Uso da clonagem por transferência nuclear na conservação e multiplicação de mamíferos silvestres / Use of cloning by nuclear transfer in the conservation and multiplication of wild mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas (TNCS) desempenha um importante papel na conservação e na multiplicação de mamíferos silvestres, especialmente quando associada à TNCS interespecífica. Contudo, a clonagem ainda possui uma baixa eficiência, sendo necessária uma extensa busca por elucidações mais precisas das metodologias empregadas em suas etapas de preparo do carioplastos (células doadoras de núcleo), obtenção dos citoplastos (oócitos receptores), e reconstrução embrionária. Assim, o objetivo desta revisão é abordar os aspectos relevantes das etapas da clonagem aplicadas a mamíferos silvestres, descrevendo seus resultados promissores e avanços alcançados.(AU)

Cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT) plays an important role in the conservation and multiplication of wild mammals, especially when associated with interspecific SCNT. Nevertheless, cloning still has a low efficiency, requiring an extensive search for more precise elucidations of the methodologies used in its stages of preparation of the karyoplasts (nucleus donor cells), production of cytoplasts (receptor oocytes), and embryonic reconstruction. Thus, the purpose of this review is to address the relevant aspects of the cloning steps applied to wild mammals, describing their promising results and advances.(AU)

Uso da clonagem por transferência nuclear na conservação e multiplicação de mamíferos silvestres / Use of cloning by nuclear transfer in the conservation and multiplication of wild mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas (TNCS) desempenha um importante papel na conservação e na multiplicação de mamíferos silvestres, especialmente quando associada à TNCS interespecífica. Contudo, a clonagem ainda possui uma baixa eficiência, sendo necessária uma extensa busca por elucidações mais precisas das metodologias empregadas em suas etapas de preparo do carioplastos (células doadoras de núcleo), obtenção dos citoplastos (oócitos receptores), e reconstrução embrionária. Assim, o objetivo desta revisão é abordar os aspectos relevantes das etapas da clonagem aplicadas a mamíferos silvestres, descrevendo seus resultados promissores e avanços alcançados.

Cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT) plays an important role in the conservation and multiplication of wild mammals, especially when associated with interspecific SCNT. Nevertheless, cloning still has a low efficiency, requiring an extensive search for more precise elucidations of the methodologies used in its stages of preparation of the karyoplasts (nucleus donor cells), production of cytoplasts (receptor oocytes), and embryonic reconstruction. Thus, the purpose of this review is to address the relevant aspects of the cloning steps applied to wild mammals, describing their promising results and advances.

Uso de bancos somáticos visando a clonagem por transferência nuclear na conservação de mamíferos silvestres uma revisão / Use of somatic banks for cloning by nuclear transfer in the conservation of wild mammals a review

Embora amostras gonadais e embriões sejam os bancos biológicos de primeira escolha para o desenvolvimento de estratégias in vitro de conservação, células e tecidos somáticos têm surgido como interessantes alternativas, especialmente para a conservação de mamíferos silvestres criticamente ameaçados de extinção. Assim, para a multiplicação destas espécies, bancos somáticos têm sido empregados como fonte de carioplasto na clonagem por transferência nuclear de células somáticas, em pesquisas voltadas para a reprogramação nuclear e obtenção de células induzidas à pluripotência. Nesse sentido, para atender a essas finalidades, é necessário inicialmente conhecer as condições adequadas de criopreservação e manipulação desses tecidos e células, visando a manutenção adequada de todas as características biológicas importantes para o estabelecimento das posteriores biotecnologias. Assim, o objetivo desta revisão é conceituar e apresentar as principais etapas técnicas fundamentais no estabelecimento da criopreservação e manipulação in vitro de células e tecidos somáticos, visando o emprego promissor e adequado destes recursos biológicos na conservação de mamíferos silvestres.(AU)

Although gonadal samples and embryos are the first-choice biological banks for the development of in vitro conservation strategies, somatic cells and tissues have emerged as interesting alternatives, especially for the conservation of wild mammals critically endangered. Thus, for the multiplication of these species, somatic banks have been used as karyoplast source in the cloning by somatic cell nuclear transfer, in research aimed at nuclear reprogramming and obtaining cells induced by pluripotency. In this sense, in order to meet these purposes, it is necessary to initially know the proper conditions for cryopreservation and manipulation of these tissues and cells, aiming at the adequate maintenance of all biological characteristics for the establishment of subsequent biotechnologies. Thus, the aim of this review is to conceptualize and present the crucial technical steps in the establishment of cryopreservation and in vitro manipulation of somatic tissues and cells, aiming at the promising and adequate use of these biological resources in the conservation of wild mammals.(AU)

Uso de bancos somáticos visando a clonagem por transferência nuclear na conservação de mamíferos silvestres – uma revisão / Use of somatic banks for cloning by nuclear transfer in the conservation of wild mammals – a review

Embora amostras gonadais e embriões sejam os bancos biológicos de primeira escolha para o desenvolvimento de estratégias in vitro de conservação, células e tecidos somáticos têm surgido como interessantes alternativas, especialmente para a conservação de mamíferos silvestres criticamente ameaçados de extinção. Assim, para a multiplicação destas espécies, bancos somáticos têm sido empregados como fonte de carioplasto na clonagem por transferência nuclear de células somáticas, em pesquisas voltadas para a reprogramação nuclear e obtenção de células induzidas à pluripotência. Nesse sentido, para atender a essas finalidades, é necessário inicialmente conhecer as condições adequadas de criopreservação e manipulação desses tecidos e células, visando a manutenção adequada de todas as características biológicas importantes para o estabelecimento das posteriores biotecnologias. Assim, o objetivo desta revisão é conceituar e apresentar as principais etapas técnicas fundamentais no estabelecimento da criopreservação e manipulação in vitro de células e tecidos somáticos, visando o emprego promissor e adequado destes recursos biológicos na conservação de mamíferos silvestres.

Although gonadal samples and embryos are the first-choice biological banks for the development of in vitro conservation strategies, somatic cells and tissues have emerged as interesting alternatives, especially for the conservation of wild mammals critically endangered. Thus, for the multiplication of these species, somatic banks have been used as karyoplast source in the cloning by somatic cell nuclear transfer, in research aimed at nuclear reprogramming and obtaining cells induced by pluripotency. In this sense, in order to meet these purposes, it is necessary to initially know the proper conditions for cryopreservation and manipulation of these tissues and cells, aiming at the adequate maintenance of all biological characteristics for the establishment of subsequent biotechnologies. Thus, the aim of this review is to conceptualize and present the crucial technical steps in the establishment of cryopreservation and in vitro manipulation of somatic tissues and cells, aiming at the promising and adequate use of these biological resources in the conservation of wild mammals.

Use of natural antioxidants in in vitro mammalian embryo production / Uso de antioxidantes naturais na produção in vitro de embriões de mamíferos

In vitro embryo production (IVEP) contributes to the quantitative and qualitative aspects of animal reproduction. Nevertheless, inherent technical factors such as oxidative stress can negatively influence the result and this can impair cell metabolism, thus decreasing the rates of in vitro development, and necessitating the supplementation of culture medium with antioxidants. In this context, compounds of natural origin with this property have been highlighted because of the positive results obtained at different stages of IVEP. Thus, this review aims to present the results obtained by using natural antioxidants to minimize the effects of oxidative stress on gametes and embryos. A variety of natural isolated substances and mixtures (essential oils and extracts) have been studied for supplementation of IVEP media, at stages of in vitro maturation, sperm capacitation, in vitro fertilization, and in vitro development of embryos in different mammalian species. Generally, beneficial effects are observed according to the concentration used, thus demonstrating the potential of several natural antioxidants. Therefore, the main challenges in using these compounds as antioxidants during IVEP include proving their efficiency against free radicals and determining the best concentration at each stage. In addition, understanding the mechanisms of action of such antioxidants is crucial...

A produção in vitro de embriões (PIVE) contribui para os aspectos quantitativos e qualitativos da reprodução animal. Contudo, fatores inerentes da técnica, como o estresse oxidativo, podem influenciar negativamente o resultado e isso pode prejudicar o metabolismo celular, diminuindo assim as taxas de desenvolvimento in vitro, e exigindo a suplementação do meio de cultivo com antioxidantes. Neste contexto, os compostos de origem natural com essa propriedade têm se destacado devido aos resultados positivos obtidos em diferentes estágios da PIVE. Assim, esta revisão pretende apresentar os resultados obtidos usando antioxidantes naturais para minimizar os efeitos do estresse oxidativo em gametas e embriões. Uma variedade de substâncias isoladas e de misturas naturais (óleos essenciais e extratos) tem sido estudada para a suplementação de meios de PIVE, nas etapas de maturação in vitro, capacitação espermática, fecundação in vitro e desenvolvimento in vitro de embriões em diferentes espécies de mamíferos. Geralmente, os efeitos benéficos são observados de acordo com a concentração utilizada, demostrando assim o potencial positivo de vários antioxidantes naturais. Portanto, os principais desafios para o uso desses compostos como antioxidantes durante a PIVE incluem provar sua eficiência contra os radicais livres e determinar a melhor concentração em cada etapa. Além disso...

Use of natural antioxidants in in vitro mammalian embryo production / Uso de antioxidantes naturais na produção in vitro de embriões de mamíferos

In vitro embryo production (IVEP) contributes to the quantitative and qualitative aspects of animal reproduction. Nevertheless, inherent technical factors such as oxidative stress can negatively influence the result and this can impair cell metabolism, thus decreasing the rates of in vitro development, and necessitating the supplementation of culture medium with antioxidants. In this context, compounds of natural origin with this property have been highlighted because of the positive results obtained at different stages of IVEP. Thus, this review aims to present the results obtained by using natural antioxidants to minimize the effects of oxidative stress on gametes and embryos. A variety of natural isolated substances and mixtures (essential oils and extracts) have been studied for supplementation of IVEP media, at stages of in vitro maturation, sperm capacitation, in vitro fertilization, and in vitro development of embryos in different mammalian species. Generally, beneficial effects are observed according to the concentration used, thus demonstrating the potential of several natural antioxidants. Therefore, the main challenges in using these compounds as antioxidants during IVEP include proving their efficiency against free radicals and determining the best concentration at each stage. In addition, understanding the mechanisms of action of such antioxidants is crucial...(AU)

A produção in vitro de embriões (PIVE) contribui para os aspectos quantitativos e qualitativos da reprodução animal. Contudo, fatores inerentes da técnica, como o estresse oxidativo, podem influenciar negativamente o resultado e isso pode prejudicar o metabolismo celular, diminuindo assim as taxas de desenvolvimento in vitro, e exigindo a suplementação do meio de cultivo com antioxidantes. Neste contexto, os compostos de origem natural com essa propriedade têm se destacado devido aos resultados positivos obtidos em diferentes estágios da PIVE. Assim, esta revisão pretende apresentar os resultados obtidos usando antioxidantes naturais para minimizar os efeitos do estresse oxidativo em gametas e embriões. Uma variedade de substâncias isoladas e de misturas naturais (óleos essenciais e extratos) tem sido estudada para a suplementação de meios de PIVE, nas etapas de maturação in vitro, capacitação espermática, fecundação in vitro e desenvolvimento in vitro de embriões em diferentes espécies de mamíferos. Geralmente, os efeitos benéficos são observados de acordo com a concentração utilizada, demostrando assim o potencial positivo de vários antioxidantes naturais. Portanto, os principais desafios para o uso desses compostos como antioxidantes durante a PIVE incluem provar sua eficiência contra os radicais livres e determinar a melhor concentração em cada etapa. Além disso...(AU)

Estado atual da conservação a 4°C de tecidos somáticos derivados da pele em mamíferos / Current status of conservation at 4°C of somatic tissues derived from the skin in mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.(AU)

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.(AU)

Estado atual da conservação a 4°C de tecidos somáticos derivados da pele em mamíferos / Current status of conservation at 4°C of somatic tissues derived from the skin in mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.

Biotécnicas reprodutivas aplicadas à reprodução de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) uma estratégia experimental / Reproductive biotechniques applied to collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) - an experimental strategy

Frente à importância ecológica, zootécnica e econômica dos catetos ou caititus (Pecari tajacu), apresente revisão compila os principais avanços em termos de técnicas de reprodução assistida desenvolvidospara a conservação e multiplicação da espécie nos últimos anos. Em especial, o texto representa um histórico dosesforços empreendidos pela equipe do Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal da UniversidadeFederal Rural do Semi-Árido com este propósito. Tais esforços se refletem no desenvolvimento de metodologiaspara obtenção de espermatozoides, refrigeração e congelação de sêmen, métodos de monitoramento e controle deciclo estral associados à inseminação artificial, e protocolos de criopreservação e cultivo de tecido testicular,ovariano e somático.(AU)

Due the ecological, zootechnical and economical importance of the collared peccaries (Pecari tajacu),this review brings the main advances related to assisted reproductive techniques developed for the conservationand multiplication of the species in last years. Specially, the text represents a historic of the effort conducted bythe Laboratory on Animal Germplasm Conservation team of the Federal University of Semiarid in this purpose.Such efforts are reflected in the development of methodologies for sperm recovery, semen chilling and freezing,methods for estrus cycle monitoring and control associated to artificial insemination, and protocols for thecryopreservation and culture of testicular, ovarian and somatic tissues.(AU)

Biotécnicas reprodutivas aplicadas à reprodução de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) – uma estratégia experimental / Reproductive biotechniques applied to collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) - an experimental strategy

Frente à importância ecológica, zootécnica e econômica dos catetos ou caititus (Pecari tajacu), apresente revisão compila os principais avanços em termos de técnicas de reprodução assistida desenvolvidospara a conservação e multiplicação da espécie nos últimos anos. Em especial, o texto representa um histórico dosesforços empreendidos pela equipe do Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal da UniversidadeFederal Rural do Semi-Árido com este propósito. Tais esforços se refletem no desenvolvimento de metodologiaspara obtenção de espermatozoides, refrigeração e congelação de sêmen, métodos de monitoramento e controle deciclo estral associados à inseminação artificial, e protocolos de criopreservação e cultivo de tecido testicular,ovariano e somático.

Due the ecological, zootechnical and economical importance of the collared peccaries (Pecari tajacu),this review brings the main advances related to assisted reproductive techniques developed for the conservationand multiplication of the species in last years. Specially, the text represents a historic of the effort conducted bythe Laboratory on Animal Germplasm Conservation team of the Federal University of Semiarid in this purpose.Such efforts are reflected in the development of methodologies for sperm recovery, semen chilling and freezing,methods for estrus cycle monitoring and control associated to artificial insemination, and protocols for thecryopreservation and culture of testicular, ovarian and somatic tissues.

Influence of commercially available follicle stimulating hormone on the in vitro maturation of bovine oocytes / Influência do hormônio folículo-estimulante disponível comercialmente sobre a maturação in vitro de oócitos bovinos

The work aimed (Experiment I) to compare commercial representations of porcine follicle stimulating hormone (FSH, Pluset® vs. Folltropin®) in concentration (10 μg/mL) and time (24 h) standard (more used in protocols of in vitro maturation, IVM); (Experiment II) to evaluate the best incubation time (6 h vs. 16 h vs. 24 h) and, (Experiment III) to analyze varying concentrations (1.0 μg/mL vs. 2.5 μg/mL vs. 10.0 μg/mL) of representations of FSH on the IVM of bovine oocytes. Thus, oocytes were recovered and submitted to IVM under appropriate conditions. After the IVM, oocytes were evaluated for expansion of cumulus cells (CCs), presence of the first polar body (1PB) and metaphase plate (MII). All the data were analyzed by the Fisher exact test (P 0.05) was observed in maturation rates of the oocytes incubated with FSH Pluset® or Folltropin®, assessed by expansion of CCs (97.6% vs. 94.3%), presence of 1PB (76.6% vs. 69.4%) and MII (70.0% vs. 68.6%). In Experiment II, when the incubation time with FSH was evaluated, both Pluset® as Folltropin® showed lower rate of expansion of CCs when they were present only in the first 6 h of IVM. As for presence of 1PB, differences were observed in relation to Pluset® while Folltropin® showed similar results in all incubation times. Regarding the MII, no difference was observed between the incubation times with FSH Pluset® and Folltropin®. In Experiment III, no difference was observed in the expansion of CCs, presence of 1PB and MII for concentrations evaluated FSH Pluset® and Folltropin®. Therefore, the FSH Pluset® and Folltropin® have the same efficiency in IVM of bovine oocytes. Regarding the incubation time, it is recommended to maintain FSH (Pluset® or Folltropin®) throughout the period of IVM, since there was no difference in the results of presence of MII...

O trabalho objetivou (Experimento I) comparar representações comerciais do hormônio folículo estimulante suíno (FSH, Pluset® vs. Folltropin®) na concentração (10 μg/mL) e tempo (24 h) padrão (mais utilizados nos protocolos de maturação in vitro, MIV); (Experimento II) avaliar o melhor tempo de incubação (6 h vs. 16 h vs. 24 h) e, (Experimento III) analisar concentrações variáveis (1,0 μg/mL vs. 2,5 μg/mL vs. 10,0 μg/mL) das representações de FSH sobre a MIV de oócitos bovinos. Para tanto, oócitos foram recuperados e submetidos a MIV em condições adequadas. Após a MIV, oócitos foram avaliados quanto à expansão das células do cumulus (CCs), presença do primeiro corpúsculo polar (1CP) e placa metafásica (MII). Todos os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher (P 0,05) nas taxas de maturação de oócitos incubados com FSH Pluset® ou Folltropin®, avaliadas pela expansão das CCs (97,6% vs. 94,3%), presença de 1CP (76,6% vs. 69,4%) e MII (70,0% vs. 68,6%). No Experimento II, quanto ao tempo de incubação com FSH foi avaliado, tanto Pluset® quanto Folltropin® mostraram uma menor taxa de expansão de CCs somente nas primeiras 6 h de MIV. Quanto à presença de 1CP, diferenças foram observadas em relação ao Pluset® enquanto o Folltropin® mostrou resultados similares em todos os tempos de incubação. Em relação à MII, nenhuma diferença foi observada entre os tempos de incubação com o FSH Pluset® e Folltropin®. No Experimento III, nenhuma diferença foi observada na expansão das CCs, presença do 1CP e MII para as concentrações avaliadas de FSH Pluset® e Folltropin®. Portanto, FSH Pluset® e Folltropin® tem a mesma eficiência na MIV de oócitos bovinos. Em relação ao tempo de incubação, é recomendado manter o FSH (Pluset® or Folltropin®) ao longo do período da MIV, uma vez que nenhuma diferença foi observada nos resultados da presença de MII...

Influence of commercially available follicle stimulating hormone on the in vitro maturation of bovine oocytes / Influência do hormônio folículo-estimulante disponível comercialmente sobre a maturação in vitro de oócitos bovinos

The work aimed (Experiment I) to compare commercial representations of porcine follicle stimulating hormone (FSH, Pluset® vs. Folltropin®) in concentration (10 μg/mL) and time (24 h) standard (more used in protocols of in vitro maturation, IVM); (Experiment II) to evaluate the best incubation time (6 h vs. 16 h vs. 24 h) and, (Experiment III) to analyze varying concentrations (1.0 μg/mL vs. 2.5 μg/mL vs. 10.0 μg/mL) of representations of FSH on the IVM of bovine oocytes. Thus, oocytes were recovered and submitted to IVM under appropriate conditions. After the IVM, oocytes were evaluated for expansion of cumulus cells (CCs), presence of the first polar body (1PB) and metaphase plate (MII). All the data were analyzed by the Fisher exact test (P < 0.05). Initially, in Experiment I, no difference (P > 0.05) was observed in maturation rates of the oocytes incubated with FSH Pluset® or Folltropin®, assessed by expansion of CCs (97.6% vs. 94.3%), presence of 1PB (76.6% vs. 69.4%) and MII (70.0% vs. 68.6%). In Experiment II, when the incubation time with FSH was evaluated, both Pluset® as Folltropin® showed lower rate of expansion of CCs when they were present only in the first 6 h of IVM. As for presence of 1PB, differences were observed in relation to Pluset® while Folltropin® showed similar results in all incubation times. Regarding the MII, no difference was observed between the incubation times with FSH Pluset® and Folltropin®. In Experiment III, no difference was observed in the expansion of CCs, presence of 1PB and MII for concentrations evaluated FSH Pluset® and Folltropin®. Therefore, the FSH Pluset® and Folltropin® have the same efficiency in IVM of bovine oocytes. Regarding the incubation time, it is recommended to maintain FSH (Pluset® or Folltropin®) throughout the period of IVM, since there was no difference in the results of presence of MII...(AU)

O trabalho objetivou (Experimento I) comparar representações comerciais do hormônio folículo estimulante suíno (FSH, Pluset® vs. Folltropin®) na concentração (10 μg/mL) e tempo (24 h) padrão (mais utilizados nos protocolos de maturação in vitro, MIV); (Experimento II) avaliar o melhor tempo de incubação (6 h vs. 16 h vs. 24 h) e, (Experimento III) analisar concentrações variáveis (1,0 μg/mL vs. 2,5 μg/mL vs. 10,0 μg/mL) das representações de FSH sobre a MIV de oócitos bovinos. Para tanto, oócitos foram recuperados e submetidos a MIV em condições adequadas. Após a MIV, oócitos foram avaliados quanto à expansão das células do cumulus (CCs), presença do primeiro corpúsculo polar (1CP) e placa metafásica (MII). Todos os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher (P < 0,05). Inicialmente, no Experimento I, nenhuma diferença foi observada (P > 0,05) nas taxas de maturação de oócitos incubados com FSH Pluset® ou Folltropin®, avaliadas pela expansão das CCs (97,6% vs. 94,3%), presença de 1CP (76,6% vs. 69,4%) e MII (70,0% vs. 68,6%). No Experimento II, quanto ao tempo de incubação com FSH foi avaliado, tanto Pluset® quanto Folltropin® mostraram uma menor taxa de expansão de CCs somente nas primeiras 6 h de MIV. Quanto à presença de 1CP, diferenças foram observadas em relação ao Pluset® enquanto o Folltropin® mostrou resultados similares em todos os tempos de incubação. Em relação à MII, nenhuma diferença foi observada entre os tempos de incubação com o FSH Pluset® e Folltropin®. No Experimento III, nenhuma diferença foi observada na expansão das CCs, presença do 1CP e MII para as concentrações avaliadas de FSH Pluset® e Folltropin®. Portanto, FSH Pluset® e Folltropin® tem a mesma eficiência na MIV de oócitos bovinos. Em relação ao tempo de incubação, é recomendado manter o FSH (Pluset® or Folltropin®) ao longo do período da MIV, uma vez que nenhuma diferença foi observada nos resultados da presença de MII...(AU)

Avaliação de oócitos imaturos bovinos derivados de ovários com baixa e alta contagem de folículos antrais / Evaluation of bovine immature oocytes derived from ovaries with low and high antral follicle count

The aim was to evaluate the quantity and quality of immature oocytes obtained from bovine ovarieswith high and low antral follicle count (AFC). Therefore, ovaries were obtained from a slaughterhouse and thelaboratory were divided in two groups: high count (HC: ≥ 20) and low count (LC: <20) follicles. After thefollicular aspiration, retrieved oocytes were assessed by morphological appearance and brilliant cresyl blue test(BCB) in viable and non-viable. The data were analyzed by Fischer exact test (P < 0.05). After three replicates,85 ovaries were recovered and distributed between the groups HC (22) and LC (63). There was no significantdifference in the recovery rate. Furthermore, in the morphology and BCB test the viability rates werestatistically similar between groups (P > 0.05). Therefore, it is concluded that the AFC does not influence thequantity and quality of oocytes.(AU)

Vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) usando diferentes crioprotetores / Somatic tissue vitrification of collared peccaries (Peccary tajacu Linnaeus, 1758) using different cryoprotectants

The somatic tissue cryopreservation of collared peccaries is an interesting alternative as conservationstrategies for maintaining the ecosystem and the optimization of breeding management. Therefore, the aim of thestudy was to evaluate different cryoprotectants in the vitrification solid surface of somatic tissue in collaredpeccaries. Thun, the tissue fragments were vitrified by solid surface in minimum essential medium modified byDulbecco supplemented with 10% bovine fetal serum (FCS) and different intracellular cryoprotectants [3.0 Mdimethylsulfoxide with 0.25 M sucrose (DMSO-SUC) and 3.0 M ethylene glycol with 0.25 M sucrose (EG-SUC)].Thus, the combination of 3.0 M EG, 0.25 M sucrose and 10% FCS was adequate to maintain normal tissuecharacteristics compared with non-vitrified fragments and vitrified with DMSO-SAC, especially for the volumetricratio of epidermis (34.5 vs. 36.6 vs. 32.1) and dermis (61.2 vs. 58.7 vs. 62.5), respectively.(AU)

Avaliação de oócitos imaturos bovinos derivados de ovários com baixa e alta contagem de folículos antrais / Evaluation of bovine immature oocytes derived from ovaries with low and high antral follicle count

The aim was to evaluate the quantity and quality of immature oocytes obtained from bovine ovarieswith high and low antral follicle count (AFC). Therefore, ovaries were obtained from a slaughterhouse and thelaboratory were divided in two groups: high count (HC: ≥ 20) and low count (LC: 0.05). Therefore, it is concluded that the AFC does not influence thequantity and quality of oocytes.

Vitrificação de tecido somático de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) usando diferentes crioprotetores / Somatic tissue vitrification of collared peccaries (Peccary tajacu Linnaeus, 1758) using different cryoprotectants

The somatic tissue cryopreservation of collared peccaries is an interesting alternative as conservationstrategies for maintaining the ecosystem and the optimization of breeding management. Therefore, the aim of thestudy was to evaluate different cryoprotectants in the vitrification solid surface of somatic tissue in collaredpeccaries. Thun, the tissue fragments were vitrified by solid surface in minimum essential medium modified byDulbecco supplemented with 10% bovine fetal serum (FCS) and different intracellular cryoprotectants [3.0 Mdimethylsulfoxide with 0.25 M sucrose (DMSO-SUC) and 3.0 M ethylene glycol with 0.25 M sucrose (EG-SUC)].Thus, the combination of 3.0 M EG, 0.25 M sucrose and 10% FCS was adequate to maintain normal tissuecharacteristics compared with non-vitrified fragments and vitrified with DMSO-SAC, especially for the volumetricratio of epidermis (34.5 vs. 36.6 vs. 32.1) and dermis (61.2 vs. 58.7 vs. 62.5), respectively.

Isolamento e caracterização de células doadoras derivadas da pele para a transferência nuclear / Isolation and characterization of skin-derived donor cells for nuclear transfer

O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.(AU)

The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. In general, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitro culture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.(AU)

Isolamento e caracterização de células doadoras derivadas da pele para a transferência nuclear / Isolation and characterization of skin-derived donor cells for nuclear transfe

O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.

The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. Ingeneral, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitroculture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.

Use of natural antioxidants in in vitro mammalian embryo production / Uso de antioxidantes naturais na produção in vitro de embriões de mamíferos

In vitro embryo production (IVEP) contributes to the quantitative and qualitative aspects of animal reproduction. Nevertheless, inherent technical factors such as oxidative stress can negatively influence the result and this can impair cell metabolism, thus decreasing the rates of in vitro development, and necessitating the supplementation of culture medium with antioxidants. In this context, compounds of natural origin with this property have been highlighted because of the positive results obtained at different stages of IVEP. Thus, this review aims to present the results obtained by using natural antioxidants to minimize the effects of oxidative stress on gametes and embryos. A variety of natural isolated substances and mixtures (essential oils and extracts) have been studied for supplementation of IVEP media, at stages of in vitro maturation, sperm capacitation, in vitro fertilization, and in vitro development of embryos in different mammalian species. Generally, beneficial effects are observed according to the concentration used, thus demonstrating the potential of several natural antioxidants. Therefore, the main challenges in using these compounds as antioxidants during IVEP include proving their efficiency against free radicals and determining the best concentration at each stage. In addition, understanding the mechanisms of action of such antioxidants is crucial to est

A produção in vitro de embriões (PIVE) contribui para os aspectos quantitativos e qualitativos da reprodução animal. Contudo, fatores inerentes da técnica, como o estresse oxidativo, podem influenciar negativamente o resultado e isso pode prejudicar o metabolismo celular, diminuindo assim as taxas de desenvolvimento in vitro, e exigindo a suplementação do meio de cultivo com antioxidantes. Neste contexto, os compostos de origem natural com essa propriedade têm se destacado devido aos resultados positivos obtidos em diferentes estágios da PIVE. Assim, esta revisão pretende apresentar os resultados obtidos usando antioxidantes naturais para minimizar os efeitos do estresse oxidativo em gametas e embriões. Uma variedade de substâncias isoladas e de misturas naturais (óleos essenciais e extratos) tem sido estudada para a suplementação de meios de PIVE, nas etapas de maturação in vitro, capacitação espermática, fecundação in vitro e desenvolvimento in vitro de embriões em diferentes espécies de mamíferos. Geralmente, os efeitos benéficos são observados de acordo com a concentração utilizada, demostrando assim o potencial positivo de vários antioxidantes naturais. Portanto, os principais desafios para o uso desses compostos como antioxidantes durante a PIVE incluem provar sua eficiência contra os radicais livres e determinar a melhor concentração em