Morphology and immunolocalization of intertubular steroidogenic cell in mesonephros of Podocnemis expansa during gonadal differentiation

Sex steroid hormones are critical in gonadal differentiation in turtles. The gonads are not the only organs responsible for producing these hormones during this phase. Mesonephros play an important role in steroidogenesis. The present study aimed to investigate the presence of steroidogenic cells in mesonephros of Podocnemis expansa during gonadal differentiation and to evaluate their morphology and ultrastructure. Ten embryos of P. expansa were collected from 5 nests on day 36 of incubation, during spawning period on an artificial beach. Embryos were extracted from eggs by slicing the shell and euthanized. They were dissected under a stereoscopic microscope to collect the gonad-mesonephro complex, in which were fixed and subsequently processed for light microscopy, immunohistochemistry and transmission electron microscopy analysis. During histological analysis was observed mesonephros has typical morphological structure. Immunohistochemistry showed immunoreaction to aromatase in cells of intertubular space. Confirming these findings, it was possible to observe a type of intertubular cell in several regions of mesonephro, being more predominant in region close to blood vessels, distal and proximal tubules. In ultrastructural analysis these cells were characterized by having a clear, large, and rounded nucleus with evident nucleolus and cytoplasm rich in electron-dense droplets. This study demonstrated for the first time the presence of cells with morphological, immunohistochemical and ultrastructural characteristics similar to steroid-producing cells in P. expansa mesonephrons, suggesting that this organ may contribute to gonadal differentiation in this species.(AU)

Desenvolvimento e diferenciação gonadal em embriões de Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) em temperatura controlada / Development and gonadal differentiation in embryos of Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) at controlled temperature

Esse estudo objetivou caracterizar o desenvolvimento e a diferenciação gonadal de Podocnemis unifilis em temperatura controlada de 32°C em incubadora artificial e com controle de umidade feito por um higrômetro interno. Foram realizadas análises macroscópicas, por microscopia de luz e por microscopia eletrônica de transmissão. O desenvolvimento gonadal foi agrupado em três etapas: células germinativas primordiais (CGP), estabelecimento da gônada indiferenciada e diferenciação gonadal. As CGP só foram visualizadas a partir do 7º dia de incubação, e se encontravam na região caudal do corpo do embrião, e entre os dias 9 e 11 de incubação foi possível observar a migração das CGP a partir do saco vitelínico em direção à região ventromedial do mesonefro. Com 20 dias de desenvolvimento, a gônada indiferenciada estava estabelecida, sendo identificadas duas regiões distintas: a região cortical externa, caracterizada pela presença de CGP, e a região medular interna, marcada por cordões sexuais primitivos. Nesse estudo, a diferenciação gonadal só ocorreu em testículo. A diferenciação teve início após 35 dias de incubação, com o início da organização dos cordões sexuais em túbulos seminíferos. As etapas de diferenciação gonadal foram semelhantes às de outras espécies de quelônios com determinação do sexo pela temperatura, no entanto, neste estudo, usando a temperatura pivotal descrita para a espécie, todos os indivíduos analisados diferenciaram-se em machos, sendo necessária, portanto, a realização de mais estudos com diferentes temperaturas.(AU)

This study aimed to characterize the development and gonadal differentiation of Podocnemis unifilis at a controlled temperature of 32° C in artificial incubator and with humidity control performed by an internal hygrometer. Macroscopic analyzes, light microscopy and transmission electron microscopy were performed. We grouped gonadal development into three stages: primordial germ cells (PGC), establishment of the undifferentiated gonad and gonadal differentiation. We only visualized the PGC from the 7th day of incubation, and in the caudal region of the embryo body; between days 9 and 11 of incubation we were able to observe the migration of the PGC from the viteline sac towards the ventromedial region of the mesonefro. At 20 days of development, the undifferentiated gonad was established and two distinct regions were identified: the external cortical region characterized by the presence of PGC, and the internal medullary region marked by primitive sexual cords. In this study, only gonadal differentiation occurred in the testicle. Gonadal differentiation began after 35 days of incubation with the beginning of the organization of sexual cords in the seminiferous tubules. The stages of gonadal differentiation were similar to those of other species of turtles with temperature determined sex, however in this study, using the pivotal temperature described for the species all the individuals analyzed were males, and it is there for necessary to carry out further studies using a higher incubation temperature.(AU)

Desenvolvimento e diferenciação gonadal em embriões de Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) em temperatura controlada / Development and gonadal differentiation in embryos of Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) at controlled temperature

Esse estudo objetivou caracterizar o desenvolvimento e a diferenciação gonadal de Podocnemis unifilis em temperatura controlada de 32°C em incubadora artificial e com controle de umidade feito por um higrômetro interno. Foram realizadas análises macroscópicas, por microscopia de luz e por microscopia eletrônica de transmissão. O desenvolvimento gonadal foi agrupado em três etapas: células germinativas primordiais (CGP), estabelecimento da gônada indiferenciada e diferenciação gonadal. As CGP só foram visualizadas a partir do 7º dia de incubação, e se encontravam na região caudal do corpo do embrião, e entre os dias 9 e 11 de incubação foi possível observar a migração das CGP a partir do saco vitelínico em direção à região ventromedial do mesonefro. Com 20 dias de desenvolvimento, a gônada indiferenciada estava estabelecida, sendo identificadas duas regiões distintas: a região cortical externa, caracterizada pela presença de CGP, e a região medular interna, marcada por cordões sexuais primitivos. Nesse estudo, a diferenciação gonadal só ocorreu em testículo. A diferenciação teve início após 35 dias de incubação, com o início da organização dos cordões sexuais em túbulos seminíferos. As etapas de diferenciação gonadal foram semelhantes às de outras espécies de quelônios com determinação do sexo pela temperatura, no entanto, neste estudo, usando a temperatura pivotal descrita para a espécie, todos os indivíduos analisados diferenciaram-se em machos, sendo necessária, portanto, a realização de mais estudos com diferentes temperaturas.

This study aimed to characterize the development and gonadal differentiation of Podocnemis unifilis at a controlled temperature of 32° C in artificial incubator and with humidity control performed by an internal hygrometer. Macroscopic analyzes, light microscopy and transmission electron microscopy were performed. We grouped gonadal development into three stages: primordial germ cells (PGC), establishment of the undifferentiated gonad and gonadal differentiation. We only visualized the PGC from the 7th day of incubation, and in the caudal region of the embryo body; between days 9 and 11 of incubation we were able to observe the migration of the PGC from the viteline sac towards the ventromedial region of the mesonefro. At 20 days of development, the undifferentiated gonad was established and two distinct regions were identified: the external cortical region characterized by the presence of PGC, and the internal medullary region marked by primitive sexual cords. In this study, only gonadal differentiation occurred in the testicle. Gonadal differentiation began after 35 days of incubation with the beginning of the organization of sexual cords in the seminiferous tubules. The stages of gonadal differentiation were similar to those of other species of turtles with temperature determined sex, however in this study, using the pivotal temperature described for the species all the individuals analyzed were males, and it is there for necessary to carry out further studies using a higher incubation temperature.