Phospholipid composition and resistance to vitrification of in vivo blastocyst of a Brazilian naturalized porcine breed / Composição de fosfolipídios e resistência à vitrificação de blastocistos produzidos in vivo de uma raça de suíno naturalizada brasileira

Piau porcine blastocysts were submitted to MALDI-TOF to identify the main phospholipids (PL). After that, in vivo blastocysts (D6) were vitrified (n=52), non-vitrified were used as control (n=42). After warming, blastocysts were in vitro cultured to assess re-expansion and hatching at 24 and 48 hours. Finally, at 48 hours, hatched blastocysts were submitted to RT-qPCR searching for BCL2A1, BAK, BAX and CASP3 genes. For MALDI-TOF, the ion intensity was expressed in arbitrary units. Blastocyst development was compared by Qui-square (P< 0.05). Among the most representative PL was the phosphatidylcholine [PC (32:0) + H]+; [PC (34:1) + H]+ and [PC (36:4) + H]+. Beyond the PL, MALDI revealed some triglycerides (TG), including PPL (50:2) + Na+, PPO (50:1) + Na+, PLO (52:3) + Na+ and POO (52:2) + Na. Re-expansion did not differ (P> 0.05) between fresh or vitrified blastocysts at 24 (33.3%; 32.7%) or 48 hours (2.4%; 13.5%). Hatching rates were higher (P< 0.05) for fresh compared to vitrified at 24 (66.7%; 15.4%) and 48 hours (97.6%; 36.0%). BAX was overexpressed (P< 0.05) after vitrification. In conclusion, Piau blastocysts can be cryopreserved by Cryotop. This study also demonstrated that the apoptotic pathway may be responsible for the low efficiency of porcine embryo cryopreservation.(AU)

Blastocistos de suínos foram submetidos ao MALDI-TOF para se identificarem os principais fosfolipídios (PL). Depois, parte destes embriões (D6) foram vitrificados (n=52), ou permaneceram frescos (grupo controle, n=42). Após o aquecimento, os blastocistos foram cultivados in vitro para se avaliar a reexpansão e a eclosão (BE) às 24 e 48 horas. Finalmente, às 48 horas, os BE foram submetidos ao RT-qPCR em busca dos genes BCL2A1, BAK, BAX e CASP3. No MALDI-TOF, a intensidade do íon foi expressa em unidades arbitrárias. O desenvolvimento embrionário foi comparado por qui-quadrado (P<0,05). Entre os PL mais representativos estavam as fosfatidilcolinas [PC (32: 0) + H] +; [PC (34: 1) + H] + e [PC (36: 4) + H] +. Além do PL, o MALDI revelou alguns triglicerídeos (TG), incluindo PPL (50: 2) + Na +, PPO (50: 1) + Na +, PLO (52: 3) + Na + e POO (52: 2) + Na. A reexpansão não diferiu (P>0,05) entre blastocistos frescos ou vitrificados às 24 (33,3%, 32,7%) e 48 horas (2,4%, 13,5%). As taxas de eclosão foram maiores (P<0,05) para o grupo fresco comparado ao vitrificado às 24 (66,7% x 15,4%) e 48 horas (97,6% x 36,0%). O BAX estava mais expresso (P<0,05) após a vitrificação. Concluindo, os blastocistos Piau podem ser criopreservados por Cryotop. Este estudo também demonstrou que a via apoptótica pode ser responsável pela baixa eficiência da criopreservação de embriões suínos.(AU)

Phospholipid composition and resistance to vitrification of in vivo blastocyst of a Brazilian naturalized porcine breed / Composição de fosfolipídios e resistência à vitrificação de blastocistos produzidos in vivo de uma raça de suíno naturalizada brasileira

Piau porcine blastocysts were submitted to MALDI-TOF to identify the main phospholipids (PL). After that, in vivo blastocysts (D6) were vitrified (n=52), non-vitrified were used as control (n=42). After warming, blastocysts were in vitro cultured to assess re-expansion and hatching at 24 and 48 hours. Finally, at 48 hours, hatched blastocysts were submitted to RT-qPCR searching for BCL2A1, BAK, BAX and CASP3 genes. For MALDI-TOF, the ion intensity was expressed in arbitrary units. Blastocyst development was compared by Qui-square (P< 0.05). Among the most representative PL was the phosphatidylcholine [PC (32:0) + H]+; [PC (34:1) + H]+ and [PC (36:4) + H]+. Beyond the PL, MALDI revealed some triglycerides (TG), including PPL (50:2) + Na+, PPO (50:1) + Na+, PLO (52:3) + Na+ and POO (52:2) + Na. Re-expansion did not differ (P> 0.05) between fresh or vitrified blastocysts at 24 (33.3%; 32.7%) or 48 hours (2.4%; 13.5%). Hatching rates were higher (P< 0.05) for fresh compared to vitrified at 24 (66.7%; 15.4%) and 48 hours (97.6%; 36.0%). BAX was overexpressed (P< 0.05) after vitrification. In conclusion, Piau blastocysts can be cryopreserved by Cryotop. This study also demonstrated that the apoptotic pathway may be responsible for the low efficiency of porcine embryo cryopreservation.(AU)

Blastocistos de suínos foram submetidos ao MALDI-TOF para se identificarem os principais fosfolipídios (PL). Depois, parte destes embriões (D6) foram vitrificados (n=52), ou permaneceram frescos (grupo controle, n=42). Após o aquecimento, os blastocistos foram cultivados in vitro para se avaliar a reexpansão e a eclosão (BE) às 24 e 48 horas. Finalmente, às 48 horas, os BE foram submetidos ao RT-qPCR em busca dos genes BCL2A1, BAK, BAX e CASP3. No MALDI-TOF, a intensidade do íon foi expressa em unidades arbitrárias. O desenvolvimento embrionário foi comparado por qui-quadrado (P<0,05). Entre os PL mais representativos estavam as fosfatidilcolinas [PC (32: 0) + H] +; [PC (34: 1) + H] + e [PC (36: 4) + H] +. Além do PL, o MALDI revelou alguns triglicerídeos (TG), incluindo PPL (50: 2) + Na +, PPO (50: 1) + Na +, PLO (52: 3) + Na + e POO (52: 2) + Na. A reexpansão não diferiu (P>0,05) entre blastocistos frescos ou vitrificados às 24 (33,3%, 32,7%) e 48 horas (2,4%, 13,5%). As taxas de eclosão foram maiores (P<0,05) para o grupo fresco comparado ao vitrificado às 24 (66,7% x 15,4%) e 48 horas (97,6% x 36,0%). O BAX estava mais expresso (P<0,05) após a vitrificação. Concluindo, os blastocistos Piau podem ser criopreservados por Cryotop. Este estudo também demonstrou que a via apoptótica pode ser responsável pela baixa eficiência da criopreservação de embriões suínos.(AU)

Antioxidantes associados à pressão hidrostática sobre a viabilidade embrionária pós-desvitrificação / Association between antioxidant and hidrostatic pressure on the embryonic viability after

Avaliou-se o efeito de dois antioxidantes no cultivo de embriões pós-desvitrificação, associados ounão à pressão hidrostática (PH) em três experimentos. O primeiro avaliou a interação entre PH e antioxidante(β-mercaptoetanol - BME, cisteamina - CYST e BME + CYST). O segundo, similar ao primeiro, vitrificou osembriões uma hora após passarem ou não pela PH. Os parâmetros foram taxas de eclosão e degeneração com24 e 48 h após passar pela PH (experimento 1) e 12, 24, 48 e 72 h pós-desvitrificação (experimento 2). Oexperimento 3 avaliou a taxa de prenhez de embriões cultivados por 12 h com/sem BME. O primeiroexperimento não demonstrou interação entre os tratamentos. No segundo, os resultados foram similares para BX.O tratamento BME + CYST obteve melhor taxa de eclosão dos BL com 48 e 72 h (76,04%). O mesmo fatoocorreu para a taxa de degeneração às 24 h (BME + CYST = 7,29%; 32,29% controle). Ao transferir os embriões(n = 55), percebeu-se uma similaridade em todos os grupos (38,9% CONT; 16,7% VITRIF e 31,6% BME). Opresente trabalho mostrou que o uso da pressão hidrostática e de BME e CYST não influencia as taxas deeclosão, degeneração e de prenhez de embriões vitrificados.(AU)

This study aimed to evaluate different antioxidants in embryo culture after vitrification, with or withoutthe previous use of hydrostatic pressure (PH). Three experiments were designed to evaluate the interactionbetween PH and antioxidants (β-mercaptoethanol - BME, cysteamine - CYST and BME + CYST) in fresh andvitrified in vitro produced embryos. In experiment 1 hatching and degeneration rates were evaluated at 24 and48 h after passing through the PH and in experiment 2 the same parameters were evaluated at 12, 24, 48 and72 h after heating. The last step of the study evaluated the pregnancy rate of vitrified embryos, cultured for 12 hwith / without BME. The first experiment showed no difference between treatments. The second found similarresults for all parameters evaluated in BX embryos. Note that the BME + CYST treatment obtained a betterhatching rate in BL with 48 and 72 h (76.04%) than the control group (45.83%). The same behavior wasobserved in degeneration 24 h, where the BME + CYST group was 7.29% against 32.29% in the control.However, the pregnancy rates (55 embryo transfers) were not different between control fresh, control vitrifiedand BME groups (38.9%, 16.7% and 31.6%, respectively). This study showed that the use of hydrostaticpressure and antioxidant had no effect on the evaluated parameters.(AU)

Antioxidantes associados à pressão hidrostática sobre a viabilidade embrionária pós-desvitrificação / Association between antioxidant and hidrostatic pressure on the embryonic viability after

Avaliou-se o efeito de dois antioxidantes no cultivo de embriões pós-desvitrificação, associados ounão à pressão hidrostática (PH) em três experimentos. O primeiro avaliou a interação entre PH e antioxidante(β-mercaptoetanol - BME, cisteamina - CYST e BME + CYST). O segundo, similar ao primeiro, vitrificou osembriões uma hora após passarem ou não pela PH. Os parâmetros foram taxas de eclosão e degeneração com24 e 48 h após passar pela PH (experimento 1) e 12, 24, 48 e 72 h pós-desvitrificação (experimento 2). Oexperimento 3 avaliou a taxa de prenhez de embriões cultivados por 12 h com/sem BME. O primeiroexperimento não demonstrou interação entre os tratamentos. No segundo, os resultados foram similares para BX.O tratamento BME + CYST obteve melhor taxa de eclosão dos BL com 48 e 72 h (76,04%). O mesmo fatoocorreu para a taxa de degeneração às 24 h (BME + CYST = 7,29%; 32,29% controle). Ao transferir os embriões(n = 55), percebeu-se uma similaridade em todos os grupos (38,9% CONT; 16,7% VITRIF e 31,6% BME). Opresente trabalho mostrou que o uso da pressão hidrostática e de BME e CYST não influencia as taxas deeclosão, degeneração e de prenhez de embriões vitrificados.

This study aimed to evaluate different antioxidants in embryo culture after vitrification, with or withoutthe previous use of hydrostatic pressure (PH). Three experiments were designed to evaluate the interactionbetween PH and antioxidants (β-mercaptoethanol - BME, cysteamine - CYST and BME + CYST) in fresh andvitrified in vitro produced embryos. In experiment 1 hatching and degeneration rates were evaluated at 24 and48 h after passing through the PH and in experiment 2 the same parameters were evaluated at 12, 24, 48 and72 h after heating. The last step of the study evaluated the pregnancy rate of vitrified embryos, cultured for 12 hwith / without BME. The first experiment showed no difference between treatments. The second found similarresults for all parameters evaluated in BX embryos. Note that the BME + CYST treatment obtained a betterhatching rate in BL with 48 and 72 h (76.04%) than the control group (45.83%). The same behavior wasobserved in degeneration 24 h, where the BME + CYST group was 7.29% against 32.29% in the control.However, the pregnancy rates (55 embryo transfers) were not different between control fresh, control vitrifiedand BME groups (38.9%, 16.7% and 31.6%, respectively). This study showed that the use of hydrostaticpressure and antioxidant had no effect on the evaluated parameters.

Criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro / Cryopreservation of in vitro produced bovine embryos

Vários estudos indicam que embriões produzidos in vitro (PIV) são menos resistentes à criopreservação do que os in vivo. Isso se deve às diferenças existentes entre eles causadas, principalmente, pelo cultivo in vitro. Essa revisão visa sumarizar os principais fatores que afetam a criopreservação de embriões PIV e abordar asdiferentes estratégias que podem ser utilizadas para melhorar a qualidade e aumentar a criotolerância desses embriões. (AU)

Numerous studies indicate that in vitro-produced (IVP) bovine embryos are less resistant to cryopreservation when compared to those produced in vivo. The lower cryotolerance of those embryos are probably caused by the in vitro culture. This review aims to summarize the main factors that affect cryopreservation of IVP embryos and to describe different strategies for modifying those embryos to increasetheir quality and cryosurvival. (AU)

Criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro / Cryopreservation of in vitro produced bovine embryos

Vários estudos indicam que embriões produzidos in vitro (PIV) são menos resistentes à criopreservação do que os in vivo. Isso se deve às diferenças existentes entre eles causadas, principalmente, pelo cultivo in vitro. Essa revisão visa sumarizar os principais fatores que afetam a criopreservação de embriões PIV e abordar asdiferentes estratégias que podem ser utilizadas para melhorar a qualidade e aumentar a criotolerância desses embriões.

Numerous studies indicate that in vitro-produced (IVP) bovine embryos are less resistant to cryopreservation when compared to those produced in vivo. The lower cryotolerance of those embryos are probably caused by the in vitro culture. This review aims to summarize the main factors that affect cryopreservation of IVP embryos and to describe different strategies for modifying those embryos to increasetheir quality and cryosurvival.