Evaluation of fecal smear methods for research on Cryptosporidium spp. oocysts in the feces of dairy calves / Avaliação dos métodos de esfregaço fecal para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. nas fezes de bezerros da bovinocultura de leite

The objective of this study is to compare the direct fecal smear (DFS) and centrifugal sedimentation (CS) methods in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples of dairy calves. One hundred and fourteen fecal samples were collected from calves aged up to six months from 10 dairy farms located in Palotina and Francisco Alves, Paraná, Brazil. The microscopic analysis revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in 51.75% (59/114) of the samples in both methods. In CS, 48.25% (55/114) of the samples were positive, while in DFS slides, only 6.14% (7/114) were positive. Only 4 samples were positive exclusively in DFS. To ensure that there were no false-negative results in the microscopic analysis, the 55 samples that were negative in both DFS and CS were selected for molecular analysis using the nested PCR (nPCR). Of these 55 samples, 24% (13/55) were positive and forwarded for sequencing part of the genome, which made it possible to identify C. parvum, C. bovis and C. ryanae. Besides the characterization of the Cryptosporidium species, it was possible to identify bacteria of the genus Acinetobacter interfering directly in the analyzed samples. The microscopic analysis also revealed higher sensitivity when CS was used to make the fecal smears. However, some samples that were negative in this technique had positive PCR results. Thus, molecular analysis is indicated to confirm cases of Cryptosporidium spp. Further studies are necessary to prove the specificities of the used primers since the results obtained in nPCR were positive for the protozoan but, when genetic sequencing was performed, Acinetobacter spp. was identified.(AU)

O objetivo deste trabalho foi comparar os métodos de esfregaço fecal direto (DFS) e centrífugo sedimentação (CS) para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros leiteiros. Foram coletadas 114 amostras fecais de bezerros com até seis meses de idade, provenientes de dez propriedades leiteiras localizadas nos municípios de Palotina e Francisco Alves, Paraná. Por meio da análise microscópica, foi possível observar oocistos de Cryptosporidium spp. em 51,75% (59/114) das amostras. Pelo método da CS foi identificada positividade em 48,25% (55/114) das amostras, enquanto nas lâminas pelo método do esfregaço fecal direto (DFS), apenas 6,14% (7/114) foram positivas. Somente 4 amostras foram positivas exclusivamente no método do DFS. Para assegurar que na análise microscópica não houvesse resultados falso-negativos, as 55 amostras negativas para os dois métodos de confecção de lâminas (DFS e CS) foram selecionadas para análise molecular por meio da técnica de Nested PCR. Das 55 amostras submetidas a nPCR, 24% (13/55) apresentaram-se positivas e foram encaminhadas para o sequenciamento genético de uma porção do genoma, o qual possibilitou identificar as espécies de C. parvum, C. bovis e C. ryanae. Além da caracterização das espécies de Cryptosporidium, foi possível identificar a presença de bactérias do gênero Acinetobacter interferindo diretamente nas amostras analisadas. A análise microscópica revelou maior sensibilidade quando o método de CS foi usado para a confecção dos esfregaços fecais, entretanto, amostras negativas por meio dessa metodologia apresentaram resultados positivos na nPCR. Desta forma, para a confirmação dos casos de Cryptosporidium spp., é indicado a realização da análise molecular. Novos estudos são necessários para se comprovar a especificidade dos primers utilizados, uma vez que na nPCR o resultado obtido foi positivo, porém ao realizar o sequenciamento genético houve a identificação de Acinetobacter spp.(AU)

Evaluation of different transmission routes of Cystoisospora suis in a farm using prophylactic toltrazuril / Avaliação de diferentes vias de transmissão de Cystoisospora suis em uma granja utilizando toltrazuril profilático

Coccidiosis is an enteric disease caused by protozoa, especially Cystoisospora suis which can lead to large losses in production. Its transmission occurs through different routes, mainly affecting piglets in the first weeks of life and normally progressing with diarrhea unresponsive to antibiotic therapy. The objective of this work was to evaluate, in two seasons of the year, the occurrence of C. suis in piglets and sows, the transmission routes and source of infection and the influence of the preventive use of toltrazuril on these epidemiological parameters. Two experiments were carried out, the first being in winter; under the influence of prophylactic use of toltrazuril; and the second in the summer, six months after the suspension of the prophylactic use of toltrazuril. The study included 36 sows (18 controls, 18 treated toltrazuril). The following samples were collected: rest of the sows, water from the individual drinkers in each cage, organic swabs present in the keepers' shoes, environmental swabs pre and housing, present in the cages in the rooms and accumulations of the maternity cage. As were disclosed to coproparaological and PCR exams. The presence of C. bebe ocysts is the winter and summer control following samples: sow feces (2.84%) of the winter and summer control groups (7.60%) of the winter and summer treated groups and the treated group winter and summer, rectal swabs from litters (9.03%) in the control and treated groups in winter, collected from the environment (20.22%) from all groups. Like others, they were negative for the presence of the parasite. There was no difference between the control and toltrazuril groups and no positive samples were observed in the summer. The possible route of transmission of the agent in the present work was the water from the douros. Preventive therapy with toltrazuril in farms with low infection pressure is not necessary to control C. suis.(AU)

A coccidiose é uma doença entérica, causada por protozoários, destacando o Cystoisospora suis que pode levar a grandes perdas na produção. Sua transmissão ocorre por diferentes rotas, afetando principalmente leitões nas primeiras semanas de vida e cursando normalmente com quadros de diarreia não responsivos à antibioticoterapia. O objetivo do trabalho foi avaliar, em duas estações do ano, a ocorrência de C. suis em leitões e matrizes, as vias de transmissão e fonte de infecção e a influência do uso preventivo do toltrazuril sobre estes parâmetros epidemiológicos, Dois experimentos foram realizados, sendo o primeiro no inverno; sob efeito do uso profilático do toltrazuril; e o segundo no verão, seis meses após a suspensão do uso profilático do toltrazuril. O estudo incluiu 36 porcas (18 controles, 18 tratadas com toltrazuril). As seguintes amostras foram coletadas: fezes das porcas, água dos bebedouros individuais de cada gaiola, suabes retais de cada leitegada, resíduos orgânicos presentes no calçado dos tratadores, suabes ambientais pré e pós alojamento, insetos presentes nas salas analisadas e fezes acumuladas nas gaiolas da maternidade. As amostras foram submetidas a exames coproparasitológicos e PCR. A presença de oocistos de C. suis foi detectada nas seguintes amostras: fezes das porcas (2,84%) dos grupos controle do inverno e verão, água dos bebedouros (7,60%) dos grupos tratado do inverno e verão e do grupo controle do verão, suabes retais das leitegadas (9,03%) nos grupos controle e tratado no inverno, fezes coletadas do ambiente (20,22%) de todos os grupos. As outras amostras foram negativas para a presença do parasita. Não houve diferença entre o grupo controle e tratado e não foram observadas amostras positivas no verão. A possível via de transmissão do agente no presente trabalho foi a água dos bebedouros. A terapia preventiva com toltrazuril em granjas com baixa pressão de infecção não é necessária para o controle de C. suis.(AU)