The Rv2807 target gene: a determining factor to directly detect Mycobacterium bovis from suspected bovine tuberculosis lesions / Gene alvo Rv2807: um fator determinante para detectar Mycobacterium bovis diretamente de lesões suspeitas de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis caused by Mycobacterium bovis, a species belonging to the Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) group. Direct bTB diagnosis from suggestive lesions can be performed by nested q-PCR targeting the Rv2807 gene present in the MTC group, as well as the TbD1 gene, present in M. bovis. In this context, the aim of the present study was to assess the importance of considering positive MTC results for the Rv2807 target gene obtained through the nested real time polymerase chain reaction (nested q-PCR) applied to samples obtained directly from suspected bTB lesions. A total of 174 samples of suggestive bTB caseous lesions were obtained during cattle slaughter in slaughterhouses in the state of Mato Grosso, Brazil. DNA was extracted from the lesions and nested q-PCR was performed to detect both MTC and M. bovis. Both samples positive for the Rv2807 (41/174) and TbD1 (29/174) were submitted to bacterial culturing (23/41), and the DNA of the isolates (23) was extracted and submitted again to nested q-PCR. The Rv2807 gene (MTC) was previously amplified by nested q-PCR directly from the lesions, although the TbD1 gene specific for M. bovis was not amplified previously in four of the successfully isolated samples (4/23), only following isolation, and only the Rv2807 gene was amplified before and after isolation. In conclusion, the target gene Rv2807(MTC) exhibited higher positivity in the analyzed samples compared to the TbD1 gene (M. bovis).

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, uma espécie pertencente ao grupo do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTC). O diagnóstico direto de bTB a partir de lesões sugestivas pode ser realizado por nested q-PCR visando o gene Rv2807 presente no grupo MTC, bem como o gene TbD1, presente em M. bovis. Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a importância de considerar os resultados de MTC positivos para o gene alvo Rv2807 obtidos através da reação em cadeia da polimerase nested real time (nested q-PCR) aplicada a amostras obtidas diretamente de lesões suspeitas de bTB. Um total de 174 amostras de lesões caseosas sugestivas de bTB foram obtidas durante o abate de bovinos em frigoríficos do estado de Mato Grosso, Brasil. DNA foi extraído das lesões e nested q-PCR foi realizado para detectar tanto MTC quanto M. bovis. Ambas as amostras positivas para Rv2807 (41/174) e TbD1 (29/174) foram submetidas a cultura bacteriana (23/41), e o DNA dos isolados (23) foi extraído e submetido novamente à nested q-PCR. O gene Rv2807 (MTC) foi previamente amplificado por nested q-PCR diretamente das lesões, embora o gene TbD1 específico para M. bovis não tenha sido amplificado anteriormente em quatro das amostras isoladas com sucesso (4/23), apenas após o isolamento, e apenas o gene Rv2807 foi amplificado antes e após o isolamento. Em conclusão, o gene alvo Rv2807 (MTC) apresentou maior positividade nas amostras analisadas em relação ao gene TbD1 (M. bovis).

Influência do ultrassom no crescimento de Salmonella typhimurium / Influence of ultrasound in Salmonella typhimurium growth

O ultrassom tem sido amplamente estudado na inativação de microrganismos e no processamento de alimentos. Entretanto, o efeito sobre o crescimento de bactérias ainda é pouco elucidado. O presente estudo avaliou o efeito de diferentes densidades energéticas de ultrassom (0; 0,11; 0,22 e 0,43 KJ/mL) no crescimento de Salmonella enterica serovar Typhimurium em caldo BHI. Altas densidades energéticas diminuíram (p < 0,05) a duração da fase lag e a densidade de células na fase estacionária. Entretanto, não houve diferença (p < 0,05) na velocidade de crescimento. Portanto, os resultados do presente estudo alertam para os riscos do ultrassom quando aplicado isoladamente. Assim, as aplicações desta tecnologia, isoladamente, em alimentos que suportam o crescimento de patógenos, como carne e produtos cárneos, devem ser minuciosamente avaliadas para cada tipo de produto.(AU)

Influência do ultrassom no crescimento de Salmonella typhimurium / Influence of ultrasound in Salmonella typhimurium growth

O ultrassom tem sido amplamente estudado na inativação de microrganismos e no processamento de alimentos. Entretanto, o efeito sobre o crescimento de bactérias ainda é pouco elucidado. O presente estudo avaliou o efeito de diferentes densidades energéticas de ultrassom (0; 0,11; 0,22 e 0,43 KJ/mL) no crescimento de Salmonella enterica serovar Typhimurium em caldo BHI. Altas densidades energéticas diminuíram (p < 0,05) a duração da fase lag e a densidade de células na fase estacionária. Entretanto, não houve diferença (p < 0,05) na velocidade de crescimento. Portanto, os resultados do presente estudo alertam para os riscos do ultrassom quando aplicado isoladamente. Assim, as aplicações desta tecnologia, isoladamente, em alimentos que suportam o crescimento de patógenos, como carne e produtos cárneos, devem ser minuciosamente avaliadas para cada tipo de produto.

Salmonella spp. in the fish production chain: a review

ABSTRACT: Salmonella spp is a pathogen responsible for severe foodborne infections, can be introduced into the fish production chain through inadequate handling or hygiene or contact with contaminated water, and is not a biological contaminant originally reported in fish. Fish microbiological safety is a concern for consumers, industries and regulatory agencies worldwide, since fish, an important food category in the international trade and often exported to several countries, can act as a vehicle for Salmonella transmission throughout the production chain. In addition, concerns regarding the misuse of antibiotics in aquaculture are also an issue, as a result of the increased isolation of resistant and multiresistant Salmonella serovars. In this review, we examined aspects associated with the microbiological risks of the presence of Salmonella spp. in fish and their implication in the aquaculture production chain. In addition, incidence and antimicrobial resistance data are presented, as well as strategies for Salmonella prevention and control in fish.

RESUMO: Salmonella spp. é um patógeno responsável por uma grave infecção alimentar que pode ser introduzida na cadeia do pescado, por meio da manipulação e higiene inadequada ou por contato do peixe com águas contaminadas. Essa bactéria não é contaminante natural no pescado. Por isso, a segurança microbiológica do pescado é uma preocupação dos consumidores, indústrias e das agências reguladoras em todo mundo, uma vez que o pescado é importante produto para comércio internacional de alimentos, sendo frequentemente exportados para vários países podendo ser veículador da transmissão de Salmonella em toda a cadeia produtiva. Outro aspecto preocupante é quanto ao uso inadequado de antibióticos na aquicultura, o que vem resultando no aumento do isolamento de sorovares de Salmonella resistentes e multidroga resistentes. Nesta revisão, são examinados aspectos associados ao risco microbiológico da presença de Salmonella spp. no pescado e sua implicação na cadeia produtiva da aquicultura. Dados sobre a incidência e resistência antimicrobiana e estratégias de prevenção e controle de Salmonella no pescado no Brasil e no mundo são apresentados e discutidos.

Salmonella spp. in the fish production chain: a review / Salmonella spp. na cadeia produtiva do peixe: uma revisão

Salmonella spp is a pathogen responsible for severe foodborne infections, can be introduced into the fish production chain through inadequate handling or hygiene or contact with contaminated water, and is not a biological contaminant originally reported in fish. Fish microbiological safety is a concern for consumers, industries and regulatory agencies worldwide, since fish, an important food category in the international trade and often exported to several countries, can act as a vehicle for Salmonella transmission throughout the production chain. In addition, concerns regarding the misuse of antibiotics in aquaculture are also an issue, as a result of the increased isolation of resistant and multiresistant Salmonella serovars. In this review, we examined aspects associated with the microbiological risks of the presence of Salmonella spp. in fish and their implication in the aquaculture production chain. In addition, incidence and antimicrobial resistance data are presented, as well as strategies for Salmonella prevention and control in fish.(AU)

Salmonella spp. é um patógeno responsável por uma grave infecção alimentar que pode ser introduzida na cadeia do pescado, por meio da manipulação e higiene inadequada ou por contato do peixe com águas contaminadas. Essa bactéria não é contaminante natural no pescado. Por isso, a segurança microbiológica do pescado é uma preocupação dos consumidores, indústrias e das agências reguladoras em todo mundo, uma vez que o pescado é importante produto para comércio internacional de alimentos, sendo frequentemente exportados para vários países podendo ser veículador da transmissão de Salmonella em toda a cadeia produtiva. Outro aspecto preocupante é quanto ao uso inadequado de antibióticos na aquicultura, o que vem resultando no aumento do isolamento de sorovares de Salmonella resistentes e multidroga resistentes. Nesta revisão, são examinados aspectos associados ao risco microbiológico da presença de Salmonella spp. no pescado e sua implicação na cadeia produtiva da aquicultura. Dados sobre a incidência e resistência antimicrobiana e estratégias de prevenção e controle de Salmonella no pescado no Brasil e no mundo são apresentados e discutidos.(AU)

Use of PCR for detection of bovine tuberculosis bacillus in milk of positive skin test cows / Uso da PCR para detecção de bacilo da tuberculose bovina em leite de vacas positivas ao teste cutâneo

The causative agent of bovine tuberculosis (BTB) is Mycobacterium bovis, a bacterium belonging to the M. tuberculosiscomplex (MTC). The definitive diagnosis is achieved through isolation and identification of M. bovis from clinical samples, using a combination of traditional culture and biochemical methods, which is considered the “gold standard”. This procedure is cumbersome and time-consuming. We evaluated a PCR assay for the direct detection of MTC DNA in milk of positive skin test cows, using primers that were previously tested and proven reliable to target the IS6110element. Milk previously seeded with M. bovis was used as the starting material, for standardization of the technique. The procedure involved extracting the DNA by enzymatic lysis (proteinase K and lysozyme), phenol, chloroform, isoamyl alcohol, followed by ethanol precipitation and PCR. The PCR assay allowed us to detect BTB in artificially contaminated milk, with a detection limit of 100 CFU/mL, and was also able to detect the bacillus in 50% (75/150) of the milk samples tested. This procedure could be used to assist the in vivo diagnosis of BTB, complementing sorological or microbiological tests, becoming an alternative option for epidemiological studies of BTB transmission and preventing contaminated milk from entering the food supply.(AU)

O agente causador da tuberculose bovina (BTB) é o Mycobacterium bovis, uma bactéria pertencente ao complexo M. tuberculosis (CMT). O diagnóstico definitivo é realizado através do isolamento e identificação de M. bovis em amostras clínicas, utilizando uma combinação de cultura bacteriológica e métodos bioquímicos, que são considerados como “padrão de ouro”. Entretanto, esses procedimentos são trabalhosos e demorados. No presente estudo, foi avaliado um ensaio de PCR para a detecção direta de DNA de CMT em leite de vacas positivas ao teste cutâneo, utilizando primerspreviamente testados e comprovadamente confiáveis, para amplificação da região de interesse IS6110. Leite previamen- te contaminado com M. bovis foi utilizado como material de partida para a padronização da técnica. O procedimento envolveu a extração do DNA por lise enzimática (proteinase K e lisozima), fenol, clorofórmio, álcool isoamílico, segui- do de precipitação com etanol e PCR. O ensaio de PCR detectou BTB em leite artificialmente contaminado, com um limite de detecção de 100 UFC/mL, e também foi capaz de detectar o bacilo em 50% (75/150) das amostras de leite testadas. A técnica de PCR pode ser utilizada para auxiliar o diagnóstico in vivo da BTB, além de complementar os tes- tes sorológicos ou microbiológicos, tornando-se uma alternativa para estudos epidemiológicos da transmissão de BTB, prevenindo que o leite contaminado entre na cadeia de alimentos.(AU)