Transforming growth factor-β (TGF-β) maintains follicular ultrastructure and stimulates preantral follicle growth in caprine ovarian tissue cultured in vitro / Fator de crescimento transformante-β (TGF-β) mantém a ultraestrutura folicular e estimula o crescimento de folículos pré-antrais caprinos inclusos em tecido ovariano cultivado in vitro

The objectives of this study were to investigate whether TGF-β affect the survival, activation and further growth of goat primordial follicles enclosed in ovarian cortex after in vitro culture. Goat ovaries were collected from an abattoir and pieces of ovarian tissues were cultured for one or seven days in a supplemented alpha Minimum Essential Medium, alone or containing TGF-β (1, 5, 10 or 50ng/mL). Ovarian tissues from the fresh control as well as those cultured were processed for histological and ultrastructural studies. The results showed that when compared with fresh control, there was decrease in the percentages of histologically normal follicles in all treatments only after seven days culture. TGF-β did not affect the activation of preantral follicles regardless of its concentration, however, larger follicles diameter (P<0.05) was observed using 10ng/mL TGF-β than in the fresh control and other treatments. Moreover, this concentration maintained the normal ultrastructure after seven days of culture. In conclusion, TGF-β showed additional effect on the follicle growth and the maintenance of ultrastructural integrity of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue when used at 10ng/mL during seven days of culture.(AU)

O objetivo desse estudo foi investigar se o TGF-β afeta a sobrevivência, ativação e crescimento de folículos primordiais caprinos inclusos no córtex ovariano após o cultivo in vitro. Ovários de cabras foram coletados em abatedouro e fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por um e sete dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM+) sozinho ou suplementado com TGF-β (1, 5, 10 ou 50ng/mL). Fragmentos ovarianos não cultivados e cultivados foram processados para análise histológica e ultraestrutural. Os resultados mostraram que, comparado ao controle fresco, houve diminuição no percentual de folículos morfologicamente normais em todos os tratamentos somente após sete dias de cultivo. O TGF-β não afetou a ativação folicular independente da concentração testada, contudo, o diâmetro folicular foi superior (P<0.05) no tratamento com 10ng/mL de TGF-β quando comparado ao controle fresco e aos demais tratamentos. Além disso, essa mesma concentração manteve a ultraestrutura normal dos folículos após sete dias de cultivo. Em conclusão, o TGF-β apresentou efeito adicional no crescimento folicular e na manutenção da integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos inclusos no tecido ovariano quando utilizado na concentração de 10ng/mL durante sete dias de cultivo.(AU)

Papel dos antioxidantes no cultivo in vitro de células ovarianas / The role of antioxidants in the in vitro culture of ovarian cells

Radicais livres são moléculas que contêm elétrons desemparelhados na camada de valência atuando na defesa do organismo contra agentes estranhos, podendo ser importantes marcadores da remodelação dos tecidos. Entretanto, um desequilíbrio entre sua produção e neutralização pode levar a danos celulares, denominados estresse oxidativo. Os agentes neutralizantes dessas moléculas são conhecidos como antioxidantes e podem ser de natureza enzimática ou não. Tendo em vista que o metabolismo oxidativo é essencial para a produção de energia em gametas e embriões, a produção de radicais livres é inevitável. Alguns agentes antioxidantes têm sido adicionados aos meios de cultivo de células ovarianas a fim de reduzir o estresse oxidativo. Sendo assim, a presente revisão objetiva descrever os principais antioxidantes e suas funções em compartimentos celulares com ênfase nas células ovarianas.(AU)

Free radical is any molecule containing unpaired electrons in the valence shell, which protects the body against foreign agents and can act as important markers in tissue remodelation. Nevertheless, an imbalance between production and neutralization of these factors can damage cells in a process named oxidative stress. Neutralizing agents for these molecules are known as antioxidants, which can be enzymatic in nature or not. Since oxidative metabolism is essential for energy production in gametes and embryos, free radicals generation is unavoidable. Some antioxidant agents have been employed in culture media for ovarian cells. In this context, the aim of present review is to describe the main antioxidants and their functions within cellular compartments, with focus on ovarian cells.(AU)

Papel dos antioxidantes no cultivo in vitro de células ovarianas / The role of antioxidants in the in vitro culture of ovarian cells

Radicais livres são moléculas que contêm elétrons desemparelhados na camada de valência atuando na defesa do organismo contra agentes estranhos, podendo ser importantes marcadores da remodelação dos tecidos. Entretanto, um desequilíbrio entre sua produção e neutralização pode levar a danos celulares, denominados estresse oxidativo. Os agentes neutralizantes dessas moléculas são conhecidos como antioxidantes e podem ser de natureza enzimática ou não. Tendo em vista que o metabolismo oxidativo é essencial para a produção de energia em gametas e embriões, a produção de radicais livres é inevitável. Alguns agentes antioxidantes têm sido adicionados aos meios de cultivo de células ovarianas a fim de reduzir o estresse oxidativo. Sendo assim, a presente revisão objetiva descrever os principais antioxidantes e suas funções em compartimentos celulares com ênfase nas células ovarianas.

Free radical is any molecule containing unpaired electrons in the valence shell, which protects the body against foreign agents and can act as important markers in tissue remodelation. Nevertheless, an imbalance between production and neutralization of these factors can damage cells in a process named oxidative stress. Neutralizing agents for these molecules are known as antioxidants, which can be enzymatic in nature or not. Since oxidative metabolism is essential for energy production in gametes and embryos, free radicals generation is unavoidable. Some antioxidant agents have been employed in culture media for ovarian cells. In this context, the aim of present review is to describe the main antioxidants and their functions within cellular compartments, with focus on ovarian cells.

The trefoil domain of porcine zona pellucida: a sperm receptor?

Trefoil domains are protein structures characterized by six cysteines, which form a three-loops, a hydrophobic groove builds a binding pocket for carbohydrates or proteins. The porcine zona pellucida protein ZP4 contains such a trefoil domain (TFD): therefore we suggested a potential sperm receptor function. Sperm-egg interaction is known to be a multistep event: thus the aim of the study was to analyze the interaction of porcine. TFD with boar sperm cells at several levels which reflect the most important steps of the fertilization cascade. We tested by Far Western blot and surface plasmon resonance whether a syntheric porcine TFD (pTFD) was able to interact with sperm cell lysates and by immunocytochemistry if it is able to bind sperm cell membranes.(AU)

The trefoil domain of porcine zona pellucida: a sperm receptor?

Trefoil domains are protein structures characterized by six cysteines, which form a three-loops, a hydrophobic groove builds a binding pocket for carbohydrates or proteins. The porcine zona pellucida protein ZP4 contains such a trefoil domain (TFD): therefore we suggested a potential sperm receptor function. Sperm-egg interaction is known to be a multistep event: thus the aim of the study was to analyze the interaction of porcine. TFD with boar sperm cells at several levels which reflect the most important steps of the fertilization cascade. We tested by Far Western blot and surface plasmon resonance whether a syntheric porcine TFD (pTFD) was able to interact with sperm cell lysates and by immunocytochemistry if it is able to bind sperm cell membranes.

Característica histológica, ultra-estrutural e produção de nitrito de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro na ausência ou presença de soro / Histological and ultrastructural feature and nitrite production of caprine preantral follicles in vitro cultured in the presence or absence of serum

Avaliou-se o efeito da adição de diferentes tipos e concentrações de soro sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos in vitro. Além disso, verificou-se a relação entre as concentrações de nitrito presentes no meio de cultivo e a viabilidade folicular. Cada par ovariano foi dividido em 29 fragmentos, sendo um destinado ao controle. Os fragmentos foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo suplementado (MEM+) ou MEM+ com diferentes concentrações (10 ou 20 por cento) de soro fetal bovino (SFB), soro de cabra em estro (SCE) ou soro de cabra em diestro (SCD). Na análise morfológica após sete dias, apenas o tratamento com 10 por cento de SFB apresentou percentual de FOPA normais similar ao MEM+ (P>0,05). A análise ultra-estrutural dos folículos cultivados por sete dias com MEM+ ou MEM+ com 10 por cento de SFB mostrou danos oocitários, porém células da granulosa normais. A análise do meio de cultivo revelou correlação positiva entre a viabilidade folicular e a produção de nitrito. A suplementação com soro não melhorou a viabilidade de FOPA e a concentração de nitrito no meio de cultivo funcionou como um indicador da viabilidade das células da granulosa de FOPA caprinos cultivados in vitro.(AU)

The effect of the addition of different types and concentrations of sera on the viability and development of caprine preantal follicles (PAF) in vitro cultured was analyzed. In addition, it was evaluated the correlation between nitrite concentrations in culture medium and folicular viability. Each ovarian pair was divided in 29 fragments and one was used as control. The fragments were cultured for one or seven days in minimal essential medium (MEM+) or MEM+ with different concentrations of (10 or 20 percent) bovine fetal serum (BFS), estrous goat serum (EGS), or diestrous goat serum (DGS). After seven days, the morphological analysis showed that only the treatment with 10 percent BFS maintained the percentage of normal PAF similar to MEM+ (P>0.05). The ultrastructural analysis of follicles cultured for seven days in MEM+ or MEM+ with 10 percent BFS showed some oocyte damage, although the granulosa cells were normal. Analysis of culture medium revealed a positive correlation between follicular viability and nitrite production. Supplementation with serum did not improve the viability of PAF and nitrite levels in culture medium served as an indicator of viability of granulose cells from caprine PAF in vitro cultured.(AU)