Low density lipoproteins added to an extender frozen or lyophilized are evenly efficient in cryoprotecting ovine sperm cells than when 16% whole egg yolk was added / Lipoproteínas de baixa densidade em meio diluidor congelado ou liofilizado exerce o mesmo efeito crioprotetor aos espermatozoides ovinos que meio contendo 16% de gema de ovo

The aim of this study was to test different concentrations of low density lipoprotein (LDL) in replacement of whole egg yolk in extenders preserved in the aqueous or lyophilized form, for ram sperm cryopreservation using two cooling curves (-40C/min from 5 to 140C and nitrogen vapor). One ejaculate from six Santa Inês rams was collected. Each ejaculate was divided into nine different diluents as follows: Tris-16% yolk (control), and Tris with 2, 4, 6 and 8% fresh LDL, and criopreserved in the aqueous or lyophilized form. The samples were diluted to a final concentration of 100 x 106 sperm/mL and filled into 0.25 ml straws. After thaw, sperm cells were evaluated for motility and sperm kinetics (CASA), and submitted to the hypoosmotic swelling test and the evaluation of the structural integrity of sperm membranes using fluorescent dyes (CFDA: PI), as well as sperm morphology and longevity. The experimental design was randomized blocks, and results were submitted to ANOVA and the averages were compared using the Scott-Knott test. There were no differences in progressive motility and functional and structural integrity of the membrane evaluated when different concentrations of aqueous or lyophilized low density lipoproteins or egg yolk were added to the extender (P>0.05). As for the velocity of sperm movement, the control medium had some kinetic scores similar to the extender containing LDL, both aqueous and lyophilized (P> 0.05). Results were similar between cooling curves. Therefore, we conclude that the media containing all concentrations of LDL, aqueous or lyophilized, were able to protect the ram sperm cells during the cryopreservation process, as whole egg yolk did.(AU)

O objetivo deste trabalho foi testar para criopreservação de sêmen ovino diferentes concentrações de lipoproteína de baixa densidade (LBD) em substituição à gema de ovo em meios diluidores, armazenados na forma aquosa e liofilizada, utilizando-se duas curvas de congelação (-40C/min de 5 à 140C ou vapor de nitrogênio). Os ejaculados de seis carneiros da raça Santa Inês foram fracionados e distribuídos em nove tratamentos, sendo o primeiro o meio controle (Tris-gema 16%) e os demais meios Tris contendo lipoproteínas de baixa densidade nas concentrações de 2, 4, 6 e 8% (v/v), criopreservados tanto na forma aquosa quanto liofilizada. As amostras foram diluídas para a concentração final de 100 x 106 espermatozoides/mL e envasadas em palhetas de 0,25 mL. Após a descongelação foram avaliadas a motilidade e cinética espermática (CASA), morfologia e longevidade espermáticas, além da integridade funcional (HOST) e estrutural (CFDA/IP) das membranas. O delineamento experimental foi blocos ao acaso e os resultados foram submetidos a ANOVA, sendo as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott. Quanto aos parâmetros de motilidade progressiva e integridade funcional e estrutural da membrana, todos os tratamentos testados foram similares (P>0,05). Quanto às velocidades do movimento espermático, o meio controle obteve alguns valores similares aos meios contendo LBD, tanto na forma aquosa quanto liofilizada (P>0,05). Não houve diferenças entre curvas de congelação. Dessa forma, é possível concluir que os meios contendo todas as concentrações de LBD, aquosa ou liofilizada, foram igualmente capazes de proteger as células espermáticas de ovinos, durante o processo de criopreservação, tanto quanto o meio contendo gema de ovo total.(AU)

Low density lipoproteins added to an extender frozen or lyophilized are evenly efficient in cryoprotecting ovine sperm cells than when 16% whole egg yolk was added / Lipoproteínas de baixa densidade em meio diluidor congelado ou liofilizado exerce o mesmo efeito crioprotetor aos espermatozoides ovinos que meio contendo 16% de gema de ovo

The aim of this study was to test different concentrations of low density lipoprotein (LDL) in replacement of whole egg yolk in extenders preserved in the aqueous or lyophilized form, for ram sperm cryopreservation using two cooling curves (-40C/min from 5 to 140C and nitrogen vapor). One ejaculate from six Santa Inês rams was collected. Each ejaculate was divided into nine different diluents as follows: Tris-16% yolk (control), and Tris with 2, 4, 6 and 8% fresh LDL, and criopreserved in the aqueous or lyophilized form. The samples were diluted to a final concentration of 100 x 106 sperm/mL and filled into 0.25 ml straws. After thaw, sperm cells were evaluated for motility and sperm kinetics (CASA), and submitted to the hypoosmotic swelling test and the evaluation of the structural integrity of sperm membranes using fluorescent dyes (CFDA: PI), as well as sperm morphology and longevity. The experimental design was randomized blocks, and results were submitted to ANOVA and the averages were compared using the Scott-Knott test. There were no differences in progressive motility and functional and structural integrity of the membrane evaluated when different concentrations of aqueous or lyophilized low density lipoproteins or egg yolk were added to the extender (P>0.05). As for the velocity of sperm movement, the control medium had some kinetic scores similar to the extender containing LDL, both aqueous and lyophilized (P> 0.05). Results were similar between cooling curves. Therefore, we conclude that the media containing all concentrations of LDL, aqueous or lyophilized, were able to protect the ram sperm cells during the cryopreservation process, as whole egg yolk did.

O objetivo deste trabalho foi testar para criopreservação de sêmen ovino diferentes concentrações de lipoproteína de baixa densidade (LBD) em substituição à gema de ovo em meios diluidores, armazenados na forma aquosa e liofilizada, utilizando-se duas curvas de congelação (-40C/min de 5 à 140C ou vapor de nitrogênio). Os ejaculados de seis carneiros da raça Santa Inês foram fracionados e distribuídos em nove tratamentos, sendo o primeiro o meio controle (Tris-gema 16%) e os demais meios Tris contendo lipoproteínas de baixa densidade nas concentrações de 2, 4, 6 e 8% (v/v), criopreservados tanto na forma aquosa quanto liofilizada. As amostras foram diluídas para a concentração final de 100 x 106 espermatozoides/mL e envasadas em palhetas de 0,25 mL. Após a descongelação foram avaliadas a motilidade e cinética espermática (CASA), morfologia e longevidade espermáticas, além da integridade funcional (HOST) e estrutural (CFDA/IP) das membranas. O delineamento experimental foi blocos ao acaso e os resultados foram submetidos a ANOVA, sendo as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott. Quanto aos parâmetros de motilidade progressiva e integridade funcional e estrutural da membrana, todos os tratamentos testados foram similares (P>0,05). Quanto às velocidades do movimento espermático, o meio controle obteve alguns valores similares aos meios contendo LBD, tanto na forma aquosa quanto liofilizada (P>0,05). Não houve diferenças entre curvas de congelação. Dessa forma, é possível concluir que os meios contendo todas as concentrações de LBD, aquosa ou liofilizada, foram igualmente capazes de proteger as células espermáticas de ovinos, durante o processo de criopreservação, tanto quanto o meio contendo gema de ovo total.