Resistance profile of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to diazinon and cypermethrin and first report of sodium channel mutation - domain III S6 - T2134A, in field samples from the state of São Paulo, Brazil / Perfil de resistência do Rhipicephalus (Boophilus) microplus ao diazinon e à cipermetrina e primeiro relato de mutação no canal de sódio - domain III S6 - T2134A em amostras de campo, no estado de São Paulo - Brasil

Rhipicephalus (Boophilus) microplus is one of the parasites that has an impact on livestock farming in Brazil. Bioassays using the larval packet test (LPT) impregnated with cypermethrin and diazinon at different concentrations were performed to characterize phenotypic resistance (resistance level, RL), molecular resistance (mutation in domain III - S6 T2134A) and enzymatic metabolism of diazinon and cypermethrin in some populations of R. microplus that were collected in different regions of the state of São Paulo. Among the 40 farms analyzed, 18 of them presented resistance factors for cypermethrin, with RL I (53%) and RL II (47%). Mutation of domain III T2134A was found for the first time in Brazil, on seven farms. Heterozygous larvae were found on six of them and resistant homozygous larvae on four. No differences (p>0.05) in enzymatic activity of α-esterase and ß-esterase were found in tests with live and dead larvae at a cypermethrin concentration of 409.6µg/cm2. Ninety percent of the farms showed resistance to the active agent diazinon: RL I in 6%, RL II in 30% and RL III in 64%. There were significant differences (p<0.05) in enzymatic activity at the highest concentration (3.2µg/cm2).

Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini) é um dos parasitas que mais impactam a pecuária de países tropicais e subtropicais, incluindo o Brasil, com perdas em torno de US$ 3,24 bilhões por ano. Ocorrências de populações resistentes a diferentes classes de acaricidas e suas associações têm sido amplamente diagnosticadas em todo o Brasil. Para isso, bioensaios utilizando o teste de pacote larval (LPT) impregnado com cipermetrina e diazinon em diferentes concentrações foram realizados para caracterizar a resistência fenotípica (nível de resistência, RL), a resistência molecular (mutação no domínio III - S6 T2134A) e o metabolismo enzimático do diazinon e da cipermetrina em algumas populações de R. (Boophilus) microplus coletadas em diferentes regiões do estado de São Paulo. Dentre as 40 propriedades analisadas, 18 delas apresentaram fatores de resistência à cipermetrina, sendo RL I (53%) e RL II (47%). A mutação do domínio III T2134A foi encontrada pela primeira vez no Brasil, em sete fazendas. Larvas heterozigotas foram constatadas em seis delas, e larvas homozigotas resistentes em quatro. Nenhuma diferença (P>0,05) na atividade enzimática de α-esterase e ß-esterase foi observada em testes com larvas vivas e mortas em uma concentração de cipermetrina de 409,6µg/cm2. Noventa por cento das propriedades apresentaram resistência ao agente ativo diazinon: RL I em 6%, RL II em 30% e RL III em 64%. Houve diferenças significativas (P<0,05) na atividade enzimática na concentração mais elevada (3,2µg/cm2) entre os grupos de larvas vivas e mortas.

Investigation of Tritrichomonas foetus in cryopreserved bovine semen by culture and polymerase chain reaction / Pesquisa por Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado mediante isolamento e reação em cadeia da polimerase

Bovine Trichomoniasis (BT) is an infectious disease caused by Tritrichomonas foetus that can be transmitted either sexually or by fomites. In males, the disease is asymptomatic and permanent. T. foetus has been detected in semen samples where it is able to remain viable even when frozen. The objective of this study was to investigate the presence of T. foetus in 27 samples of commercial frozen bovine semen by culture and Polymerase Chain Reaction (PCR). Samples were thawed in water at 37°C. Part of the samples was inoculated in a test tube containing Diamond's medium and incubated at 35°C. Growth was evaluated every 24 hours via direct examination under a microscope. The other part was placed in an Eppendorf tube and frozen for later molecular analysis. After 10 days of culture, all samples were negative for T. foetus. The Quick-DNA Miniprep Kit (Zymo Research) without proteinase K was used for DNA extraction. The primers used in PCR were TRF3 and TRF4. PCR results were negative for all samples. In conclusion, bovine semen samples were negative for T. foetus in both diagnostic methods, according to the adopted methodology.(AU)

A tricomonose genital bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo Tritrichomonas foetus, é transmitida por via venérea e fômites contaminados. Em machos a doença é assintomática e permanente. O agente já foi encontrado em amostras de sêmen e é capaz de permanecer viável quando congelado. Este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino comercial congelado, por meio de cultivo e reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram descongeladas em água a 37ºC; parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliada a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen testado.(AU)