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1.
Ci. Rural ; 45(4): 704-710, 04/2015. graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-66479

Resumo

The main objective of this study was to detect the steroidogenic effects of Ang II in bovine theca cells in vitro. Bovine theca cells were obtained from follicles (larger than 10mm of diameter) collected from a local abattoir and submitted to different treatments in a sequence of experiments. In experiment 1, CYP17A1 mRNA profile was evaluated in LH- (10ng ml-1) and Ang II-treated (0.1µM) theca cells. In experiment 2, a dose-response effect of Ang II (0.001; 0.1 e 10µM) plus insulin (100ng ml-1) and LH (100ng ml-1) was evaluated on steroidogenesis of bovine theca cells. Experiment 3 explored the effects of saralasin (an antagonist of Ang II receptors) on steroid production and steroidogenic enzymes regulation in theca cells. After 24 hours, culture media from experiments 2 and 3 was collected to evaluate testosterone and androstenedione levels by High-Performance Liquid Chromatography. In parallel, mRNA levels of key steroidogenic enzymes (HSD3B2, CYP11A1, CYP17A1) and STAR were assessed by RT-PCR. There was no difference in testosterone and androstenedione production between treated and controls groups, as well as in mRNA levels of the evaluated genes. In conclusion, the results suggest that Ang II does not regulate steroidogenesis in bovine theca cells.(AU)


O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da Angiotensina II (Ang II) sobre a esteroidogenese nas células da teca bovina, cultivadas in vitro. Para isso, células da teca bovina foram obtidas de folículos maiores que 10 mm de diâmetro de ovários oriundos de abatedouro e submetidas a diferentes tratamentos em uma sequência de experimentos. No experimento 1, o perfil de expressão do RNAm de CYP17A1 foi avaliado nas células da teca em resposta ao LH (10ng ml-1) e/ou Ang II (0,1µM) em diferentes momentos de tratamento. No experimento 2, foi investigado o efeito dose-resposta de Ang II (0,001; 0,1 e 10µM), acrescido de insulina (100ng ml-1) e LH (100ng ̸ml) sobre a esteroidogênese nas células da teca bovina. O experimento 3 explorou os possíveis efeitos da Ang II por meio do tratamento de células da teca com saralasina (antagonista dos receptores da Ang II). Após 24 horas, nos experimentos 2 e 3, o meio de cultura foi coletado e avaliado quanto aos níveis de testosterona e androstenediona pela técnica de HPLC. Em paralelo, a expressão gênica de enzimas-chave da esteroidogênese (HSD3B2, CYP11A1, CYP17A1) e STAR foi avaliada por qRT-PCR. Não se observou diferença na produção de testosterona e androstenediona entre controle e grupos tratados, bem como, na expressão do RNAm para os genes estudados. Em conclusão, nossos resultados não demonstraram um papel da Ang II sobre a esteroidogenese nas células da teca bovina.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Bignoniaceae/veterinária , Angiotensina II/uso terapêutico , Ovário
2.
Ci. Rural ; 45(5): 905-911, 05/2015. graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-10724

Resumo

Cell therapy has shown encouraging perspectives for human and veterinary medicine. Experimentally, genetic manipulation allows to mark and locate allogeneic cells. However, this makes their genotype/phenotype different from non-marked cells used clinically. Alternatively, the presence of the Y-chromosome enables male donor cells detection in female organisms. However, the concentration of engrafted cells may be minimal in tissues, due to systemic distribution. In this study, a nested-PCR multiplex test was developed, aiming to increase the sensitivity of the presence/absence diagnosis of male mice adipose-derived (ADSC-Y) and bone marrow mononuclear (BMNC-Y) cells in samples of blood and lungs from females, after endovenous transplantation. Four females received placebos; four females received ADSC-Y from two males; and four females received BMNC-Y from two males. The PCR first-step included two primer sets (multiplex): one for amplification of a Y-chromosome fragment (SRYout; 300bp); the other for amplification of an X-chromosome (DXNds3 gene) fragment. In the PCR second-step, one primer set (SRYinn) was used for amplification of a 110bp fragment, restrained in the SRYout amplification product. The PCR internal control (DXNds3 gene) was detected in all DNA samples, whereas the SRY gene external fragment (300bp) was detected exclusively in ADSC-Y and BMNC-Y pure DNA samples. The SRY gene internal fragment (110bp) was detected in 100% of the blood and lung samples from the ADSC-Y and BMNC-Y female recipients. The nested-PCR technique increased sensitivity and reliability for molecular diagnostic of presence or absence of male mice cells in body fluids and tissues of female recipients after endovenous transplantation.(AU)


A terapia celular traz perspectivas encorajadoras à medicina humana e veterinária. Experimentalmente, a manipulação genética permite a marcação e a localização de células alogênicas. Porém, isso torna seu genótipo/fenótipo diferente daquelas usadas clinicamente, sem marcação. Alternativamente, a presença do cromossomo Y possibilita detectar células de doadores machos no organismo de fêmeas. Todavia, a concentração de células transplantadas pode ser mínima em certos tecidos, pela distribuição sistêmica. Neste estudo, foi desenvolvida uma nested-PCR multiplex, visando a aumentar a sensibilidade do diagnóstico de presença/ausência de células derivadas do tecido adiposo (CDTA-Y) e derivadas da fração mononuclear da medula óssea (CFMO-Y) de camundongos machos, em amostras de sangue e de pulmões de camundongos fêmeas, após transplante endovenoso. Quatro fêmeas receberam placebo; quatro fêmeas receberam CDTA-Y de dois machos; e quatro fêmeas receberam CFMO-Y de dois machos. A primeira fase da PCR teve dois pares de primers (multiplex): um para amplificação de fragmento do cromossomo Y (SRYout; 300pb); outro para amplificação de fragmento do cromossomo X (gene DXNds3). Na segunda fase da PCR, foi usado um par de primers para amplificação de fragmento de 110pb (SRYinn) interno ao produto amplificado pelo SRYout. O controle interno da reação (gene DXNds3) foi detectado em todas as amostras de DNA testadas, enquanto que o fragmento externo do gene SRY (300pb) foi detectado apenas nas amostras puras de DNA de CDTA-Y e CFMO-Y. O fragmento interno do gene SRY (110pb) foi detectado no sangue e nos pulmões de 100% das receptoras de CDTA-Y e CFMO-Y. A técnica de nested-PCR aumentou a sensibilidade e a segurança do diagnóstico molecular de presença ou ausência de células de camundongos machos em fluidos e tecidos de receptoras fêmeas após transplante endovenoso.(AU)


Assuntos
Camundongos , Terapia Baseada em Transplante de Células e Tecidos/veterinária , Cromossomos , Transplante/métodos , Diagnóstico
3.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 50(5): 406-413, 2013. tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-334219

Resumo

The aim of this study was to evaluate genetic diversity of nine molecular markers, six short tandem repeats - STRs (BM4325, BMS3004, ILSTS002, IDVGA51, HEL5, AFZ1) and three single nucleotide polymorphisms (SNPs; LepSau3A1 A-B, LepSau3A1 1-2, and FSHRAlu1), linked to genes involved in reproductive function and their possible effect on reproductive performance. For this purpose, 81 crossbred beef cows were used in this study. The animals were classified into two groups (fertile and sub-fertile cows) based on their pregnancy status after two breeding seasons. High genetic diversity level was observed highlighted by the polymorphic content information ranging 0.23 to 0.87 and expected heterozygosity from 27 to 89%, with an average of 62%. Alleles BM4325 103, BMS3004 129, ILSTS002 137, IDVGA51 177, LEPSau3A1 A, LEPSau3A1 1, HEL5 149, AFZ1 119 and FSHRAlu1 G presented high frequencies. Two STRs (IDVGA51 and ILSTS002), linked to Leptin and LH genes, respectively, were associated to reproductive performance. These data support previous findings suggesting the potential use of IDVGA51 and ILSTS002 STRs for reproductive performance selection(AU)


Foi avaliada a diversidade genética de nove marcadores moleculares, dos quais seis do tipo short tandem repeats - STR (BM4325, BMS3004, ILSTS002, IDVGA51, HEL5, AFZ1) e três do tipo single nucleotide polymorphisms - SNPs (LepSau3A1 A-B, LepSau3A1 1-2 e FSHRAlu1), ligados a genes envolvidos na reprodução e seus efeitos na performance reprodutiva. Foram examinadas amostras de sangue de 81 vacas sem raça definida, os animais foram classificados em dois grupos (vacas férteis e subférteis) baseado nas taxas de prenhez de duas estações reprodutivas. Alto nível de diversidade genética foi observado, revelando alto conteúdo de informação polimórfica, variando de 0,23 a 0,87 e heterozigosidade esperada de 27 a 89% com 62% em média. Os alelos mais frequentes foram BM4325 103*, BMS3004 129*, ILSTS002 137*, IDVGA51 177*, LEPSau3A1 A, LEPSau3A1 1, HEL5 149*, AFZ1 119* e FSHRAlu1 G. Os marcadores IDVGA51 e ILSTS002, ligados aos genes da leptina e LH, respectivamente, foram associados a performance reprodutiva. Esses dados suportam achados prévios que sugerem o potencial uso desses marcadores na seleção de animais com maior performance reprodutiva(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Gravidez , Bovinos , Polimorfismo de Nucleotídeo Único/genética , Sequências de Repetição em Tandem/genética , Variação Genética/genética , Leptina/genética , Hormônio Luteinizante Subunidade beta/genética , Técnicas de Reprodução Assistida/veterinária
4.
Acta sci. vet. (Impr.) ; 41: Pub. 1149, 2013. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1371965

Resumo

Background: The marker assisted selection (MAS) is indicated as an auxiliary strategy to increase the productive performance in cattle. The principle consists in the identifi cation and selection of molecular markers associated with genes involved directly or indirectly with the expression of a desired trait, usually multifactorial and polygenic. The pregnancy rate is a form of expression fertility, with great economic importance in cattle production systems. The pregnancy rate is a multifactorial trait, which is infl uence by genetics, environment and their interactions. In the current study was search for an association between the reproductive response, expressed by pregnancy rate at insemination and pregnancy rate at the end of the mating season, and molecular markers of genes related to IGF-1 receptor, LHß, Leptin, receptors of FSH and LH. Materials, Methods & Results: Data were evaluated from 249 beef heifers of British breeds, Angus, Devon and crosses. The animals at fourteen or twenty seven months were subjected to different protocols for artificial insemination (AI) and fixed-time artificial insemination (TAI), followed by clean up bulls. The protocols AI and TAI, called AI/TAI, were: Group 1 -Ovsynch protocol (27th months). At day zero the animals received an injection of a GnRH at a dose of 10 µg buserelin, at seventh day received 500 µg of cloprostenol sodium, at ninth day the animals received another dose of 10 µg of buserelin. TAI was performed 10 h after the application of buserelin; Group 2 - Protocol Crestar® with ½ dose of estradiol valerate injectable (27th months). At eighth day the implant was removed, followed by 375 µg of cloprostenol sodium. At ninth day, was administered 1 mg of estradiol benzoate. TAI was performed in tenth day, 52 h after implant removal; Group 3 - Control group (27th months), with AI 12 h after estrus during the fi rst seven days. Seventh day, was applied 375 µg of cloprostenol sodium on all heifers not inseminated, followed by AI for fi ve days more; Group 4 (14th months) - Same protocol of the Group 2; Group 5 (14th months) - Same protocol of the Group 3. During the group formation, blood samples for extraction of DNA were obtained individually from all experimental animals. Microsatellite markers (short tandem repeats, STR) and/or single nucleotide polymorphisms (SNPs) were investigated by means of polymerase chain reaction (PCR). The STR investigated were the AFZ-1, HEL5, ILST002, IDVGA51, FSHR and LHR. We considered the effects of the treatment groups, age, body condition score (BCS), reproductive tract score (RTS), weight at the beginning of the breeding season, daily weight gain on pregnancy rate to AI/TAI and pregnancy rate to final. Molecular markers investigated did not show association with pregnancy rate. The mean pregnancy rate at insemination was 41.0% and the pregnancy rate final was 91.6%. There were no differences in pregnancy between the age of the animals. The average weight at the beginning of the mating was 313 kg without differentiate between animal that become pregnant or empty during the reproductive season. The RTS influenced the pregnancy rate after insemination in respectively 0%, 32.1% and 49.5% (P < 0.05) for RTS 1, 2 and 3. Discussion: Molecular markers AFZ-1, HEL5, ILST002, IDVGA51, FSHR and LHR could not be associated with pregnancy rate at insemination and pregnancy in beef heifers, perhaps because the high degree of reproductive selection that these animals are subjected. The nutritional status of the herd, expressed by weight and body condition score at mating of animals contributed to the achievement of significant pregnancy rates. The reproductive tract score can be considered as a predictor of fertility in herds of beef heifers.


Assuntos
Animais , Feminino , Prenhez/genética , Bovinos/genética , Inseminação Artificial/veterinária , Frequência do Gene
5.
Vet. foco ; 5(2): 85-92, jan.-jun. 2008. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1502735

Resumo

Foi analisada a diversidade genética, em doadoras de embrião puras de origem das raças Nelore e Aberdeen Angus, através de marcadores moleculares (6 repetições curtas em tandem e 3 polimorfismos de um nucleotídeo) ligados à reprodução. A variação observada do número de alelos detectados nas raças Nelore e Angus foi de 2 a 8 e 1 a 10, respectivamente. As duas raças não apresentaram freqüências alélicas semelhantes em nenhum dos sistemas estudados e alguns alelos foram observados somente em uma das raças, como para A. Angus BMS3004 129, HEL5 161, e, para Nelore BMS3004 132, 138, HEL5 149 e AFZ 111. Os valores de heterozigose esperada, nos diversos sistemas, em A. Angus variou de 0 a 87%, enquanto que, em Nelore, oscilou entre 0,03 e 0,75, sendo as médias de 56 e 50%, respectivamente. Conclui-se que as práticas seletivas aplicadas a estes rebanhos não afetaram grandemente a variabilidade genética dos mesmos. A diversidade entre rebanhos foi bastante alta, refletindo-se em baixa probabilidade (6x10-9) de encontrar dois indivíduos geneticamente identicos, um de cada rebanho


This paper analyzed the genetic diversity of embryos donors from Nellore and Aberdeen Angus pure of origin breeds, through molecular markers (6 short tandem repeats and 3 single nucleotide polymorphisms) linked to reproduction. The variation observed in the number of alleles in Nellore and A. Angus breeds was 2 to 8 and 1 to 10, respectively. No similarity in allele frequencies was observed in both breeds in all investigated systems, and some alleles were exclusive of one of the herds, such as BMS3004 129, HEL5 161, in A. Angus, and BMS3004


Assuntos
Feminino , Animais , Variação Genética
6.
Vet. Foco ; 5(2): 85-92, jan.-jun. 2008. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-3326

Resumo

Foi analisada a diversidade genética, em doadoras de embrião puras de origem das raças Nelore e Aberdeen Angus, através de marcadores moleculares (6 repetições curtas em tandem e 3 polimorfismos de um nucleotídeo) ligados à reprodução. A variação observada do número de alelos detectados nas raças Nelore e Angus foi de 2 a 8 e 1 a 10, respectivamente. As duas raças não apresentaram freqüências alélicas semelhantes em nenhum dos sistemas estudados e alguns alelos foram observados somente em uma das raças, como para A. Angus BMS3004 129, HEL5 161, e, para Nelore BMS3004 132, 138, HEL5 149 e AFZ 111. Os valores de heterozigose esperada, nos diversos sistemas, em A. Angus variou de 0 a 87%, enquanto que, em Nelore, oscilou entre 0,03 e 0,75, sendo as médias de 56 e 50%, respectivamente. Conclui-se que as práticas seletivas aplicadas a estes rebanhos não afetaram grandemente a variabilidade genética dos mesmos. A diversidade entre rebanhos foi bastante alta, refletindo-se em baixa probabilidade (6x10-9) de encontrar dois indivíduos geneticamente identicos, um de cada rebanho(AU)


This paper analyzed the genetic diversity of embryos donors from Nellore and Aberdeen Angus pure of origin breeds, through molecular markers (6 short tandem repeats and 3 single nucleotide polymorphisms) linked to reproduction. The variation observed in the number of alleles in Nellore and A. Angus breeds was 2 to 8 and 1 to 10, respectively. No similarity in allele frequencies was observed in both breeds in all investigated systems, and some alleles were exclusive of one of the herds, such as BMS3004 129, HEL5 161, in A. Angus, and BMS3004(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Variação Genética
7.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-2131

Resumo

O objetivo do presente trabalho foi estabelecer um cultivo primário de células intestinais de suínos para a caracterização celular quanto a expressão de RNAm de genes relacionados á formação e desenvolvimento pancreático e ao metabolismo da insulina. O tecido intestinal e as células isoladas de leitões neonatos foram avaliados quanto a expressão de RNAm dos genes pancreáticos por qRT-PCR. O tecido e as células isoladas antes e depois do cultivo, nas duas primeiras passagens, foram avaliados para os genes Pdx1 (Pancreatic and duodenal homeobox), Ngn3 (Neurogin3), NeuroD1 (Neurogin differentiation 1), PC1/3 (Prohormone convertase 1/3), PC2 (Prohormone convertase 2) e o gene da insulina (INS). O intestino e a passagem 2 das células cultivadas foram avaliadas quanto a presença de insulina por imunofluorescência. No primeiro experimento, as células intestinais foram cultivadas em meio contendo RPMI, EGF, penicilina, anfotericina B e insulina (10μg/ml). Para os genes Ngn3, PC1/3 e PC2 a expressão de RNAm não diferiu durante o processo de obtenção das células nem durante as passagens, enquanto que para os genes Pdx1, INS e NeuroD1 a expressão diminuiu nas células cultivadas. No segundo experimento, foi realizado um cultivo primário de células intestinais de suínos neonatos, utilizando o meio básico descrito no primeiro experimento, mas sem insulina (grupo controle) ou com 25 mM de glicose e sem insulina (grupo tratamento). Esse experimento foi realizado com o objetivo de avaliar a expressão desses genes em resposta á ausência da insulina ou presença de glicose no cultivo. Independentemente da adição de glicose, houve uma diminuição da expressão de todos os genes estudados ao longo da primeira passagem e um aumento (retornando aos níveis iniciais encontrados no intestino), ou até superiores (NeuroD1) em células da segunda passagem, com exceção do Pdx1. A quantidade de mRNA para Pdx1 observada no tecido intestinal se manteve nas células isoladas e na primeira passagem, independente da presença de glicose, e decresceu nas células da segunda passagem. Anticorpos para insulina não detectaram a presença desta proteína no tecido intestinal, bem como nas células cultivadas com adição de glicose e do grupo controle. Com base nesses resultados, pode-se inferir que as células intestinais duodenais de suínos neonatos possuem um caráter de célula progenitora pancreática, em função do padrão de expressão gênica, porém não são capazes de produzir a proteína insulina. No entanto, observando os dados de expressão de RNAm é possível sugerir que essas células podem ser mais facilmente diferenciadas e consequentemente usadas em estudos de terapia celular para diabetes mellitus tipo 1


The objective of the present study was to establish a primary culture of intestinal cells and to characterize the mRNA expression profile of genes related to pancreatic formation, development and insulin metabolism. The mRNA expression of pancreatic-related genes was evaluated in intestinal tissue and isolated cells from newborn piglet by qRT-PCR. The tissue and isolated cells before and after culture from the first two passages were evaluated for Pdx1 (Pancreatic and duodenal homeobox), Ngn3 (Neurogin3), NeuroD1 (Neurogenic differentiation 1), PC1/3 (Prohormone convertase 1/3), PC2 (Prohormone convertase 2) and insulin (INS) gene expression. The intestinal tissue and passage 2 of cultured cells were evaluated for the presence of insulin by immunofluorescence. In the first experiment, cells were cultured in RPMI medium plus EGF, penicillin, amphotericin B, and insulin (10 μg/ml). The Ngn3, PC1/3 and PC2 expression did not differ during cell isolation process and culture passages, while for genes Pdx1, INS and NeuroD1 the expression decreased in cultured cells. In the second experiment, a primary cell culture of porcine newborn intestinal cells were performed using the same medium describe above but without insulin (control group) or with glucose (25 mM) and without insulin (treatment group). The objective of this experiment was to evaluate the mRNA expression of pancreatic-related genes in response to glucose. Independently of the presence of glucose, the expression of all studied genes decreased at passage 1 and raised (to the same levels found in intestine) or even higher (NeuroD1) at passage 2 of cultured cells, except for Pdx1. The Pdx1 mRNA expression observed in intestinal tissue was maintained through first cell passage, but decreased at passage 2. The intestinal tissue and cells cultured with or without glucose from the second passage did not reveal any insulin-producing cell by immunofluorescence. Our results let us to conclude that newborn duodenal tissue had cells that express mRNA pancreatic markers; however, these cells were not able to produce insulin. The results of this study allowed us to infer that newborn piglet duodenal cells have potential to be transdifferentiated in insulin producing cells for cell therapy of type 1 diabetes mellitus

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