Ultrastructural analysis of bovine oocytes from ovarian follicles with different diameters / Análise ultra-estrutural de oócitos bovinos provenientes de folículos ovarianos com diferentes diâmetros

In vitro embryo production is an important technique for facilitating the reproduction of animals with high genetic merit. The greatest challenge for the reproducibility of this technique is the quality of the oocyte that is submitted for in vitro maturation. The aim of this work was to evaluate the ultrastructural characteristics of oocytes from follicles of different diameters using transmission electron microscopy. The animals were divided into 2 groups and were given a single i.m. injection of 250 IU FSH (Pluset, Serono, Italy). To synchronize the follicular growth, all follicles > 2 mm were aspirated during the estrous cycle, which was considered day zero (D0). Group 1 (G1; n = 4) received FSH on day 1 (D1), and the 2- to 5-mm follicles were aspirated on day 2 (D2). The animals in group 2 (G2; n = 5) received FSH on day 2 (D2), and their 10- to 15-mm follicles were aspirated on day 5 (D5). After aspiration, the oocytes from both groups were fixed and prepared for ultrastructural analysis. The oocytes analyzed from both groups had similar ultrastructural characteristics. The presence and distribution of organelles in the cytoplasm of the oocytes did not differ between groups, suggesting that, in relation to the ultrastructural characteristics, oocytes from 2 to 5 mm and 10 to 15 mm follicles are similar.

A produção in vitro de embriões é uma técnica importante para facilitar a reprodução de animais com elevado mérito genético. O maior desafio para a reprodutibilidade desta técnica é a qualidade do oócito destinado à maturação in vitro. O objetivo deste trabalho foi avaliar as características ultra-estruturais de oócitos provenientes de folículos com diferentes diâmetros por microscopia eletrônica de transmissão. Os animais foram divididos em dois grupos e receberam uma única injeção im de 250 UI de FSH (Pluset, Serono, Itália). Para sincronizar o crescimento folicular, todos os folículos > 2 mm foram aspirados durante o ciclo estral, que foi considerado o dia zero (D0). O Grupo 1 (G1, n = 4) recebeu FSH no dia 1 (D1), e os folículos de 2 a 5 mm foram aspirados no dia 2 (D2). Os animais do grupo 2 (G2, n = 5) receberam FSH no dia 2 (D2), e os folículos de 10 a 15 mm foram aspirados no dia 5 (D5). Após a aspiração, os oócitos de ambos os grupos foram fixados e preparados para análise ultra-estrutural. Os oócitos analisados de ambos os grupos apresentaram características ultra-estruturais semelhantes. A presença e distribuição de organelas no citoplasma dos oócitos não diferiram entre os grupos, sugerindo que, em relação às características ultra-estruturais, oócitos oriundos de folículos de 2-5 mm e 10-15 mm são similares.

Efeitos de diferentes sistemas de cultivo in vitro sobre o crescimento de folículos pré-antrais isolados de ovários de fetos bovinos / Effects of different systems of in vitro culture on the isolated preantral follicles from fetal bovine ovaries

O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-antrais de fetos bovinos da raça Nelore no último trimestre de gestação e para identificar o sistema mais eficiente durante o crescimento dos folículos isolados. Para isso, folículos pré antrais foram isolados mecanicamente e submetidos ao cultivo individual, por 9 dias, em meio não suplementado ou suplementado com soro fetal bovino (SFB), albumina sérica bovina (BSA) ou suplemento definido sintético substituto do soro KnockoutSR(KNO). Avaliou-se ainda, o efeito do gel de colágeno ou monocamada de fibroblastos fetais bovinos como substrato para o cultivo in vitro. A avaliação do aumento de diâmetro folicular foi realizada no dia da colheita (0 hora) e a cada 72 horas de cultivo. A associação entre meio suplementado com SFB e uso de gel de colágeno como substrato foram significativamente mais efetivos sobre o aumento do diâmetro folicular quando comparados aos demais tratamentos. Quando fragmentos de tecido ovariano foram submetidos ao cultivo in vitro, não houve preservação da ultraestrutura folicular por mais de 3 dias de cultivo, em qualquer dos tratamentos utilizados. Ainda não está estabelecido um sistema de cultivo adequado que sustente a diferenciação e multiplicação das células da granulosa e que mantenha o contato das mesmas com o oócito para prover moléculas e fatores que supram a demanda metabólica. Entendemos que esta pesquisa apresentou avanços promissores na busca pelo estabelecimento um sistema de cultivo in vitro de folículos pré-antrais em bovinos.(AU)

The objective of this study is to use different in vitro culture systems of preantral follicles from Nelore breed bovine fetuses in the last gestation quarter. The evaluation of treatments considered the time of growth of isolated follicles. Preantral follicles were mechanically isolated and submitted to the individual culture, for 9 days, in mediano supplemented or supplemented with fetal calf serum (FCS), bovine serum albumin (BSA) or synthetic defined supplement substitute of serum KnockoutSR (KNO). We have also evaluated the effects of collagen gel or fetal calf fibroblast monolayer as substratum for in vitro cultures. The increase on the follicular diameter was followed in the first day (0 h), at the 72 h, 144 h and 216 h. Considering cultures of isolated follicles, the results have shown that the association between media supplemented with FCS and collagengel was significantly more efficient on the increase of the follicular diameter than other treatments. It is not still established a system ofappropriate cultivation that sustains the differentiation and multiplication of the granular cells and that maintains the contact of the same ones with the oocyte to provide molecules and factors that supply the metabolic demand. We also under stand that our results also represent another promising step on the search for the ultimate system of in vitro culture of preantral follicles from bovines.(AU)

Morfogênese do testículo de embriões e fetos de vacas da raça nelore (Bos taurus indicus) / Morfogenesis of Testis From Embryos and Fetuses of Nelore Breed Cows (Bos taurus Indicus)

Este estudo teve como objetivo acompanhar o processo de desenvolvimento testicular desde a fase indiferenciada até sua completa formação. Embriões e fetos de vacas da raça nelore (Bos taurus indicus) foram obtidos em frigoríficos próximos à cidade de Uberlândia, Minas Gerais. As gônadas dos fetos e os embriões foram fixados em bouin e processados para microscópica óptica convencional. A gônada foi observada primeiramente em um embrião de 1,0 cm de comprimento. Em embriões com 2,5 cm a presença da albugínea permite a identificação do sexo. A espessura média da albugínea variou de 29,08 a 558,46 mm. Gradativamente, observou-se aumento da vascularização da albugínea e do parênquima. O mediastino encontrava-se localizado centralmente. Houve uma diminuição no espaço ocupado pelos cordões testiculares de 63,71 para 41,99% do volume total dos testículos. O seu diâmetro variou de 31,68 a 48,80 mm. O diâmetro das células germinativas (e dos seus núcleos) foi de 12,27(6,65) a 16,95 (14,21) mm, respectivamente. A quantidade de células germinativas por corte transversal de cordão diminuiu de um máximo de 2,80 para 0,76. O número total de células germinativas foi de 16 no princípio da colonização da gônada para 18,32 x 106 no final do estudo. O número de células de Sertoli por corte transversal de cordão variou de 10,00 a 16,25. Os resultados obtidos mostram que a origem e a formação dos testículos nos embriões e fetos de vacas da raça Nelore (Bos taurus indicus) ocorre de forma muito semelhante ao do que é descrito para Bos taurus taurus.(AU)

The aim of this study was to accompany the process of testicular development from the non-differentiable phase to its complete formation. Embryos and fetuses of Nelore breed cows (Bos Taurus indicus) were obtained in slaughterhouses near the Uberlandia city, Minas Gerais. The gonads and the embryos were fixed in Bouins fixative and afterwards processed for conventional optical microscopy. The gonadal was observed firstly in a 1.0 cm long embryo. In 2.5 cm long embryos the presence of the albuginea allows the sex identification. The mean thickness of the albuginea ranged from 29.08 to 558.45 mm. Gradually increase of vascularization of the albuginea and parenchyma is observed. The mediastinum is located centrally. There was a decrease in the space occupied by the testicular cords, from 63.71 to 41.99% of the total testes volume. Its diameter ranged from 31.68 to 48.80 mm. The diameter of germinal cells (and their nuclei) was from 12.27 (6.65) to 16.95 914.21) mm. The quantity of germinal cells by cross section of cord decreased from a maximum of 2.80 to 0.76. The total number of germinal cells was from 16 at the beginning of colonization of the gonad to 18.32 x 106 at the end of the study. The number of Sertolis cells by cross section of cord ranged from 10.00 to 16.25. The results obtained show that the origin and formation of testes in embryos and fetuses from Nelore breed cows (Bos taurus indicus) does occur in a very similar way to what is described for Bos taurus taurus.(AU)

Technical and biological aspects on recovery of oocytes from cattle donors: bibliographical review / Aspectos técnicos e biológicos da obtençãode oócitos bovinos: revisão de literatura

Since the first work about embryo collection, a great amount of research and development has founded on enhancing genetic contribution of cows. The aim of this publication is to give an account of the current knowledge, new findings and techniques on recovery of oocytes from cattle donors.

Desde o primeiro relato de colheita de embriões, um grande número de trabalhos tem apresentado os esforços para melhorar a contribuição genética de fêmeas bovinas. O objetivo desta revisão consiste em relacionar os primeiros trabalhos, novas descobertas e inovações técnicas da obtenção de oócitos em vacas.

Technical and biological aspects on recovery of oocytes from cattle donors: bibliographical review / Aspectos técnicos e biológicos da obtençãode oócitos bovinos: revisão de literatura

Since the first work about embryo collection, a great amount of research and development has founded on enhancing genetic contribution of cows. The aim of this publication is to give an account of the current knowledge, new findings and techniques on recovery of oocytes from cattle donors.

Desde o primeiro relato de colheita de embriões, um grande número de trabalhos tem apresentado os esforços para melhorar a contribuição genética de fêmeas bovinas. O objetivo desta revisão consiste em relacionar os primeiros trabalhos, novas descobertas e inovações técnicas da obtenção de oócitos em vacas.