Resumo
The objective of this study is to compare the direct fecal smear (DFS) and centrifugal sedimentation (CS) methods in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples of dairy calves. One hundred and fourteen fecal samples were collected from calves aged up to six months from 10 dairy farms located in Palotina and Francisco Alves, Paraná, Brazil. The microscopic analysis revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in 51.75% (59/114) of the samples in both methods. In CS, 48.25% (55/114) of the samples were positive, while in DFS slides, only 6.14% (7/114) were positive. Only 4 samples were positive exclusively in DFS. To ensure that there were no false-negative results in the microscopic analysis, the 55 samples that were negative in both DFS and CS were selected for molecular analysis using the nested PCR (nPCR). Of these 55 samples, 24% (13/55) were positive and forwarded for sequencing part of the genome, which made it possible to identify C. parvum, C. bovis and C. ryanae. Besides the characterization of the Cryptosporidium species, it was possible to identify bacteria of the genus Acinetobacter interfering directly in the analyzed samples. The microscopic analysis also revealed higher sensitivity when CS was used to make the fecal smears. However, some samples that were negative in this technique had positive PCR results. Thus, molecular analysis is indicated to confirm cases of Cryptosporidium spp. Further studies are necessary to prove the specificities of the used primers since the results obtained in nPCR were positive for the protozoan but, when genetic sequencing was performed, Acinetobacter spp. was identified.(AU)
O objetivo deste trabalho foi comparar os métodos de esfregaço fecal direto (DFS) e centrífugo sedimentação (CS) para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros leiteiros. Foram coletadas 114 amostras fecais de bezerros com até seis meses de idade, provenientes de dez propriedades leiteiras localizadas nos municípios de Palotina e Francisco Alves, Paraná. Por meio da análise microscópica, foi possível observar oocistos de Cryptosporidium spp. em 51,75% (59/114) das amostras. Pelo método da CS foi identificada positividade em 48,25% (55/114) das amostras, enquanto nas lâminas pelo método do esfregaço fecal direto (DFS), apenas 6,14% (7/114) foram positivas. Somente 4 amostras foram positivas exclusivamente no método do DFS. Para assegurar que na análise microscópica não houvesse resultados falso-negativos, as 55 amostras negativas para os dois métodos de confecção de lâminas (DFS e CS) foram selecionadas para análise molecular por meio da técnica de Nested PCR. Das 55 amostras submetidas a nPCR, 24% (13/55) apresentaram-se positivas e foram encaminhadas para o sequenciamento genético de uma porção do genoma, o qual possibilitou identificar as espécies de C. parvum, C. bovis e C. ryanae. Além da caracterização das espécies de Cryptosporidium, foi possível identificar a presença de bactérias do gênero Acinetobacter interferindo diretamente nas amostras analisadas. A análise microscópica revelou maior sensibilidade quando o método de CS foi usado para a confecção dos esfregaços fecais, entretanto, amostras negativas por meio dessa metodologia apresentaram resultados positivos na nPCR. Desta forma, para a confirmação dos casos de Cryptosporidium spp., é indicado a realização da análise molecular. Novos estudos são necessários para se comprovar a especificidade dos primers utilizados, uma vez que na nPCR o resultado obtido foi positivo, porém ao realizar o sequenciamento genético houve a identificação de Acinetobacter spp.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Cryptosporidium/patogenicidade , Oocistos , Fezes/microbiologiaResumo
Considered a zoonosis of utmost importance, cryptosporidiosis has a worldwide distribution and can infect mammals, birds, reptiles, and amphibians. It is caused by a highly resistant protozoan present in the environment and can cause death in immunosuppressed individuals and pups, as well as in farm animals such as cattle and sheep, generating losses. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium spp. in sheep feces from the farms of Western Paraná, which have different management styles, and compare the results with their respective management methods. One hundred and forty-four stool samples were collected (69 from Property 1 and 75 from Property 2) and analyzed using a fecal smear on slides after staining by the modified Ziehl-Neelsen method. Samples tested positive by this method were subjected to nested PCR and the products obtained were sent for sequencing to determine the species. While 82.60% of the samples from Property 1 were tested positive, only 36% of the samples from Property 2 were tested positive. On analyzing the sequencing data, it was observed that the Cryptosporidium species of samples from Property 1 showed high similarity to Cryptosporidium xiaoi and those from Property 2, to Cryptosporidium ubiquitum. The reason for divergence in results can be attributed to differences in management systems adopted by each property, thus showing the importance of detecting carrier animals, as they can contaminate the environment,especially the water sources, and spread the disease to humans and other animals.(AU)
Considerada uma zoonose de extrema importância, a cryptosporidiose possui distribuição mundial e pode infectar mamíferos, aves, répteis e anfíbios. É causada por um protozoário muito resistente no ambiente, podendo gerar mortes em indivíduos imunossuprimidos e filhotes, principalmente em animais de produção como bovinos e ovinos, gerando prejuízos. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a presença de Cryptosporidium spp. em fezes de ovinos de propriedades rurais do Oeste do Paraná, que possuem manejos diferenciados e comparar os resultados encontrados com o respectivo manejo. Foram coletadas 144 amostras de fezes, sendo 69 da Propriedade 1 e 75 da Propriedade 2, analisadas pelo esfregaço de fezes em lâminas após a coloração pelo método de Ziehl-Neelsen modificado. As amostras positivas por esse método foram submetidas à Nested-PCR sendo os produtos obtidos enviados ao sequenciamento para a determinação da espécie. A Propriedade 1 apresentou positividade em 82,60% das amostras, enquanto a Propriedade 2 obteve 36% de amostras positivas. Foi encontrada alta similaridade para Cryptosporidium xiaoi na primeira propriedade e Cryptosporidium ubiquitum na segunda propriedade. A divergência nos resultados pode ser comprovada pela diferente forma de manejo adotada em cada propriedade, mostrando a importância de detectar os animais portadores, uma vez que estes podem contaminar o meio ambiente, especialmente os cursos dágua, e promover a disseminaçãoda doença para outros animais e para o homem.(AU)
Assuntos
Animais , Ovinos/genética , Ovinos/microbiologia , Criptosporidiose/classificação , Criptosporidiose/genéticaResumo
O estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação de Arginina (Arg) sobre a resposta imune humoral e o desenvolvimento dos órgãos linfoides de frangos de corte imunizados contra a Doença de Gumboro. Foram utilizados 640 pintos de corte, distribuídos aleatoriamente em um delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos (1. Controle, 2. Imunização, 3. Imunização + suplementação de L-Arg e 4. Suplementação de L-Arg.) e oito repetições de 20 aves cada. As aves dos tratamentos 3 e 4 foram imunizadas no 16º dia, contra a Doença de Gumboro (cepa intermediária plus). Amostras de soro das aves com 14, 21, 28 e 35 dias de idade foram analisadas por ELISA para detecção de título de anticorpos contra a Doença de Gumboro e nestas mesmas idades foi determinado o peso dos órgãos linfoides e a altura de pregas primárias do tecido linfoide da bolsa cloacal. Não houve diferença significativa (p > 0,05) entre os tratamentos. A suplementação de Arg não contribuiu com a resposta imune dos frangos de corte imunizados contra a Doença de Gumboro. A falta de resposta à imunização pode ser atribuída à baixa virulência da cepa vacinal utilizada e à presença de vírus de campo.
The study was conducted to evaluate the effect of supplemental Arginine (Arg) on the humoral immune response and development of lymphoid organs of broiler chickens vaccinated against Gumboro disease. Six hundred and forty broilers were reared in a complete randomized design with four treatments (1. Control, 2. Immunization, 3. Immunization and supplementation of L-Arg, and 4. Supplemental L-Arg.) and eight replications of 20 birds each. Birds in treatments 3 and 4 were vaccinated at 16 days against Gumboro disease (intermediate plus strain). Serum samples from birds at 14, 21, 28 and 35 days old were analyzed by ELISA for detection of antibody titers against Gumboro disease, and at these same ages, lymphoid organ weight was determined and the height of the primary folds of lymphoid tissue in the cloacal bursa was measured. There was no significant difference (p > 0.05) among treatments. Arg supplementation did not improve the immune response of broilers immunized against Gumboro Disease. The lack of response to immunization may be attributed to the low virulence of the vaccine strain used and the presence of environmental virus.
Assuntos
Animais , Arginina , Galinhas , Imunização , Corte , AnticorposResumo
Considered a zoonosis of utmost importance, cryptosporidiosis has a worldwide distribution and can infect mammals, birds, reptiles, and amphibians. It is caused by a highly resistant protozoan present in the environment and can cause death in immunosuppressed individuals and pups, as well as in farm animals such as cattle and sheep, generating losses. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium spp. in sheep feces from the farms of Western Paraná, which have different management styles, and compare the results with their respective management methods. One hundred and forty-four stool samples were collected (69 from Property 1 and 75 from Property 2) and analyzed using a fecal smear on slides after staining by the modified Ziehl-Neelsen method. Samples tested positive by this method were subjected to nested PCR and the products obtained were sent for sequencing to determine the species. While 82.60% of the samples from Property 1 were tested positive, only 36% of the samples from Property 2 were tested positive. On analyzing the sequencing data, it was observed that the Cryptosporidium species of samples from Property 1 showed high similarity to Cryptosporidium xiaoi and those from Property 2, to Cryptosporidium ubiquitum. The reason for divergence in results can be attributed to differences in management systems adopted by each property, thus showing the importance of detecting carrier animals, as they can contaminate the environment,especially the water sources, and spread the disease to humans and other animals.
Considerada uma zoonose de extrema importância, a cryptosporidiose possui distribuição mundial e pode infectar mamíferos, aves, répteis e anfíbios. É causada por um protozoário muito resistente no ambiente, podendo gerar mortes em indivíduos imunossuprimidos e filhotes, principalmente em animais de produção como bovinos e ovinos, gerando prejuízos. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a presença de Cryptosporidium spp. em fezes de ovinos de propriedades rurais do Oeste do Paraná, que possuem manejos diferenciados e comparar os resultados encontrados com o respectivo manejo. Foram coletadas 144 amostras de fezes, sendo 69 da Propriedade 1 e 75 da Propriedade 2, analisadas pelo esfregaço de fezes em lâminas após a coloração pelo método de Ziehl-Neelsen modificado. As amostras positivas por esse método foram submetidas à Nested-PCR sendo os produtos obtidos enviados ao sequenciamento para a determinação da espécie. A Propriedade 1 apresentou positividade em 82,60% das amostras, enquanto a Propriedade 2 obteve 36% de amostras positivas. Foi encontrada alta similaridade para Cryptosporidium xiaoi na primeira propriedade e Cryptosporidium ubiquitum na segunda propriedade. A divergência nos resultados pode ser comprovada pela diferente forma de manejo adotada em cada propriedade, mostrando a importância de detectar os animais portadores, uma vez que estes podem contaminar o meio ambiente, especialmente os cursos dágua, e promover a disseminaçãoda doença para outros animais e para o homem.
Assuntos
Animais , Criptosporidiose/classificação , Criptosporidiose/genética , Ovinos/genética , Ovinos/microbiologiaResumo
The study was conducted to evaluate the effect of supplemental Arginine (Arg) on the humoral immune response and development of lymphoid organs of broiler chickens vaccinated against Gumboro disease. Six hundred and forty broilers were reared in a complete randomized design with four treatments (1. Control, 2. Immunization, 3. Immunization and supplementation of L-Arg, and 4. Supplemental L-Arg.) and eight replications of 20 birds each. Birds in treatments 3 and 4 were vaccinated at 16 days against Gumboro disease (intermediate plus strain). Serum samples from birds at 14, 21, 28 and 35 days old were analyzed by ELISA for detection of antibody titers against Gumboro disease, and at these same ages, lymphoid organ weight was determined and the height of the primary folds of lymphoid tissue in the cloacal bursa was measured. There was no significant difference (p > 0.05) among treatments. Arg supplementation did not improve the immune response of broilers immunized against Gumboro Disease. The lack of response to immunization may be attributed to the low virulence of the vaccine strain used and the presence of environmental virus.
O estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação de Arginina (Arg) sobre a resposta imune humoral e o desenvolvimento dos órgãos linfoides de frangos de corte imunizados contra a Doença de Gumboro. Foram utilizados 640 pintos de corte, distribuídos aleatoriamente em um delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos (1. Controle, 2. Imunização, 3. Imunização + suplementação de L-Arg e 4. Suplementação de L-Arg.) e oito repetições de 20 aves cada. As aves dos tratamentos 3 e 4 foram imunizadas no 16° dia, contra a Doença de Gumboro (cepa intermediária plus). Amostras de soro das aves com 14, 21, 28 e 35 dias de idade foram analisadas por ELISA para detecção de título de anticorpos contra a Doença de Gumboro e nestas mesmas idades foi determinado o peso dos órgãos linfoides e a altura de pregas primárias do tecido linfoide da bolsa cloacal. Não houve diferença significativa (p > 0,05) entre os tratamentos. A suplementação de Arg não contribuiu com a resposta imune dos frangos de corte imunizados contra a Doença de Gumboro. A falta de resposta à imunização pode ser atribuída à baixa virulência da cepa vacinal utilizada e à presença de vírus de campo.
Resumo
Considered a zoonosis of utmost importance, cryptosporidiosis has a worldwide distribution and can infect mammals, birds, reptiles, and amphibians. It is caused by a highly resistant protozoan present in the environment and can cause death in immunosuppressed individuals and pups, as well as in farm animals such as cattle and sheep, generating losses. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium spp. in sheep feces from the farms of Western Paraná, which have different management styles, and compare the results with their respective management methods. One hundred and forty-four stool samples were collected (69 from Property 1 and 75 from Property 2) and analyzed using a fecal smear on slides after staining by the modified Ziehl-Neelsen method. Samples tested positive by this method were subjected to nested PCR and the products obtained were sent for sequencing to determine the species. While 82.60% of the samples from Property 1 were tested positive, only 36% of the samples from Property 2 were tested positive. On analyzing the sequencing data, it was observed that the Cryptosporidium species of samples from Property 1 showed high similarity to Cryptosporidium xiaoi and those from Property 2, to Cryptosporidium ubiquitum. The reason for divergence in results can be attributed to differences in management systems adopted by each property, thus showin
Considerada uma zoonose de extrema importância, a cryptosporidiose possui distribuição mundial e pode infectar mamíferos, aves, répteis e anfíbios. É causada por um protozoário muito resistente no ambiente, podendo gerar mortes em indivíduos imunossuprimidos e filhotes, principalmente em animais de produção como bovinos e ovinos, gerando prejuízos. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a presença de Cryptosporidium spp. em fezes de ovinos de propriedades rurais do Oeste do Paraná, que possuem manejos diferenciados e comparar os resultados encontrados com o respectivo manejo. Foram coletadas 144 amostras de fezes, sendo 69 da Propriedade 1 e 75 da Propriedade 2, analisadas pelo esfregaço de fezes em lâminas após a coloração pelo método de Ziehl-Neelsen modificado. As amostras positivas por esse método foram submetidas à Nested-PCR sendo os produtos obtidos enviados ao sequenciamento para a determinação da espécie. A Propriedade 1 apresentou positividade em 82,60% das amostras, enquanto a Propriedade 2 obteve 36% de amostras positivas. Foi encontrada alta similaridade para Cryptosporidium xiaoi na primeira propriedade e Cryptosporidium ubiquitum na segunda propriedade. A divergência nos resultados pode ser comprovada pela diferente forma de manejo adotada em cada propriedade, mostrando a importância de detectar os animais portadores, uma vez que estes podem contaminar o meio am
Resumo
O objetivo deste experimento foi conhecer a epidemiologia e a bieecologia de larvas de D. hominis na região sul do etado do Mato Grosso do Sul. Foram utilizadas 12 fêmeas da raça Nelore, com aproximadamente 18 meses, criadas em regime extensivo. Durante doze meses, os animais foram recolhidos, mensalmente a mangueira onde, pela insepeção e palpação, o número de nódulos cutâneos eram contados e mapeados conforme sua distribuição corpórea. Colheitas de sangue também foram feitas para realização de hemograma. Neste período um total de 294 nódulos cutâneos foram observados, sendo a paleta a região corpórea mais parasitada (24,52%), seguida das costelas (15,64%) e flanco (13,60%). a região anerior dos animais apresentou 71,09% das larvas observadas. A flutuação populacional das larvas de D. hominis registrou um número máximo nos meses do verão, onde foram observados 80,26¨dos nódulos, com nítida influência da temperatura sobre esses piques populacionais. A variação do número de leucócitos está diretamente relacionada com o número de neutrófilos segmentados e monócitos. Todas as células da série branca apresentaram um aumento de seu número diretamente proporcional ao número de nódulos de larvas de D. hominis