscomatrix. Twelve mixed breed pigs divided into three groups (n=4) were used, G1 received recombinant ROP2 proteins (200 µg/dose) plus Iscomatrix, G2 received PBS plus Iscomatrix, and G3 as the control group. The intranasal (IN) and intramuscular (IM) routes were used. Animals were challenged orally with VEG strain oocysts and treated on day three after challenge. Fever, anorexia, and prostration were the clinical signs observed in all animals. All the G1 animals produced antibodies above the cut-off on the day of the challenge, while the G2 and G3 remained below the cut-off. Better partial protection against parasitemia and cyst tissue formation was observed in G1 than G3. The protection factors against tissue cyst formation were 40.0% and 6.1% for G1 and G2, respectively, compared to G3. In conclusion, there were not systemic antibody responses in pigs with IN immunization with rROP2+Iscomatrix; however, after IM immunization, those animals produced higher titers than animal controls. We associated these results with partial protection obtained against parasitemia and tissue cysts formation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune humoral em suínos imunizados pelas vias intranasal e intramuscular com proteínas recombinantes rROP2 do Toxoplasma gondii associadas ao adjuvante Iscomatrix. Doze suínos cruzados divididos em 3 grupos (n=4) foram utilizados. O G1 recebeu proteína recombinante ROP2 (200mg/dose) associada ao adjuvante Iscomatrix; o G2 recebeu PBS associado ao Iscomatrix; e o G3 foi o grupo controle. As vias intranasal (IN) e intramuscular (IM) foram utilizadas. Os animais foram desafiados por via oral com a cepa VEG e tratados no dia três após o desafio. Febre, anorexia e prostração foram os sinais clínicos observados em todos os animais. Todos os animais do G1 produziram anticorpos acima do ponto de corte no dia do desafio, enquanto os animais do G2 e G3 permaneceram abaixo do ponto de corte no desafio. Proteção parcial contra parasitemia e formação de cistos teciduais foram observadas nos suínos do G1 comparados ao G3. Os fatores de proteção contra a formação de cistos teciduais foram 40,0% e 6,1% no G1 e G2, respectivamente, comparados com o G3. Como conclusão, não houve estimulação da resposta imune humoral sistêmica nos suínos após as imunizações IN com rROP2+Iscomatrix. Estes animais, porém, após a imunização IM, produziram títulos de anticorpos mais altos que os animais controles. Esses resultados foram associados a uma proteção parcial contra a parasitemia e formação de cistos teciduais.(AU)

Neospora caninum in free-range chickens (Gallus gallus domesticus) from southern Brazil / Neospora caninum em galinhas de vida livre (Gallus gallus domesticus) do sul do Brasil

Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that can infect many domestic and wild animals, including birds. These animals are important sources for monitoring of environmental contamination, as they could become infected through sporulated oocysts; however, the real role of birds in the biological cycle of N. caninum remains uncertain. This study aimed to determine the prevalence of anti-N. caninum antibodies, evaluate associated factors, detect the parasite by molecular testing of free-range chickens from Brazil, and evaluate different techniques for its serological diagnosis. Blood samples of 366 chickens from 25 farms were collected for serological assays. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to detect anti-N. caninum antibodies. Chickens that tested seropositive by IFAT had their brain tissues and a pool of organs (heart, lung, and liver) submitted to PCR for molecular detection of the parasite. Out of 366 chickens, 65 (17.8%) and 163 (44.6%) were seropositive by IFAT and ELISA, respectively. Brain tissues (n=60) and the pools of organs (n=65) were negative in the PCR. Our results showed a high prevalence of antibodies in free-range chickens and that IFAT is the more sensitive technique for the detection of anti-N. caninum antibodies.(AU)

Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar vários animais domésticos e silvestres, incluindo as aves. Esses animais são importantes fontes para o monitoramento da contaminação ambiental, uma vez que eles podem se infectar por meio da ingestão de oocistos. Porém, o real papel das aves no ciclo biológico do N. caninum ainda é incerto. Este estudo teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum, avaliar fatores associados, detectar o parasita por meio de teste molecular em galinhas de vida livre do Brasil e avaliar diferentes técnicas para o diagnóstico sorológico. Amostras de sangue de 366 galinhas de 25 fazendas foram coletadas para testes sorológicos. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foram utilizados para detectar anticorpos anti-N. caninum. As amostras de tecidos (cérebro, coração, pulmão e fígado) de galinhas soropositivas na RIFI foram coletadas e submetidas à PCR para detecção molecular do parasita. Das 366 galinhas, 65 (17,8%) e 163 (44,6%) foram soropositivas pela RIFI e ELISA, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Esses resultados demonstram uma elevada prevalência de anticorpos em galinhas de vida livre e que a RIFI é uma técnica mais sensível para a detecção de anticorpos anti-N. caninum.(AU)

Neospora caninum and Toxoplasma gondii: seroprevalence and associated factors in cows from milk farms of Toledo, Parana, Brazil / Neospora caninum e Toxoplasma gondii: soroprevalência e fatores associados em vacas leiteiras de Toledo, Paraná, Brasil

Neospora caninum and Toxoplasma gondii are important protozoa in cattle production. Neosporosis is responsible for reproductive failures in cattle, constituting one of the main causes of abortion and leading to significant economic losses in dairy farming. Toxoplasmosis is a cosmopolitan disease of great importance in the context of public health and animal production. Considering the lack of available data on the subject for the studied region, the objective of the present study was to detect the seroprevalence of antibodies against N. caninum and T. gondii in dairy cows in the municipality of Toledo, Western Paraná, Brazil and to assess how to detect factors associated with risk or protection. Serology was performed with serum samples from 390 dairy cows from 58 farms by indirect immunofluorescence (IFI) reaction using cutoff point 100 for N. caninum and 64 for T. gondii. The analysis of associations between seropositivity and the variables detected in the properties was also performed. The seroprevalence for Neospora caninum was 15.4% (60/390; CI 95% 12.4-19.3) and for Toxoplasma gondii was 38.7% (151/390; CI 95% 34.0-43.6). The prevalence of co-infection was 8.72% (34/390; CI 95% 6.31-11.94). For N. caninum, the presence of abortion was observed as a risk factor (OR= 5.32). With T. gondii, the presence of abortion was found to be a risk factor (OR= 2.09) and properties with 10 or more lactating animals was found to be a protection factor (OR= 0.56). Abortion was also detected as a factor associated with the risk of co-infection (OR= 11.80). Through serological diagnosis, the present study showed that protozoa are widely distributed among dairy cattle in the region, and control and prophylaxis measures should be adopted in the studied animal population. Because abortion is a risk associated with N. caninum, T. gondii, and the two agents surveyed (co-infection), all reproductive disorders detected in cattle should include neosporosis and toxoplasmosis as a differential diagnosis.(AU)

Neospora caninum e Toxoplasma gondii são protozoários importantes na cadeia produtiva dos bovinos. A neosporose é responsável por falhas reprodutivas nesta espécie, constituindo uma das principais causas de abortamento, levando a significativas perdas econômicas na pecuária leiteira. A toxoplasmose é uma doença cosmopolita, com grande importância no contexto de saúde pública e produção animal. Considerando a escassez de dados disponíveis sobre o tema para a região estudada, o objetivo do presente estudo foi detectar a soroprevalência de anticorpos contra N. caninum e T. gondii em fêmeas de bovinos leiteiros no município de Toledo, Oeste do Paraná, Brasil, bem como detectar os fatores associados ao risco ou proteção. A sorologia foi realizada com amostras de soro de 390 fêmeas bovinas leiteiras provenientes de 58 propriedades rurais, pela reação de Imunofluorescência Indireta (IFI) utilizando ponto de corte 100 para o N. caninum e 64 para o T. gondii. Também foi procedida as análises das associações entre a soropositividade e as variáveis detectadas nas propriedades. A soroprevalência encontrada para o Neospora caninum foi de 15,4% (60/390; IC 95% 12,4-19,3) e para o Toxoplasma gondii foi de 38,7% (151/390; IC 95% 34,0-43,6), sendo que a co-infecção detectada foi de 8,72% (34/390; IC 95% 6,31-11,94). Para o N. caninum foi observado como fator associado ao risco a presença de aborto (OR= 5,32). Já para o T. gondii, como fatores associados ao risco, foi encontrado a presença de aborto (OR= 2,09) e como fator associado à proteção, foi detectado propriedades com 10 ou mais animais em lactação (OR= 0,56). O aborto foi também detectado como um fator associado ao risco da co-infecção (OR= 11,80). Através do diagnóstico sorológico o presente estudo evidenciou que os protozoários estão amplamente distribuídos entre os bovinos leiteiros da região e medidas de controle e profilaxia devem ser adotadas na população animal estudada. Devido ao aborto ser uma associação de risco para o N. caninum, para o T. gondii e para os dois agentes pesquisados (co-infecção), todas as desordens reprodutivas detectadas em bovinos devem incluir a neosporose e a toxoplasmose como diagnóstico diferencial.(AU)

Diurnal variations in canine hematological parameters after commercial feed feeding / Variações diurnas nos parâmetros hematológicos caninos após alimentação com ração comercial

Complete blood count (CBC) is the evaluation of blood cells, which provides resourceful information.Considering that inadequate fasting time is the most common pre-analytical error in laboratory diagnosisand is associated with lipemia in blood samples, which has not yet been adequately investigated in dogs,this study aimed to assess diurnal postprandial changes in the CBC of healthy dogs fed with industrializedfeed. Eighteen clinically healthy dogs aged 2-6 years and weighing over 6 kg were enrolled in the study.All dogs received “Premium” industrialized feed every 12 hours. Blood was collected after a 12-hourfasting period at 6:00 am (baseline), followed by feeding and new blood samples collected hourly forthe next 11 consecutive hours. Red blood cell (RBC) counts, red cell distribution width (RDW), whiteblood cell (WBC) counts, platelets, mean platelet volume (MPV) and hemoglobin were obtained usingan automated veterinary cell counter. Hematocrit (HTC) was determined by Strumia’s microcapillarymethod, differential leukocyte count was performed on hematological dye-stained blood smears and total plasma protein (TPP) was determined using refractometry. Variables were tested for normality anddifferences were considered significant when p < 0.05. A statistically significant decrease was observedin the erythrogram from 2 h for RBC and hemoglobin, from 3 h for HTC and from 4 h for MCV, persistinguntil the end of 11 hours. There was no change in MCHC and RDW. Regarding the leukogram, asignificant increase in WBC was observed from 2 to 7 h, due to the increase in segmented neutrophils 2to 8 h following feeding. Lymphocyte counts decreased significantly at 2 and 6 h following feeding. Noalteration was observed in eosinophil, basophil, monocyte and platelet counts, as well as in MPV. From5 h to 11 h after feeding, a significant decrease was seen on TPP. However, changes in hematological [...].

O hemograma é a avaliação das células do sangue e fornece grande diversidade de informações.Considerando que o tempo inadequado de jejum é o erro pré-analítico mais comum no diagnósticolaboratorial por causar lipemia nas amostras sanguíneas e tal interferência ainda não foi adequadamenteinvestigada no hemograma de cães, esse trabalho teve como objetivo analisar as alterações pós-prandiaisdiurnas no hemograma de cães saudáveis alimentados com ração comercial. Foram selecionados 18cães clinicamente saudáveis, entre 2 e 6 anos, pesando mais de 6 kg e que recebiam como alimentaçãoração comercial tipo “Premium” a cada 12 horas. O sangue dos animais foi colhido após jejum de12 horas às 6:00 da manhã (amostra basal), foi fornecida ração comercial e novas amostras foramcolhidas nas 11 horas consecutivas. As contagens de hemácias, amplitude de distribuição eritrocitária(RDW), leucócitos totais, plaquetas, volume plaquetário médio (VPM) e hemoglobina foram realizadasem contador automatizado de células veterinário. O volume globular (VG) foi determinado pelo métododo microcapilar de Strumia, a contagem diferencial de leucócitos foi realizada em esfregaço sanguíneocorado com corante hematológico e a proteína plasmática total (PPT) foi determinada por refratometria.As variáveis foram testadas quanto à normalidade e as diferenças foram consideradas significativasquando p < 0,05. Em relação ao eritrograma, houve redução estatisticamente significativa a partir de 2 hpara hemácias e hemoglobina, a partir de 3 h para o VG e a partir de 4 h para o VCM, persistindo até ofinal das 11 horas. Não houve alteração do CHCM e do RDW. Em relação ao leucograma, foi observadoaumento significativo de leucócitos totais de 2 a 7 h, decorrente do aumento de neutrófilos segmentados,o que foi constatado 2 a 8 h após a [...].

Occurrence of gastrointestinal protozoans in cats from Londrina, Paraná, Brazil / Ocorrência de protozoários gastrointestinais em gatos de Londrina, Paraná, Brasil

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.

Os protozoários são amplamente distribuídos, e várias espécies podem parasitar o trato digestivo de gatos (Felis catus) e podem ser transmitidas para humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as espécies e a ocorrência de protozoários gastrintestinais em gatos na cidade de Londrina, Paraná, Brasil. Um total de 206 amostras de fezes de gato foram testadas, das quais 141 eram de animais de abrigo, e 65 eram de animais de propriedade da população local. As amostras foram processadas por técnicas parasitológicas. Willis e esfregaços fecais foram confeccionados e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Posteriormente, todas as amostras foram processadas por protocolos de PCR específicos para Toxoplasma gondii, Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os produtos de PCR de amostras positivas foram selecionados para sequenciamento. Nenhuma amostra foi considerada positiva para Cryptosporidium spp. usando a técnica de Ziehl-Neelsen. Utilizando protocolos específicos de PCR, 1/206 (0,48%) amostras apresentaram resultados positivos para Cryptosporidium spp. Após a purificação, essa amostra positiva foi sequenciada e demonstrou 100% de equivalência de identidade com Cryptosporidium muris. Utilizando protocolos específicos de PCR, 13/206 (9,22%) amostras fecais de gatos testadas, incluindo 2/65 (3,08%) amostras fecais de gatos de estimação, foram positivas para T. gondii. A análise de PCR revelou que 37/206 (17,96%) das amostras de fezes de gatos foram positivas para Giardia spp., Incluindo 27/141 (19,15%) de amostras fecais de gatos de abrigo, e 10/65 (15,38%) amostras fecais de gatos de estimação (p = 0,5124). Quando sequenciadas, essas amostras positivas apresentaram 100% de equivalência de identidade com Giardia duodenalis. Este estudo demonstrou que as infecções por Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Giardia duodenalis estão presentes na população de gatos de estimação e gatos de abrigo na...

Diurnal variations in canine hematological parameters after commercial feed feeding / Variações diurnas nos parâmetros hematológicos caninos após alimentação com ração comercial

Complete blood count (CBC) is the evaluation of blood cells, which provides resourceful information.Considering that inadequate fasting time is the most common pre-analytical error in laboratory diagnosisand is associated with lipemia in blood samples, which has not yet been adequately investigated in dogs,this study aimed to assess diurnal postprandial changes in the CBC of healthy dogs fed with industrializedfeed. Eighteen clinically healthy dogs aged 2-6 years and weighing over 6 kg were enrolled in the study.All dogs received “Premium” industrialized feed every 12 hours. Blood was collected after a 12-hourfasting period at 6:00 am (baseline), followed by feeding and new blood samples collected hourly forthe next 11 consecutive hours. Red blood cell (RBC) counts, red cell distribution width (RDW), whiteblood cell (WBC) counts, platelets, mean platelet volume (MPV) and hemoglobin were obtained usingan automated veterinary cell counter. Hematocrit (HTC) was determined by Strumias microcapillarymethod, differential leukocyte count was performed on hematological dye-stained blood smears and total plasma protein (TPP) was determined using refractometry. Variables were tested for normality anddifferences were considered significant when p < 0.05. A statistically significant decrease was observedin the erythrogram from 2 h for RBC and hemoglobin, from 3 h for HTC and from 4 h for MCV, persistinguntil the end of 11 hours. There was no change in MCHC and RDW. Regarding the leukogram, asignificant increase in WBC was observed from 2 to 7 h, due to the increase in segmented neutrophils 2to 8 h following feeding. Lymphocyte counts decreased significantly at 2 and 6 h following feeding. Noalteration was observed in eosinophil, basophil, monocyte and platelet counts, as well as in MPV. From5 h to 11 h after feeding, a significant decrease was seen on TPP. However, changes in hematological [...].(AU)

O hemograma é a avaliação das células do sangue e fornece grande diversidade de informações.Considerando que o tempo inadequado de jejum é o erro pré-analítico mais comum no diagnósticolaboratorial por causar lipemia nas amostras sanguíneas e tal interferência ainda não foi adequadamenteinvestigada no hemograma de cães, esse trabalho teve como objetivo analisar as alterações pós-prandiaisdiurnas no hemograma de cães saudáveis alimentados com ração comercial. Foram selecionados 18cães clinicamente saudáveis, entre 2 e 6 anos, pesando mais de 6 kg e que recebiam como alimentaçãoração comercial tipo “Premium” a cada 12 horas. O sangue dos animais foi colhido após jejum de12 horas às 6:00 da manhã (amostra basal), foi fornecida ração comercial e novas amostras foramcolhidas nas 11 horas consecutivas. As contagens de hemácias, amplitude de distribuição eritrocitária(RDW), leucócitos totais, plaquetas, volume plaquetário médio (VPM) e hemoglobina foram realizadasem contador automatizado de células veterinário. O volume globular (VG) foi determinado pelo métododo microcapilar de Strumia, a contagem diferencial de leucócitos foi realizada em esfregaço sanguíneocorado com corante hematológico e a proteína plasmática total (PPT) foi determinada por refratometria.As variáveis foram testadas quanto à normalidade e as diferenças foram consideradas significativasquando p < 0,05. Em relação ao eritrograma, houve redução estatisticamente significativa a partir de 2 hpara hemácias e hemoglobina, a partir de 3 h para o VG e a partir de 4 h para o VCM, persistindo até ofinal das 11 horas. Não houve alteração do CHCM e do RDW. Em relação ao leucograma, foi observadoaumento significativo de leucócitos totais de 2 a 7 h, decorrente do aumento de neutrófilos segmentados,o que foi constatado 2 a 8 h após a [...].(AU)

Occurrence of gastrointestinal protozoans in cats from Londrina, Paraná, Brazil / Ocorrência de protozoários gastrointestinais em gatos de Londrina, Paraná, Brasil

Protozoans are widely distributed, and several species may parasitize the digestive tracts of cats (Felis catus), and can be transmitted to humans. The present study aimed to evaluate the species and occurrence of gastrointestinal protozoans in cats in the city of Londrina, Paraná, Brazil. A total of 206 cat fecal samples were tested, of which 141 were from shelter animals, and 65 were from pets owned by local people. Samples were processed by parasitological techniques. Coproparasitological techniques (Willis, Faust and Ziehl-Neelsen) were performed for detection of protozoan parasites. Subsequently, all samples were processed by PCR protocols specific to Toxoplasma gondii, Giardia spp., and Cryptosporidium spp. PCR products from positive samples were selected for sequencing. No samples were found to be positive for Cryptosporidium spp. using the Ziehl-Neelsen technique. Using specific PCR protocols, 1/206 (0.48%) samples tested positive for Cryptosporidium spp. After purification, this one positive sample was sequenced, and it demonstrated a 100% identity match to Cryptosporidium muris. Using specific PCR protocols, 13/206 (9.22%) cat fecal samples tested, including 2/65 (3.08%) pet cat fecal samples, were positive for T. gondii. PCR analysis revealed that 37/206 (17.96%) of cat fecal samples were positive for Giardia spp., including 27/141 (19.15%) of shelter cat fecal samples, and 10/65 (15.38%) pet cat fecal samples (p = 0.5124). When sequenced, these positive samples showed a 100% identity match with Giardia duodenalis. This study demonstrated that infections with Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii, and Giardia duodenalis are present in the population of both pet cats and shelter cats in the city of Londrina. This poses a risk to public health, because these parasites have a high zoonotic potential.(AU)

Os protozoários são amplamente distribuídos, e várias espécies podem parasitar o trato digestivo de gatos (Felis catus) e podem ser transmitidas para humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as espécies e a ocorrência de protozoários gastrintestinais em gatos na cidade de Londrina, Paraná, Brasil. Um total de 206 amostras de fezes de gato foram testadas, das quais 141 eram de animais de abrigo, e 65 eram de animais de propriedade da população local. As amostras foram processadas por técnicas parasitológicas. Willis e esfregaços fecais foram confeccionados e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. Posteriormente, todas as amostras foram processadas por protocolos de PCR específicos para Toxoplasma gondii, Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os produtos de PCR de amostras positivas foram selecionados para sequenciamento. Nenhuma amostra foi considerada positiva para Cryptosporidium spp. usando a técnica de Ziehl-Neelsen. Utilizando protocolos específicos de PCR, 1/206 (0,48%) amostras apresentaram resultados positivos para Cryptosporidium spp. Após a purificação, essa amostra positiva foi sequenciada e demonstrou 100% de equivalência de identidade com Cryptosporidium muris. Utilizando protocolos específicos de PCR, 13/206 (9,22%) amostras fecais de gatos testadas, incluindo 2/65 (3,08%) amostras fecais de gatos de estimação, foram positivas para T. gondii. A análise de PCR revelou que 37/206 (17,96%) das amostras de fezes de gatos foram positivas para Giardia spp., Incluindo 27/141 (19,15%) de amostras fecais de gatos de abrigo, e 10/65 (15,38%) amostras fecais de gatos de estimação (p = 0,5124). Quando sequenciadas, essas amostras positivas apresentaram 100% de equivalência de identidade com Giardia duodenalis. Este estudo demonstrou que as infecções por Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Giardia duodenalis estão presentes na população de gatos de estimação e gatos de abrigo na...(AU)

Neospora caninum: seroepidemiology of cows and dogs from milk farms of Cunha, São Paulo, Brazil / Neospora caninum: soroepidemiologia de vacas e cães de propriedades leiteiras de Cunha, São Paulo, Brasil

Neosporosis, a parasitic disease prevalent worldwide, is caused by the protozoan Neospora caninum, an obligatory intracellular parasite that can cause abortions and infertility in females, resulting in high economic losses. The aim of this study was to determine the seroprevalence of antibodies against N. caninum in dairy cattle, and the occurrence of antibodies in dogs from farms in the municipality of Cunha, São Paulo, Brazil. Additionally, eighteen months after the primary study, an analysis to determine the incidence, seroconversion, and occurrence of anti-N. caninum antibodies was conducted in cows. Sampling was carried out in two phases: during the first one, 400 dairy cattle and 50 dog blood samples from 40 farms were collected. During the second phase, blood samples were collected from 119 cows belonging to 16 farms visited 18 months before. Serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence (IFI) with titers ≥ 100 for cattle and ≥ 50 for dogs considered as positives. The occurrence of antibodies against N. caninum was 15.0% (60/400) and 14.0% (7/50) for cattle and dogs, respectively. After 18 months, the observed incidence of antibodies was 7.4% (4/54), the conversion detected was 71.4% (seropositive to seronegative) and 7.4% (seronegative to seropositive animals), and the observed occurrence was 7.56% (9/119). The calculated odds ratio (OR) was significant (p < 0.05) for abortions, presence of dogs, and parturition stalls. However, protection factors were identified in 2- to 4-year-old dairy cattle and in the number of lactating cows ≤ 10 animals. Thus, the presence of antibodies against N. caninum in the studied suggested both vertical and horizontal transmission are occurring in cattle.

A neosporose é uma doença parasitária de distribuição mundial, cujo agente etiológico é o protozoário intracelular obrigatório Neospora caninum, o qual pode causar abortamentos e infertilidade em fêmeas, promovendo elevados prejuízos econômicos. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de anticorpos contra N. caninum em bovinos de leite e a ocorrência de anticorpos em cães destas propriedades do município de Cunha, São Paulo, Brasil. Como segunda etapa, 18 meses após o primeiro estudo, foi conduzido outro estudo em vacas para determinar da incidência, soroconversão e ocorrência de anti-N. caninum. As colheitas foram realizadas em duas fases. Na primeira, participaram do estudo 400 bovinos de leite e 50 cães pertencentes a 40 propriedades rurais. Na segunda fase, foram efetuadas novas colheitas em 119 vacas de 16 propriedades já anteriormente visitadas na fase 1. Amostras de soro foram analisadas por imunofluorescência indireta (IFI) com títulos ≥100 para bovinos e ≥50 para cães foram considerados positivos. A ocorrência de anticorpos contra N. caninum foi de 15,0% (60/400) e 14,0% (7/50) para bovinos e cães respectivamente. Após 18 meses a incidência de anticorpos observada foi de 7,4% (4/54), a conversão detectada foi de 71,4% (animais soropositivos para soronegativos) e 7,4% (animais soronegativos para soropositivos) e a ocorrência observada foi de 7,56% (9/119). O “odds ratio” (OR) calculado revelou significância estatística (p < 0,05) para os seguintes fatores; abortamentos, propriedades com cães, e piquetes de parição. No entanto, fatores associados a proteção da positividade foram identificados entre; vacas entre 2 a 4 anos de idade, e o número de vacas em lactação ≤10 animais. Neste trabalho foi revelada a presença do N. caninum circulando na região estudada, sugerindo o papel de fêmeas bovinas e cães como transmissores do agente etiológico...