Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews / Caracterização fitoquímica e atividades biológicas de Plectranthus barbatus Andrews

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-¹ and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-¹ . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-¹) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-¹). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-¹). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN-γ and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-¹ e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-¹ em 1, 10 e 100 µg.mL-¹ . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-¹) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-¹). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-¹). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-¹ inibiu significativamente as citocinas IFN-γ e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews

Abstract Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-1 and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-1 . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-1) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-1). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-1). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN- and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.

Resumo Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-1 e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-1 em 1, 10 e 100 µg.mL-1 . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-1) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-1). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-1). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-1 inibiu significativamente as citocinas IFN- e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews / Caracterização fitoquímica e atividades biológicas de Plectranthus barbatus Andrews

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-1 and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-1 . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-1) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-1). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-1). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN-γ and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-1 e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-1 em 1, 10 e 100 µg.mL-1 . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-1) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-1). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-1). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-1 inibiu significativamente as citocinas IFN-γ e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.

Viability of fibroblasts from "Curraleiro Pé Duro" cattle after different cryopreservation protocols / Viabilidade de fibroblastos de bovinos da raça Curraleiro Pé Duro submetidos a diferentes protocolos de criopreservação

A raça tropicalmente adaptada Curraleiro Pé Duro (CPD) possui grande rusticidade e capacidade de produção. A técnica de criopreservação de células somáticas permite estocar, por tempo indeterminado, o material genético. O objetivo deste trabalho é avaliar a viabilidade de fibroblastos, pós-criopreservação, em protocolos diferentes. Foi utilizada uma biópsia auricular de um bovino CPD, que passou por antissepsia e anestesia local. Posteriormente o material foi processado e incubado para ser observado quanto à confluência e à morfologia. Em seguida, os fibroblastos foram criopreservados em três tratamentos (T1, T2 e T3). Após serem criopreservados, foram descongelados e analisados quanto à viabilidade celular, à capacidade de crescimento e à morfologia. Na análise de variância e das médias, foram comparados pelo teste de Tukey com significância de 5%. Não foram observadas, nos protocolos, diferenças estatísticas entre a viabilidade celular (T1 = 67,98%, T2 = 71,42% e T3 = 69,93%), a capacidade de confluência (T1 = 80%, T2 = 90%, T3 = 85%) ou a passagem de origem das células. A criopreservação de fibroblastos auriculares de bovinos CPD não mostrou diferença entre os três métodos, sugerindo até que o método que demanda equipamentos menos especializados (T1) é tão eficiente quanto os demais.

Phytochemical characterization and biological activities of Plectranthus barbatus Andrews / Caracterização fitoquímica e atividades biológicas de Plectranthus barbatus Andrews

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) is widely distributed in the world and has a range of popular therapeutic indications. This work aimed to evaluate the phytochemical characterization of two leaf extracts of P. barbatus, and their antimicrobial, antineoplastic and immunomodulatory potential. After collection, herborization and obtainment of the P. barbatus aqueous extract (PBA) and acetone:water 7:3 P. barbatus organic extract (PBO), the phytochemical characterization was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antimicrobial activity was performed to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against eight bacterial strains using the microdilution test and the fungus Trichophyton rubrum by disc diffusion assay and microdilution test. Cytotoxicity was assessed by MTT and trypan blue methods in normal peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) at concentrations ranged between 0.1 to 100 µg.mL-¹ and in neoplastic cell lines Toledo, K562, DU-145 and PANC-1 at 1, 10 and 100 µg.mL-¹ . Immunomodulatory activity, was evaluated by sandwich ELISA of proinflammatory cytokines at BALB/c mice splenocytes cultures supernatant. Both extracts presented flavonoids, cinnamic derivatives, steroids and ellagic acid. PBO showed bacteriostatic activity against Acinetobacter baumannii (MIC = 250 µg.mL-¹) clinical isolate and PBA fungistatic activity against Trichophyton rubrum (MIC = 800 µg.mL-¹). The extracts did not exhibit toxicity to PBMCs and neoplastic cells (IC50 > 100 µg.mL-¹). Additionally, PBO at 100 µg.mL-1 significantly inhibited IFN-γ and IL-17A cytokines (p = 0.03). Plectranthus barbatus is a potential candidate for therapeutic use due to its low toxicity in healthy human cells and exhibits biological activities of medical interest as bacteriostatic, fungistatic and immunomodulatory.(AU)

Plectranthus barbatus Andrews (Lamiaceae) é amplamente distribuída no mundo e com uma série de indicações terapêuticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a caracterização fitoquímica de dois extratos da folha de P. barbatus e seu potencial antimicrobiano, antineoplásico e imunomodulador. Após coleta, herborização e obtenção do extrato aquoso (PBA) e acetona: água 7: 3 (orgânico) (PBO) de P. barbatus, a caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi realizada para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) contra oito cepas bacterianas usando o teste de microdiluição e o fungo Trichophyton rubrum por ensaio de difusão em disco e teste de microdiluição. A citotoxicidade foi avaliada por métodos MTT e azul de tripan em células normais mononucleares do sangue periférico (CMSP) em concentrações variadas entre 0,1 a 100 µg.mL-¹ e nas linhagens celulares neoplásicas Toledo, K562, DU-145 e PANC-¹ em 1, 10 e 100 µg.mL-¹ . A atividade imunomoduladora foi avaliada por ELISA sanduíche de citocinas pró-inflamatórias em sobrenadante de culturas de esplenócitos de camundongos BALB/c. Ambos os extratos apresentaram flavonoides, derivados cinâmicos, esteróides e ácido elágico. O PBO mostrou atividade bacteriostática contra Acinetobacter baumannii (CIM = 250 µg.mL-¹) e atividade fungistática do PBA contra Trichophyton rubrum (CIM = 800 µg.mL-¹). Os extratos não apresentaram toxicidade para CMSP e células neoplásicas (IC50 > 100 µg.mL-¹). Além disso, o PBO a 100 µg.mL-¹ inibiu significativamente as citocinas IFN-γ e IL-17A (p = 0,03). Plectranthus barbatus é um candidato potencial para uso terapêutico devido à sua baixa toxicidade em células humanas saudáveis e exibe atividade de interesse médico como bacteriostática, fungistática e imunomoduladora.(AU)

Efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) na produção in vivo e na maturação in vitro de oócitos bovinos da raça Sindi / Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the in vivo production and in vitro maturation of bovine oocytes of the Sindi breed

A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, a produção e a maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, divididas em três grupos, receberam um dispositivo de progesterona intravaginal, estradiol e PGF2α, além de 2mL de solução salina (grupo controle), 250 (grupo rbST 250) ou 500mg de rbST (grupo rbST 500). Cinco dias depois, realizou-se a ovum pick up, e os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados, classificados e maturados in vitro. Os dados de contagem foram comparados pelo procedimento glht (General Linear Hypothesis Test), e os dados em porcentagem foram submetidos ao qui-quadrado, no programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto à quantidade de folículos e à taxa de maturação. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram significativamente superiores (P<0,05) ao grupo controle em relação ao número de folículos grandes (0,42±0,20 vs. 0). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes, e 500mg de rbST aumentam a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi.(AU)

In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, production, and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindhi cows were divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device, estradiol and PGF2α, and 2mL of solution saline (Control Group), 250 (rbST 250 Group) or 500mg rbST (rbST 500 Group). Five days later, the ovum pick up was performed, and the cumulus-oocyte (CCO) complexes recovered were selected, classified, and matured in vitro. The counting data were compared by the glht (General Linear Hypothesis Test) procedure, and the percentage data were submitted to Qui- square, in the statistical program R, where differences were considered significant when P< 0.05. There was no difference (P> 0.05) between the groups regarding follicle quantity and maturation rate. The rbST 250 and rbST 500 groups were significantly higher (P< 0.05) than the Control group in relation to the number of large follicles (0.42±0.20 versus 0). The rbST 500 group presented higher (P< 0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. rbST increases the number of large follicles and 500mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindhi cows.(AU)

Efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) na produção in vivo e na maturação in vitro de oócitos bovinos da raça Sindi / Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the in vivo production and in vitro maturation of bovine oocytes of the Sindi breed

A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, a produção e a maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, divididas em três grupos, receberam um dispositivo de progesterona intravaginal, estradiol e PGF2α, além de 2mL de solução salina (grupo controle), 250 (grupo rbST 250) ou 500mg de rbST (grupo rbST 500). Cinco dias depois, realizou-se a ovum pick up, e os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados, classificados e maturados in vitro. Os dados de contagem foram comparados pelo procedimento glht (General Linear Hypothesis Test), e os dados em porcentagem foram submetidos ao qui-quadrado, no programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto à quantidade de folículos e à taxa de maturação. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram significativamente superiores (P<0,05) ao grupo controle em relação ao número de folículos grandes (0,42±0,20 vs. 0). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes, e 500mg de rbST aumentam a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi.(AU)

In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, production, and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindhi cows were divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device, estradiol and PGF2α, and 2mL of solution saline (Control Group), 250 (rbST 250 Group) or 500mg rbST (rbST 500 Group). Five days later, the ovum pick up was performed, and the cumulus-oocyte (CCO) complexes recovered were selected, classified, and matured in vitro. The counting data were compared by the glht (General Linear Hypothesis Test) procedure, and the percentage data were submitted to Qui- square, in the statistical program R, where differences were considered significant when P< 0.05. There was no difference (P> 0.05) between the groups regarding follicle quantity and maturation rate. The rbST 250 and rbST 500 groups were significantly higher (P< 0.05) than the Control group in relation to the number of large follicles (0.42±0.20 versus 0). The rbST 500 group presented higher (P< 0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. rbST increases the number of large follicles and 500mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindhi cows.(AU)

Rapid assessment of the orchid bee fauna (Hymenoptera: Apidae: Euglossini) in the vicinity of an urban Atlantic Forest remnant in São Paulo, Brazil

Euglossini (Hymenoptera: Apidae, Apini), also known as orchid bees, are endemic to the Neotropical region (Nemésio and Rasmussem, 2011). They are well-known and widely distributed taxon in the Atlantic Forest with more than 60 species (included in four distinct genera) registered in this biome (Nemésio, 2009; Garraffoni et al., 2017). The Atlantic Rain Forest originally occupied about 15% of the Brazilian territory, but it was completely fragmented in forest remnants, and now covers 11-16% of its original area (Ribeiro et al., 2009; Joly et al., 2014). Our knowledge about orchid bee diversity in urban forest fragments is very scarce (Nemésio and Silveira, 2007; Cordeiro et al., 2013), although diverse communities of wild bees have been surprisingly found in cities around the world (Nemésio and Silveira, 2007; Burr et al., 2016). Thus, our aim in this study was a rapid assessment of the orchid bee fauna in the vicinity of an Atlantic Forest remain. The strategy of intensive sampling over a few days in the rainy season are common and has been demonstrated to be very useful to know the orchid bee fauna of an area (Nemésio, 2013a, b). Data were collected in an urban area (22º4940”S-47º0610”W; altitude 630 m), among fruit and ornamental trees, distant 200 m of the east edge of an Atlantic Forest remnant called Santa Genebra Forest (Campinas, SP), the second larger urban forest in Brazil (252 ha). It is a semideciduous forest and the regional climate is the Cfa of Köppen (humid subtropical with a hot summer). Orchid bee males were collected at a fixed site using seven bait traps as described in Viotti et al. (2013), and bottles of 0.5 L. Each trap received one of the seven baits: 1,8-cineole, eugenol, vanillin, β-ionone, benzyl acetate, methyl trans-cinnamate, and methyl salicylate; and were randomly hanged in shaded branches at about 1.5 m above the ground and distant at least 2 m from each other. The collections were done during five consecutive days (from day 6th to 10th) in February of both 2015 and 2016, from 9:00 to 17:00 h (when the bees are most active). The scents were replaced every day, and cineole three times a day. Captured bees were pinned, identified and deposited at Coleção de Abelhas da Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Taxonomic decisions were based on Moure's Bee Catalogue (Moure et al., 2012). Species accumulation curves were constructed for the data set from each sampling year separately or for both years jointly. Sampling efficiency was also evaluated by nonparametric richness estimators (Chao 1, Chao 2, Jackknife 1, Jackknife 2, and Bootstrap) available in the EstimateS 9.1.0 software (Colwell, 2006).(AU)

Efeito do óleo essencial do Croton nepetifolius Baill na penetração cervical em ovelhas mestiças de Dorper e Santa Inês / Effect of the essential oil of Croton nepetifolius Baill on cervical penetration in crossbred Dorper and Santa Inês ewes

A fim de se avaliar o uso do óleo essencial de Croton nepetifolius Baill (OECn) na penetrabilidade cervical em ovelhas mestiças, 40 ovelhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos (n=10): controle, misoprostol, OECn50 e OECn100 (50 e 100µg do OECn, respectivamente). Após a sincronização do estro, utilizando CIDR e eCG (200UI), a profundidade de penetração da cérvix foi mensurada utilizando-se uma pipeta de inseminação artificial de bovino graduada, no período de zero até 72h após a retirada do CIDR. Os resultados foram expressos em média ± erro-padrão, submetidos à ANOVA seguida do teste de Tukey, enquanto os dados, em porcentagem, foram submetidos aos testes de Fisher ouqui-quadrado. Nenhuma diferença significativa (P>0,05) foi encontrada quanto ao grau de penetrabilidade cervical. Quanto ao tempo de passagem, os grupos misoprostol e OECn100 apresentaram um menor tempo de penetrabilidade às 60h(1,7±0,6 e 1,5±0,6min, respectivamente), quando comparados ao grupo controle (4,1±0,6min), que não diferiu significativamente do grupo OECn50 (2,3±0,6min). Portanto, o óleo essencial de Croton nepetifolius Baill pode ser utilizado para encurtar o tempo de penetrabilidade cervical em ovelhas submetidas à sincronização estral.(AU)

In order to evaluate the use of the essential oil of Croton nepetifolius Baill (EOCn) on cervical penetration in crossbred ewes, 40 ewes were randomly allocated into four groups (n= 10): CONTROL, MISOPROSTOL, EOCn50 and EOCn100 (50 e 100µg of the EOCn, respectively). After estrus synchronization, using CIDR and eCG (200IU), depth of cervical penetration was measured using artificial insemination gun for bovine species which was graduated and used from 0 to 72h after CIDR removal. Results were expressed as mean ± standard error mean, submitted to ANOVA and Tukey test while data in percentage were submitted to Fisher or Chi-Square test. No significant difference (P> 0.05) was observed at grade of cervical penetration. Concerning trespassing time, MISOPROTOL and EOCn100 groups presented a lower trespassing time at 60h (1.7±0.6 and 1.5±0.6min, respectively) than CONTROL group (4.1±0.6min), which did not differ significantly from EOCn50 (2.3±0.6min) group. Therefore, the essential oil of Croton nepetifolius Baill can be used to shorten the cervical penetration time in estrus synchronized ewes.(AU)

Efeito do óleo essencial do Croton nepetifolius Baill na penetração cervical em ovelhas mestiças de Dorper e Santa Inês / Effect of the essential oil of Croton nepetifolius Baill on cervical penetration in crossbred Dorper and Santa Inês ewes

A fim de se avaliar o uso do óleo essencial de Croton nepetifolius Baill (OECn) na penetrabilidade cervical em ovelhas mestiças, 40 ovelhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos (n=10): controle, misoprostol, OECn50 e OECn100 (50 e 100µg do OECn, respectivamente). Após a sincronização do estro, utilizando CIDR e eCG (200UI), a profundidade de penetração da cérvix foi mensurada utilizando-se uma pipeta de inseminação artificial de bovino graduada, no período de zero até 72h após a retirada do CIDR. Os resultados foram expressos em média ± erro-padrão, submetidos à ANOVA seguida do teste de Tukey, enquanto os dados, em porcentagem, foram submetidos aos testes de Fisher ouqui-quadrado. Nenhuma diferença significativa (P>0,05) foi encontrada quanto ao grau de penetrabilidade cervical. Quanto ao tempo de passagem, os grupos misoprostol e OECn100 apresentaram um menor tempo de penetrabilidade às 60h(1,7±0,6 e 1,5±0,6min, respectivamente), quando comparados ao grupo controle (4,1±0,6min), que não diferiu significativamente do grupo OECn50 (2,3±0,6min). Portanto, o óleo essencial de Croton nepetifolius Baill pode ser utilizado para encurtar o tempo de penetrabilidade cervical em ovelhas submetidas à sincronização estral.(AU)

In order to evaluate the use of the essential oil of Croton nepetifolius Baill (EOCn) on cervical penetration in crossbred ewes, 40 ewes were randomly allocated into four groups (n= 10): CONTROL, MISOPROSTOL, EOCn50 and EOCn100 (50 e 100µg of the EOCn, respectively). After estrus synchronization, using CIDR and eCG (200IU), depth of cervical penetration was measured using artificial insemination gun for bovine species which was graduated and used from 0 to 72h after CIDR removal. Results were expressed as mean ± standard error mean, submitted to ANOVA and Tukey test while data in percentage were submitted to Fisher or Chi-Square test. No significant difference (P> 0.05) was observed at grade of cervical penetration. Concerning trespassing time, MISOPROTOL and EOCn100 groups presented a lower trespassing time at 60h (1.7±0.6 and 1.5±0.6min, respectively) than CONTROL group (4.1±0.6min), which did not differ significantly from EOCn50 (2.3±0.6min) group. Therefore, the essential oil of Croton nepetifolius Baill can be used to shorten the cervical penetration time in estrus synchronized ewes.(AU)

Seroprevalence of Rickettsia rickettsii and Rickettsia parkeri in dogs during a Brazilian Spotted Fever outbreak in the State of Rio de Janeiro / Soroprevalência de Rickettsia rickettsii e Rickettsia parkeri em cães durante um surto de Febre Maculosa Brasileira no Estado do Rio de Janeiro

The present paper is the first to perform this evaluation in dogs from the cities of Natividade, Porciuncula and Varre-Sai. The aim of this study is to search for Spotted Fever Group Rickettsia in canine sera using indirect immunofluorescence assay and to identify the probable causative agent of sera reactions in animals. Of the 253 sampled canines, 67.59% (171/253) were seroreactive for Rickettsia rickettsii and 11.07% (28/253) for Rickettsia parkeri, both in dilution 1:64. Titration of tested sera against R. rickettsii antigens reached 1:131.072 and, for R. parkeri, 1:4.096. We conclude that dogs are important sentinels for R. rickettsii infection, and can be infected regardless of sex, age, the habit of visiting woodlands or being in direct contact with equines and capybaras. Serological diagnosis has highlighted many dogs infected by R. rickettsii, and ambient conditions, such as the presence of flowing water bodies, was important for the occurrence of Brazilian Spotted Fever in the northwestern of Rio de Janeiro State.(AU)

O presente trabalho é o primeiro a ser realizado com cães nos municípios de Natividade, Porciúncula e Varre-Sai e tem por objetivo pesquisar Rickettsias do Grupo da Febre Maculosa em soros de cães, por meio da reação de imunofluorescência indireta, e identificar o provável agente causador da reação sorológica nos animais. Dos caninos amostrados, 67,59% (171/253) foram sororreativos para Rickettsia rickettsii e 11,07% (28/253) para Rickettsia parkeri, ambos em diluição de 1:64. A titulação dos soros testados contra antígenos de R. rickettsii chegou a 1:131.072, e para R. parkeri, 1:4.096. Conclui-se que cães são importantes sentinelas para a infecção por R. rickettsii, independente de sexo, idade, hábito de visitar ambientes florestais ou de estarem em contato direto com equinos e capivaras. O diagnóstico sorológico permitiu evidenciar muitos cães infectados por R. rickettsii, e condições ambientais, como a presença de áreas ribeirinhas, foram importantes para a ocorrência de Febre Maculosa Brasileira na região noroeste do Estado do Rio de Janeiro.(AU)

Seroprevalence of Rickettsia rickettsii and Rickettsia parkeri in dogs during a Brazilian Spotted Fever outbreak in the State of Rio de Janeiro / Soroprevalência de Rickettsia rickettsii e Rickettsia parkeri em cães durante um surto de Febre Maculosa Brasileira no Estado do Rio de Janeiro

The present paper is the first to perform this evaluation in dogs from the cities of Natividade, Porciuncula and Varre-Sai. The aim of this study is to search for Spotted Fever Group Rickettsia in canine sera using indirect immunofluorescence assay and to identify the probable causative agent of sera reactions in animals. Of the 253 sampled canines, 67.59% (171/253) were seroreactive for Rickettsia rickettsii and 11.07% (28/253) for Rickettsia parkeri, both in dilution 1:64. Titration of tested sera against R. rickettsii antigens reached 1:131.072 and, for R. parkeri, 1:4.096. We conclude that dogs are important sentinels for R. rickettsii infection, and can be infected regardless of sex, age, the habit of visiting woodlands or being in direct contact with equines and capybaras. Serological diagnosis has highlighted many dogs infected by R. rickettsii, and ambient conditions, such as the presence of flowing water bodies, was important for the occurrence of Brazilian Spotted Fever in the northwestern of Rio de Janeiro State.(AU)

O presente trabalho é o primeiro a ser realizado com cães nos municípios de Natividade, Porciúncula e Varre-Sai e tem por objetivo pesquisar Rickettsias do Grupo da Febre Maculosa em soros de cães, por meio da reação de imunofluorescência indireta, e identificar o provável agente causador da reação sorológica nos animais. Dos caninos amostrados, 67,59% (171/253) foram sororreativos para Rickettsia rickettsii e 11,07% (28/253) para Rickettsia parkeri, ambos em diluição de 1:64. A titulação dos soros testados contra antígenos de R. rickettsii chegou a 1:131.072, e para R. parkeri, 1:4.096. Conclui-se que cães são importantes sentinelas para a infecção por R. rickettsii, independente de sexo, idade, hábito de visitar ambientes florestais ou de estarem em contato direto com equinos e capivaras. O diagnóstico sorológico permitiu evidenciar muitos cães infectados por R. rickettsii, e condições ambientais, como a presença de áreas ribeirinhas, foram importantes para a ocorrência de Febre Maculosa Brasileira na região noroeste do Estado do Rio de Janeiro.(AU)

Relação zinco cobre em dietas de codornas japonesas em postura / Zinc copper ratio of Japanese quails diets posture

Objetivou-se verificar o efeito da suplementação de diferentes relações de zinco orgânico e de cobre inorgânico, bem como comparar os resultados com a dieta controle de codornas japonesas, sobre o desempenho produtivo e a qualidade dos ovos. Foram realizados dois experimentos na área experimental da Universidade Federal do Espírito Santo: variando os níveis de zinco orgânico e mantendo os de cobre recomendados e outro variando os níveis de cobre inorgânico. O período experimental foi de 84 dias, divididos em períodos de 21 dias. Foram usadas cinco pré-misturas minerais. Foram analisadas variáveis de desempenho e qualidade dos ovos. Foi observado primeiramente que as variáveis avaliadas não foram afetadas de forma significativa pelas diferentes relações dos minerais, exceto para pesos relativo e absoluto da casca. No segundo ensaio, não houve interação entre os níveis de zinco e de cobre nem entre estes e a dieta controle, para nenhuma das variáveis observadas; quando analisadas as médias individuais, foi observada diferença significativa para taxa de postura, relação ovos comerciais e totais, consumo de ração e na unidade Haugh. Pode-se concluir que a relação de 35mg/kg de zinco orgânico e a de 3,5mg/kg de cobre inorgânico atenderam as necessidades nutricionais dos animais para desempenho e qualidade de ovos.(AU)

The objective of this study was to verify the effect of the supplementation of different organic zinc and inorganic copper ratios and to compare the results with the Japanese quail control diet on the productive performance and egg quality. Two experiments were carried out in the experimental area of the Federal University of Espírito Santo, varying the levels of organic zinc and maintaining the recommended copper and the other varying levels of inorganic copper. The experimental period was 84 days. Five mineral premixes were used. Performance and egg quality variables were analyzed. It was first observed that the evaluated variables were not affected significantly by the different mineral relations, except for relative and absolute weight of the bark. In the second test, there was no interaction between the zinc and copper levels, neither between the control and the control diet, for any of the variables observed, when analyzing the individual means, a significant difference was observed for posture rate, commercial and total eggs ratio, feed intake, and in the Haugh Unit. It can be concluded that the ratio of 35mg/kg organic zinc and 3,5mg/kg of inorganic copper met the nutritional requirements of the animals for performance and egg quality.(AU)

Relação zinco cobre em dietas de codornas japonesas em postura / Zinc copper ratio of Japanese quails diets posture

Objetivou-se verificar o efeito da suplementação de diferentes relações de zinco orgânico e de cobre inorgânico, bem como comparar os resultados com a dieta controle de codornas japonesas, sobre o desempenho produtivo e a qualidade dos ovos. Foram realizados dois experimentos na área experimental da Universidade Federal do Espírito Santo: variando os níveis de zinco orgânico e mantendo os de cobre recomendados e outro variando os níveis de cobre inorgânico. O período experimental foi de 84 dias, divididos em períodos de 21 dias. Foram usadas cinco pré-misturas minerais. Foram analisadas variáveis de desempenho e qualidade dos ovos. Foi observado primeiramente que as variáveis avaliadas não foram afetadas de forma significativa pelas diferentes relações dos minerais, exceto para pesos relativo e absoluto da casca. No segundo ensaio, não houve interação entre os níveis de zinco e de cobre nem entre estes e a dieta controle, para nenhuma das variáveis observadas; quando analisadas as médias individuais, foi observada diferença significativa para taxa de postura, relação ovos comerciais e totais, consumo de ração e na unidade Haugh. Pode-se concluir que a relação de 35mg/kg de zinco orgânico e a de 3,5mg/kg de cobre inorgânico atenderam as necessidades nutricionais dos animais para desempenho e qualidade de ovos.(AU)

The objective of this study was to verify the effect of the supplementation of different organic zinc and inorganic copper ratios and to compare the results with the Japanese quail control diet on the productive performance and egg quality. Two experiments were carried out in the experimental area of the Federal University of Espírito Santo, varying the levels of organic zinc and maintaining the recommended copper and the other varying levels of inorganic copper. The experimental period was 84 days. Five mineral premixes were used. Performance and egg quality variables were analyzed. It was first observed that the evaluated variables were not affected significantly by the different mineral relations, except for relative and absolute weight of the bark. In the second test, there was no interaction between the zinc and copper levels, neither between the control and the control diet, for any of the variables observed, when analyzing the individual means, a significant difference was observed for posture rate, commercial and total eggs ratio, feed intake, and in the Haugh Unit. It can be concluded that the ratio of 35mg/kg organic zinc and 3,5mg/kg of inorganic copper met the nutritional requirements of the animals for performance and egg quality.(AU)

Reproductive efficiency of adult and prepubertal goats subjected to repeated follicular aspiration / Eficiência reprodutiva em cabras adultas e pré-púberes após repetidas sessões de aspiração folicular

The objective of this study was to assess the reproductive response of adult and prepubertal goats subjected to repeated laparoscopic ovum pick-up (LOPU). The study animals were divided into two groups, specifically, adult nanny goats (GA, n=10) and prepubertal nanny goats (GP, n=10), which were subjected to estrous synchronization and ovarian stimulation for LOPU. Both groups underwent six LOPU procedures at seven-day intervals and were subsequently subjected to controlled mating and pregnancy diagnosis to evaluate their future fertility. The study showed a reduction in the number of follicles visualized and in the amount and quality of the oocytes that were recovered and exposed to in vitro maturation. As indicated by the fertility test, however, no complications were found during the laparoscopic procedures that would impair the reproductive future of the animals. Therefore, a viable number of oocytes were obtained even with the decreased reproductive efficiency, proving that repeated LOPUs do not interfere with the reproductive of adult and prepubertal nanny goats. These results indicate a positive aspect of this procedure, allowing for increasing reproductive performance of this kind, when used for the production in vitro.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta reprodutiva de cabras adultas e pré-púberes submetidas a repetidas aspirações foliculares por videolaparoscopia (LOPU). Os animais do estudo foram divididos em dois grupos, especificamente cabras adultas (GA, n = 10) e pré-púberes (GP, n = 10), que foram submetidas a sincronização de estro e estimulação ovariana para LOPU. Ambos os grupos foram submetidos a seis procedimentos LOPU em intervalos de sete dias e foram posteriormente submetidos à monta controlada e posterior diagnóstico de gestação para avaliar sua fertilidade. O estudo mostrou uma diminuição do número de folículos visualizados, na quantidade e na qualidade dos oócitos que foram recuperados e expostos à maturação in vitro. Tal como indicado pelo teste de fertilidade, no entanto, não foram observadas grandes complicações durante os procedimentos laparoscópicos que pudessem prejudicar o futuro reprodutivo dos animais. Portanto, foi obtido um número de oócitos viáveis, mesmo com a diminuição da eficiência reprodutiva, provando que repetidas LOPU não interferem na reprodutividade de animais adultos e pré-púberes. Estes resultados indicam um aspecto positivo desse procedimento, possibilitando um aumento da eficiência reprodutiva dessa espécie quando utilizado para a produção in vitro.(AU)

Evaluation of apoptosis as a mechanism of follicular cell atresia in the ovaries of cattle (bos indicus) and buffalo (bubalus bubalis) fetuses

The objective of this study was to investigate the occurrence of apoptosis in the ovaries of cattle and buffalo fetuses between 4 and 8 months old by the terminal deoxynucleotidyltransferase - mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay . Histological analysis of the ovarian t issue showed that apoptosis occurred at all ages evaluated , presenting a similar pattern among different fetal stages in both species . Within species, secondary follicles displayed a higher (P 0.05) of apoptotic follicular cells among the three follicular classes compared . C omparing resul ts between species, secondary follicles had a higher (P < 0.05) mean number of TUN EL positive cells in bovine fetuses; however , this difference was proportional to the larger number of follicular cells present in secondary follicles in this species . In summary, the TUNEL method was effective for the detection of apoptosis in the support ing cells of ovarian follicles from bovine and buffalo fetuses with apoptosis occurring at similar rates in both species between 4 and 8 months of gestational age. Further studies are needed to better understand the dynamics of apoptosis as a regulator of follicular atresia in fetal ovaries from these species, as well as the potential involvement of the oocyte in this process.

Evaluation of apoptosis as a mechanism of follicular cell atresia in the ovaries of cattle (bos indicus) and buffalo (bubalus bubalis) fetuses

The objective of this study was to investigate the occurrence of apoptosis in the ovaries of cattle and buffalo fetuses between 4 and 8 months old by the terminal deoxynucleotidyltransferase - mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay . Histological analysis of the ovarian t issue showed that apoptosis occurred at all ages evaluated , presenting a similar pattern among different fetal stages in both species . Within species, secondary follicles displayed a higher (P < 0.05) mean number of apoptotic follicular cells than primordi al or primary follicles in cattle . In buffalo there was a similar number (P > 0.05) of apoptotic follicular cells among the three follicular classes compared . C omparing resul ts between species, secondary follicles had a higher (P < 0.05) mean number of TUN EL positive cells in bovine fetuses; however , this difference was proportional to the larger number of follicular cells present in secondary follicles in this species . In summary, the TUNEL method was effective for the detection of apoptosis in the support ing cells of ovarian follicles from bovine and buffalo fetuses with apoptosis occurring at similar rates in both species between 4 and 8 months of gestational age. Further studies are needed to better understand the dynamics of apoptosis as a regulator of follicular atresia in fetal ovaries from these species, as well as the potential involvement of the oocyte in this process.(AU)