Resumo
Endophytic bacteria play an important role in agriculture by improving plant performance and adaptation against biotic and abiotic stresses. In the present study molecular methods were used for identifying Bacillus endophytic bacteria isolated from Brazilian sweet corn. SDS-PAGE of wholecell protein extract of fortytwo isolates revealed a high number of scrutinable bands. Twenty-four isolates were identified in nine different groups of duplicated bacteria and eighteen were identified as unique. Some high-accumulated polipeptides with variable length were observed in almost isolates. Partial sequencing of 16S ribosomal gene revealed that all isolates are Bacillus sp. and among thirteen isolates with similar protein profiles, two were different strains. Among the forty-two isolates identified by rDNA sequencing, Bacillus subitilis and B. pumilus were the most frequenty species (15 and 12 isolates, respectively) followed by B. licheniformes (7 isolates), B. cereus (5 isolates) and B. amiloliquefascens (3 isolates). According to present results, SDS-PAGE technique could be used as a fast and cheap first tool for identifying interspecific variation in maize endophytic bacterial collections while rDNA sequencing could be applied for analyzing intraspecific variation among isolates with similar protein profile as well as for taxonomic studies.
Bactérias endofíticas desempenham papel importante na agricultura, melhorando a performance e adaptação de plantas contra estresses bióticos e abióticos. No presente estudo, métodos moleculares foram empregados para identificar bactérias endofíticas do gênero Bacillus isoladas de cultivares de milho doce brasileiro. SDS-PAGE de extratos protéicos totais de quarenta e dois isolados revelaram elevado número de bandas escrutináveis. Vinte e quatro isolados formaram nove grupos diferentes de réplicas bactérianas e dezoito foram considerados como únicos. Entre os isolados, alguns polipeptídios, de tamanhos variados, foram altamente acumulados. Seqüenciamento parcial do gene ribosomal 16S revelou que todos os isolados pertencem ao gênero Bacillus e que, entre treze isolados com padrão protéico similar, dois eram linhagens diferentes. Entre os quarenta e dois isolados identificados por seqüenciamento de rDNA, Bacillus subtilis e B. pumilus foram mais frequentes (15 e 12 isolados, respectivamente), seguido por, B. licheniformes (7 isolados), B. cereus (5 isolados) e B. amiloliquefascens (3 isolados). Baseado nos resultados, conclui-se que a técnica de SDS-PAGE poderá ser usada como primeiro procedimento, rápido e barato, para identificar variação inter-específica em coleções de bactérias endofíticas isoladas do milho, enquanto o método de seqüenciamento de rDNA poderá ser aplicado para analisar variações intra-específica entre isolados com padões similares de proteínas e estudos de taxonomia.
Resumo
Nutrients media (Murashige & Skoog, Hoagland & Arnon and White's media) supplemented or not with sucrose and substrates (vermiculite, agar and natrosol) were tested for their effects on plant development and root colonization of micropropagated sweet potato, cv. White Star, by Glomus etunicatum Becker & Gerdemann (isolate INVAM FL S329). Addition of sucrose (3%) did not affect plant development. However, hyphal growth and root colonization were depressed. Contrasting responses to media nutrient concentration were observed for plant height, root colonization, and hyphal growth. The highest concentration of nutrients in Murashige & Skoog medium improved plant development, but this medium decreased hypha growth and inhibited root colonization. Plants growing in vermiculite substrate had higher (p£0.05) development and mycorrhizal root colonization than those growing in agar or natrosol. The results indicate that colonization of micropropagated sweet potato by arbuscular mycorrhizal fungi is affected by media composition and type of substrate.
Os meios de Murashige e Skoog, Hoagland, Arnon e White, suplementados ou não com sacorose, e tendo como substratos vermiculita, ágar ou natrosol foram utilizados para avaliar seus efeitos sobre o desenvolvimento da batata doce, c.v. White Star, e sua colonização por Glomus etunicatum Becker & Gerd. (isolado INVAM FL S329). A adição de sacorose (3%) ao meio não afetou o desenvolvimento da planta, porém reduziu o crescimento das hifas de G. etunicatum e a colonização das raízes. A concentração de nutrientes dos meios utilizados mostrou efeitos contrastantes entre altura da planta, crescimento das hifas e colonização das raízes por G. etunicatum. A alta concentração de nutrientes no meio Murashige e Skoog estimulou o crescimento das plantas, reduziu o desenvolvimento das hifas e inibiu a colonização das raízes pelo fungo micorrízico. Plantas desenvolvidas em vermiculita mostraram maior desenvolvimento e maior colonização das raízes que as desenvolvidas em agar ou natrosol. Os resultados indicam que o desenvolvimento e a colonização "in vitro" da batata doce micropropagada é afetada pela composição do meio e pelo tipo de substrato.
Resumo
The effects of P and N amendment and its interactions on spore germination, root growth and colonized root length by Glomus etunicatum Becker & Gerdemann (INVAM S329) was studied "in vitro" in RiT - DNA transformed roots of Anthylis vulneraria sub sp. Sampaiana (Kidney vetch). Three N media concentrations (5, 10 and 50 mg/l) at P constant level (2 mg/l) and three P media concentrations (2, 10 and 20 mg/l) at N constant level (5 mg/l) were utilized as a treatment. Bécard & Fortin medium was used as a basal medium for root growth and colonized root length, and water/agar (0.8%) media was the control for spore germination. Spore germination of G. etunicatum at low P level was reduced by N addition in relation to the control media, and at low N level addition of P stimulated spore germination. Total root length was stimulated by N addtion at low P level, but no significant difference (p£0.05) was observed between 10 and 50 mg/l of N. P addition at low N level media also stimulated total root growth, and a significant difference (p£0.05) was observed among P concentrations. Colonized root length by G. etunicatum increased significantly (p£0.05) with P additions at low N levels. Under low P level no significant differences was found between 10 and 50 mg/l of N. These results demonstrate that the interaction between P and N affect differently spore germination, root growth and colonized root lenght.
Os efeitos da adição de P e N e suas interações sobre a germinação de esporos, crescimento e extensão de raízes de Anthylis vulneraria sub sp. Sampaiana (Kidney vetch) RiT-DNA transformadas e colonizadas por Glomus etunicatum Becker & Gerdemann (INVAM S329) foram estudadas em condições "in vitro". Em meios com baixo nível de P (2 mg/l) foram utilizadas três concentrações de N (5, 10 e 50 mg/l) e em baixo nível de N (5 mg/l) foram utilizadas três concentrações de P (2, 10 e 20 mg/l). O meio de Bécard e Fortin foi utilizado como meio básico para o crescimento das raízes e colonização por G. etunicatum. O meio agar-água (0,8%) foi considerado como controle para a germinação dos esporos. A germinação dos esporos de Glomus etunicatum em meios com baixo nível de P foi diminuída pela adição de N em relação ao meio de controle, e em meios com baixo nível de N a adição de P estimulou a germinação dos esporos. O comprimento total das raízes foi estimulado pela adição de N em meios com baixo nível de P, mas não foi observada diferença significativa entre as concentrações de 10 e 50 mg/l de N. A adição de P em meios com baixo nível de N também estimulou o comprimento total das raízes, observando-se diferença significativa (p£0,05) no comprimento total das raízes entre as concentrações de P utilizadas. A extensão das raízes colonizadas por G. etunicatum aumentou significativamente (p£0,05) com a adição de P nos meios com baixo nível de N. Sob baixo nível de P não foi observada diferença significativa entre a adição de 10 e 50 mg/l de N. Os resultados mostram que a interação entre P e N afeta diferentemente a germinação de esporos, o crescimento das raízes e a extensão da colonização.