Congelamento de sêmen e sua eficiência na inseminação artificial de cães / Semen freezing and its efficiency in the artificial insemination in dog

A fisiologia reprodutiva da espécie canina e a resposta insatisfatória do sêmen do cão à técnica da congelação são os dois maiores empecilhos aos esforços para o avanço da inseminação artificial em cães. Inúmeras pesquisas estão sendo desenvolvidas nessa área, gerando muitas informações, sobretudo na tecnologia de sêmen. O objetivo desse texto é discutir os principais avanços na avaliação e congelação de sêmen e sua influencia nos resultados de inseminação artificial.(AU)

The canine reproductive physiology and unsatisfactory results on techniques of frozen dog semen has been the biggest barrier on the improvement of artificial insemination in dogs. Many researches are been done in this area generating a lot of information, especially on semen technology. The aim of this text is to discuss the major advances on semen evaluation and semen frozen and its influence on artificial insemination results. (AU)

Congelamento de sêmen e sua eficiência na inseminação artificial de cães / Semen freezing and its efficiency in the artificial insemination in dog

A fisiologia reprodutiva da espécie canina e a resposta insatisfatória do sêmen do cão à técnica da congelação são os dois maiores empecilhos aos esforços para o avanço da inseminação artificial em cães. Inúmeras pesquisas estão sendo desenvolvidas nessa área, gerando muitas informações, sobretudo na tecnologia de sêmen. O objetivo desse texto é discutir os principais avanços na avaliação e congelação de sêmen e sua influencia nos resultados de inseminação artificial.

The canine reproductive physiology and unsatisfactory results on techniques of frozen dog semen has been the biggest barrier on the improvement of artificial insemination in dogs. Many researches are been done in this area generating a lot of information, especially on semen technology. The aim of this text is to discuss the major advances on semen evaluation and semen frozen and its influence on artificial insemination results.

Oocyte maturation in bitches

The canine species has been used as an experimental model for preservation of endangered species. Biotechnologies of reproduction, such as in vitro maturation (IVM), have been used to meet this objective. Several protocols for in vitro embryo production (IVEP) in swine and bovine species have been adapted for canids. Ho wever, the highest rate reported for in vitro maturation in canids is only 39%, which is still lower than those in other species. Therefore, current research on assisted reproduction in canids have focused on several IVM protocols, including the addition of proteins, hormones, meiosis inhibitors, growth factors and antioxidants to the maturation media and the determination of suitable timing for culture, so that variables involved in the process can be fine-tuned. This review has the main objective of describing major developments and limitations in the process of oocyte maturation in bitches.

Oocyte maturation in bitches

The canine species has been used as an experimental model for preservation of endangered species. Biotechnologies of reproduction, such as in vitro maturation (IVM), have been used to meet this objective. Several protocols for in vitro embryo production (IVEP) in swine and bovine species have been adapted for canids. Ho wever, the highest rate reported for in vitro maturation in canids is only 39%, which is still lower than those in other species. Therefore, current research on assisted reproduction in canids have focused on several IVM protocols, including the addition of proteins, hormones, meiosis inhibitors, growth factors and antioxidants to the maturation media and the determination of suitable timing for culture, so that variables involved in the process can be fine-tuned. This review has the main objective of describing major developments and limitations in the process of oocyte maturation in bitches.(AU)

Imunoistoquímica de útero e cérvice de cadelas com diagnóstico de piometra / Immunohistochemical of the cervix and uterus of bitches diagnosed with pyometra

Analisou-se a piometra de 31 cadelas, de raças e idades variadas, sendo 25 cadelas com piometra de cérvice aberta e seis de cérvice fechada. Após ovariossalpingo-histerectomia, foram coletados fragmentos da cérvice e do útero para a avaliação imunoistoquímica. Foram analisados os receptores de estrógenos α e β, progesterona e colágenos I e III. Foram realizadas imunomarcações em diferentes regiões da cérvice, como o epitélio glandular, o epitélio luminal e o estroma glandular, assim como em diferentes regiões do útero, como o epitélio glandular e o estroma glandular. As imunomarcações de colágenos I e III foram realizadas nas regiões glandular e muscular da cérvice e do útero. Concentrações de receptores de progesterona foram maiores em cadelas com piometra fechada.(AU)

The pyometra in 31 bitches of different breeds and ages, 25 with pyometra cervix open and 6 closed cervix was analyzed. After the ovariohysterectomy procedure, samples were collected from the cervix and uterus to evaluate immunohistochemistry. For immunohistochemical evaluation estrogen receptors α and β, progesterone and collagen I and III were analyzed. Immunostainings were performed in different regions of the cervix such as glandular epithelium, luminal epithelium and glandular stroma, as well as in different regions of the uterus, such as glandular epithelium and glandular stroma. The immunostainings for collagen I and III were performed in muscular and glandular regions of the cervix and uterus. The concentration the progesterone receptors were elevated in bitches from the closed pyometra.(AU)

Expressão gênica dos REα, REβ e PR em tumores mamários de cadelas por meio do q-PCR / REα, REβ and PR gene expression in mammary gland tumors of female dogs by q-PCR

A expressão de receptores de estrógeno (ER) e progesterona (PR) por meio da técnica de q-PCR foi avaliada em 26 cadelas portadoras de neoplasias mamárias e cinco cadelas sem afecções mamárias (grupo controle). Os resultados mostraram que os três grupos de animais estudados - com tumor maligno ou benigno e controle - expressaram receptores de estrógeno alfa, beta e progesterona. A quantificação relativa mostrou tendência para uma expressão maior de receptores no grupo controle e menor no grupo de animais com neoplasias malignas. Além disso, observou-se expressão maior de ERα em relação ao ERβ, e as neoplasias malignas de origem mista apresentaram maiores concentrações dos receptores PR, ERα e ERβ que as neoplasias de origem epitelial.(AU)

The estrogen and progesterone receptor (ER and PR) expression with the q-PCR technique was evaluated in 26 female dog carrying of mammary tumors and five female dogs without mammary disease (control group). The results showed that the three animal groups evaluated - malignant or benign tumor and control - expressed alpha and beta estrogen and progesterone receptors. The relative quantification showed a tendency for a higher expression of receptors from the control group and smaller in the malignat tumors animal group. Also, there was a major ERα expression regarding to ERβ and the malignat tumors from mixed origin presented higher concentrations of receptors PR, ERα and ERβ, when compared to tumors of epithelial origin.(AU)

Concentração de lactato e glicemia em cadelas e neonatos nascidos de cesariana / Lactato concentration in bitch and canine neonates born through cesarean section

Avaliaram-se a concentração de lactato e a glicemia em sete cadelas em trabalho de parto submetidas à cesariana e em seus respectivos neonatos. O lactato materno foi mensurado utilizando-se medidor portátil e pelo método enzimático colorimétrico. Nos neonatos avaliou-se também o peso ao nascimento. Os valores de lactato materno e neonatal foram estatisticamente diferentes, sendo mais elevado nos neonatos. Ao nascimento, as cadelas e os neonatos encontravam-se normoglicêmicos, e não se observou correlação entre a glicemia de ambos. Os valores de lactato obtidos pelo o analisador portátil (3,5±0,6mmol/L) foram mais altos do que os obtidos pelo método enzimático colorimétrico (1,6±0,6mmol/L). Observou-se correlação significativa entre o peso do neonato e a concentração de lactato, isto é, os filhotes de menor peso apresentaram maior concentração de lactato.(AU)

This work evaluated the concentration of lactate and blood glucose in seven bitches in labor subject to caesarean section and in their newborns. The lactate concentration was measured using a portable analyzer and enzymatic colorimetric method. In neonates, the birth weight was evaluated. The maternal and neonatal lactate values were statistically different, being higher in newborns. At birth, the bitches and the newborns had normal glucose status, and no correlation was observed between blood glucose in either. The lactate concentration obtained by the portable analyzer (3.5±0.6mmol/L) was higher than that obtained with the enzymatic colorimetric method (1.6±0.6mmol/L). There was significant correlation between the neonate weight and lactate concentration and in puppies with lighter weight there was a higher concentration of lactate.(AU)

Fisiologia da ovulação, da fertilização e do desenvolvimento embrionário inicial na cadela / Ovulation physiology, fertilization and initial embryonic development in the bitch

Os aspectos relacionados à ovulação, à fertilização e ao desenvolvimento embrionário inicial na espécie canina apresentam pecularidades. Nas cadelas há uma grande dificuldade na determinação precisa do momento da ocorrência das ovulações, devido ao período adicional necessário à maturação oocitária, já que os oócitos caninos são liberados ainda em estágio imaturo, esse fato, associados a longevidade dos espermatozoídes no trato genital da fêmea são responsáveis por um comprometimento da determinação da cronologia do desenvolvimento embrionário. Um maior conhecimento a respeito dessas particularidades é de grande valia para aplicação das principais biotécnicas reprodutivas nos canídeos domésticos e não domésticos. O objetivo desta revisão de literatura é discutir aspectos relacionados à ovulação, à fertilização e ao desenvolvimento embrionário inicial das cadelas, visando ao uso desses conhecimentos na prática veterinária e na área de biotecnologia reprodutiva.(AU)

The aspects related to the ovulation, fertilization and initial embryonic development on canine species have several peculiarities. Due to the difficulty to determine the exact moment of ovulation, the additional period required after ovulation for the oocytary maturation and the longevity of the spermatozoa in the reproduction system of the bitches, the chronology of the embryonic development are engaged. The major knowledge of these particularities has a great importance for the application in reproduction biothecnique in the domestic and non-domestic carnivores. Therefore, the aim of this review is to discuss this knowledge in the practical veterinary as well as in the area of reproductive biotechnology.(AU)

Efeito da centrifugação sobre a qualidade do sêmen canino / Effect of centrifugation on quality of canine semen

Avaliou-se o efeito da centrifugação sobre a viabilidade do sêmen canino e compararam-se três meios de diluição pré-centrifugação. Utilizaram-se 10 ejaculados completos de 10 cães que, após a avaliação inicial, foram divididos em quatro porções (grupos). Uma das amostras, não centrifugada, formou o grupo-controle; as outras foram diluídas em três diferentes meios e centrifugadas a 800 x g por 15 minutos, formando os grupos: CPSA - constituído por sêmen centrifugado em plasma seminal autólogo; CLG - sêmen centrifugado em meio à base de leite desnatado e glicose (LG); e CPer- sêmen centrifugado em gradientes de Percoll (45 por cento e 90 por cento). Após a centrifugação e a eliminação do sobrenadante, procedeu-se à ressuspensão de todas as porções do ejaculado em LG e à imediata avaliação quanto à motilidade, vigor, aglutinação espermática e integridade das membranas espermáticas. Todas as suspensões foram, então, incubadas a 37ºC por 30 minutos e reavaliadas. O processo de centrifugação não causou danos aos espermatozoides e a centrifugação em meio LG melhorou a viabilidade espermática.(AU)

The effect of the centrifugation process on canine sperm viability was evaluated using three different precentrifugation extenders in the process. After an initial evaluation, ten complete ejaculates from ten dogs were used and subdivided in four groups. One sample of semen was not centrifuged and was used as control and the remaining samples of semen were diluted in three different extenders and centrifuged at 800 x g per 15 minutes, performing groups: CPSA- centrifuged in autologous seminal fluid, CLGcentrifuged in skim milk plus glucose extender (LG), and CPer- centrifuged under Percoll gradient (45 percent and 90 percent). After centrifugation, the resulting pellets were diluted in LG and evaluated for motility, viability, sperm agglutination, and spermatic membrane integrity. All the samples were incubated at 37ºC for 30 minutes and the evaluations were performed again. Centrifugation procedures did not induce damage to canine spermatozoa and samples centrifuged and diluted in skim milk plus glucose extender remained with better viability.(AU)

Fisiologia da ovulação, da fertilização e do desenvolvimento embrionário inicial na cadela / Ovulation physiology, fertilization and initial embryonic development in the bitch

Os aspectos relacionados à ovulação, à fertilização e ao desenvolvimento embrionário inicial na espécie canina apresentam pecularidades. Nas cadelas há uma grande dificuldade na determinação precisa do momento da ocorrência das ovulações, devido ao período adicional necessário à maturação oocitária, já que os oócitos caninos são liberados ainda em estágio imaturo, esse fato, associados a longevidade dos espermatozoídes no trato genital da fêmea são responsáveis por um comprometimento da determinação da cronologia do desenvolvimento embrionário. Um maior conhecimento a respeito dessas particularidades é de grande valia para aplicação das principais biotécnicas reprodutivas nos canídeos domésticos e não domésticos. O objetivo desta revisão de literatura é discutir aspectos relacionados à ovulação, à fertilização e ao desenvolvimento embrionário inicial das cadelas, visando ao uso desses conhecimentos na prática veterinária e na área de biotecnologia reprodutiva.

The aspects related to the ovulation, fertilization and initial embryonic development on canine species have several peculiarities. Due to the difficulty to determine the exact moment of ovulation, the additional period required after ovulation for the oocytary maturation and the longevity of the spermatozoa in the reproduction system of the bitches, the chronology of the embryonic development are engaged. The major knowledge of these particularities has a great importance for the application in reproduction biothecnique in the domestic and non-domestic carnivores. Therefore, the aim of this review is to discuss this knowledge in the practical veterinary as well as in the area of reproductive biotechnology.

Perfil de sensibilidade e multirresistência em linhagens de Escherichia coli isoladas de infecção do trato urinário, de piometra e de fezes de cães / Sensitivity profile and multiresistance in Escherichia coli strains isolated from urinary tract infection, pyometra and feces of dogs

Susceptibility profile and multiple drug resistance in 158 E. coli strains isolated from urinary tract infection (UTI), pyometra, and feces of dogs were studied. Norfloxacin, ciprofloxacin, and enrofloxacin were the most-effective drugs (>60 percent) for E. coli strains. High rates of resistance to antimicrobials were observed in 60 percent or more of the isolated strains using sulfametoxazole/trimetoprim. Multiple drug resistance for three or more antimicrobials was observed in two (47.1 percent) strains isolated from UTI, seven (13.5 percent) from pyometra, and four (7.3 percent) from feces. From these, 17 (33.3 percent), one (1.9 percent), and three (5.5 percent), respectively, showed multiple resistance to five or more drugs.(AU)

Perfil lipoprotéico de cadelas submetidas à ovário-histerectomia com e sem reposição estrogênica / Lipoproteic profile of bitches submitted to ovaryhysterectomy with and without estrogen administration

Doze cadelas mestiças, adultas, foram submetidas à ovário-histerectomia e posteriormente distribuídas em dois grupos de seis animais. Um dos grupos recebeu estrógenos naturais conjugados na dose de 0,01mg/kg, via oral, a cada 48 horas, durante 12 meses, e o outro serviu como controle. A cada 60 dias foram realizadas colheitas de sangue e obtidos os valores de colesterol total, triglicerídeos, HDL, LDL e VLDL. Houve elevação do colesterol total e do LDL nas fêmeas sem reposição de hormônio. No grupo que recebeu estrógenos houve elevação do HDL. A ovário-histerectomia influenciou significativamente o perfil lipoprotéico; a reposição com estrógenos foi capaz de preservar esse perfil nas cadelas castradas.(AU)

Twelve mixed-bred, bitches were divided in two groups of six animals each after ovariohysterectomy. One group received 0.01mg/kg per os of natural conjugated estrogens every 48h for 12 months; the other group, used as control, was not treated with hormones. Blood samples were collected every 60 days and the levels of total cholesterol, triglycerides, HDL, LDL and VLDL were determined. Ovariohysterectomy affected the lipoproteic profile, increasing the total cholesterol and LDL levels; it also showed that the estrogen supplementation maintained the lipoproteic profile of castrated bitches within normal levels.(AU)

Perfil dos constituintes do sangue no puerpério imediato de ovelhas submetidas a cesariana eletiva e de ovelhas com parto normal

Blood components of ewes submitted to cesarean section (n=21, GI) were compared to those with normal parturition (n=11, GII). Blood samples were taken at the following times: on delivery day, before delivery (T1), and one day (T2), two days (T3), three days (T4), and seven days (T5) after delivery. All animals showed normal erytrogram values, which could not be used as a prognostic guide of the pos-partum outcome. Immature neutrophil count in the leucogram was characteristic of animals that died due to surgery (GI). This study showed the importance of sequential hemograms for post-cesarean follow up. Despite of the immature neutrophil count be suggestive of cesarean effect, no determined hematological variable provided an accurate prognostic guide of cesarean section.

Compararam-se os perfis dos constituintes do sangue de ovelhas submetidas a cesariana eletiva (n=21; GI) ou com partos normais (n= 11; GII). Obtiveram-se amostras de sangue em cinco momentos: no dia do parto, antes de sua ocorrência (M1), um (M2), dois (M3), três (M4) e sete (M5) dias pós-parto. Os valores do eritrograma em todos os animais apresentaram-se normais, não se constituindo em guia para o prognóstico da ocorrência pós-parto. No leucograma do GI observou-se presença de neutrófilos imaturos nos animais que morreram após a cirurgia. Apesar de a contagem de neutrófilos imaturos ter sido sugestiva do efeito da cesariana, nenhuma variável hematológica mensurada constituiu-se em acurado guia para o prognóstico da cesariana.

Relação entre comprimento craniocaudal e diâmetro da vesícula embrionária/fetal com idade de gestação por meio de avaliação ultra-sonográfica em ovino da raça Bergamácia / Relationship between crown-rump length and embryonic/fetal vesicle diameter with gestational age in ovine of Bergamácia breed by ultrasonography

Este trabalho objetivou relacionar o diâmetro da vesícula embrionária/fetal (DVE) e comprimento craniocaudal do embrião/feto (CCC) do 15§ ao 45§ dia de gestação com a idade de gestação em ovelhas. Utilizaram-se 19 ovelhas adultas da raça Bergamácia, com cio sincronizado e cobertas por um mesmo reprodutor. A avaliação ultra-sonográfica foi realizada diariamente do 15§ ao 30§ dia após a cobrição e a cada cinco dias do 30§ ao 45§ dia, utilizando-se aparelho com transdutor linear de 5,0 e 7,5MHZ. O crescimento diário médio do DVE e CCC foi de 1,40mm e 1,33mm, respectivamente. A calibragem inversa obtida para DVE foi: Dias = -11 + 50(0,1 + 0,04log DVE sobrescrito) 1/2(sobrescrito), com R2(sobrescrito) = 0,85 e para CCC foi: Dias = 13,63 + 12,5(-0,71 + 0,l6CCC)1/2(sobrescrito), com R 2 sobrescrito = 0,93. Tanto o DVE como o CCC obtidos por ultra-sonografia são medidas pelas quais se pode prever a idade de gestação em ovelhas da raça Bergamácia (AU)

This study aimed to relate embryonic/fetal vesicle diameter (EVD) and crown-rump length (CRL) to gestational age in ewes from the 15th to the 45th day of pregnancy. Nineteen adult Bergamácia ewes with synchronized estrus were mated by the same male. Ultrasonographic evaluations were performed every 24 hours from the 15th to the 30th day after mating and every five days from the 30th to the 45th day using 5.0 and 7.5MHZ linear transducers. Average daily growth of EVD and CRL were 1.40mm and 1.33mm, respectively. The inverse calibration obtained for EVD was: Days = -11 + 50(0.1 + 0.04log EVD)1/2 with R2 = 0.85, and for CRL was: Days = 13.63 + 12.5(- 0.71 + 0.16CRL)1/2 with R2 = 0.93. Both EVD and CRL obtained by ultrasonography are useful measurements that allow the prediction of gestational age in Bergamácia ewes(AU)

EFFECT OF ESTRADIOL BENZOATE ON OOCYTES/EMBRYOS RECOVERY AND HEMATOLOGICAL PARAMETERS OF MISMATED BITCHES / Efeito do benzoato de estradiol na recuperação de oócitos, embriões e nos parâmetros hematológicos de cadelas recém acasaladas.

Nosso objetivo foi avaliar os efeitos do benzoato de estradiol sobre a taxa de recuperação oocitária e embrionária e sua influência sobre o sistema hematopoiético. Vinte e quatro fêmeas foram utilizadas: GRUPO I – 12 cadelas que receberam uma única aplicação de benzoato de estradiol, dose de 0,2 mg/Kg, via intramuscular, entre o 2º e 7º dia do último acasalamento ou inseminação. GRUPO II - 12 cadelas que receberam solução oleosa diluente, dose de 0,2 ml/Kg em datas correspondentes. As cadelas foram submetidas a ovariohisterectomia e as tubas uterinas e útero lavados, com solução de PBS, álcool polivinil e heparina. Os oócitos e embriões foram quantificados e classificados de acordo com seu estádio de desenvolvimento. O hemograma foi realizado em M1 (antes da aplicação do fármaco), M2 (15 dias após a aplicação do fármaco) e M3 (40 dias após a aplicação do fármaco). Para as variáveis recuperação de estruturas foi utilizado o coeficiente de correlaç&at