Resumo
The objective of the present trial was to characterize genetically strains of Campylobacter jejuni subsp. jejuni isolated from humans and several animal sources (bovines, swine, dogs, primates, wild boars and poultry). A total of 828 different animal samples (feces, carcass, aborted fetus and hysterectomized uterus) were analysed by means of routine bacteriological methods, and 36 C. jejuni strains were isolated. Thirty strains of human fecal origin were obtained in clinical analysis laboratories in the city of São Paulo. The 66 C. jejuni strains isolated were submitted to genetic characterization. Primers based on fla A gene were used in a polymerase chain reaction (PCR) and amplified a fragment of the 702 bp. PCR products were evaluated by means of sequencing and genealogic analysis. Genetic variability analysis of 66 strains showed 44 different subtypes of C. jejuni. One subtype was identical to a C. jejuni strain of human origin with the sequence in the GenBank (GENBANK accession number AF050186). Subtyping analysis of C. jejuni strains based on sequencing of the fla A gene variable region and analysis of sequence alignment by the Maximum Parsimony method showed to be highly discriminatory, providing the best conditions to differentiate strains involved in outbreaks from those sporadically isolated. This is the first study of molecular subtyping analysis of human and animal C. jejuni strains using sequencing technique and genealogic analysis in the state of São Paulo, Brazil.
O objetivo do presente trabalho foi caracterizar geneticamente estirpes de Campylobacter jejuni subsp. jejuni isoladas de humanos e de diferentes origens animais (bovinas, suínas, cães, primatas, javalis, suínos e aves de corte). Um total de 828 amostras (fezes, carcaças, fetos abortados e útero histerectomizado) foram analisadas por métodos de rotina bacteriológica e 36 estirpes de C. jejuni foram isoladas. Trinta estirpes de origem fecal humana foram obtidas de laboratórios de análises clínicas da cidade de São Paulo. As 66 estirpes de C. jejuni isoladas foram submetidas à caracterização genética. Oligonucleotídeos baseados no gene fla A foram usados na reação de polimerase em cadeia (PCR) e amplificou um fragmento de 702 pb. Os produtos obtidos pela PCR foram avaliados pelas técnicas de seqüenciamento e análise genealógica. Análise da variabilidade genética das 66 estirpes revelou 44 diferentes subtipos de C. jejuni. Um subtipo de origem humana apresentou seqüência idêntica à de C. jejuni depositada no GenBank (GENBANK acesso número AF050186). A subtipagem das estirpes de C. jejuni baseadas no seqüenciamento da região variável do gene fla A e na análise do alinhamento das seqüências pelo método da Máxima Parcimônia, mostraram-se altamente discriminatórios fornecendo melhores condições para a correta diferenciação entre estirpes originárias de surto e as isoladas esporadicamente. Este foi o primeiro estudo de subtipagem molecular de estirpes de C. jejuni de origem humana e animal utilizando a técnica do seqüenciamento com análise genealógica realizado no Estado de São Paulo, Brasil.
Resumo
Forty-six S. maltophilia isolates obtained from hospital clinical specimens were studied for protease (caseinase and elastase) production, hemolytic activity, adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. Susceptibility to antimicrobial agents was also evaluated. The majority of isolates were obtained from respiratory tract secretions of patients using medical devices. All the isolates grown overnight were able to hydrolyze casein at 30ºC and 37ºC. After 72h, all the isolates hydrolyzed elastase at 30ºC and 40 isolates (87%) at 37ºC. Most of the isolates presented hemolytic activity after 96h of incubation at both temperatures. Rabbit blood showed the hightest hemolytic activity, after 96h 61% and 98% of tested isolates presented beta-hemolysis at 30ºC and 37ºC, respectively. All isolates were susceptible to trimethoprim-sulfametoxazole and were resistant to most beta-lactams tested. By the dilution method, S. maltophilia showed a high susceptibility to ticarcillin-clavulanate and a lower susceptibility to ciprofloxacin than the agar diffusion. The isolates showed adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. The proteolytic activities and adhesion to inanimate surfaces detected in S. maltophilia can be related to the pathogenesis of this bacterium and/or medical device colonization which favors the development of nosocomial infections.
Quarenta e seis amostras de S. maltophilia obtidas de amostras clínicas foram estudadas quanto à produção de protease (caseinase e elastase), atividade hemolítica, adesão a células HEp-2, ao plástico e ao vidro. A sensibilidade aos agentes antimicrobianos também foi avaliada. A maioria das amostras foi obtida de secreções do trato respiratório de pacientes em uso de "dispositivos" médicos. Todas as amostras foram capazes de hidrolisar a caseína após o crescimento a 30ºC e 37ºC por 16-18hs. Após 72 hs, todas as amostras apresentaram atividade hemolítica após 96hs de incubação em ambas as temperaturas. A maior atividade hemolítica foi verificada com o sangue de coelho; após 96hs, 61% e 98% das amostras apresentaram b-hemólise a 30ºC e 37ºC, respectivamente. Todas as amostras foram sensíveis ao sulfametoxazol-trimetoprim e resistentes à maioria dos antimicrobianos b-lactâmicos testados. Através do método de diluição em ágar, S. maltophilia mostrou uma alta sensibilidade à ticarcilina-ácido clavulânico e uma menor sensibilidade à ciprofloxacina do que pelo método de difusão em ágar. As amostras mostraram adesão às células HEp-2, ao plástico e ao vidro. A atividade proteolítica e adesão a superfícies inanimadas detectadas em S. maltophilia podem estar relacionadas à patogênese desta bactéria. A colonização de "dispositivos" médicos favorece o desenvolvimento de infecções hospitalares.