In vitro sperm characteristics and in vivo fertility of sex-sorted and conventional semen in suckled Nelore cows at a traditional schedule for timed-AI with estrus detection / Características espermáticas in vitro e fertilidade in vivo de sêmen convencional e sexado em vacas Nelore pósparto submetidas à IATF tradicional com detecção de estro

The aim of this study was to assess in vitro sperm characteristics and pregnancies/AI (P/AI) of conventional and sex-sorted semen at timed-AI of suckled, multiparous Nelore cows. All cows (n=348) were submitted to a traditional estradiol/progesterone (P4)-based protocol. At 48h after P4-device removal, the estrous behavior was recorded, and AI was performed with conventional or sex-sorted semen from two bulls. The following sperm assessments were performed: CASA, Hyposmotic Test, sperm morphometry and chromatin structure by TB staining. P/AI were reduced (P<0.001) for sex-sorted compared to conventional semen in cows expressing estrus (27vs47%) or not (11vs.37%). Membrane integrity (Bull1: 30.3±9.6 vs. 52.3±12.4%, P=0.01; Bull2: 24.5±3.0 vs. 48.7±1.6%, P=0.006) and sperm concentration (Bulll: 23.2±0.6 vs. 43.0±0.8x10 sperm/mL, P<0.001; Bull2: 25.1+2.8 VS. 42.1±0.7x10 sperm/mL; P<0.001) were reduced in sex-sorted compared to conventional semen, for both bulls. Total and progressive motility were reduced in sex-sorted semen for Bull1 (TM: 49.7±15.9 vs. 94.9±1.9%, P=0.007; PM: 16.7±3.4 vs. 44.1±13.2%, P=0.009) and no differences were detected for Bull2 (TM: 45.0±17.5 vs. 68.2±19.1%, P=0.098; PM: 12.8±4.7 vs. 30.0±13.0%, P=0.065). Sperm ellipticity from sex-sorted was lower than conventional semen for Bull2 (0.306±0.01 vs. 0.342±0.02, P=0.02) and no difference was detected for Bull1 (0.332±0.01 vs. 0.330±0.01, P=0.55). Reduced in vivo fertility was observed for sex-sorted semen, regardless of estrous behavior. In vitro sperm quality of sex-sorted semen was compromised for both bulls, but differently affected for each sire.

O estudo teve como objetivo avaliar características espermáticas in vitro e a taxa de concepção (TC) de sêmen convencional e sexado em um programa de IATF tradicional de vacas Nelore pós-parto. Todas as vacas (n=348) foram submetidas ao mesmo protocolo de IATF à base de estradiol e de progesterona. Após 48 horas da retirada do implante, foi determinada a expressão de estro dos animais e a IA foi realizada com sêmen convencional e sexado de dois touros Angus. As seguintes características espermáticas foram avaliadas: análise computadorizada do sêmen, teste hiposmótico, morfometria espermática e estrutura cromatinica por meio da coloração com azul de toluidina. A TC foi menor (P<0,001) para sêmen sexado comparado ao convencional, em vacas que expressaram estro (27 vs. 47%) e que não apresentaram estro (11 vs. 37%). A integridade da membrana plasmática (Touro 1: 30,319,6 vs. 52,3+12,4%, P=0,010; Touro 2: 24,5+3,0 vs. 48,7±1,6%, P=0,006) e a concentração espermática (Touro 1: 23,2±0,6 vs. 43,0±0,8x10 sperm/mL, P<0,001; Touro 2: 25,1+2,8 vs. 42,1 +0,7x10'sperm/mL, P<0,001) foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional, para ambos os touros. Motilidades total e progressiva foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional para o Touro 1 (MT: 49,7±15,9 vs. 94,9±1,9%, P=0,007; MP: 16,7+3,4 vs. 44,1+13,2%, P=0,009), enquanto diferenças não foram detectadas no Touro 2 (MT: 45,0±17,5 vs. 68,2±19,1%, P=0,098; MP: 12,8±4,7 vs. 30,0±13,0%, P=0,065). Elipticidade espermática do sêmen sexado foi menor do que do sêmen convencional no Touro 2 (0,306±0,01 vs. 0,342±0,02, P=0,020), mas não houve diferença no Touro 1 (0,332±0,01 vs. 0,330±0,01, P=0,552). Reduzida fertilidade in vivo foi observada para o sêmen sexado em relação ao convencional, independentemente da expressão de cio das vacas. A qualidade seminal in vitro do sêmen sexado foi comprometida para ambos os touros, mas diferentemente afetada para cada reprodutor.

Morphometry of bovine blastocysts produced in vitro in culture media with antioxidants cysteamine or oily extract of Lippia origanoides / [Morfometria de blastocistos bovinos produzidos in vitro em meio de cultura com antioxidantes cisteamina ou extrato oleoso de Lippia origanoides]

This study aimed to evaluate the ultrastructural morphometry of bovine embryos produced in vitro grown at different concentrations of antioxidants. After in vitro maturation and fertilization, the presumptive zygotes were assigned into five treatments. T1) without the addition of any antioxidants (negative control); T2) addition of 50µM/mL cysteamine; and T3, T4 and T5) adding 2.5µg/mL, 5.0µg/mL or 10.0µg/mL of the antioxidants derived from the oily extract from Lippia origanoides, respectively. On D7 of culture, the embryos in the blastocyst stage were fixed and prepared for electron transmission microscopy. These were evaluated for the proportion of cytoplasm-to-nucleus, cytoplasm-to-mitochondria, cytoplasm-to-vacuoles, cytoplasm-to-autophagic vacuoles and cytoplasm-to-lipid droplets. Blastocysts cultured in media containing oily extract of Lippia origanoides presented morphological characteristics such as high cell:mitochondria ratio and low cell:vacuoles and cell:autophagic vacuole ratio, possibly been morphological indicators of embryonic quality. Inner cell mass (ICM) from blastocysts cultured in media without any antioxidants had the highest cell:vacuole ratio. Similar results were found in the trophectoderm (TE) cells of blastocysts from treatment 2. Embryo culture media supplemented with antioxidants derived from Lippia origanoides oil produced embryos with a higher cytoplasmic proportion of organelles, such as mitochondria. Also, treatments without any antioxidants or with the addition of cysteamine presented cytoplasmic vacuolization, a characteristic related to production of poor-quality embryos.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a morfometria ultraestrutural de embriões bovinos produzidos in vitro e cultivados em diferentes concentrações de antioxidantes. Após a maturação e a fertilização in vitro, os possíveis zigotos foram divididos em cinco tratamentos: T1) sem adição de antioxidantes (controle negativo); T2) adição de 50µM/mL de cisteamina; e T3, T4 e T5) adição de 2,5µg/mL, 5,0µg/mL ou 10,0µg/mL dos antioxidantes derivados do extrato oleoso de Lippia origanoides, respectivamente. No D7 de cultivo, os embriões em estágio de blastocisto foram fixados e preparados para microscopia eletrônica de transmissão. Estes foram avaliados para a proporção entre citoplasma e núcleo, citoplasma e mitocôndria, citoplasma e vacúolos, citoplasma e vacúolos autofágicos e citoplasma e gotículas lipídicas. Blastocistos cultivados em meio contendo extrato oleoso de Lippia origanoides apresentaram características morfológicas como alta relação célula:mitocôndria e baixa relação célula:vacúolos e célula:vacúolo autofágico, possíveis indicadores morfológicos de qualidade embrionária. A massa celular interna (MCI) de blastocistos cultivados em meio sem quaisquer antioxidantes teve a maior razão célula:vacúolo. Resultados semelhantes foram encontrados nas células do trofectoderma (TE) de blastocistos do tratamento 2. Portanto, o meio de cultivo embrionário suplementado com antioxidantes derivados do óleo de Lippia origanoides produziu embriões com maior proporção citoplasmática de organelas, como mitocôndrias. Além disso, tratamentos sem antioxidantes ou com adição de cisteamina apresentaram vacuolização citoplasmática, característica relacionada à produção de embriões de baixa qualidade.(AU)

Ultrastructure of bovine placenta during all gestational period / Ultraestrutura de placenta bovina durante todo o período gestacional

Placentas from pregnant cows with different gestation periods were used. Placental fragments of all groups were processed and evaluated by transmission electron microscopy. After fragment analysis, bovine placenta was observed to be epitheliochorial type in early pregnancy, becoming progressively sinepiteliocorial at the beginning of the second trimester. There are no ultrastructural evidences of inflammation in the region of caruncles throughout gestation, despite the invasion of caruncle proper lamina by trophoblast cells. However, throughout pregnancy and especially at the end, there were evident signs of cell degeneration in both trophoblast and the uterine epithelium. The active trophoblast cells intensely phagocytize cellular debris. There are complex interdigitations between the surface of the trophoblast and the uterine epithelium, which is related to the increase of the exchange surface between mother and fetus. At the end of pregnancy, interdigitations disappear, favoring the detachment and expulsion of the placenta after birth.(AU)

Foram utilizadas placentas de vacas abatidas em frigorífico com diversos tempos gestacionais. Fragmentos de placentomo de todos os grupos foram processados e avaliados em microscopia eletrônica de transmissão. Após análise dos fragmentos, observou-se que a placenta bovina é do tipo epiteliocorial no início da gestação, tornando-se sinepiteliocorial progressivamente a partir do início do segundo mês de gestação. Não existem evidências ultraestruturais de inflamação na região das carúnculas durante toda a gestação, apesar da invasão da lâmina própria caruncular por células trofoblásticas. No entanto, durante toda a gestação e em especial ao seu final, foram observados sinais evidentes de degeneração celular, tanto do trofoblasto como do epitélio uterino. As células trofoblásticas ativas fagocitam intensamente os debris celulares originados dessas degenerações. Existem complexas interdigitações entre a superfície do trofoblasto e do epitélio uterino, o que estaria relacionado com o aumento da superfície de troca entre mãe e feto. Ao final da gestação, praticamente desaparecem essas interdigitações, favorecendo o descolamento e a expulsão da placenta após o parto.(AU)

Ultrastructure of bovine placenta during all gestational period

ABSTRACT Placentas from pregnant cows with different gestation periods were used. Placental fragments of all groups were processed and evaluated by transmission electron microscopy. After fragment analysis, bovine placenta was observed to be epitheliochorial type in early pregnancy, becoming progressively sinepiteliocorial at the beginning of the second trimester. There are no ultrastructural evidences of inflammation in the region of caruncles throughout gestation, despite the invasion of caruncle proper lamina by trophoblast cells. However, throughout pregnancy and especially at the end, there were evident signs of cell degeneration in both trophoblast and the uterine epithelium. The active trophoblast cells intensely phagocytize cellular debris. There are complex interdigitations between the surface of the trophoblast and the uterine epithelium, which is related to the increase of the exchange surface between mother and fetus. At the end of pregnancy, interdigitations disappear, favoring the detachment and expulsion of the placenta after birth.

RESUMO Foram utilizadas placentas de vacas abatidas em frigorífico com diversos tempos gestacionais. Fragmentos de placentomo de todos os grupos foram processados e avaliados em microscopia eletrônica de transmissão. Após análise dos fragmentos, observou-se que a placenta bovina é do tipo epiteliocorial no início da gestação, tornando-se sinepiteliocorial progressivamente a partir do início do segundo mês de gestação. Não existem evidências ultraestruturais de inflamação na região das carúnculas durante toda a gestação, apesar da invasão da lâmina própria caruncular por células trofoblásticas. No entanto, durante toda a gestação e em especial ao seu final, foram observados sinais evidentes de degeneração celular, tanto do trofoblasto como do epitélio uterino. As células trofoblásticas ativas fagocitam intensamente os debris celulares originados dessas degenerações. Existem complexas interdigitações entre a superfície do trofoblasto e do epitélio uterino, o que estaria relacionado com o aumento da superfície de troca entre mãe e feto. Ao final da gestação, praticamente desaparecem essas interdigitações, favorecendo o descolamento e a expulsão da placenta após o parto.

Ultrastructure of bovine placenta during all gestational period / Ultraestrutura de placenta bovina durante todo o período gestacional

Placentas from pregnant cows with different gestation periods were used. Placental fragments of all groups were processed and evaluated by transmission electron microscopy. After fragment analysis, bovine placenta was observed to be epitheliochorial type in early pregnancy, becoming progressively sinepiteliocorial at the beginning of the second trimester. There are no ultrastructural evidences of inflammation in the region of caruncles throughout gestation, despite the invasion of caruncle proper lamina by trophoblast cells. However, throughout pregnancy and especially at the end, there were evident signs of cell degeneration in both trophoblast and the uterine epithelium. The active trophoblast cells intensely phagocytize cellular debris. There are complex interdigitations between the surface of the trophoblast and the uterine epithelium, which is related to the increase of the exchange surface between mother and fetus. At the end of pregnancy, interdigitations disappear, favoring the detachment and expulsion of the placenta after birth.(AU)

Foram utilizadas placentas de vacas abatidas em frigorífico com diversos tempos gestacionais. Fragmentos de placentomo de todos os grupos foram processados e avaliados em microscopia eletrônica de transmissão. Após análise dos fragmentos, observou-se que a placenta bovina é do tipo epiteliocorial no início da gestação, tornando-se sinepiteliocorial progressivamente a partir do início do segundo mês de gestação. Não existem evidências ultraestruturais de inflamação na região das carúnculas durante toda a gestação, apesar da invasão da lâmina própria caruncular por células trofoblásticas. No entanto, durante toda a gestação e em especial ao seu final, foram observados sinais evidentes de degeneração celular, tanto do trofoblasto como do epitélio uterino. As células trofoblásticas ativas fagocitam intensamente os debris celulares originados dessas degenerações. Existem complexas interdigitações entre a superfície do trofoblasto e do epitélio uterino, o que estaria relacionado com o aumento da superfície de troca entre mãe e feto. Ao final da gestação, praticamente desaparecem essas interdigitações, favorecendo o descolamento e a expulsão da placenta após o parto.(AU)

Proposal of a Standard for the Condemnation for Turkey Carcasses Due to Fowlpox

This study aimed at proposing a new technical criteria for condemnation of turkey carcasses due to fowlpox in turkeys as a contribution for the work of the Brazilian Federal Meat Inspection Service. Skin samples from 30 carcasses of a flock of 840 turkeys (Meleagris gallopavo), previously vaccinated for fowlpox and slaughtered in June 2013, were collected. Samples were submitted to histological examination under light microscopy. The virus was identified using standard PCR techniques. The main histological findings were hyperplasia and hydropic degeneration of the epithelium and the presence of intracytoplasmic eosinophilic inclusion bodies. PCR results yielded 83.3% positive and 16.7% negative samples. Fowlpox virus is species specific, and there are no reports of its occurrence in mammals. The macroscopic and microscopic findings of the skin lesions do not justify the total condemnation of carcasses of poultry affected with fowlpox, except in cases of cachexia or repulsive appearance, as established by SIF regulation.

Proposal of a Standard for the Condemnation for Turkey Carcasses Due to Fowlpox

This study aimed at proposing a new technical criteria for condemnation of turkey carcasses due to fowlpox in turkeys as a contribution for the work of the Brazilian Federal Meat Inspection Service. Skin samples from 30 carcasses of a flock of 840 turkeys (Meleagris gallopavo), previously vaccinated for fowlpox and slaughtered in June 2013, were collected. Samples were submitted to histological examination under light microscopy. The virus was identified using standard PCR techniques. The main histological findings were hyperplasia and hydropic degeneration of the epithelium and the presence of intracytoplasmic eosinophilic inclusion bodies. PCR results yielded 83.3% positive and 16.7% negative samples. Fowlpox virus is species specific, and there are no reports of its occurrence in mammals. The macroscopic and microscopic findings of the skin lesions do not justify the total condemnation of carcasses of poultry affected with fowlpox, except in cases of cachexia or repulsive appearance, as established by SIF regulation. (AU)

Campylobacter Jejuni Increases Transcribed Il-1 B and Causes Morphometric Changes in the Ileal Enterocytes of Chickens

Campylobacteriosis is a worldwide foodborne zoonosis disease caused by Campylobacter jejuni. This microorganism is considered a commensal bacterium in chicken hosts. C. jejuni produces epithelial cell modifications and induces a cytokine gene transcription innate immunity repertoire. In the present study, we describe the invasiveness, morphological cellular modifications, and transcript level expressions of innate immune cytokines from C. jejuni-inoculated chicken ileum explants. C. jejuni was internalized by epithelial ileum cells at 15 minutes postinoculation (p.i.) and was detected intracellularly for 4hs (p.i.). Inoculated explants displayed significant increases in cell height. C. jejuni induced a significant elevation of Transforming Growth Factor Beta 3 (TGF-b3) and Interleukin-1b (IL-1b) transcripts. In conclusion, C. jejuni is internalized in explanted epithelial ileum cells, produces morphological cell modifications, and induces gene transcription of both anti-inflammatory and pro-inflammatory cytokines.

Campylobacter Jejuni Increases Transcribed Il-1 B and Causes Morphometric Changes in the Ileal Enterocytes of Chickens

Campylobacteriosis is a worldwide foodborne zoonosis disease caused by Campylobacter jejuni. This microorganism is considered a commensal bacterium in chicken hosts. C. jejuni produces epithelial cell modifications and induces a cytokine gene transcription innate immunity repertoire. In the present study, we describe the invasiveness, morphological cellular modifications, and transcript level expressions of innate immune cytokines from C. jejuni-inoculated chicken ileum explants. C. jejuni was internalized by epithelial ileum cells at 15 minutes postinoculation (p.i.) and was detected intracellularly for 4hs (p.i.). Inoculated explants displayed significant increases in cell height. C. jejuni induced a significant elevation of Transforming Growth Factor Beta 3 (TGF-b3) and Interleukin-1b (IL-1b) transcripts. In conclusion, C. jejuni is internalized in explanted epithelial ileum cells, produces morphological cell modifications, and induces gene transcription of both anti-inflammatory and pro-inflammatory cytokines.(AU)

Characterization of the virulence, growth temperature and antibiotic resistance of the Campylobacter jejuni IAL 2383 strain isolated from humans

The objective of this study was to characterize the C. jejuni IAL2383 strain isolated from humans in Brazil. Transcripts for the racR, dnaJ and ciaB genes were found and flaA, plda and cadF genes were present in the genome and bacteria was sensitive to most of the important antimicrobials used to treat humans. C. jejuni IAL2383 is a good experimental model to analyze the interactions with cells.(AU)

Cromatina espermática: quebrando paradigmas / Sperm chromatin: breaking paradigms

Há algumas décadas, pensava-se que espermatozoides maduros possuíssem uma cromatina não funcional, inerte, sem a capacidade de transcrição. Acreditava-se que a matriz nuclear não existisse e que a presença de histonas no núcleo seria um erro no processo de compactação cromatínica, o que poderia interferir na fertilidade do macho. Hoje se sabe que, entre as estruturas toroidais, unidades básicas da cromatina espermática altamente compactada, há algumas poucas regiões que contêm sequências de nucleossomos, e estas geralmente estão anexadas a uma matriz nuclear proteica. Os espermatozoides possuem cromatina altamente organizada e são condutores metabolicamente funcionais do genoma masculino, carreando RNAs de diferentes tipos, os quais, tanto quanto os nucleossomos, são importantes sinalizadores epigenéticos paternos e, logo,influenciam o desenvolvimento embrionário inicial. Portanto, alterações cromatínicas podem não somente interferir no processo de fecundação, como principalmente no desenvolvimento embrionário, o que reforça a necessidade da análise da cromatina na avaliação de reprodutores machos.(AU)

Decades ago, it was thought thatspermatozoa had a chromatin nonfunctional, inert, without the abilityto transcription. It was believed in the absence of nuclear matrix and the presence of the core histones would be an error in the chromatin packaging, which could interfere with male fertility. Today we know that between thetoroidal structures, basic units of highly compacted sperm chromatin, there are a few regions containing nucleosome sequences, these usually being attached to a nuclear protein matrix. The sperm chromatin is highly organized and is metabolically functional carrier of male genome, carrying different RNA types, which, along with the nucleosomes are important paternal epigenetic signaling, and influencing early embryonic development. Therefore, chromatin alterations not only interfere with the fertilization process, but also influencethe embryonic development, which reinforces the need for chromatin analysis in the evaluation of breeding males.(AU)

Cromatina espermática: quebrando paradigmas / Sperm chromatin: breaking paradigms

Há algumas décadas, pensava-se que espermatozoides maduros possuíssem uma cromatina não funcional, inerte, sem a capacidade de transcrição. Acreditava-se que a matriz nuclear não existisse e que a presença de histonas no núcleo seria um erro no processo de compactação cromatínica, o que poderia interferir na fertilidade do macho. Hoje se sabe que, entre as estruturas toroidais, unidades básicas da cromatina espermática altamente compactada, há algumas poucas regiões que contêm sequências de nucleossomos, e estas geralmente estão anexadas a uma matriz nuclear proteica. Os espermatozoides possuem cromatina altamente organizada e são condutores metabolicamente funcionais do genoma masculino, carreando RNAs de diferentes tipos, os quais, tanto quanto os nucleossomos, são importantes sinalizadores epigenéticos paternos e, logo,influenciam o desenvolvimento embrionário inicial. Portanto, alterações cromatínicas podem não somente interferir no processo de fecundação, como principalmente no desenvolvimento embrionário, o que reforça a necessidade da análise da cromatina na avaliação de reprodutores machos.

Decades ago, it was thought thatspermatozoa had a chromatin nonfunctional, inert, without the abilityto transcription. It was believed in the absence of nuclear matrix and the presence of the core histones would be an error in the chromatin packaging, which could interfere with male fertility. Today we know that between thetoroidal structures, basic units of highly compacted sperm chromatin, there are a few regions containing nucleosome sequences, these usually being attached to a nuclear protein matrix. The sperm chromatin is highly organized and is metabolically functional carrier of male genome, carrying different RNA types, which, along with the nucleosomes are important paternal epigenetic signaling, and influencing early embryonic development. Therefore, chromatin alterations not only interfere with the fertilization process, but also influencethe embryonic development, which reinforces the need for chromatin analysis in the evaluation of breeding males.

Pressão intra-ocular após implante de tubo de teflon associado à mitomicina c em coelhos da raça Nova Zelândia / Intra-ocular pressure in New Zealand rabbit after teflon tube implant associated to mitomycin c

Foram utilizados 14 coelhos da raça Nova Zelândia, adultos, hígidos, machos e fêmeas, para avaliar os aspectos histológicos e clínicos após o implante de tubo de teflon associado a mitomicina C. Dez olhos direitos formaram o grupo I e dez olhos esquerdos formaram o grupo II avaliados por 30 e 60 dias de pós-operatório (PO), respectivamente. Os outros oito olhos formaram o grupo III observados por 48 horas. Foi constituído uma bolsa na conjuntiva bulbar e dentro dela foi aplicado mitomicina C. Um tubo de teflon foi introduzido na câmara anterior e fixado na esclera, a bolsa conjuntival foi aproximada no limbo sobre o implante. Houve diferença significativa nas médias das pressões intra-oculares (PIO) entre o pré-operatório e o pós-operatório de 30 e 60 dias. Os animais dos grupos I e II apresentaram hipotonia e câmara anterior rasa nos primeiros 15 dias de PO. Na avaliação histológica da bolsa conjuntival foi verificado descamação das células superficiais do epitélio e degeneração do tecido conjuntivo, o que indicou alterações na cicatrização mediante ação da mitomicina C. O implante de teflon associado com mitomicina C demonstrou ser um método eficaz por diminuir e manter a PIO dos 30 aos 60 dias de PO.

Fourteen healthy, adult New Zealand rabbits, males and females, were used to evaluate the histological and clinical aspects after the implant of Teflon tube associated to mytomicin C. The ten right eyes of group I and ten left eyes of group II were evaluated for 30 and 60 days of postoperative (PO), respectively. The other eight eyes of group III were observed for 48 hours. A bag was constituted in the bulbar conjunctive and inside of it mytomicin C was applied. A Teflon tube was introduced in the anterior chamber and fastened in the sclera, the conjunctive bag was approximated in the limbus over the implant. There was significant difference in the averages of the intraocular pressures (IOP) between the preoperative and the postoperative of 30 and 60 days. The animals of groups I and II presented hypotonia and shallow anterior chamber in the first 15 days of PO. In the histological evaluation of the conjunctive bag, descaling of the epithelium superficial cells and degeneration of the conjunctive tissue was verified, which indicated healing changes due to the action of mytomicin C. The implant of Teflon associated with mytomicin C demonstrated to be an effective method to decrease and to maintain the IOP from 30 to 60 days PO.

INTRA-OCULAR PRESSURE IN NEW ZEALAND RABBIT AFTER TEFLON TUBE IMPLANT ASSOCIATED TO MITOMYCIN C /Pressão intra-ocular após implante de tubo de teflon associado à mitomicina c em coelhos da raça Nova Zelândia

Foram utilizados 14 coelhos da raça Nova Zelândia, adultos, hígidos, machos e fêmeas, para avaliar os aspectos histológicos e clínicos após o implante de tubo de teflon associado a mitomicina C. Dez olhos direitos formaram o grupo I e dez olhos esquerdos formaram o grupo II avaliados por 30 e 60 dias de pós-operatório (PO), respectivamente. Os outros oito olhos formaram o grupo III observados por 48 horas. Foi constituído uma bolsa na conjuntiva bulbar e dentro dela foi aplicado mitomicina C. Um tubo de teflon foi introduzido na câmara anterior e fixado na esclera, a bolsa conjuntival foi aproximada no limbo sobre o implante. Houve diferença significativa nas médias das pressões intra-oculares (PIO) entre o pré-operatório e o pós-operatório de 30 e 60 dias. Os animais dos grupos I e II apresentaram hipotonia e câmara anterior rasa nos primeiros 15 dias de PO. Na avaliação histológica da bolsa conjuntival foi verificado descamação das células superficiais do epitélio e degeneração do tecido conjuntivo, o que indicou alterações na cicatrizaç&ati

Pressão intra-ocular após implante de tubo de teflon associado à mitomicina c em coelhos da raça Nova Zelândia / Intra-ocular pressure in New Zealand rabbit after teflon tube implant associated to mitomycin c

Foram utilizados 14 coelhos da raça Nova Zelândia, adultos, hígidos, machos e fêmeas, para avaliar os aspectos histológicos e clínicos após o implante de tubo de teflon associado a mitomicina C. Dez olhos direitos formaram o grupo I e dez olhos esquerdos formaram o grupo II avaliados por 30 e 60 dias de pós-operatório (PO), respectivamente. Os outros oito olhos formaram o grupo III observados por 48 horas. Foi constituído uma bolsa na conjuntiva bulbar e dentro dela foi aplicado mitomicina C. Um tubo de teflon foi introduzido na câmara anterior e fixado na esclera, a bolsa conjuntival foi aproximada no limbo sobre o implante. Houve diferença significativa nas médias das pressões intra-oculares (PIO) entre o pré-operatório e o pós-operatório de 30 e 60 dias. Os animais dos grupos I e II apresentaram hipotonia e câmara anterior rasa nos primeiros 15 dias de PO. Na avaliação histológica da bolsa conjuntival foi verificado descamação das células superficiais do epitélio e degeneração do tecido conjuntivo, o que indicou alterações na cicatrização mediante ação da mitomicina C. O implante de teflon associado com mitomicina C demonstrou ser um método eficaz por diminuir e manter a PIO dos 30 aos 60 dias de PO.(AU)

Fourteen healthy, adult New Zealand rabbits, males and females, were used to evaluate the histological and clinical aspects after the implant of Teflon tube associated to mytomicin C. The ten right eyes of group I and ten left eyes of group II were evaluated for 30 and 60 days of postoperative (PO), respectively. The other eight eyes of group III were observed for 48 hours. A bag was constituted in the bulbar conjunctive and inside of it mytomicin C was applied. A Teflon tube was introduced in the anterior chamber and fastened in the sclera, the conjunctive bag was approximated in the limbus over the implant. There was significant difference in the averages of the intraocular pressures (IOP) between the preoperative and the postoperative of 30 and 60 days. The animals of groups I and II presented hypotonia and shallow anterior chamber in the first 15 days of PO. In the histological evaluation of the conjunctive bag, descaling of the epithelium superficial cells and degeneration of the conjunctive tissue was verified, which indicated healing changes due to the action of mytomicin C. The implant of Teflon associated with mytomicin C demonstrated to be an effective method to decrease and to maintain the IOP from 30 to 60 days PO.(AU)

A manutenção de Ehrlichia canis em macrófagos é dependente da evasão lisossomal / The maintenance of Ehrlichia canis in macrophages is dependent on lysosomal evasion

Ehrlichia canis é o agente etiológico de Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma das mais importantes doenças infecciosas de cães no Brasil. Bactérias intracelulares obrigatórias de monócitos e macrófagos, como E. canis, desenvolvem diversos mecanismos celulares para assegurar a sua evasão das defesas do hospedeiro, que envolvem distintas adaptações para sobrevivência nos compartimentos intracelulares. No entanto, estudos sobre essas estratégias ainda são escassos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar se a E. canis possui a capacidade de evitar a fusão de lisossomos às inclusões citoplasmáticas, o que favoreceria sua multiplicação. A fusão de lisossomos com endossomos contendo E. canis foi investigada utilizando cultivo celular de histiócitos caninos (DH82) infectados com a cepa São Paulo de E. canis, em uma momento no qual 50% das células estavam parasitadas. Para esse fim as células infectadas foram marcadas citoquimicamente para fosfatase ácida, uma enzima presente nos compartimentos fusionados a lisossomos. Após o processo de inclusão em resina, os cortes ultrafinos foram analisados e documentados fotograficamente em um microscópio eletrônico de transmissão. Foram reazaliadas comparações entre três pares de controle e grupos experimentais em relação a número de bactérias por célula, número de lisossomos marcados por célula e número de vacúolos marcados contendo E. canis por célula. A análise estatística foi realizada pelo teste de Mann-Whitney, sendo considerados significativos valores p<0,05. A marcação citoquímica da enzima lisossomal não foi observada em vacúolos contendo E. canis íntegras indicando que essas bactérias são capazes de inibir a fusão lisossomal aos endossomos, como um mecanismo de evasão imune. A evasão da fusão lisossomal por inclusões erliquiais é fundamental para a sobrevivência e reprodução do patógeno, apesar de ser baseado em diferentes estratégias de acordo para as espécies de Ehrlichia spp. A demonstração da evasão lisossomal durante a propagação de E. canis serve como base para o desenvolvimento e elaboração de novas estratégias terapêuticas.

Ehrlichia canis is the etiologic agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), one of the most important infectious diseases of dogs in Brazil. Obligate intracellular bacteria of monocytes and macrophages like E. canis develop various cellular mechanisms to avoid host defenses, which involve different adaptations for survival in intracellular compartments. However, studies about these strategies are scarce. Thus, the present study aimed to investigate whether E. canis has the ability to prevent the fusion of lysosomes to cytoplasmic inclusions, which would favor its multiplication. The fusion of lysosomes with endosomes containing E. canis was investigated using cell culture of canine histiocytes (DH82) infected with the São Paulo strain of E. canis when 50% of the cells were parasitized. To this end, infected cells were cytochemistrically labeled for acid phosphatase, an enzyme present in the fused lysosome compartments. After resin embedding process, the ultrathin sections were analyzed and photographically documented in a transmission electron microscope (TEM). We compared three control pairs and experimental groups in relation to the number of bacteria per cell, number lysosomes marked per cell and the number of labeled vacuoles containing E. canis per cell. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test, at p<0.05 significance level. The cytochemical staining of the lysosomal enzyme was not observed in vacuoles containing intact E. canis indicating that these bacteria are able to inhibit lysosomal fusion to endosomes, as a mechanism of immune evasion. The evasion of lysosomal fusion by erlichia inclusions is critical to the survival and reproduction of the pathogen, despite being based on different strategies according to the species of Ehrlichia spp. Demonstration of lysosomal escape during the propagation of E. canis serves as a basis for the development and design of new therapeutic strategies.

A MANUTENÇÃO DE Ehrlichia canis EM MACRÓFAGOS É DEPENDENTE DA EVASÃO LISOSSOMAL / THE MAINTENANCE OF Ehrlichia canis IN MACROPHAGES IS DEPENDENT ON LYSOSOMAL EVASION

Ehrlichia canis é o agente etiológico de Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma das mais importantes doenças infecciosas de cães no Brasil. Bactérias intracelulares obrigatórias de monócitos e macrófagos, como E. canis, desenvolvem diversos mecanismos celulares para assegurar a sua evasão das defesas do hospedeiro, que envolvem distintas adaptações para sobrevivência nos compartimentos intracelulares. No entanto, estudos sobre essas estratégias ainda são escassos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar se a E. canis possui a capacidade de evitar a fusão de lisossomos às inclusões citoplasmáticas, o que favoreceria sua multiplicação. A fusão de lisossomos com endossomos contendo E. canis foi investigada utilizando cultivo celular de histiócitos caninos (DH82) infectados com a cepa São Paulo de E. canis, em uma momento no qual 50% das células estavam parasitadas. Para esse fim as células infectadas foram marcadas citoquimicamente para fosfatase ácida, uma enzima presente nos compartimentos fusionados a lisossomos. Após o processo de inclusão em

O PROCESSO DE PROPAGAÇÃO DE Ehrlichia canis EM MACRÓFAGOS É DEPENDENTE DO CITOESQUELETO DE ACTINA E DO INFLUXO DE CÁLCIO E FERRO / THE SPREADING PROCESS OF Ehrlichia canis IN MACROPHAGES IS DEPENDENT ON ACTIN CYTOSKELETON AND IRON AND CALCIUM INFLUX

Erliquioses são enfermidades de importância médica e veterinária, causadas por α-proteobactéria Gram-negativa pertencente à ordem Rickettsiales. No Brasil, o principal agente etiológico da Erliquiose Monocítica Canina (EMC) é a Ehrlichia canis, patógeno intracelular obrigatório com tropismo para monócitos e macrófagos. Este microrganismo tem ampla distribuição mundial, mais comumente encontrada em regiões tropicais e subtropicais devido à distribuição geográfica de sua principal vetor, o carrapato Rhipicephalus sanguineus. O processo de invasão já descrito para algumas bactérias deste gênero, tais como E. muris e E. chaffeensis,  compreende quatro fases: adesão, internalização, proliferação intracelular e propagação intercelular. Entretanto, pouco se sabe sobre os mecanismos celulares envolvidos no processo de invasão nas células-alvo por parte da Ehrlichia canis. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o papel do citoesqueleto de actina, do cálcio e do ferro durante o processo de propaga&a

A manutenção de Ehrlichia canis em macrófagos é dependente da evasão lisossomal / The maintenance of Ehrlichia canis in macrophages is dependent on lysosomal evasion

Ehrlichia canis é o agente etiológico de Erliquiose Monocítica Canina (EMC), uma das mais importantes doenças infecciosas de cães no Brasil. Bactérias intracelulares obrigatórias de monócitos e macrófagos, como E. canis, desenvolvem diversos mecanismos celulares para assegurar a sua evasão das defesas do hospedeiro, que envolvem distintas adaptações para sobrevivência nos compartimentos intracelulares. No entanto, estudos sobre essas estratégias ainda são escassos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar se a E. canis possui a capacidade de evitar a fusão de lisossomos às inclusões citoplasmáticas, o que favoreceria sua multiplicação. A fusão de lisossomos com endossomos contendo E. canis foi investigada utilizando cultivo celular de histiócitos caninos (DH82) infectados com a cepa São Paulo de E. canis, em uma momento no qual 50% das células estavam parasitadas. Para esse fim as células infectadas foram marcadas citoquimicamente para fosfatase ácida, uma enzima presente nos compartimentos fusionados a lisossomos. Após o processo de inclusão em resina, os cortes ultrafinos foram analisados e documentados fotograficamente em um microscópio eletrônico de transmissão. Foram reazaliadas comparações entre três pares de controle e grupos experimentais em relação a número de bactérias por célula, número de lisossomos marcados por célula e número de vacúolos marcados contendo E. canis por célula. A análise estatística foi realizada pelo teste de Mann-Whitney, sendo considerados significativos valores p<0,05. A marcação citoquímica da enzima lisossomal não foi observada em vacúolos contendo E. canis íntegras indicando que essas bactérias são capazes de inibir a fusão lisossomal aos endossomos, como um mecanismo de evasão imune. A evasão da fusão lisossomal por inclusões erliquiais é fundamental para a sobrevivência e reprodução do patógeno, apesar de ser baseado em diferentes estratégias de acordo para as espécies de Ehrlichia spp. A demonstração da evasão lisossomal durante a propagação de E. canis serve como base para o desenvolvimento e elaboração de novas estratégias terapêuticas.(AU)

Ehrlichia canis is the etiologic agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), one of the most important infectious diseases of dogs in Brazil. Obligate intracellular bacteria of monocytes and macrophages like E. canis develop various cellular mechanisms to avoid host defenses, which involve different adaptations for survival in intracellular compartments. However, studies about these strategies are scarce. Thus, the present study aimed to investigate whether E. canis has the ability to prevent the fusion of lysosomes to cytoplasmic inclusions, which would favor its multiplication. The fusion of lysosomes with endosomes containing E. canis was investigated using cell culture of canine histiocytes (DH82) infected with the São Paulo strain of E. canis when 50% of the cells were parasitized. To this end, infected cells were cytochemistrically labeled for acid phosphatase, an enzyme present in the fused lysosome compartments. After resin embedding process, the ultrathin sections were analyzed and photographically documented in a transmission electron microscope (TEM). We compared three control pairs and experimental groups in relation to the number of bacteria per cell, number lysosomes marked per cell and the number of labeled vacuoles containing E. canis per cell. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test, at p<0.05 significance level. The cytochemical staining of the lysosomal enzyme was not observed in vacuoles containing intact E. canis indicating that these bacteria are able to inhibit lysosomal fusion to endosomes, as a mechanism of immune evasion. The evasion of lysosomal fusion by erlichia inclusions is critical to the survival and reproduction of the pathogen, despite being based on different strategies according to the species of Ehrlichia spp. Demonstration of lysosomal escape during the propagation of E. canis serves as a basis for the development and design of new therapeutic strategies.(AU)

Avaliação computacional da compactação da cromatina e de características morfométricas da cabeça de espermatozoides de coelho (Oryctolagus cuniculus) / Computational evaluation of chromatin condensation and morphometric characteristics of rabbit (Oryctolagus cuniculus) sperm head

Investigou-se a correlação entre a morfometria da cabeça e a intensidade da condensação e heterogeneidade da cromatina em espermatozoides de coelho (Oryctolagus cuniculus). Para tal, utilizaram-se 35 esfregaços de sêmen de coelhos da raça Nova Zelândia, corados com azul de toluidina e avaliados por análise de imagem computacional. As imagens foram obtidas digitalmente em tons de cinza e avaliadas por algoritmos desenvolvidos em ambiente de programação Scilab. As mensurações obtidas da cabeça dos espermatozoides foram área, perímetro, comprimento, largura, relação comprimento largura, elipsidade, fator de forma, descritores Fourier e simetria lateral e anteroposterior. Também foram avaliadas a intensidade da compactação e a heterogeneidade da cromatina espermática. Os espermatozoides de coelho apresentaram compactação e heterogeneidade cromatínica mais intensas do que os de touro e observou-se correlação significativa entre características morfométricas da cabeça e compactação e heterogeneidade cromatínica. Conclui-se que a cromatina é importante para a constituição morfológica da cabeça de espermatozoides de coelho e que a cromatina espermática de coelho é naturalmente mais heterogênea e menos compactada que a de touro.(AU)

The correlation between the head morphometry and the intensity of condensation and heterogeneity of sperm chromatin were investigated in rabbit (Oryctolagus cuniculus). To this, 35 semen smears from New Zealand rabbits were stained with toluidine blue and evaluated by computer image analysis. The images were obtained in digital grayscale and analyzed by algorithms developed in the Scilab programming environment. The measurements obtained from the sperm heads were area, perimeter, length, width, length:width ratio, ellipticity, shape factor, lateral and anterior-posterior symmetries, and Fourier descriptors. The intensity and heterogeneity of the compaction of sperm chromatin was also evaluated. The rabbit spermatozoa showed chromatin heterogeneity and condensation more intense than the bull spermatozoa, and it was observed correlation between morphometric characteristics of the head and chromatin compaction and heterogeneity. The results suggest that chromatin is important for the morphological constitution of the head morphology spermatozoa head, as well as, rabbit sperm chromatin is inherently more heterogeneous and less condensed than the bull sperm chromatin.(AU)