Hemoparasites in Didelphis aurita from Seropédica, Rio de Janeiro state, Brazil / Hemoparasitos em Didelphis aurita capturados em Seropédica, estado do Rio de Janeiro, Brasi

The present study aimed to use polymerase chain reaction (PCR) to detect species of the order Piroplasmida, such as Anaplasma spp., Borrelia spp., and Ehrlichia spp., circulating in the blood of Didelphis aurita in a peridomiciliary environment. Blood samples collected from big-eared opossum (Didelphis aurita) were screened for hemoparasites using PCR. The extracted DNA was tested for tick-borne hemoparasites. We were unable to detect hemoparasites, such as Ehrlichia spp., Babesia spp., Anaplasma spp., and Borrelia spp. Theileria DNA was detected in only one sample screened using PCR for an approximately 650-base pair fragment of the 18S rRNA gene. Sequencing and BLAST analysis of a subset of the PCR amplicons revealed 97% (535/553 bp) identity with Theileria bicornis. The detection of Theileria sp. in D. aurita challenges us to pursue more in-depth studies of marsupial piroplasmosids and to evaluate the morphological aspects of the findings and their possible involvement in zoonoses.

O objetivo do presente estudo foi utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar espécies da ordem Piroplasmida, como Anaplasma spp., Borrelia spp. e Ehrlichia spp., circulando no sangue de Didelphis aurita em ambiente peridomiciliar. Amostras de sangue coletadas de gambá da orelha preta (Didelphis aurita) foram triadas para hemoparasitas por meio da PCR. O DNA extraído foi testado para alguns hemoparasitas transmitidos por carrapatos. Não conseguimos detectar hemoparasitos, como Ehrlichia spp., Babesia spp., Anaplasma spp. e Borrelia spp. O DNA de Theileria foi detectado apenas em uma amostra. Um fragmento de ~650 pares de bases do gene 18S rRNA foi sequenciado. e a análise pelo BLAST (um subconjunto de amplicons de PCR) revelou uma identidade de 97% (535/553 pb) com Theileria bicornis. A detecção de Theileria sp. in D. aurita nos desafia a aprofundar estudos sobre piroplasmosídeos marsupiais e avaliar os aspectos morfológicos dos achados e seu possível envolvimento com zoonoses.

Hemoparasites in ticks of wild birds of Serra dos Órgãos National Park, state of Rio de Janeiro, Brazil / Hemoparasitos em carrapatos de aves silvestres do Parque Nacional da Serra dos Órgãos, estado do Rio de Janeiro, Brasil

The aim of this study is to detect the presence of tick-borne agents of genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Ehrlichia and Anaplasma in ticks collected from native wild birds in the state of Rio de Janeiro. Birds were captured and observed carefully to find the ectoparasites. DNA detection of hemoparasites was performed by means of the polymerase chain reaction (PCR). The sequences obtained were analyzed and their homologies were compared to the available isolates in the GenBank platform database. A total of 33 birds were captured from 20 different species, of which 14 were parasitized by Amblyomma longirostre (n = 22). There was absence of DNA from agents of the genera Babesia, Anaplasma and Ehrlichia in the evaluated samples. The phylogenetic analysis indicated that one sample had 100% identity with Rickettsia bellii (KJ534309), the other two samples showed 100% identity with Rickettsia sp. Aranha strain and strain AL (EU274654 and AY360216). The positive sample for R. bellii was also demonstrated to be positive for Borrelia sp., which presented a similarity of 91% with Borrelia turcica (KF422815). This is the first description of Borrelia sp. in ticks of the genus Amblyomma in South America.(AU)

Este trabalho teve como objetivo detectar evidências moleculares da presença de agentes dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Anaplasma e Ehrlichia transmitidos por carrapatos coletados de aves silvestres no estado do Rio de Janeiro. Aves foram capturadas e observadas cuidadosamente a procura de ectoparasitos. A detecção de DNA de hemoparasitos foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). As sequências obtidas foram analisadas e sua homologia comparada aos isolados disponíveis na base de dados da plataforma GenBank. Foram capturadas 33 aves, de 20 espécies diferentes das quais 14 estavam parasitadas por Amblyomma longirostre (n = 22). Houve ausência de DNA de agentes dos gêneros Babesia, Anaplasma e Ehrlichia nas amostras avaliadas. A análise filogenética indicou que uma amostra apresentou 100% de identidade com Rickettsia bellii (KJ534309), as outras duas amostras apresentaram 100% de identidade com Rickettsia sp. cepa Aranha e Cepa AL (EU274654 e AY360216.). A amostra positiva para R. bellii também apresentou positividade para Borrelia sp. que apresentou similaridade de 91% com Borrelia turcica (KF422815). Esta é a primeira descrição de Borrelia sp. em carrapatos do gênero Amblyomma na América do Sul.(AU)

Clinical and epidemiological use of nested PCR targeting the repetitive element IS1111 associated with the transposase gene from Coxiella burnetii

Q fever is a worldwide zoonosis caused by Coxiella burnetii—a small obligate intracellular Gram-negative bacterium found in a variety of animals. It is transmitted to humans by inhalation of contaminated aerosols from urine, feces, milk, amniotic fluid, placenta, abortion products, wool, and rarely by ingestion of raw milk from infected animals. Nested PCR can improve the sensitivity and specificity of testing while offering a suitable amplicon size for sequencing. Serial dilutions were performed tenfold to test the limit of detection, and the result was 10× detection of C. burnetti DNA with internal nested PCR primers relative to trans-PCR. Different biological samples were tested and identified only in nested PCR. This demonstrates the efficiency and effectiveness of the primers. Of the 19 samples, which amplify the partial sequence of C. burnetii, 12 were positive by conventional PCR and nested PCR. Seven samples—five spleen tissue samples from rodents and two tick samples—were only positive in nested PCR. With these new internal primers for trans-PCR, we demonstrate that our nested PCR assay for C. burnetii can achieve better results than conventional PCR.(AU)

Morphological, molecular and phylogenetic characterization of Borrelia theileri in Rhipicephalus microplus / Caracterização morfológica, molecular e filogenética de Borrelia theileri em Rhipicephalus microplus

This study aimed to perform a morphological, molecular and phylogenetic characterization of Borrelia theileri obtained from infected Rhipicephalus microplus in Brazil. Fifty engorged R. microplus females from cattle in the municipality of Seropédica, Rio de Janeiro, were analyzed for spirochetes by hemolymph smear. Macerated eggs and positive ticks, as well as blood from the bovine infested by these ticks, were analyzed the glpQ, flaB and hpt genes by PCR. The PCR products were purified and sequenced for analysis and construction of a phylogenetic tree. Only 2% (1/50) of the ticks generated a positive result by both smear and PCR. The spiral forms (n = 50) had (media ± SD) a mean length of 19.17 ± 4.12 µm, diameter of 0.2935 ± 0.0469 and number of turns 8.44 ± 2.59. Sequence alignments of the three evaluated genes exhibited 98% similarity to B. theileri isolates, occurring in a clade highly related to B. theileri strain KAT. Egg maceration samples were positive for the three evaluated genes, whereas bovine blood was negative by PCR. This is the most detailed characterization of B. theileri in the Americas to-date, presenting morphological, molecular and phylogenetic data, including the transovarial transmission of the spirochete in the host tick.(AU)

O estudo teve como objetivo realizar a caracterização morfológica, molecular e filogenética de Borrelia theileri obtida de Rhipicephalus microplus naturalmente infectado em bovino no estado do Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 50 fêmeas de R. microplus ingurgitadas foram analisadas para espiroquetas por meio de esfregaço de hemolinfa. Ovos macerados e carrapatos, assim como sangue de bovinos infectados por esses carrapatos, foram analisados os genes glpQ, flaB e hpt por PCR. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados para análise e construção de uma árvore filogenética. Apenas 2% (1/50) dos carrapatos geraram um resultado positivo tanto pelo esfregaço como pela PCR. As formas espirais (n = 50) apresentaram (média ± DP) comprimento médio de 19,17 ± 4,12, diâmetro de 0,2935 ± 0,0469 e número de voltas de 8,44 ± 2,59. Os alinhamentos das sequências dos três genes avaliados exibiram 98% de similaridade aos isolados de B. theileri, ocorrendo em um clado altamente relacionado à linhagem de B. theileri KAT. As amostras de maceração de ovos foram positivas para os três genes avaliados, enquanto o sangue bovino foi negativo pela PCR. Esta é a mais completa caracterização de B. theileri nas Américas, apresentando dados morfológicos, moleculares e filogenéticos, incluindo a transmissão transovarial da espiroqueta no carrapato hospedeiro.(AU)