Diferenciação de gametas in vitro a partir de células-tronco / In vitro ES cell differention into gametes

As células germinativas representam uma população de células especializadas. A separação entre as linhagens germinativa e somática ocorre no início do desenvolvimento embrionário, garantindo que modificações genéticas que ocorram durante o desenvolvimento não tenham efeito sobre a formação dos gametas e, desta forma, não sejam transmitidas para a próxima geração. Os gametas são células com uma missão importante: garantir a conservação e a preservação das espécies. O DNA haploide, resultado da gametogênese,será unido no processo de fecundação para a formação de um novo ser, Devido à sua importância, a gametogênese éum processo complexo e regulado, que o torna difícil de ser mimetizado in vitro. Ao longo da última década, vários grupos de pesquisa têm demonstrado que essas células da linhagem germinativa podem ser produzidas in vitro a partir de células-tronco pluripotentes. Embora ainda exista uma série de perguntas sem respostas, as pesquisas sugerem novas possibilidades de investigação sobre as células-tronco e sua aplicação na área da reprodução. (AU)

Germ cells present a specialized cell population. The separation between germ and somatic cell lines occur early in embryonic development, ensuring that any genetic modification that might happen throughout development is not transferred to the next generation. Gametes have an important role: assure conservation and preservation of species. Both haploid DNA resulting from gametogenesis will join at fertilization in order to form a new organism. Due to its importance, gametogenesis is a complex and tight regulated process, which makes it difficult to replicate in vitro. During the last decade, some research groups have demonstrated that germ cells can be produced in vitro from pluripotent embryonic stem cells. Although several questions remain unanswered, novel data suggest new possibilities for investigation on stem cells and its application on reproductive biology(AU)

Diferenciação de gametas in vitro a partir de células-tronco / In vitro ES cell differention into gametes

As células germinativas representam uma população de células especializadas. A separação entre as linhagens germinativa e somática ocorre no início do desenvolvimento embrionário, garantindo que modificações genéticas que ocorram durante o desenvolvimento não tenham efeito sobre a formação dos gametas e, desta forma, não sejam transmitidas para a próxima geração. Os gametas são células com uma missão importante: garantir a conservação e a preservação das espécies. O DNA haploide, resultado da gametogênese,será unido no processo de fecundação para a formação de um novo ser, Devido à sua importância, a gametogênese éum processo complexo e regulado, que o torna difícil de ser mimetizado in vitro. Ao longo da última década, vários grupos de pesquisa têm demonstrado que essas células da linhagem germinativa podem ser produzidas in vitro a partir de células-tronco pluripotentes. Embora ainda exista uma série de perguntas sem respostas, as pesquisas sugerem novas possibilidades de investigação sobre as células-tronco e sua aplicação na área da reprodução.

Germ cells present a specialized cell population. The separation between germ and somatic cell lines occur early in embryonic development, ensuring that any genetic modification that might happen throughout development is not transferred to the next generation. Gametes have an important role: assure conservation and preservation of species. Both haploid DNA resulting from gametogenesis will join at fertilization in order to form a new organism. Due to its importance, gametogenesis is a complex and tight regulated process, which makes it difficult to replicate in vitro. During the last decade, some research groups have demonstrated that germ cells can be produced in vitro from pluripotent embryonic stem cells. Although several questions remain unanswered, novel data suggest new possibilities for investigation on stem cells and its application on reproductive biology

Establishment of a protocol for obtention of neuronal stem cells lineages from the dog olfactory epithelium / Estabelecimento de um protocolo para obtenção de linhagens de células-tronco neuronais a partir do epitélio olfatório de cães

A morphological and cell culture study from nasal mucosa of dogs was performed in order to establish a protocol to obtain a cell population committed to neuronal lineage, as a proposal for the treatment of traumatic and degenerative lesions in these animals, so that in the future these results could be applied to the human species. Twelve mongrel dogs of 60-day aged pregnancy were collected from urban pound dogs in São Paulo. Tissue from cribriform ethmoidal lamina of the fetuses was collected at necropsy under sterile conditions around 1h to 2h postmortem by uterine sections and sections from the fetal regions described above. Isolated cells of this tissue were added in DMEM/F-12 medium under standard conditions of incubation (5 percent CO², >37ºC). Cell culture based on isolated cells from biopsies of the olfactory epithelium showed rapid growth when cultured for 24 hours, showing phase-bright sphere cells found floating around the fragments, attached on culture flasks. After 20 days, a specific type of cells, predominantly ellipsoids or fusiform cells was characterized in vitro. The indirect immunofluorescence examination showed cells expressing markers of neuronal precursors (GFAP, neurofilament, oligodendrocyte, and III â-tubulin). The cell proliferation index showed Ki67 immunostaining with a trend to label cell groups throughout the apical region, while PCNA immunostaining label predominantly cell groups lying above the basal lamina. (AU)

Foi realizado um estudo morfológico e por cultivo celular a partir de células provenientes da mucosa olfatória de cães, como forma de estabelecer um protocolo de cultivo, como uma proposta para o tratamento de lesões traumáticas e nervosas degenerativas nestes animais e futuramente, para que tais resultados possam ser aplicados a espécie humana. Foram utilizados doze cães sem raça definida, a termo, oriundos de castrações do Centro de Controle de Zoonoses de São Paulo. O tecido da lâmina cribiforme do etmóide dos fetos foi coletado sob necropsia, em condições estéreis, 1 a 2 horas post mortem, por meio de incisão uterina e acesso da região fetal supracitada. Depois as células isoladas desse tecido foram adicionadas em médio DMEM/F-12 sob condições padrão (5 por cento CO2, >37ºC). As células obtidas a partir de biópsias do epitélio olfatório de cães apresentaram rápido crescimento após 24 horas de cultivo, demonstrando morfologia esférica, sendo encontradas flutuando ao redor do fragmento aderido à garrafa de cultura. Após 20 dias, foram verificados tipos celulares específicos, predominantemente elipsóides ou fusiformes, foram observadas in vitro. Sob avaliação por imunofluorescência indireta observaram-se células com expressão positiva para marcadores de precursores neuronais (GFAP, Neurofilamentos, oligodendrócitos e â-tubulina III). O índice de proliferação celular mostrou-se positivo para Ki67 com uma tendência de marcação de grupos celulares ao longo da região apical, enquanto a imunomarcação para PCNA mostrou-se predominantemente em grupos celulares residentes sobre a lâmina basal. A microscopia eletrônica de transmissão do epitélio olfatório de cães revelou células com citoplasma eletrodenso e mesma distribuição das células marcadas positivamente para PCNA. A atividade metabólica foi confirmada pela presença de eucromatina em muitas regiões celulares. Todos estes aspectos sustentam a hipotese sobre a presença de células progenitoras ...(AU)