Identification of Pentatrichomonas hominis in preputial washes of bulls in Brazil / Identificação de Pentatrichomonas hominis em lavado prepucial de touros no Brasil

The parabasalid Pentatrichomonas hominis is generally considered to represent a symbiotic component of the gastrointestinal microbiota in a wide variety of vertebrate hosts including humans. Nevertheless, a limited number of studies have raised the possibility that it may act as a pathogen of humans, dogs, and pigs and that some human infections may have a zoonotic origin. Data from North America revealed an association between P. hominis and the bovine urogenital tract, principally in bulls and rarely in cows. The importance of this observation is linked to possible interference in the accurate diagnosis of the economically important venereal pathogen Tritrichomonas foetus. The current study employed culture-based and molecular methods to examine the preputial cavities of four breeding bulls, raised in open pasture in southeastern Brazil, for the presence of trichomonads. Motile protozoa were isolated from three of the bulls and were definitively identified as P. hominis based on nucleotide sequencing of polymerase chain reaction (PCR) amplicons derived from the ribosomal RNA operon (ITS1-5.8S rDNA-ITS2) of the parasite. The potential implications of these findings for bovine and human health are discussed.(AU)

O parabasalídeo Pentatrichomonas hominis é geralmente considerado um componente simbiótico da microbiota gastrointestinal em uma ampla variedade de hospedeiros vertebrados, incluindo os humanos. No entanto, um número limitado de estudos levantou a possibilidade de que possa atuar como patógeno de humanos, cães e suínos, e que algumas infecções humanas possam ter origem zoonótica. Dados da América do Norte revelaram uma associação entre P. hominis e o trato urogenital bovino, principalmente, em touros e raramente em vacas. A importância dessa observação está ligada a uma possível interferência no diagnóstico preciso do patógeno venéreo de importância econômica Tritrichomonas foetus. O presente estudo empregou métodos baseados em cultura em combinação com técnicas moleculares, para examinar as cavidades prepuciais de quatro touros, criados em pastagem aberta no sudeste do Brasil, quanto à presença de tricomonas. Protozoários móveis foram isolados de três dos touros e foram definitivamente identificados como P. hominis com base no sequenciamento de nucleotídeos de amplicons geradas pela reação em cadeia da polimerase (PCR), empregando a região RNA ribossômico (ITS1-5.8S rDNA-ITS2) do parasita como alvo. Os potenciais implicações desses achados para a saúde bovina e humana são discutidas.(AU)

Diagnóstico parasitológico de Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) em hamster golden (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparação entre as técnicas de sedimentação, flutuação e exame direto / Parasitological diagnosis of Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) in golden hamster (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparison between sedimentation, flotation and direct examination techniques

A experimentação animal é primordial para os avanços científicos em prol da saúde humana e animal. Inúmeros parasitos que acometem animais de laboratório podem interferir nas pesquisas, comprometendo os resultados. O protozoário Tritrichomonas muris pode ser um bioindicador de quebra de barreiras sanitárias em instalações de animais de laboratório, auxiliando na conduta do manejo e melhoria do padrão de qualidade animal. Este trabalho comparou três métodos parasitológicos, visando implantar a metodologia mais adequada em uma rotina de monitoramento sanitário de um biotério de criação de hamsters golden (Mesocricetus auratus). Foram utilizados 50 hamsters, entre três meses a um ano de idade, selecionados por amostragem, para exames parasitológicos nos períodos de monitoramento sanitário pré-estabelecidos. A análise foi feita por dois anos, abrangendo um total de oito exames trimestrais. O diagnóstico foi realizado por exame direto, flutuação de Willis-Mollay e sedimentação espontânea de Dennis Stone & Swanson a partir da mucosa intestinal e das fezes frescas in natura. Foram identificados apenas trofozoítos de T. muris nas três primeiras porções intestinais selecionadas no estudo (intestino delgado, ceco e cólon), enquantoa forma de pseudocisto foi detectada nas amostras fecais e na região do reto onde já há fezes formadas. Tais achados são embasados no mecanismo do ciclo de vida do protozoário em questão. O método direto mostrou maior eficácia para o diagnóstico de T. muris para a identificação de trofozoítos e pseudocistos, tanto nas fezes formadas, como na mucosa intestinal devidamente fragmentada em suas diferentes regiões.

Animal experimentation is primordial to scientific advances for human and animal health. Numerous parasites that affect laboratory animals can interfere with research, compromising the results. The protozoan Tritrichomonas muris can be a bioindicator of breaking down health barriers in laboratory animal facilities, helping to conduct management and improve animal quality standards. This work compared three parasitological methods, aiming to implement the most suitable methodology in a sanitary monitoring routine of a golden hamster breeding (Mesocricetus auratus). Fifty hamsters from three months to one year of age, selected by sampling, were used for parasitological examinations in pre-established sanitary monitoring periods. Analysis was performed for two years, covering a total of eight quarterly exams. The diagnosis was carried out by direct examination, Willis-Mollay flotation and spontaneous sedimentation by Dennis Stone & Swanson from the intestinal mucosa and fresh stool. Only T. muris trophozoites were identified in the first three intestinal portions selected in the study (small intestine, cecum and colon), while the pseudocyst form was detected in faecal samples and in the rectal region where there are already formed stools. Such findings are based on the life-cycle mechanism of this protozoan. The direct method showed greater efficacy for the diagnosis of T. muris for the identification of trophozoites and pseudocysts, both in formed feces and in the intestinal mucosa, properly fragmented in their different regions.

Diagnóstico parasitológico de Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) em hamster golden (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparação entre as técnicas de sedimentação, flutuação e exame direto / Parasitological diagnosis of Tritrichomonas muris (Grassi, 1879) in golden hamster (Mesocricetus auratus) (Waterhouse, 1839): comparison between sedimentation, flotation and direct examination techniques

A experimentação animal é primordial para os avanços científicos em prol da saúde humana e animal. Inúmeros parasitos que acometem animais de laboratório podem interferir nas pesquisas, comprometendo os resultados. O protozoário Tritrichomonas muris pode ser um bioindicador de quebra de barreiras sanitárias em instalações de animais de laboratório, auxiliando na conduta do manejo e melhoria do padrão de qualidade animal. Este trabalho comparou três métodos parasitológicos, visando implantar a metodologia mais adequada em uma rotina de monitoramento sanitário de um biotério de criação de hamsters golden (Mesocricetus auratus). Foram utilizados 50 hamsters, entre três meses a um ano de idade, selecionados por amostragem, para exames parasitológicos nos períodos de monitoramento sanitário pré-estabelecidos. A análise foi feita por dois anos, abrangendo um total de oito exames trimestrais. O diagnóstico foi realizado por exame direto, flutuação de Willis-Mollay e sedimentação espontânea de Dennis Stone & Swanson a partir da mucosa intestinal e das fezes frescas in natura. Foram identificados apenas trofozoítos de T. muris nas três primeiras porções intestinais selecionadas no estudo (intestino delgado, ceco e cólon), enquantoa forma de pseudocisto foi detectada nas amostras fecais e na região do reto onde já há fezes formadas. Tais achados são embasados no mecanismo do ciclo de vida do protozoário em questão. O método direto mostrou maior eficácia para o diagnóstico de T. muris para a identificação de trofozoítos e pseudocistos, tanto nas fezes formadas, como na mucosa intestinal devidamente fragmentada em suas diferentes regiões.(AU)

Animal experimentation is primordial to scientific advances for human and animal health. Numerous parasites that affect laboratory animals can interfere with research, compromising the results. The protozoan Tritrichomonas muris can be a bioindicator of breaking down health barriers in laboratory animal facilities, helping to conduct management and improve animal quality standards. This work compared three parasitological methods, aiming to implement the most suitable methodology in a sanitary monitoring routine of a golden hamster breeding (Mesocricetus auratus). Fifty hamsters from three months to one year of age, selected by sampling, were used for parasitological examinations in pre-established sanitary monitoring periods. Analysis was performed for two years, covering a total of eight quarterly exams. The diagnosis was carried out by direct examination, Willis-Mollay flotation and spontaneous sedimentation by Dennis Stone & Swanson from the intestinal mucosa and fresh stool. Only T. muris trophozoites were identified in the first three intestinal portions selected in the study (small intestine, cecum and colon), while the pseudocyst form was detected in faecal samples and in the rectal region where there are already formed stools. Such findings are based on the life-cycle mechanism of this protozoan. The direct method showed greater efficacy for the diagnosis of T. muris for the identification of trophozoites and pseudocysts, both in formed feces and in the intestinal mucosa, properly fragmented in their different regions.(AU)

Co-infection by Tritrichomonas foetus and Pentatrichomonas hominis in asymptomatic cats / Co-infecção por Tritrichomonas foetus e Pentatrichomonas hominis em gatos assintomáticos

Tritrichomonas foetus, a parasite well known for its significance as a venereally transmitted pathogen in cattle, has been identified as a cause of chronic large bowel diarrhea in domestic cats in many countries of the world. In Brazil, several studies on the diagnosis of bovine trichomoniasis have been performed, but until now, no study was made regarding feline trichomoniasis. Thus, this is the first study to report the occurrence of T. foetus and Pentatrichomonas hominis in cats using morphological and molecular analysis. Feces from 77 cats were examined, four of which (5.2%) were positive for the presence of parabasalids. Morphological analysis of stained smears revealed piriform trophozoites showing the three anterior flagella, elongated nucleus and axostyle ending abruptly in fillet, characteristic of T. foetus. In scanning and transmission electron microscopy, identification characters similar to those previously reported for T. foetus were observed. The cultures containing trophozoites were submitted for molecular analysis, which resulted positive for T. foetus DNA using specific primers (TFR3 and TFR4), and all samples were positive and subjected to sequencing in which they showed 99.7-100% similarity with another isolate sequencing of T. foetus (JX960422). Although no trophozoite with consistent morphology of P. hominis has been visualized in the samples, differential diagnosis was performed using specific primers for P. hominis (TH3 and TH5) amplicon. In three of the four samples (3.89%) sequencing revealed 100% similarity when compared with another sequence of P. hominis deposited in Genbank (KC623939). Therefore, the present study revealed through the diagnostic techniques employed the simultaneous infection by T. foetus and P. hominis in the feces of cats. However, it was necessary to use more than one technique for the diagnosis of the co-infection[...](AU)

Tritrichomonas foetus, um parasito bem conhecido por seu significado como um agente patogênico transmitido venereamente em bovinos, também foi identificado como causa de diarreia crónica do intestino grosso em gatos domésticos em muitos países. No Brasil, vários estudos sobre o diagnóstico de tricomonose bovina foram realizados, mas até agora, não há informação disponível em relação à trichomonose felina. Assim, este é o primeiro estudo a relatar a ocorrência de T. foetus e Pentatrichomonas hominis em gatos por meio de análise morfológica e molecular. Fezes de 77 gatos foram examinadas, a partir da qual quatro (5,2%) foram positivas para a presença de parabasalídeos. A análise morfológica de esfregaços corados revelou trophozoitos piriformes com três flagelos anteriores, núcleo alongado e axóstilo cuja projeção termina abruptamente em formato de filete, características estas de identificação morfológica T. foetus. Além disso, microscopia eletrônica de varredura e transmissão, revelaram caracteres morfológicos semelhantes aos descritos na literatura para esta espécie. A análise molecular de culturas utilizando iniciadores específicos para trofozoítos de T. foetus (TFR3 e TFR4), mostrou que as quatro amostras foram positivas para este parasito e osequenciamento dos fragmentos amplificados demonstraram 99,7-100% de similaridade com seqüências depositadas no GeneBank de T. foetus. Nenhum trofozoíto com morfologia consistente com a descrição de P. hominis foi visualizado nas amostras. No entanto, a análise molecular, utilizando iniciadores específicos para esta espécie (TH3 e TH5) detectou que três das quatro amostras (75%) também foram positivas para P. hominis e o sequenciamento de nucleotideos revelou 100% de similaridade dos amplicons quando comparada com o mesmo fragmento de DNA de P. hominis depositado no GenBank. Como tal, o presente estudo relata a coinfecção de gatos com T. foetus e P. hominis e destacou a exigência de uma combinação de métodos[...](AU)

Tritrichomonas foetus como agente etiológico de diarreia em gatos - relato de dois casos / Tritrichomonas foetus as a causative agent of diarrhea in cats - report of two cases / Tritrichomonas foetus como agente causal de diarrea en gatos - relato de dos casos

O Tritrichomonas foetus é um importante patógeno que causa diarreia crônica do intestino grosso em gatos. Até a realização do presente estudo ainda não havia relatos dessa enfermidade no Brasil detectada pelo uso de técnicas de diagnóstico por meio de biologia molecular (PCR). Os sinais clínicos mais importantes da infecção são fezes pouco volumosas com presença de muco, hematoquezia, tenesmos e aumento da frequência do ato de defecar - sintomas esses característicos de diarreia do intestino grosso. O presente trabalho tem como objetivo relatar a presença do DNA do protozoário Tritrichomonas foetus em fezes de gatos com histórico de diarreia crônica atendidos no Setor de Medicina Felina do Hospital Veterinário de Pequenos Animais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, por meio da técnica de PCR em tempo real (qPCR).

Tritrichomonas foetus is an important pathogen that causes chronic diarrhea of the large intestine in cats. Until the completion of this study there were no reports of this disease in Brazil employing molecular biology (PCR) as a diagnostic technique. The most important clinical signs of infection are skinny stools with mucus, hematochezia, tenesmus and increased frequency of the act of defecation. These are characteristic symptoms of diarrhea of the large intestine. This paper aims to report the detection by real-time PCR (qPCR) of DNA of the protozoan Tritrichomonas foetus in feces of cats with a history of chronic diarrhea, which were seen at the Feline Medicine's Small Animal Veterinary Hospital of the Federal Rural University of Rio de Janeiro.

La Tritrichomonas foetus es un importante patógeno que causa diarrea crónica originada en el intestino grueso de los gatos. Hasta la finalización del presente trabajo todavía no había relatos del diagnóstico de esta enfermedad en Brasil a través de la utilización de técnicas de diagnóstico donde se utiliza biología molecular (PCR). Los signos clínicos más importantes de esta infección son la presencia de materia fecal de poco volumen, presencia de moco, hematoquezia, tenesmo y aumento de frecuencia en las deposiciones, todos síntomas característicos de las diarreas de intestino grueso. El presente trabajo tuvo como objetivo relatar la presencia de ADN del protozoario Tritrichomonas foetus en la materia fecal de gatos con historia de diarrea crónica, que fueron atendidos en el Sector de Medicina Felina del Hospital Veterinario de Pequenos Animales de la Universidade Federal Rural de Rio de Janeiro, a través de la técnica de PCR en tiempo real (qPCR).

Tritrichomonas foetus como agente etiológico de diarreia em gatos - relato de dois casos / Tritrichomonas foetus as a causative agent of diarrhea in cats - report of two cases / Tritrichomonas foetus como agente causal de diarrea en gatos - relato de dos casos

O Tritrichomonas foetus é um importante patógeno que causa diarreia crônica do intestino grosso em gatos. Até a realização do presente estudo ainda não havia relatos dessa enfermidade no Brasil detectada pelo uso de técnicas de diagnóstico por meio de biologia molecular (PCR). Os sinais clínicos mais importantes da infecção são fezes pouco volumosas com presença de muco, hematoquezia, tenesmos e aumento da frequência do ato de defecar - sintomas esses característicos de diarreia do intestino grosso. O presente trabalho tem como objetivo relatar a presença do DNA do protozoário Tritrichomonas foetus em fezes de gatos com histórico de diarreia crônica atendidos no Setor de Medicina Felina do Hospital Veterinário de Pequenos Animais da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, por meio da técnica de PCR em tempo real (qPCR).(AU)

Tritrichomonas foetus is an important pathogen that causes chronic diarrhea of the large intestine in cats. Until the completion of this study there were no reports of this disease in Brazil employing molecular biology (PCR) as a diagnostic technique. The most important clinical signs of infection are skinny stools with mucus, hematochezia, tenesmus and increased frequency of the act of defecation. These are characteristic symptoms of diarrhea of the large intestine. This paper aims to report the detection by real-time PCR (qPCR) of DNA of the protozoan Tritrichomonas foetus in feces of cats with a history of chronic diarrhea, which were seen at the Feline Medicine's Small Animal Veterinary Hospital of the Federal Rural University of Rio de Janeiro.(AU)

La Tritrichomonas foetus es un importante patógeno que causa diarrea crónica originada en el intestino grueso de los gatos. Hasta la finalización del presente trabajo todavía no había relatos del diagnóstico de esta enfermedad en Brasil a través de la utilización de técnicas de diagnóstico donde se utiliza biología molecular (PCR). Los signos clínicos más importantes de esta infección son la presencia de materia fecal de poco volumen, presencia de moco, hematoquezia, tenesmo y aumento de frecuencia en las deposiciones, todos síntomas característicos de las diarreas de intestino grueso. El presente trabajo tuvo como objetivo relatar la presencia de ADN del protozoario Tritrichomonas foetus en la materia fecal de gatos con historia de diarrea crónica, que fueron atendidos en el Sector de Medicina Felina del Hospital Veterinario de Pequenos Animales de la Universidade Federal Rural de Rio de Janeiro, a través de la técnica de PCR en tiempo real (qPCR).(AU)

Um novo meio de transporte e cultivo para Tritrichomonas foetus (Riedmuller, 1928) V. Lactopep como meio de cultivo / A new transfer and culture medium of Tritrichomonas foetus (Riedmuller, 1928) V. Lactopep as a culture medium

Para o diagnóstico da tricomonose bovina, o meio Lactopep foi testado para o transporte de amostras de lavado prepucial e de muco vaginal de bovinos infectados com Tritrichomonas foetus. A metodologia de colheita do material foi descrita por Lopes et al. (1994), utilizando o meio Guida-Kupferberg como testemunho. Os meios foram mantidos em temperatura ambiente e analisados após 24 horas. Pela análise de variação com delineamento inteiramente casualizado, avaliou-se o dia de máxima eficiência. Com Lactopep obteve-se a média de 9,8 dias e com Guida-Kupferberg, 9,2 dias, com material proveniente de machos naturalmente infectados; as médias das culturas para material proveniente de fêmeas foi 7,1 dias para o Lactope, e de 7,5 para o Guida-Kupferberg. A estatística demonstrou que os meios são eficientes para o transporte e cultivo de T. foetus, mas o meio Lactopep é de mais fácil preparo e de baixo custo. Na segunda etapa do experimento, adicionou-se ao Lactopep a fração de 10% de soro fetal bovino para manutenção de T. foetus por repiques sucessivos em laboratório, comparando-se ao de Hanks. Os dois meios permitem curva de crescimento em torno de sete dias, quando a fase de esgotamento chega aos valores mais baixos mas ainda viáveis. O Lactopep modificado para laboratório também mantém acentuada correlação negativa com o tempo de cultivo e pode ser indicado para a manutenção de T. foetus.

Lactopep medium efficacy for transport of Tritrichomonas foetus was checked in sample obtained from preputials washing of bulls and vaginal mucus of cows knowghy T. foetus positive, and compared to Guida-Kupferberg medium. Samples were obtained from bulls or cows with 0,85% saline solution and, half part of sample received three grams Lactopep; to the other half part, three grams of Guida-Kupferberg medi um were added. Both groups were kept at environmental temperature and daily examined under microscopy. The results were statistically analised by a variance analisis for casualised entirely delineation surveying the efficient maximum day. The Lactopep medium and Guida-Kupferber medium mean proceeded 9.8 day and 9.2 day respectively, with material from bulls, and 7.1 day and 7.5 day, respectively, with material from cows, and the conclusion is that both media are efficient for T. foetus maintenance but Lactopep medium has the advantage of the easy preparation and is produced at lower cost. In second stage to experiment to added in Lactopep medi um the fraction of 10% bovine se rum for maintainance to T. foetus by sucessive tollings in laboratory; the medium was compared with the Hanks medium. The results showed the both media allowed a line arround the seven days at the declive but further practicable. The Lactopep medium modificated for laboratory also conserve accentuated invertion correlation with the time cultivation, but it is indicat for maintaince of T. foetus in laboratory.