Sorting and cryopreservation of goat sperm with or without phenolic compounds / Seleção e criopreservação de espermatozoides caprinos com ou sem compostos fenólicos

The objectives of this study were to evaluate goat sperm sorting in continuous Percoll® density gradients and gamete freezability, in the presence or absence of phenolic antioxidants. For this, semen pools were sorted, frozen, and evaluated. The non-selected group (NSg) presented lower progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), and wobble (WOB) than the selected groups, and straight line velocity (VSL) compared to those with catechin or resveratrol. The amplitude of lateral head displacement (ALH) was higher in NSg, and quercetin reduced the mitochondrial membrane potential (MMP). After thawing, the NSg presented lower PM than the selected groups, VSL and VAP (average path velocity) than the selected group with or without catechin, LIN and WOB than the selected with or without catechin or resveratrol, and STR than the selected with catechin. Moreover, NSg presented higher ALH and BCF than the samples selected with or without catechin. Plasma membrane integrity and intact and living cells were higher in the selected groups, and MMP was lower in the NSg and the selected group with quercetin. Thus, centrifugation in Percoll® continuous density gradients is a viable methodology to select goat sperm compatible with the freezing, especially in the presence of catechin or resveratrol.(AU)

Objetivou-se avaliar a separação de espermatozoides caprinos em gradientes de densidade contínuos de Percoll® e a congelabilidade espermática, com ou sem antioxidantes fenólicos. Para tal, pools seminais foram selecionados, congelados e avaliados. O grupo não selecionado (gNS) apresentou menor motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR) e oscilação (WOB) do que os selecionados, bem como menor velocidade linear progressiva (VSL) do que os com catequina ou resveratrol. A amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior no gNS e a quercetina reduziu o potencial de membrana mitocondrial (PMM). Após a descongelação, o gNS manifestou menor MP do que os selecionados, menor VSL e VAP (velocidade média da trajetória) do que os com ou sem catequina, menor LIN e WOB do que os com ou sem catequina ou resveratrol, e menor STR do que os com catequina, além de maior ALH e BCF do que os com ou sem catequina. A integridade da membrana plasmática e as células intactas e vivas foram maiores nas amostras selecionadas e o PMM foi inferior no gNS e no selecionado com quercetina. Portanto, a centrifugação em gradientes contínuos de densidade de Percoll® é uma metodologia viável para selecionar espermatozoides caprinos compatíveis com a congelação, especialmente na presença de catequina ou resveratrol.(AU)

Sorting and cryopreservation of goat sperm with or without phenolic compounds / Seleção e criopreservação de espermatozoides caprinos com ou sem compostos fenólicos

The objectives of this study were to evaluate goat sperm sorting in continuous Percoll® density gradients and gamete freezability, in the presence or absence of phenolic antioxidants. For this, semen pools were sorted, frozen, and evaluated. The non-selected group (NSg) presented lower progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), and wobble (WOB) than the selected groups, and straight line velocity (VSL) compared to those with catechin or resveratrol. The amplitude of lateral head displacement (ALH) was higher in NSg, and quercetin reduced the mitochondrial membrane potential (MMP). After thawing, the NSg presented lower PM than the selected groups, VSL and VAP (average path velocity) than the selected group with or without catechin, LIN and WOB than the selected with or without catechin or resveratrol, and STR than the selected with catechin. Moreover, NSg presented higher ALH and BCF than the samples selected with or without catechin. Plasma membrane integrity and intact and living cells were higher in the selected groups, and MMP was lower in the NSg and the selected group with quercetin. Thus, centrifugation in Percoll® continuous density gradients is a viable methodology to select goat sperm compatible with the freezing, especially in the presence of catechin or resveratrol.(AU)

Objetivou-se avaliar a separação de espermatozoides caprinos em gradientes de densidade contínuos de Percoll® e a congelabilidade espermática, com ou sem antioxidantes fenólicos. Para tal, pools seminais foram selecionados, congelados e avaliados. O grupo não selecionado (gNS) apresentou menor motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR) e oscilação (WOB) do que os selecionados, bem como menor velocidade linear progressiva (VSL) do que os com catequina ou resveratrol. A amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior no gNS e a quercetina reduziu o potencial de membrana mitocondrial (PMM). Após a descongelação, o gNS manifestou menor MP do que os selecionados, menor VSL e VAP (velocidade média da trajetória) do que os com ou sem catequina, menor LIN e WOB do que os com ou sem catequina ou resveratrol, e menor STR do que os com catequina, além de maior ALH e BCF do que os com ou sem catequina. A integridade da membrana plasmática e as células intactas e vivas foram maiores nas amostras selecionadas e o PMM foi inferior no gNS e no selecionado com quercetina. Portanto, a centrifugação em gradientes contínuos de densidade de Percoll® é uma metodologia viável para selecionar espermatozoides caprinos compatíveis com a congelação, especialmente na presença de catequina ou resveratrol.(AU)

Assessment of swim-up and discontinuous density gradient in sperm sex preselection for bovine embryo production / Avaliação do swim-up e do gradiente descontinuo de densidade na pré-seleção do sexo de espermatozoides na produção de embriões bovinos

The purpose of this work was to associate the modified swim-up method with centrifugation in density gradient for the separation of X-bearing spermatozoa. Sperm viability and integrity were evaluated through the Trypan Blue/Giemsa staining method. Quality control of centrifuged spermatozoa was performed in in vitro produced embryos. The results were validated by the sex ratio of in vitro produced embryos using PCR by Y- specific sequences present in bovine male genomic DNA. After determining genetic sex of in vitro produced embryos, the results showed difference (P<0.05) in deviation of sex ratio when comparing the control group (45.2% females) with the other spermatozoa selection procedures (60.6% females) (P<0.05). The sperm selection methods are capable of selecting X-bearing spermatozoa without compromising the spermatozoa fertility (cleavage and blastocyst rates, 70% and 26%, respectively) and were considered relevant methods to be introduced in bovine in vitro produced embryo programs.(AU)

O objetivo do presente trabalho foi associar o método de swim-up modificado à centrifugação em gradiente de densidade para a separação de espermatozoides portadores do cromossomo X. A viabilidade e a integridade espermática foram avaliadas pelo método de coloração Azul de Tripan e Giemsa. O controle de qualidade dos espermatozoides centrifugados foi realizado por meio da produção in vitro de embriões bovinos. Os resultados foram validados pela técnica de PCR para verificar a proporção sexual dos embriões produzidos in vitro, com o uso de sequências Y especificas presente no DNA genômico de machos bovinos. Após determinar o sexo genético dos embriões produzidos in vitro, os resultados não mostraram diferença (P<0,05) no desvio da proporção do sexo quando comparou o grupo controle (45,2% de fêmeas) com os outros processos de seleção de espermatozoides (60,6% de fêmeas) (P<0,05). Os métodos de seleção de espermatozoides são capazes de selecionar espermatozoides portadores do cromossomo X sem comprometer a fertilidade, medida pelas taxas de clivagem e blastocisto de 70% e 26%, respectivamente, e foram considerados métodos de relevância para serem introduzidos nos programas de produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

High incidence of testicular hypoplasia in Brangus-Ibagé bulls in Mato Grosso do Sul state: case report / Alta incidência de hipoplasia testicular em touros Brangus-Ibagé no estado do Mato Grosso do Sul: relato de caso

This study describes a high incidence of testicular hypoplasia observed during breeding soundness examination conducted on a commercial farm in Mato Grosso do Sul state. Sixty-eight Brangus-Ibagé bulls aged between 36 and 48 months were evaluated and eight animals were diagnosed with testicular hypoplasia, which corresponded to an incidence of 11.8%. The hypoplastic animals presented flaccid testicular consistency and small size of scrotal circumference (mean of 28.9 cm) compared with the other animals evaluated, which presented a firm-elastic testicular consistency and mean scrotal circumference of 36.6 cm. In the semen evaluation of hypoplastic animals, low progressive motility (mean of 47%) and high percentage of major and total defects (means of 56% and 62%, respectively) were observed. The animals that were approved in the breeding soundness examination presented mean progressive motility, major defects and total defects of 68%, 17% and 23%, respectively. Given the genetic character of testicular hypoplasia, the immediate removal of hypoplastic animals from breeding was recommended. Finally, it was suggested to investigate the origin of these animals in order to avoid that new animals from this lineage are acquired by the owner.

Neste trabalho, relata-se um caso de alta incidência de hipoplasia testicular observada durante exame andrológico realizado em uma fazenda comercial no estado do Mato Grosso do Sul. Foram avaliados 68 touros Brangus-Ibagé com idade entre 36 e 48 meses e observou-se oito animais com hipoplasia testicular, o que correspondeu a uma incidência de 11,8% desta patologia. Os animais hipoplásicos apresentaram consistência testicular flácida, bem como tamanho médio do perímetro escrotal bastante reduzido (28,9 cm) em comparação aos demais animais avaliados, que apresentaram média do perímetro escrotal de 36,6 cm e consistência testicular firme-elástica. Na avaliação do sêmen dos animais com hipoplasia testicular, observou-se baixa motilidade progressiva (média de 47%) e alta porcentagem de defeitos maiores e totais (média de 56% e 62%, respectivamente). Nos demais animais aprovados no exame andrológico, a média de motilidade progressiva, defeitos maiores e defeitos totais foram 68%, 17% e 23%, respectivamente. Dado o caráter genético da hipoplasia testicular, recomendou-se o descarte ou retirada imediata destes animais da reprodução. Por fim, sugeriu-se a investigação da origem destes animais de modo a evitar-se que novos animais oriundos dessa linhagem genética sejam adquiridos pelo proprietário.

Induction of the acrosome reaction test to in vitro estimate embryo production in Nelore cattle / Teste de indução da reação acrossomal na estimativa de produção in vitro de embriões Nelore

The effectiveness of induction of the acrosome reaction (AR) test as a parameter to in vitro estimate embryo production (IVP) in Nelore breed and the AR pattern by the Trypan Blue/Giemsa (TB) stain were evaluated. Frozen semen samples from ten Nelore bulls were submitted to AR induction and were also evaluated for cleavage and blastocyst rates. The treatments utilized for AR induction were: control (TALP medium), TH (TALP medium + 10μg heparin), TL (TALP medium + 100μg lysophosphatidylcholine) and THL (TALP medium + 10μg heparin + 100μg lysophosphatidylcholine). Sperm acrosomal status and viability were evaluated by TB staining at 0 and after 4h incubation at 38ºC. The results obtained for AR presented a significant difference (P<0.05) in the percentage of acrosome reacted live sperm after 4h of incubation in the treatments that received heparin. The cleavage and blastocyst rates were 60 percent and 38 percent respectively and a significant difference was observed among bulls (P<0.05). It was founded a satisfactory model to estimate the cleavage and blastocyst rates by AR induction test. Therefore, it can be concluded that the induction of the AR test is a valuable tool to predict the IVP in Nelore breed.(AU)

Avaliou-se a eficiência da técnica de indução da reação acrossomal (RA) como parâmetro para estimar a produção in vitro (PIV) de embriões Nelore e analisou-se o padrão de RA pela técnica de coloração Azul de Tripan/Giemsa (TB). Amostras de sêmen congelado de dez touros foram submetidas à indução da RA e avaliadas quanto a taxa de clivagem e blastocisto. Os tratamentos utilizados para indução da RA foram: controle (meio TALP), TH (meio TALP + 10μg heparina), TL (meio TALP + 100μg lisofosfatidilcolina) e THL (meio TALP + 10μg heparina + 100μg lisofosfatidilcolina). Avaliou-se viabilidade espermática e acrossomal pela coloração TB a zero e após 4h de incubação a 38ºC. Os resultados obtidos para RA mostram uma diferença significativa (P<0,05) na porcentagem de espermatozoides vivos com acrossoma reagindo após 4h de incubação nos tratamentos que receberam heparina. As taxas de clivagem e blastocisto obtidas foram 60 por cento e 38 por cento respectivamente e observou-se uma diferença significativa entre touros (P<0,05). Delineou-se um modelo satisfatório para estimar as taxas de clivagem e blastocisto. Desta forma, conclui-se que o teste de indução da RA é uma ferramenta valiosa para predizer a PIV na raça Nelore.(AU)

Perfil em SDS-PAGE das proteínas do plasma seminal e sua relação com a congelabilidade do sêmen de touros doadores da raça gir / SDS-PAGE seminal plasma proteins pattern and its correlation with gir breed semen freezability

Foram utilizados dez animais doadores de sêmen em nível de Central de Inseminação Artificial, da raça Gir, divididos em dois grupos, de acordo com o grau de congelabilidade do sêmen de cada animal. Os animais com sêmen de alta congelabilidade foram aqueles cuja porcentagem de ejaculados viáveis pós-descongelação foi superior a 80 por cento. O grupo de baixa congelabilidade tinha animais com porcentagem menor que 50 por cento de ejaculados viáveis pós-descongelação. Os critérios de avaliação da viabilidade do sêmen e seleção dos animais foram definidos pelo controle de qualidade do Departamento de Produção da Central de Inseminação Artificial. Foram feitas quatro coletas semanais consecutivas, sendo que obtiveram-se as amostras de plasma seminal por centrifugação a 1.500 g por 15 a 20 minutos a 4ºC, momentos após a coleta do sêmen em vagina artificial. O plasma seminal foi dialisado em membrana de celulose, em tampão Tris-Glicina pH-7,4 por 24 horas a 4ºC, em agitação lenta e constante. As amostras foram padronizadas em 1,0 mg/ml de proteína total, por diluição em tampão Tris-HCl 62mM pH-6,2 mais 20 por cento de glicerol e 4 por cento de SDS. Através de eletroforese do tipo SDS-PAGE, foram feitas as corridas em gel a 13 por cento. A corrida foi feita com a constante de 25 mA, por um período de 5 horas. A coloração do gel foi feita por Coomassie Brilliant Blue. Pelos resultados obtidos, verificou-se que existe uma banda no grupo de alta congelabilidade, cujo fragmento polipeptídico desta proteína tem Mr (mobilidade relativa) 20,3 e PM (peso molecular) aproximado de 61.800 Da. Esta banda nao foi detectada nas amostras do grupo de baixa congelabilidade, o que sugere ser um possível marcador bioquímico quanto ao potencial de criopreservação do sêmen de bovinos.(AU)