Sarcocystis spp. detection in cattle using different diagnostic methods / Detecção de Sarcocystis spp. em bovinos usando diferentes métodos de diagnóstico

Cattle are considered intermediate hosts of Sarcocystis, which can cause clinical signs and lower performance in the acute phase of infection. Sarcocystis spp. are usually not visible to the naked eye during the post mortem inspection. Moreover, fresh microscopic examination and transmission electron microscopy techniques are difficult to apply to large samples. Therefore, extensive studies on Sarcocystis infection in cattle using molecular and serological methods are required. Here, we investigated Sarcocystis spp. infection in cattle using fresh microscopic examination and polymerase chain reaction of myocardium samples and compared the results with the presence of antibodies against Sarcocystis spp. in corresponding serum samples detected using indirect fluorescent antibody test. Microscopic Sarcocystis were observed in 100% of the myocardial samples, and Sarcocystis DNA was present in 86% (43/50) of these samples. Antibodies against Sarcocystis spp. were detected in 96% (48/50) and 80% (40/50) of the serum samples at 1:25 and 1:200 dilutions, respectively. The three associated methods (fresh microscopic examination, PCR and serology) showed good sensitivity and detection for Sarcocystis spp. compared with fresh microscopic examination (only), and they may facilitate diagnosis in live animals on a large scale as well as monitoring of the herd status.

Os bovinos são considerados hospedeiros intermediários de Sarcocystis, podendo causar sinais clínicos e menor desempenho na fase aguda da infecção. Sarcocystis spp. geralmente não são visíveis a olho nu durante a inspeção post mortem. Além disso, o exame microscópico a fresco e as técnicas de microscopia eletrônica de transmissão são difíceis de aplicar a uma amostras de grande tamanho. Portanto, são necessários extensos estudos sobre a infecção por Sarcocystis em bovinos usando métodos moleculares e sorológicos. Aqui, investigamos a infecção de Sarcocystis spp. em bovinos por meio de exame microscópico a fresco e reação em cadeia da polimerase de amostras de miocárdio e comparado os resultados com a presença de anticorpos contra Sarcocystis spp. em amostras de soro correspondentes detectadas usando o teste de anticorpos fluorescentes indiretos. Sarcocistos microscópicos foram observados em 100% das amostras de miocárdio, e o DNA de Sarcocystis estava presente em 86% (43/50) dessas amostras. Anticorpos contra Sarcocystis spp. foram detectados em 96% (48/50) e 80% (40/50) das amostras de soro nas diluições 1:25 e 1:200, respectivamente. Os três métodos associados (exame microscópico a fresco, PCR e sorologia) mostraram boa sensibilidade e detecção para Sarcocystis spp. em comparação com o exame microscópico fresco (apenas) e podem facilitar o diagnóstico em animais vivos em larga escala, bem como o monitoramento do status do rebanho.

Molecular detection of Sarcocystis spp. in the breast muscle of captive birds from the southern region of Brazil / Detecção molecular de Sarcocystis spp. no músculo peitoral de aves de cativeiro da região sul do Brasil

Studies on diseases of wild birds are essential in the context of public health, as these animals act as sentinels, allowing information regarding a determined geographic area. In addition, birds are food protein sources for animals, and therefore play an important role in the life cycle of the protozoan Sarcocystis spp. This study aimed to identify the Sarcocystis spp. in breast muscle samples of naturally infected captive birds. The breast muscle of 89 birds were sampled, and the DNA amplified by PCR targeting the 18S ribosomal RNA gene to detect Sarcocystis spp. PCR products were sequenced and 5.61% (5/89) samples showed 100% similarity with Sarcocystis spp. (one Cyanoliseus patagonus, one Psittacula krameri, two Pyrrhura frontalis, and one Ramphastos dicolorus). The large number of naturally infected species analyzed by molecular methods allowed the detection of Sarcocystis spp. in different bird species, corroborating the epidemiology of Sarcocystis spp.

Estudos sobre doenças de aves silvestres são essenciais no contexto da saúde pública, pois esses animais atuam como sentinelas, permitindo obter informações sobre uma determinada área geográfica. Além disso, as aves são fontes de proteína alimentar para os animais e, portanto, desempenham um papel importante no ciclo de vida do Sarcocystis. Este estudo teve como objetivo identificar Sarcocystis spp. nos músculos do peito de aves de cativeiro naturalmente infectadas. Os músculos do peito de 89 aves foram coletados, e o DNA amplificado pela PCR do gene RNA ribossômico 18S para detecção de Sarcocystis spp. Os produtos da PCR foram sequenciados e 5,61% (5/89) amostras apresentaram 100% de similaridade com o Sarcocystis spp. (um Cyanoliseus patagonus, um Psittacula krameri, dois Pyrrhura frontalis e um Ramphastos dicolorus). O grande número de espécies naturalmente infectadas analisadas por métodos moleculares permitiu a detecção de Sarcocystis spp. em diferentes espécies de aves, corroborando a epidemiologia de Sarcocystis spp.

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. in species of naturally infected birds / Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. em espécies de aves naturalmente infectadas

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. are parasites detected in tissues of domestic and wild animals. Birds are relevant in the life cycle and epidemiology of protozoa due to the wide variety of bird species, feeding and migratory habits. The aim of this study was the molecular detection of T. gondii, N. caninum and Sarcocystis spp. in several species of naturally infected birds. Therefore, samples of brain and heart tissue were collected from birds received and necropsied at the Central Laboratory for the Diagnosis of Avian Pathologies (LCDPA), undergoing DNA extraction and amplification by the polymerase chain reaction (PCR) of the 18S rRNA gene to Sarcocystis spp., NC5 gene for N. caninum and repetitive gene 529 base pairs for T. gondii. N. caninum was detected in two birds (02/65, 3.07%), in a brain sample of Rupornis magnisrostris (accession number: ON182081, 267pb) and in a brain and heart sample of Dendrocygna bicolor (accession number: ON211312, 267pb). DNA of the genus Sarcocystis was detected in three birds (03/65, 4.62%), and in the genetic sequencing Sarcocystis spp. (accession number: MW463929) in brain of Nymphicus hollandicus and Sarcocystis speeri (accession number: MW464125) in brain and heart of Amazona aestiva. Phylogenetic analysis revealed that Sarcocystis spp. formed a clade with Sarcocystis spp. that use skunk (Didelphis aurita) as definitive host and Sarcocystis falcatula that use Moluccan loris (Trichoglossus moluccanus) as intermediate host. S. speeri formed a clade with S. speeri that used Mus musculus as an experimental intermediate host and formed a clade with Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti and Sarcocystis sp. that affect bird species. T. gondii DNA was not detected in any tissue. This is the first report of DNA detection of N. caninum, Sarcocystis spp. and S. speeri in tissue samples for these bird species extending the list of intermediate hosts.

Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. são parasitas detectados em tecidos de animais domésticos e selvagens. As aves são relevantes no ciclo de vida e epidemiologia dos protozoários devido à grande variedade de espécies de aves, hábitos alimentares e migratórios. O objetivo deste estudo foi a detecção molecular de T. gondii, N. caninum e Sarcocystis spp. em diversas espécies de aves naturalmente infectadas. Portanto, amostras de tecido de cérebro e coração foram coletados de aves recebidas e necropsiadas no Laboratório Central de Diagnóstico de Patologias Aviárias (LCDPA), sendo submetidas a extração de DNA e amplificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene 18S rRNA para Sarcocystis spp., gene NC5 para N. caninum e gene repetitivo 529 pares de bases para T. gondii. N. caninum foi detectado em duas aves (02/65; 3,07%), em amostra de cérebro de Rupornis magnisrostris (número acesso: ON182081, 267pb) e em amostras de cérebro e coração de Dendrocygna bicolor (número acesso: ON211312, 267pb). DNA do genero Sarcocystis spp. foi detectado em três aves (03/65; 4,62%), sendo que no sequenciamento genético foram identificados Sarcocystis spp. (número acesso: MW463929) em cérebro de Nymphicus hollandicus e Sarcocystis speeri (número acesso: MW464125) em cérebro e coração de Amazona aestiva. A análise filogenética revelou que Sarcocystis spp. formou um clado com Sarcocystis spp. que utilizam gambá (Didelphis aurita) como hospedeiro definitivo e S. falcatula que utilizam Lóris-molucano (Trichoglossus moluccanus) como hospedeiro intermediário. S. speeri formou um clado com S. speeri que utilizou Mus musculus como hospedeiro intermediário experimental e formou um clado com Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti e Sarcocystis sp. que afetam espécies de aves. O DNA de T. gondii não foi detectado em nenhum tecido. Este é o primeiro relato de detecção de DNA de N. caninum, Sarcocystis spp. e S. speeri em amostras de tecido para essas espécies de aves estendendo a lista de hospedeiros intermediários.

Occurrence of anti Sarcocystis spp., anti Toxoplasma gondii, and anti Neospora spp. antibodies in equines from western Santa Catarina, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti Sarcocytis spp., anti Toxoplasma gondii e anti Neospora spp. em equinos da região Oeste de Santa Catarina

Equine raising is generally articulated as a secondary activity on farms, where animals are used for leisure or work. Thus, it is important to consider the health of these animals, seeking to understand which are the main agents that circulate in a given farm or region. In this sense, this study aimed to evaluate the presence of IgG anti-Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii, and anti-Neospora spp. antibodies in equines in western Santa Catarina, Brazil. A total of 100 serum samples from horses from 10 farms, located in the municipalities of Faxinal dos Guedes, Xaxim, and Xanxerê were analyzed from June to December 2019. The samples were evaluated by indirect immunofluorescence reaction (IIFR) to detect antibodies of IgG class against the three agents. The results showed that the equines in the region are seropositive against the three studied agents, 11% of which for Sarcocystis spp. 21% for T. gondii, and 20% for Neospora spp. The analysis of the presence of these protozoa in different environments showed that both stabled and extensively raised horses presented signs of contact with the studied agents. Animals that live only in stables had a higher occurrence of IgG anti-Sarcocystis (7/32; 21.88%) and anti-T. gondii (11/32; 34.38%) antibodies. The evaluating of animals raised on pasture, semi-extensively and extensively, showed a higher percentage of seropositivity for N. caninum (9/34; 26.47%). The high occurrence of animals seropositive to the studied protozoa reinforces the importance of controlling and preventing these agents in the region, as they have the potential to cause a high impact on equid farming, mainly involving reproductive losses and equine protozoal myeloencephalitis (EPM).

A criação de equinos geralmente está articulada como atividade secundária nas propriedades, nas quais os animais são utilizados para lazer ou trabalho. Dessa forma é importante considerar a sanidade desses animais, buscando entender quais os principais agentes que circulam em determinada propriedade ou região. Com isso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a presença de anticorpos IgG anti- Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora spp. em equinos na região Oeste de Santa Catarina. Foram analisadas 100 amostras de soro de equinos de 10 propriedades, localizadas nos municípios de Faxinal dos Guedes, Xaxim e Xanxerê, no período de junho a dezembro de 2019. As amostras foram avaliadas por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos da classe IgG contra os três agentes. Os resultados obtidos demonstram que os equinos da região apresentam soropositividade contra os três agentes estudados, sendo 11%, para Sarcocystis spp. 21%, para T. gondii e 20 %, para Neospora spp. Na análise da presença destes protozoários em diferentes ambientes, observou-se que tanto equinos estabulados ou criados de forma extensiva ambos apresentaram já terem entrado em contato com os agentes pesquisados. Animais que vivem apenas estabulados, apresentaram maior ocorrência de anticorpos IgG anti – Sarcocystis (7/32; 21,88%) e anti-T. gondii (34.38%-11/32). Quando avaliados os animais criados a pasto, de forma semi-extensiva e extensiva, houve um percentual maior de soropositividade para N. caninum (26.47% -9/34). A alta ocorrência de animais soropositivos aos protozoários estudados reforça a importância com o controle e prevenção desses agentes na região, uma vez que estes têm potencial para causar grande impacto na equideocultura, envolvendo principalmente as perdas reprodutivas, além da mieloencefalite protozoária equina (EPM).

Occurrence and molecular characterization of Giardia duodenalis from naturally infected dogs in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p 0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.

RESUMO: A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene -giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p 0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.

Occurrence and molecular characterization of Giardia duodenalis from naturally infected dogs in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil / Ocorrência e caracterização molecular de Giardia duodenalis em cães naturalmente infectados no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil

Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (β-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p<0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.(AU)

A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene β-giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p<0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.(AU)

Occurrence of anti Sarcocystis spp., anti Toxoplasma gondii, and anti Neospora spp. antibodies in equines from western Santa Catarina, Brazil / Ocorrência de anticorpos anti Sarcocytis spp., anti Toxoplasma gondii e anti Neospora spp. em equinos da região Oeste de Santa Catarina

Equine raising is generally articulated as a secondary activity on farms, where animals are used for leisure or work. Thus, it is important to consider the health of these animals, seeking to understand which are the main agents that circulate in a given farm or region. In this sense, this study aimed to evaluate the presence of IgG anti-Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii, and anti-Neospora spp. antibodies in equines in western Santa Catarina, Brazil. A total of 100 serum samples from horses from 10 farms, located in the municipalities of Faxinal dos Guedes, Xaxim, and Xanxerê were analyzed from June to December 2019. The samples were evaluated by indirect immunofluorescence reaction (IIFR) to detect antibodies of IgG class against the three agents. The results showed that the equines in the region are seropositive against the three studied agents, 11% of which for Sarcocystis spp. 21% for T. gondii, and 20% for Neospora spp. The analysis of the presence of these protozoa in different environments showed that both stabled and extensively raised horses presented signs of contact with the studied agents. Animals that live only in stables had a higher occurrence of IgG anti-Sarcocystis (7/32; 21.88%) and anti-T. gondii (11/32; 34.38%) antibodies. The evaluating of animals raised on pasture, semi-extensively and extensively, showed a higher percentage of seropositivity for N. caninum (9/34; 26.47%). The high occurrence of animals seropositive to the studied protozoa reinforces the importance of controlling and preventing these agents in the region, as they have the potential to cause a high impact on equid farming, mainly involving reproductive losses and equine protozoal myeloencephalitis (EPM).(AU)

A criação de equinos geralmente está articulada como atividade secundária nas propriedades, nas quais os animais são utilizados para lazer ou trabalho. Dessa forma é importante considerar a sanidade desses animais, buscando entender quais os principais agentes que circulam em determinada propriedade ou região. Com isso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a presença de anticorpos IgG anti- Sarcocystis spp., anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora spp. em equinos na região Oeste de Santa Catarina. Foram analisadas 100 amostras de soro de equinos de 10 propriedades, localizadas nos municípios de Faxinal dos Guedes, Xaxim e Xanxerê, no período de junho a dezembro de 2019. As amostras foram avaliadas por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos da classe IgG contra os três agentes. Os resultados obtidos demonstram que os equinos da região apresentam soropositividade contra os três agentes estudados, sendo 11%, para Sarcocystis spp. 21%, para T. gondii e 20 %, para Neospora spp. Na análise da presença destes protozoários em diferentes ambientes, observou-se que tanto equinos estabulados ou criados de forma extensiva ambos apresentaram já terem entrado em contato com os agentes pesquisados. Animais que vivem apenas estabulados, apresentaram maior ocorrência de anticorpos IgG anti Sarcocystis (7/32; 21,88%) e anti-T. gondii (34.38%-11/32). Quando avaliados os animais criados a pasto, de forma semi-extensiva e extensiva, houve um percentual maior de soropositividade para N. caninum (26.47% -9/34). A alta ocorrência de animais soropositivos aos protozoários estudados reforça a importância com o controle e prevenção desses agentes na região, uma vez que estes têm potencial para causar grande impacto na equideocultura, envolvendo principalmente as perdas reprodutivas, além da mieloencefalite protozoária equina (EPM).(AU)

Occurrence and molecular characterization of Giardia duodenalis from naturally infected dogs in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil / Ocorrência e caracterização molecular de Giardia duodenalis em cães naturalmente infectados no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil

Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (β-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p<0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.(AU)

A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene β-giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p<0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.(AU)

Anti-Neospora caninum IgG in fetal bovine serum / Anti-Neospora caninum IgG em soro fetal bovino

Neospora caninum is an obligate intracellular protozoan, recognized as an important cause of abortion in infection cattle worldwide, and is responsible for major economic losses in beef and dairy herds. There are scarce data on the presence of antibodies in fetal serum samples from beef cattle. The pathogen is straggling mainly by vertical transmission in ruminants. This study aimed to determine the frequency of anti-N. caninum antibodies in fetal bovine serum. Overall, 751 fetal serum samples from slaughterhouses in Uruguaiana and Santo Ângelo (Rio Grande do Sul state) were used. Serologic diagnosis was made using indirect immunofluorescence assay (IFA). Slides were prepared by culturing infected Vero cells using tachyzoites of the N. caninum NC-1 strain and a serum dilution of 1:25. Of the 751 samples analyzed, 11.7% (88/751) were positive in the IFA assay. The results indicate an occurrence of neosporosis in the studied region, as well as the possibility of transplacental transmission of the protozoon, characterizing an important mechanism of propagation for the disease.(AU)

O Neospora caninum é um protozoário intracelular obrigatório, reconhecido como uma causa importante de aborto no mundo todo, e é responsável pelas maiores perdas da economia de carne e leite. Há poucos dados da presença de anticorpos em amostras de soro fetal de bovinos de corte. Os patógenos são transmitidos principalmente por transmissão vertical em ruminantes. Este estudo pode ser usado para determinar a frequência de anti-N. caninum em soro fetal bovino. Ao todo, foram utilizadas 751 amostras de soro fetal bovino de matadouros de Uruguaiana e Santo Ângelo (RS). Os diagnósticos sorológicos foram realizados utilizando ensaios de imunufluorescência indireta (IFA). As lâminas foram preparadas por cultura de células Vero infectadas utilizando taquizoítos da estirpe N. caninum NC-1 e uma diluição de soro de 1:25. Das 751 amostras analisadas, 11,7% (88/751) foram positivas para o IFA. Os resultados indicam uma ocorrência de neosporose na região estudada, bem como a possibilidade de transmissão transplacentária do protozoário, caracterizando um importante mecanismo de propagação da doença.(AU)

Performance of the Dot-blot test method for detecting antibodies to Sarcocystis spp. in cattle / Desempenho do teste Dot-blot para detecção de anticorpos para Sarcocystis spp. em bovinos

Serological techniques can detect antibodies against Sarcocystis spp., Neospora caninum and Toxoplasma gondii antigens in single or mixed infections. Immunofluorescent antibody tests (IFAT) is considered the gold standard technique for Sarcocystosis diagnostic in cattle serum and a positive IFAT result reflects Sarcocystis spp. infection. Therefore, the aims of the present study were to compare IFAT and Dot-blot for sarcocystosis diagnostic in experimentally infected mice and to investigate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii in these methods. Mice (Mus musculus) were inoculated intraperitoneally with bradizoites of Sarcocystis spp. or tachyzoites of N. caninum or T. gondii. Serum samples were obtained and analyzed by IFAT and Dot-blot for the three protozoa. Serum from N. caninum and T. gondii experimentally infected mice were tested by IFAT and reacted only to N. caninum or T. gondii antigens, respectively. Specific antibodies against Sarcocystis spp. were present in all animals experimentally infected with this protozoan, with IFAT titers from 10 to 800. Serum samples from mice experimentally infected with Sarcocystis spp., N. caninum and T. gondii and tested by Dot-blot demonstrated no cross reaction between protozoa. A Dot-blot using Sarcocystis spp. antigen appears to be a good alternative to IFAT in the serological diagnosis of Sarcocystosis.(AU)

As técnicas sorológicas podem detectar anticorpos contra os antígenos de Sarcocystis spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em infecções únicas ou mistas. O teste de anticorpos imunofluorescentes (IFAT) é considerado a técnica padrão-ouro para o diagnóstico de sarcocistose no soro de bovinos e um resultado positivo de IFAT reflete Sarcocystis spp. infecção. Portanto, os objetivos do presente estudo foram comparar IFAT e Dot-blot para diagnóstico de sarcocistose em camundongos infectados experimentalmente e investigar reações cruzadas sorológicas com N. caninum e T. gondii nesses métodos. Os camundongos (Mus musculus) foram inoculados intraperitonealmente com bradizoítos de Sarcocystis spp. ou taquizoítos de N. caninum ou T. gondii. As amostras de soro foram obtidas e analisadas por IFAT e Dot-blot para os três protozoários. O soro de N. caninum e T. gondii infectados experimentalmente foram testados por IFAT e reagiram apenas aos antígenos de N. caninum ou T. gondii, respectivamente. Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. estavam presentes em todos os animais experimentalmente infectados com este protozoário, com títulos de IFAT de 10 a 800. Amostras de soro de camundongos infectados experimentalmente com Sarcocystis spp., N. caninum e T. gondii e testadas por Dot-blot não demonstraram reação cruzada entre protozoários. Um Dot-blot usando Sarcocystis spp. O antígeno parece ser uma boa alternativa ao IFAT no diagnóstico sorológico da sarcocistose.(AU)

DNA extraction methods for molecular detection of Eimeria spp. in cattle and sheep / Métodos de extração de DNA para detecção molecular de Eimeria spp. em bovinos e ovinos

Molecular detection of Eimeria species in fecal samples can be useful for experimental and diagnostic purposes. However, the parasite quantity presence in feces and the oocyst wall are an obstacle in DNA extraction protocols. Therefore, adequate sampling and effective disruption of the oocysts are essential to improve the accuracy of DNA detection by PCR. The aims of this study were to evaluate the suitability of six protocols for DNA extraction from Eimeria spp. present in bovine and sheep. Twenty pools of fecal samples from cattle (10 pools) and sheep (10 pools) were distributed to six DNA extraction protocols: commercial kit, commercial kit with modification, DNAzol, cetyl-trimethyl ammonium bromide (CTAB), glass beads and commercial kit for fecal samples. Fecal samples were submitted to DNA extraction and PCR. Among the protocols tested, CTAB was determined to be most suitable for DNA extraction from oocysts (90% of DNA detection by PCR); DNAzol and CTAB resulted in higher DNA detection from bovine samples (80%). CTAB and commercial kit with modification improved PCR detection of Eimeria spp. in sheep samples, with positive amplification of DNA in all tested samples.(AU)

A detecção molecular de espécies de Eimeria em amostras fecais pode ser útil para fins experimentais e de diagnóstico. No entanto, a quantidade de parasitas nas fezes e a parede do oocisto são um obstáculo nos protocolos de extração de DNA. Portanto, uma amostragem adequada e a ruptura efetiva dos oocistos são essenciais para melhorar a precisão da detecção de DNA por PCR. Os objetivos deste estudo foram avaliar seis protocolos para extração de DNA de Eimeria spp. em amostras de bovinos e ovinos. Foram distribuídos 20 grupos de amostras fecais de bovinos (10 grupos) e ovinos (10 grupos) em seis protocolos de extração de DNA: kit comercial, kit comercial com modificação, DNAzol, brometo de cetil-trimetil amônio (CTAB), pérolas de vidro e kit comercial para amostras fecais. As amostras fecais foram submetidas à extração de DNA e PCR. Entre os protocolos testados, CTAB foi considerado o mais adequado para extração de DNA de oocistos (90% de detecção de DNA por PCR); DNAzol e CTAB resultaram em maior detecção de DNA em amostras de bovinos (80%). CTAB e kit comercial com modificação melhoraram a detecção por PCR de Eimeria spp. em amostras de ovinos, amplificação positiva de DNA em todas as amostras testadas.(AU)

Co-infection by Neopora caninum and bovine viral diarrhea virus in cattle from Rio Grande do Sul, Brazil, destined to exportation / Coinfecção por Neospora caninum e vírus da diarreia viral bovina em bovinos do Rio Grande do Sul, Brasil, destinados à exportação

Reproductive tests in cattle are of great economic importance, given the impact it can have on the production system and may be caused by agents. Neospora caninum and Bovine Viral Diarrhea virus (BVDV) are considered of great importance as reproductive and should be considered responsible for keeping animals persistently infected. The present study included 479 calf serum samples for export in the state of Rio Grande do Sul (RS). All samples were screened for BVDV by an ELISA antigen. BVDV antigen-positive ELISA samples were isolated from BVDV in cell culture. An indirect immunofluorescence (IFT) technique was used to detect anti-N. caninum antibodies. Of the 479 export-treated serum samples, 361 were positive for BVDV antigens by ELISA and/or viral isolation test (361/479-75.36%), and 109 IFT-positive samples for N. caninum (109/479-22.75%). Despite detection of antibodies anti-N. caninum did not differ statistically between naturally infected BVDV and non-BVDV infected animals suggesting that there is no interference of BVDV infection on infection or detection rate of animals with N. caninum, positive animals in viral isolation and high DO in BVDV-Ag ELISA. may present active disease and consequent immunosuppression, contributing to a potential reactivation of N. caninum.(AU)

Testes reprodutivos em bovinos são de grande importância econômica, dado o impacto que podem ter no sistema de produção e podem ser causados por agentes. O Neospora caninum e o vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV) são considerados de grande importância como reprodutivos e devem ser considerados responsáveis por manter os animais persistentemente infectados. O presente estudo incluiu 479 amostras de soro de bezerro para exportação no estado do Rio Grande do Sul (RS). Todas as amostras foram rastreadas para BVDV por um antígeno ELISA. As amostras de ELISA positivas para o antigénio BVDV foram isoladas a partir de BVDV em cultura de células. Uma técnica de imunofluorescência indireta (IFT) foi utilizada para detectar anticorpos anti-N caninum. Das 479 amostras de soro tratadas para exportação, 361 foram positivas para antígenos de BVDV por ELISA e/ou teste de isolamento viral (361/479-75,36%) e 109 amostras positivas para IFT para N. caninum (109/479-22,75%). Apesar da detecção de anticorpos anti-N. caninum não diferiu estatisticamente entre animais infectados naturalmente BVDV e não BVDV sugerindo que não há interferência da infecção pelo BVDV na infecção ou taxa de detecção de animais com N. caninum, animais positivos em isolamento viral e alta DO em BVDV-Ag ELISA, pode apresentar doença ativa e consequente imunossupressão, contribuindo para uma potencial reativação de N. caninum.(AU)

DNA extraction methods for molecular detection of Eimeria spp. in cattle and sheep

ABSTRACT: Molecular detection of Eimeria species in fecal samples can be useful for experimental and diagnostic purposes. However, the parasite quantity presence in feces and the oocyst wall are an obstacle in DNA extraction protocols. Therefore, adequate sampling and effective disruption of the oocysts are essential to improve the accuracy of DNA detection by PCR. The aims of this study were to evaluate the suitability of six protocols for DNA extraction from Eimeria spp. present in bovine and sheep. Twenty pools of fecal samples from cattle (10 pools) and sheep (10 pools) were distributed to six DNA extraction protocols: commercial kit, commercial kit with modification, DNAzol, cetyl-trimethyl ammonium bromide (CTAB), glass beads and commercial kit for fecal samples. Fecal samples were submitted to DNA extraction and PCR. Among the protocols tested, CTAB was determined to be most suitable for DNA extraction from oocysts (90% of DNA detection by PCR); DNAzol and CTAB resulted in higher DNA detection from bovine samples (80%). CTAB and commercial kit with modification improved PCR detection of Eimeria spp. in sheep samples, with positive amplification of DNA in all tested samples.

RESUMO: A detecção molecular de espécies de Eimeria em amostras fecais pode ser útil para fins experimentais e de diagnóstico. No entanto, a quantidade de parasitas nas fezes e a parede do oocisto são um obstáculo nos protocolos de extração de DNA. Portanto, uma amostragem adequada e a ruptura efetiva dos oocistos são essenciais para melhorar a precisão da detecção de DNA por PCR. Os objetivos deste estudo foram avaliar seis protocolos para extração de DNA de Eimeria spp. em amostras de bovinos e ovinos. Foram distribuídos 20 grupos de amostras fecais de bovinos (10 grupos) e ovinos (10 grupos) em seis protocolos de extração de DNA: kit comercial, kit comercial com modificação, DNAzol, brometo de cetil-trimetil amônio (CTAB), pérolas de vidro e kit comercial para amostras fecais. As amostras fecais foram submetidas à extração de DNA e PCR. Entre os protocolos testados, CTAB foi considerado o mais adequado para extração de DNA de oocistos (90% de detecção de DNA por PCR); DNAzol e CTAB resultaram em maior detecção de DNA em amostras de bovinos (80%). CTAB e kit comercial com modificação melhoraram a detecção por PCR de Eimeria spp. em amostras de ovinos, amplificação positiva de DNA em todas as amostras testadas.

Co-infection by Neopora caninum and bovine viral diarrhea virus in cattle from Rio Grande do Sul, Brazil, destined to exportation / Coinfecção por Neospora caninum e vírus da diarreia viral bovina em bovinos do Rio Grande do Sul, Brasil, destinados à exportação

Reproductive tests in cattle are of great economic importance, given the impact it can have on the production system and may be caused by agents. Neospora caninum and Bovine Viral Diarrhea virus (BVDV) are considered of great importance as reproductive and should be considered responsible for keeping animals persistently infected. The present study included 479 calf serum samples for export in the state of Rio Grande do Sul (RS). All samples were screened for BVDV by an ELISA antigen. BVDV antigen-positive ELISA samples were isolated from BVDV in cell culture. An indirect immunofluorescence (IFT) technique was used to detect anti-N. caninum antibodies. Of the 479 export-treated serum samples, 361 were positive for BVDV antigens by ELISA and/or viral isolation test (361/479-75.36%), and 109 IFT-positive samples for N. caninum (109/479-22.75%). Despite detection of antibodies anti-N. caninum did not differ statistically between naturally infected BVDV and non-BVDV infected animals suggesting that there is no interference of BVDV infection on infection or detection rate of animals with N. caninum, positive animals in viral isolation and high DO in BVDV-Ag ELISA. may present active disease and consequent immunosuppression, contributing to a potential reactivation of N. caninum.(AU)

Testes reprodutivos em bovinos são de grande importância econômica, dado o impacto que podem ter no sistema de produção e podem ser causados por agentes. O Neospora caninum e o vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV) são considerados de grande importância como reprodutivos e devem ser considerados responsáveis por manter os animais persistentemente infectados. O presente estudo incluiu 479 amostras de soro de bezerro para exportação no estado do Rio Grande do Sul (RS). Todas as amostras foram rastreadas para BVDV por um antígeno ELISA. As amostras de ELISA positivas para o antigénio BVDV foram isoladas a partir de BVDV em cultura de células. Uma técnica de imunofluorescência indireta (IFT) foi utilizada para detectar anticorpos anti-N caninum. Das 479 amostras de soro tratadas para exportação, 361 foram positivas para antígenos de BVDV por ELISA e/ou teste de isolamento viral (361/479-75,36%) e 109 amostras positivas para IFT para N. caninum (109/479-22,75%). Apesar da detecção de anticorpos anti-N. caninum não diferiu estatisticamente entre animais infectados naturalmente BVDV e não BVDV sugerindo que não há interferência da infecção pelo BVDV na infecção ou taxa de detecção de animais com N. caninum, animais positivos em isolamento viral e alta DO em BVDV-Ag ELISA, pode apresentar doença ativa e consequente imunossupressão, contribuindo para uma potencial reativação de N. caninum.(AU)

Performance of the Dot-blot test method for detecting antibodies to Sarcocystis spp. in cattle / Desempenho do teste Dot-blot para detecção de anticorpos para Sarcocystis spp. em bovinos

Serological techniques can detect antibodies against Sarcocystis spp., Neospora caninum and Toxoplasma gondii antigens in single or mixed infections. Immunofluorescent antibody tests (IFAT) is considered the gold standard technique for Sarcocystosis diagnostic in cattle serum and a positive IFAT result reflects Sarcocystis spp. infection. Therefore, the aims of the present study were to compare IFAT and Dot-blot for sarcocystosis diagnostic in experimentally infected mice and to investigate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii in these methods. Mice (Mus musculus) were inoculated intraperitoneally with bradizoites of Sarcocystis spp. or tachyzoites of N. caninum or T. gondii. Serum samples were obtained and analyzed by IFAT and Dot-blot for the three protozoa. Serum from N. caninum and T. gondii experimentally infected mice were tested by IFAT and reacted only to N. caninum or T. gondii antigens, respectively. Specific antibodies against Sarcocystis spp. were present in all animals experimentally infected with this protozoan, with IFAT titers from 10 to 800. Serum samples from mice experimentally infected with Sarcocystis spp., N. caninum and T. gondii and tested by Dot-blot demonstrated no cross reaction between protozoa. A Dot-blot using Sarcocystis spp. antigen appears to be a good alternative to IFAT in the serological diagnosis of Sarcocystosis.(AU)

As técnicas sorológicas podem detectar anticorpos contra os antígenos de Sarcocystis spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em infecções únicas ou mistas. O teste de anticorpos imunofluorescentes (IFAT) é considerado a técnica padrão-ouro para o diagnóstico de sarcocistose no soro de bovinos e um resultado positivo de IFAT reflete Sarcocystis spp. infecção. Portanto, os objetivos do presente estudo foram comparar IFAT e Dot-blot para diagnóstico de sarcocistose em camundongos infectados experimentalmente e investigar reações cruzadas sorológicas com N. caninum e T. gondii nesses métodos. Os camundongos (Mus musculus) foram inoculados intraperitonealmente com bradizoítos de Sarcocystis spp. ou taquizoítos de N. caninum ou T. gondii. As amostras de soro foram obtidas e analisadas por IFAT e Dot-blot para os três protozoários. O soro de N. caninum e T. gondii infectados experimentalmente foram testados por IFAT e reagiram apenas aos antígenos de N. caninum ou T. gondii, respectivamente. Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. estavam presentes em todos os animais experimentalmente infectados com este protozoário, com títulos de IFAT de 10 a 800. Amostras de soro de camundongos infectados experimentalmente com Sarcocystis spp., N. caninum e T. gondii e testadas por Dot-blot não demonstraram reação cruzada entre protozoários. Um Dot-blot usando Sarcocystis spp. O antígeno parece ser uma boa alternativa ao IFAT no diagnóstico sorológico da sarcocistose.(AU)

Detection and genetic identification of pestiviruses in Brazilian lots of fetal bovine serum collected from 2006 to 2014 / Detecção e identificação genética de pestivírus em lotes brasileiros de soro fetal bovino coletado de 2006 a 2014

The present study performed a genetic identification of pestiviruses contaminating batches of fetal bovine serum (FBS) produced in Brazil from 2006 to 2014. Seventy-three FBS lots were screened by a RT-PCR targeting the 5'untranslated region (UTR) of the pestivirus genome. Thirty-nine lots (53.4%) were positive for pestivirus RNA and one contained infectious virus. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of the 5'UTR revealed 34 lots (46.6%) containing RNA of bovine viral diarrhea virus type 1 (BVDV-1), being 23 BVDV-1a (5' UTR identity 90.8-98.7%), eight BVDV-1b (93.9-96.7%) and three BVDV-1d (96.2- 97.6%). Six lots (8.2%) contained BVDV-2 (90.3-100% UTR identity) being two BVDV-2a; three BVDV-2b and one undetermined. Four FBS batches (5.5%) were found contaminated with HoBi-like virus (98.3 to 100%). Five batches (6.8%) contained more than one pestivirus. The high frequency of contamination of FBS with pestivirus RNA reinforce the need for systematic and updated guidelines for monitoring this product to reduce the risk of contamination of biologicals and introduction of contaminating agents into free areas.(AU)

No presente estudo foi realizada a identificação genética de pestivírus contaminantes de lotes de soro fetal bovino (SFB) produzidos no Brasil de 2006 a 2014. Setenta e três lotes de SFB foram testados por RT-PCR para a região 5' não traduzida do genoma dos pestivírus. Trinta e nove lotes (53,4%) foram positivos para RNA de pestivírus e um continha vírus infeccioso. O sequenciamento de nucleotídeos e análise filogenética da região 5'UTR revelou que 34 lotes (46,6%) continham RNA do vírus da diarreia viral bovina tipo 1 (BVDV-1), sendo 23 BVDV-1a (identidade na 5' UTR de 90,8-98,7%), oito BVDV-1b (93,9 a 96,7%) e três BVDV-1d (96,2%-97,6%). Seis lotes (8,2%) continham BVDV-2 (90,3 a 100% de identidade), sendo dois BVDV-2a, três BVDV-2b e um de subgenótipo indeterminado. Quatro lotes de SFB (5,5%) estavam contaminados com o vírus HoBi-like (98,3 a 100%). Cinco lotes (6,8%) continham mais do que um pestivírus. A alta frequência de contaminação de SFB com RNA de pestivírus reforça a necessidade para diretrizes sistemáticas atualizadas para a monitoração deste produto com a finalidade de reduzir a contaminação de produtos biológicos e a introdução de agentes contaminantes em áreas livres.(AU)

Detection and genetic identification of pestiviruses in Brazilian lots of fetal bovine serum collected from 2006 to 2014 / Detecção e identificação genética de pestivírus em lotes brasileiros de soro fetal bovino coletado de 2006 a 2014

The present study performed a genetic identification of pestiviruses contaminating batches of fetal bovine serum (FBS) produced in Brazil from 2006 to 2014. Seventy-three FBS lots were screened by a RT-PCR targeting the 5'untranslated region (UTR) of the pestivirus genome. Thirty-nine lots (53.4%) were positive for pestivirus RNA and one contained infectious virus. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of the 5'UTR revealed 34 lots (46.6%) containing RNA of bovine viral diarrhea virus type 1 (BVDV-1), being 23 BVDV-1a (5' UTR identity 90.8-98.7%), eight BVDV-1b (93.9-96.7%) and three BVDV-1d (96.2- 97.6%). Six lots (8.2%) contained BVDV-2 (90.3-100% UTR identity) being two BVDV-2a; three BVDV-2b and one undetermined. Four FBS batches (5.5%) were found contaminated with HoBi-like virus (98.3 to 100%). Five batches (6.8%) contained more than one pestivirus. The high frequency of contamination of FBS with pestivirus RNA reinforce the need for systematic and updated guidelines for monitoring this product to reduce the risk of contamination of biologicals and introduction of contaminating agents into free areas.(AU)

No presente estudo foi realizada a identificação genética de pestivírus contaminantes de lotes de soro fetal bovino (SFB) produzidos no Brasil de 2006 a 2014. Setenta e três lotes de SFB foram testados por RT-PCR para a região 5' não traduzida do genoma dos pestivírus. Trinta e nove lotes (53,4%) foram positivos para RNA de pestivírus e um continha vírus infeccioso. O sequenciamento de nucleotídeos e análise filogenética da região 5'UTR revelou que 34 lotes (46,6%) continham RNA do vírus da diarreia viral bovina tipo 1 (BVDV-1), sendo 23 BVDV-1a (identidade na 5' UTR de 90,8-98,7%), oito BVDV-1b (93,9 a 96,7%) e três BVDV-1d (96,2%-97,6%). Seis lotes (8,2%) continham BVDV-2 (90,3 a 100% de identidade), sendo dois BVDV-2a, três BVDV-2b e um de subgenótipo indeterminado. Quatro lotes de SFB (5,5%) estavam contaminados com o vírus HoBi-like (98,3 a 100%). Cinco lotes (6,8%) continham mais do que um pestivírus. A alta frequência de contaminação de SFB com RNA de pestivírus reforça a necessidade para diretrizes sistemáticas atualizadas para a monitoração deste produto com a finalidade de reduzir a contaminação de produtos biológicos e a introdução de agentes contaminantes em áreas livres.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica

ABSTRACT: Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.

RESUMO: A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.