Resumo
Polymorphisms in the BMP-15 gene related to Galway (FecXG) and Inverdale (FecXI) and in the BMPR-1B gene known as Booroola (FecB) mutations were investigated using the Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method, on sheep from the breeds Santa Inês (n= 574) and Morada Nova (n=282). DNA was extracted and amplified through PCR with specific primers that introduced a restriction site in association with the mutation. The PCR products were submitted to endonucleases. The experiment found no FecXG and FecXI mutations. Six samples of animals with multiple offspring/birth history presented polymorphism for FecB similar to control samples, but this pattern was not confirmed by nucleotide sequencing. Although the absence of these mutations in the studied breeds, other factors related to prolificacy should be investigated to explain the inherent prolificity mechanisms.(AU)
Polimorfismos Galway (Fec XG ) e Inverdale (Fec XI), relacionados ao gene BMP-15, e Booroola (FecB), localizado no gene BMPR-1B, foram investigados usando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase - polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), em ovelhas Santa Inês (n= 574) e Morada Nova (n=282). O DNA foi extraído e amplificado por PCR com iniciadores específicos, que introduziram um sítio de restrição associado à mutação, em seguida os amplicons foram submetidos à ação de endonucleases. Não foram observadas as mutações Fec XG e Fec XI nas amostras estudadas. Amostras de seis animais com histórico de partos gemelares apresentaram polimorfismo para FecB semelhantes às amostras controle, mas esse padrão não foi confirmado pelo sequenciamento de nucleotídeos. Apesar da ausência dessas mutações nos animais das raças estudadas, outros fatores relacionados à prolificidade devem ser pesquisados para explicar os mecanismos da alta prolificidade desses animais.(AU)
Assuntos
Animais , Polimorfismo Genético , Ovinos/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Polimorfismo de Fragmento de RestriçãoResumo
Polymorphisms in the BMP-15 gene related to Galway (FecXG) and Inverdale (FecXI) and in the BMPR-1B gene known as Booroola (FecB) mutations were investigated using the Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method, on sheep from the breeds Santa Inês (n= 574) and Morada Nova (n=282). DNA was extracted and amplified through PCR with specific primers that introduced a restriction site in association with the mutation. The PCR products were submitted to endonucleases. The experiment found no FecXG and FecXI mutations. Six samples of animals with multiple offspring/birth history presented polymorphism for FecB similar to control samples, but this pattern was not confirmed by nucleotide sequencing. Although the absence of these mutations in the studied breeds, other factors related to prolificacy should be investigated to explain the inherent prolificity mechanisms.(AU)
Polimorfismos Galway (Fec XG ) e Inverdale (Fec XI), relacionados ao gene BMP-15, e Booroola (FecB), localizado no gene BMPR-1B, foram investigados usando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase - polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), em ovelhas Santa Inês (n= 574) e Morada Nova (n=282). O DNA foi extraído e amplificado por PCR com iniciadores específicos, que introduziram um sítio de restrição associado à mutação, em seguida os amplicons foram submetidos à ação de endonucleases. Não foram observadas as mutações Fec XG e Fec XI nas amostras estudadas. Amostras de seis animais com histórico de partos gemelares apresentaram polimorfismo para FecB semelhantes às amostras controle, mas esse padrão não foi confirmado pelo sequenciamento de nucleotídeos. Apesar da ausência dessas mutações nos animais das raças estudadas, outros fatores relacionados à prolificidade devem ser pesquisados para explicar os mecanismos da alta prolificidade desses animais.(AU)
Assuntos
Animais , Ovinos/genética , Polimorfismo Genético , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Polimorfismo de Fragmento de RestriçãoResumo
A identificação do sexo tem sido estudada principalmente para fins de manejo ou comerciais. O presente estudo visou determinar a menor quantidade de DNA extraída com CTAB a 10%, necessária para identificar o sexo genético das espécies caprina e ovina, sendo usados diferentes protocolos de reações em cadeia da polimerase (PCR) multiplex para os genes SRY, Aml-X e regiões ZFX/ZFY. O DNA foi extraído do sangue de 20 animais de cada espécie. A PCR foi realizada utilizando-se SRY na identificação do cromossomo Y e tanto Aml-X quanto ZFX/ZFY como controles. As amostras com quantidades acima de 1,0 ng apresentaram 100% de amplificações nos protocolos empregados, o que sugere a viabilidade das técnicas utilizadas para identificação sexual, que futuramente poderão ser utilizadas em biópsias embrionárias ou em espermatozoides.(AU)
The identification of the sex has been studied mostly for handling and commercial finalities. This study aimed to determine the smallest amount of DNA possible (extracted with 10% CTAB) to identify the genetic sex of goat and sheep using different multiplex polymerase chain reaction (PCR) protocols for genes SRY and Aml-X and regions ZFX/ZFY. The DNA was extracted from the blood of 20 animals of both species. The PCR was carried out for each species using SRY to identify chromosome Y, while both Aml-X and ZFX/ZFY were used as control. The samples with quantities higher than 1.0 ng showed 100% amplifications in the protocols used, which suggests the viability of the these techniques for sexing, and they can be used in the future in embryo biopsies and sperma.(AU)
Assuntos
Animais , DNA/análise , DNA/genética , Ruminantes/genética , Reação em Cadeia da Polimerase Multiplex/métodosResumo
A identificação do sexo tem sido estudada principalmente para fins de manejo ou comerciais. O presente estudo visou determinar a menor quantidade de DNA extraída com CTAB a 10%, necessária para identificar o sexo genético das espécies caprina e ovina, sendo usados diferentes protocolos de reações em cadeia da polimerase (PCR) multiplex para os genes SRY, Aml-X e regiões ZFX/ZFY. O DNA foi extraído do sangue de 20 animais de cada espécie. A PCR foi realizada utilizando-se SRY na identificação do cromossomo Y e tanto Aml-X quanto ZFX/ZFY como controles. As amostras com quantidades acima de 1,0 ng apresentaram 100% de amplificações nos protocolos empregados, o que sugere a viabilidade das técnicas utilizadas para identificação sexual, que futuramente poderão ser utilizadas em biópsias embrionárias ou em espermatozoides.
The identification of the sex has been studied mostly for handling and commercial finalities. This study aimed to determine the smallest amount of DNA possible (extracted with 10% CTAB) to identify the genetic sex of goat and sheep using different multiplex polymerase chain reaction (PCR) protocols for genes SRY and Aml-X and regions ZFX/ZFY. The DNA was extracted from the blood of 20 animals of both species. The PCR was carried out for each species using SRY to identify chromosome Y, while both Aml-X and ZFX/ZFY were used as control. The samples with quantities higher than 1.0 ng showed 100% amplifications in the protocols used, which suggests the viability of the these techniques for sexing, and they can be used in the future in embryo biopsies and sperma.