Disfunções endócrinas mais comuns e que podem afetar a atividade reprodutiva de cães / Endocrine dysfunctions that can affect reproductive activity in dogs

As disfunções hormonais podem interagir com eixo hipotalamo-hipófise-gônadas (H/H/G) resultando em alteração da espermatogênese e impactando negativamente a fertilidade dos machos. As endocrinopatias na espécie canina são mais frequentes nas fêmeas e muitas vezes os sinais clínicos iniciais envolvem alopecias e alterações de peso, comportamento e de metabolismo. As disfunções hormonais comuns em cães machos incluem o hipotireoidismo, hiperplasia prostática benigna e os tumores testiculares. Cães idosos geralmente apresentam alterações hormonais dependentes da idade, mas a literatura é escassa e conflitante em relação a esta condição, assim o objetivo dessa revisão é informar e atualizar conceitos relacionados às disfunções hormonais que podem causar infertilidade em cães machos com vistas a ferramentas mais modernas de diagnósticos e avaliação seminal.(AU)

Hormonal dysfunctions may interact with hypothalamus, pituitary, gonads (H/H/G) axis resulting in altered spermatogenesis and negatively impacting male fertility. Endocrinopathies in the canine species are more frequent in females and often the initial clinical signs involve alopecia and changes in weight, behavior, and metabolism. Common hormonal dysfunctions in male dogs include hypothyroidism, benign prostatic hyperplasia, and testicular tumors. Older dogs usually present age- dependent hormonal changes, but the literature is scarce and conflicting regarding this condition, thus the aim of this review is to inform and update concepts related to hormonal dysfunctions that can cause infertility in male dogs with a view to more modern diagnostic tools and seminal evaluation.(AU)

Effects of the cryopreservation process on dog sperm integrity

Sperm cryopreservation has become an indispensable tool in reproductive biology. However, frozen/thawed semen has a short lifespan due to loss of sperm cell integrity. To better understand which sperm cell structures are compromised by the cryopreservation process and apoptosis markers, the sperm of five healthy mature dogs was analyzed in this study. Analysis was performed after collection, cooling, and thawing via computer assisted sperm analyzer (CASA) and evaluation of membrane fluidity and permeability, phosphatidylserine translocation (Annexin V), membrane integrity, mitochondrial membrane potential, membrane lipid peroxidation (LPO) and activity of the apoptotic markers caspases 3 and 7 by flow cytometry. Cryopreservation decreased total and progressive motility and the percentage of rapid sperm (P < 0.01). Damage to sperm cells was confirmed by Annexin V (P <0.01), indicating that capacitation-like changes were induced by the cryopreservation procedures. An increase in sperm membrane fluidity was also noted in frozen/thawed samples (P < 0.01). Plasma and acrosomal cell membranes were affected (P < 0.01), with decreases in the subpopulation displaying high membrane potential (P < 0.01). Membrane LPO was increased in thawed sperm compared to cooled sperm (P < 0.05) but was not different from that in fresh sperm. No differences were observed in caspase 3 and 7 activity after cooling, freezing, or thawing. In conclusion, total and progressive motility, plasma membrane integrity and mitochondrial membrane potential suffered from the deleterious effects caused by cryopreservation, unlike the activity of caspases that remained stable during the freezing process.

Effects of the cryopreservation process on dog sperm integrity

Sperm cryopreservation has become an indispensable tool in reproductive biology. However, frozen/thawed semen has a short lifespan due to loss of sperm cell integrity. To better understand which sperm cell structures are compromised by the cryopreservation process and apoptosis markers, the sperm of five healthy mature dogs was analyzed in this study. Analysis was performed after collection, cooling, and thawing via computer assisted sperm analyzer (CASA) and evaluation of membrane fluidity and permeability, phosphatidylserine translocation (Annexin V), membrane integrity, mitochondrial membrane potential, membrane lipid peroxidation (LPO) and activity of the apoptotic markers caspases 3 and 7 by flow cytometry. Cryopreservation decreased total and progressive motility and the percentage of rapid sperm (P < 0.01). Damage to sperm cells was confirmed by Annexin V (P <0.01), indicating that capacitation-like changes were induced by the cryopreservation procedures. An increase in sperm membrane fluidity was also noted in frozen/thawed samples (P < 0.01). Plasma and acrosomal cell membranes were affected (P < 0.01), with decreases in the subpopulation displaying high membrane potential (P < 0.01). Membrane LPO was increased in thawed sperm compared to cooled sperm (P < 0.05) but was not different from that in fresh sperm. No differences were observed in caspase 3 and 7 activity after cooling, freezing, or thawing. In conclusion, total and progressive motility, plasma membrane integrity and mitochondrial membrane potential suffered from the deleterious effects caused by cryopreservation, unlike the activity of caspases that remained stable during the freezing process.(AU)

Influência do hepes na maturação in vitro de oócitos caninos obtidos de cadelas em diestro e anestro / Influence of hepes on in vitro maturation of canine oocytes in different stages of the estrous cycle

Diferentemente de outras espécies domésticas, a maturação in vitro (MIV) de oócitos caninos apresenta sucesso limitado. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do HEPES na maturação in vitro de oócitos caninos obtidos de cadelas em diestro e anestro. Os ovários foram coletados, isolados assepticamente e transportados refrigerados a uma temperatura de 4 ºC. Os complexos cumulus-oócito (CCOs), provenientes das duas fases do ciclo estral, foram submetidos a dois tratamentos: meio TCM-199 com adição de 25 mM de HEPES (GT) e meio sem suplementação (GC). Depois de 72 horas de maturação, os CCOs foram desnudados, fixados e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da maturação nuclear. Os oócitos obtidos da fase de anestro e diestro do GT demonstraram, em relação ao grupo GC, maior frequência de oócitos nos estágios de M-II (p<0,01). Comparando-se os diferentes status reprodutivos, observou-se que os oócitos obtidos da fase de diestro apresentaram índices maiores de QVG e M-II. Nossos resultados demonstraram que o HEPES preserva a viabilidade e morfologia oocitária, indispensáveis para a aquisição da competência meiótica, potencializando as taxas de M-II, e que os oócitos obtidos da fase de diestro estão mais aptos a completarem a maturação oocitária.

Unlike other domestic animals, in vitro maturation (IVM) of canine oocytes still has limited success. The aim of this study was to evaluate the effect of HEPES on the in vitro maturation of dog oocytes in anestrus and diestrus. Ovaries were collected, aseptically isolated and transported refrigerated at a temperature of 4ºC. Cumulus-oocyte complexe (COCs) from the two phases of estrous cycle were subjected to two treatments: medium TCM-199 with addition of 25 mM HEPES (TG) and medium without supplementation (CG). After 72 h of maturation, COCs were denuded, fixed and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear maturation. The oocytes obtained from the anestrus and diestrus phases of the TG showed a higher frequency of oocytes in metaphase II (M-II) (p <0.01) stage.Comparing the different reproductive status, it was observed that the oocytes obtained from the diestrus phase presented higher rates of GVBD (germinal vesicle breakdown) and M-II. Our results showed that HEPES preserves the viability and oocyte morphology essential for the acquisition of meiotic competence, increasing the M-II rates and that the oocytes obtained from the diestrus phase are better able to complete oocyte maturation.

Influência do hepes na maturação in vitro de oócitos caninos obtidos de cadelas em diestro e anestro / Influence of hepes on in vitro maturation of canine oocytes in different stages of the estrous cycle

Diferentemente de outras espécies domésticas, a maturação in vitro (MIV) de oócitos caninos apresenta sucesso limitado. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do HEPES na maturação in vitro de oócitos caninos obtidos de cadelas em diestro e anestro. Os ovários foram coletados, isolados assepticamente e transportados refrigerados a uma temperatura de 4 ºC. Os complexos cumulus-oócito (CCOs), provenientes das duas fases do ciclo estral, foram submetidos a dois tratamentos: meio TCM-199 com adição de 25 mM de HEPES (GT) e meio sem suplementação (GC). Depois de 72 horas de maturação, os CCOs foram desnudados, fixados e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da maturação nuclear. Os oócitos obtidos da fase de anestro e diestro do GT demonstraram, em relação ao grupo GC, maior frequência de oócitos nos estágios de M-II (p<0,01). Comparando-se os diferentes status reprodutivos, observou-se que os oócitos obtidos da fase de diestro apresentaram índices maiores de QVG e M-II. Nossos resultados demonstraram que o HEPES preserva a viabilidade e morfologia oocitária, indispensáveis para a aquisição da competência meiótica, potencializando as taxas de M-II, e que os oócitos obtidos da fase de diestro estão mais aptos a completarem a maturação oocitária.(AU)

Unlike other domestic animals, in vitro maturation (IVM) of canine oocytes still has limited success. The aim of this study was to evaluate the effect of HEPES on the in vitro maturation of dog oocytes in anestrus and diestrus. Ovaries were collected, aseptically isolated and transported refrigerated at a temperature of 4ºC. Cumulus-oocyte complexe (COCs) from the two phases of estrous cycle were subjected to two treatments: medium TCM-199 with addition of 25 mM HEPES (TG) and medium without supplementation (CG). After 72 h of maturation, COCs were denuded, fixed and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear maturation. The oocytes obtained from the anestrus and diestrus phases of the TG showed a higher frequency of oocytes in metaphase II (M-II) (p <0.01) stage.Comparing the different reproductive status, it was observed that the oocytes obtained from the diestrus phase presented higher rates of GVBD (germinal vesicle breakdown) and M-II. Our results showed that HEPES preserves the viability and oocyte morphology essential for the acquisition of meiotic competence, increasing the M-II rates and that the oocytes obtained from the diestrus phase are better able to complete oocyte maturation.(AU)

Hypoplasia of ribs associated with cleft palate, cleft lip, and unilateral renal agenesis in a neonate dog of undefined breed / Hipoplasia de costelas associada a fenda palatina, lábio leporino e agenesia renal unilateral em cão neonato sem raça definida

Congenital defects can cause changes in the normal function or morphology of organs, thus contributing to neonatal mortality. Malformations in dogs occur as a result of genetic factors or by the action of teratogenic agents during pregnancy. Genetic defects can be inherited from one or both parents. These defects are more common in purebred puppies or can even be the result of consanguinity. Teratogenic agents, such as toxins, drugs, infectious diseases, mechanical influences, and irradiation, may affect the litters during gestational development. Hypoplasia of ribs has been described in human newborns. It is a rare and lethal malformation of autosomal recessive inheritance that prevents thoracic expansion and reduces pulmonary compliance, causing respiratory failure. A pregnant bitch of undefined breed was submitted to caesarean section. At birth, a neonate exhibited respiratory distress, and the palpation of the thorax indicated absence of ribs. In addition, the newborn had cleft palate and cleft lip, which led to perform the euthanasia of the animal. Post-mortem examination indicated hypoplasia of ribs and unilateral renal agenesis. As in the canine neonate, hypoplasia of ribs in human newborns is also associated with other malformations, such as cleft lip, cleft palate, and urogenital defects. The present report describes the first case of hypoplasia of ribs associated with other malformations in a canine neonate, the cause being possibly related to a genetic hereditary factor.(AU)

Os defeitos congênitos podem causar alterações na função ou na morfologia normal de órgãos, contribuindo para a mortalidade neonatal canina. As malformações em cães podem ocorrer devido a fatores genéticos ou por ação de agentes teratogênicos durante a gestação. Os defeitos genéticos podem ser herdados de um ou ambos os pais, sendo mais comum em filhotes de raça pura, ou ainda ocorrerem por consaguinidade. Já os agentes teratogênicos como toxinas, fármacos, doenças infecciosas, influências mecânicas e irradiação, podem afetar a ninhada durante o desenvolvimento gestacional. A hipoplasia de costelas é relatada em recém-nascidos humanos, é uma malformação rara e letal de herança autossômica recessiva que impede a expansão torácica e reduz a complacência pulmonar, causando insuficiência respiratória. Uma cadela prenhe sem raça definida foi submetida à cesariana, ao nascimento um neonato apresentou sofrimento respiratório, à palpação do tórax presumiu-se ausência de costelas, o recém-nascido apresentava ainda fenda palatina e lábio leporino, e optou-se pela eutanásia do animal. No exame post-mortem foi diagnosticado hipoplasia de costelas e agenesia renal unilateral. Assim como encontrado no neonato canino, em recém-nascidos humanos a hipoplasia de costelas também está associada com outras malformações, como fenda labial e do palato e defeitos urogenitais. O presente relato descreve o primeiro caso de hipoplasia de costelas em neonato canino, associada com outras malformações, sendo a causa possivelmente relacionada a um fator genético hereditário.(AU)

Infiltrado leucocitário em cérvix de cadelas com piometra aberta e fechada / Leukocyte infiltration in the cervix of bitches with pyometra opened and closed

A piometra canina é uma doença frequente em cadelas comprometendo o útero. Apesar da elevada incidência, ainda é desconhecido o processo responsável pela forma aberta ou fechada. O objetivo da presente pesquisa foi estudar os mecanismos de abertura e fechamento cervical através da determinação do infiltrado leucocitário na cérvix. A leitura no epitélio luminal, epitélio glandular e camada muscular, em microscópio de luz em 400X, sendo os leucócitos classificados em número absoluto de neutrófilos, linfócitos, macrófagos, eosinófilos, mastócitos e plasmócitos. Os grupos e as camadas foram comparadas não sendo encontrada diferença significativa entre as cadelas com piometra aberta e fechada.(AU)

Canine pyometra is a common disease in dogs with involvement of the uterus. Despite the high incidence, is still unknown responsible for the open or closed form process. The objective of this research was to study the mechanisms of cervical opening and closing by determining the leukocyte infiltrate in the cervix. The reading was performed in the luminal epithelium, glandular epithelium and muscle layer, a light microscope at 400X, with leukocytes classified as absolute numbers of neutrophils, lymphocytes, macrophages, eosinophils, mast cells and plasma cells. The groups and layers were compared no significant difference the cervix bitches with open and closed pyometra.(AU)

Infiltrado leucocitário em cérvix de cadelas com piometra aberta e fechada / Leukocyte infiltration in the cervix of bitches with pyometra opened and closed

A piometra canina é uma doença frequente em cadelas comprometendo o útero. Apesar da elevada incidência, ainda é desconhecido o processo responsável pela forma aberta ou fechada. O objetivo da presente pesquisa foi estudar os mecanismos de abertura e fechamento cervical através da determinação do infiltrado leucocitário na cérvix. A leitura no epitélio luminal, epitélio glandular e camada muscular, em microscópio de luz em 400X, sendo os leucócitos classificados em número absoluto de neutrófilos, linfócitos, macrófagos, eosinófilos, mastócitos e plasmócitos. Os grupos e as camadas foram comparadas não sendo encontrada diferença significativa entre as cadelas com piometra aberta e fechada.

Canine pyometra is a common disease in dogs with involvement of the uterus. Despite the high incidence, is still unknown responsible for the open or closed form process. The objective of this research was to study the mechanisms of cervical opening and closing by determining the leukocyte infiltrate in the cervix. The reading was performed in the luminal epithelium, glandular epithelium and muscle layer, a light microscope at 400X, with leukocytes classified as absolute numbers of neutrophils, lymphocytes, macrophages, eosinophils, mast cells and plasma cells. The groups and layers were compared no significant difference the cervix bitches with open and closed pyometra.

Perfil proteico de oócitos caninos / Protein profile of canine oocytes

O presente estudo foi conduzido para caracterizaro proteoma de oócitos caninos. Oócitos foram coletados de 120 cadelas e apenas os COCs grau 1 foram selecionados para o cultivo in vitro. Após o cultivo, os oócitos foram submetidos à extração de proteínas. As proteínas foram digeridas com tripsina e analisadas por espectrometria de massa. Trinta e quatro proteínas foram identificadas nos oócitos caninos. Estas proteínas foram agrupadas em três categorias de acordo com a sua função biológica, molecular e localização celular. Quanto ao processo biológico, foram encontradas diversas proteínas envolvidas no ciclo celular, fertilização, regulação da transcrição e via de sinalização. A análise da ontologia do gene revelou alta porcentagem de proteínas envolvidas na atividade de ligação. Com base na análise da rede proteína-proteína usando a plataforma STRING, observou-se que a vimentina apresentou interações com as CASP3, CASP6, CASP7 e CASP8, envolvidos na apoptose. O componente de complemento C3, interagiu com receptores do complemento, como CR1 e CR2. A proteína de ligação retinol 4 interagiu com precursores de retinol. Actina esteve intimamente relacionada com as proteínas cofilinas 1e 2. A queratina 10 interagiu com a proteína CDK9 relacionada ao processo de sinalização celular. Essas proteínas são essenciais para o desenvolvimento completo de oócitos e fertilização. O presente estudo contém a primeira descrição da composição proteica dos oócitos caninos. A construção de bibliotecas de proteínas de oócitos, para cada espécie, estabelecerá as bases para a compreensão e o mapeamento dos eventos cruciais que definem a competência dos oócitos.

The present study was conducted to characterize the major proteome of canine oocytes. Ovaries were collected from 120 bitches and only Grade 1 COCs were selected for in vitro culture. After in vitro maturation, oocytes were subjected to protein extraction. Proteins were then trypsin-digested and analyzed by tandem mass spectrometry. Thirty-four proteins were identified in the canine oocytes. These proteins have been grouped into three different categories according to their biological, molecular function and cellular localization. With regard to biological process, we found many proteins involved in cell cycle, fertilization, transcription regulation and signaling pathway. The gene ontology analysis also revealeda high percentage of proteins involved in binding activity. Based on protein–protein network analysis using STRING platform, we found that vimentin presents links with CASP3, CASP6, CASP7 and CASP8, which are involved in apoptosis. Complement component C3, interacted with complement receptors, such as CR1 and CR2. Retinol-binding protein 4 interacted with retinol precursors. Actin potentially interacted with cofil in protein 1 and 2. Keratin 10, in turn, had interacted with CDK9, which are involved in pathway signaling. These proteins are essentials for the complete oocyte development and fertilization. In summary, the present study contains the first description of the main protein composition of canine oocytes. Construction of libraries of oocyte proteins, for each especies, will set the foundations for understanding and mapping the crucial events that define oocyte competence.

Partial ablation of endometrial glands in dogs after exposure to progestin during the neonatal period

Bitches with uteri devoid of endometrial glands should be sterile, and consequently could contribute to the population control of dogs. Considering that an inadequate exposure of the female reproductive system to steroids can lead to the formation of the uterine gland knock-out (UGKO) phenotype in some species, the aim of this study was to evaluate the effect of serial applications of medroxyprogesterone acetate (MPA) from birth until the age of six months on the development of endometrial glands in bitches. For this purpose, 16 female mongrel dogs from different litters were distributed into either an MPA group (n = 8), animals treated with 10 mg kg sc (Promone-E®, Pfizer, Brasil) at 3-week intervals, from day one after birth until the age of six months, or a control group (n = 8), composed of animals that only received a 0.9% NaCl solution in place of MPA. At six months of age, ovariohysterectomy was performed and uterine horn samples were collected for histological and immunohistochemical examinations. The bitches from the MPA-treated group presented a 35% decrease in the number of endometrial glands, a larger diameter of the endometrial glands, a greater epithelial height, as well as a greater thickness of the uterine wall, endometrium, and myometrium. However, no significant differences were observed between the two groups in the expression of ER-α, ER-β, and PR on the surface epithelium and endometrial stroma. Therefore, the serial application of MPA from birth until the age of 6 months do not completely ablate the development of the endometrial glands in bitches, but impair it by 35%.

Perfil proteico de oócitos caninos / Protein profile of canine oocytes

O presente estudo foi conduzido para caracterizaro proteoma de oócitos caninos. Oócitos foram coletados de 120 cadelas e apenas os COCs grau 1 foram selecionados para o cultivo in vitro. Após o cultivo, os oócitos foram submetidos à extração de proteínas. As proteínas foram digeridas com tripsina e analisadas por espectrometria de massa. Trinta e quatro proteínas foram identificadas nos oócitos caninos. Estas proteínas foram agrupadas em três categorias de acordo com a sua função biológica, molecular e localização celular. Quanto ao processo biológico, foram encontradas diversas proteínas envolvidas no ciclo celular, fertilização, regulação da transcrição e via de sinalização. A análise da ontologia do gene revelou alta porcentagem de proteínas envolvidas na atividade de ligação. Com base na análise da rede proteína-proteína usando a plataforma STRING, observou-se que a vimentina apresentou interações com as CASP3, CASP6, CASP7 e CASP8, envolvidos na apoptose. O componente de complemento C3, interagiu com receptores do complemento, como CR1 e CR2. A proteína de ligação retinol 4 interagiu com precursores de retinol. Actina esteve intimamente relacionada com as proteínas cofilinas 1e 2. A queratina 10 interagiu com a proteína CDK9 relacionada ao processo de sinalização celular. Essas proteínas são essenciais para o desenvolvimento completo de oócitos e fertilização. O presente estudo contém a primeira descrição da composição proteica dos oócitos caninos. A construção de bibliotecas de proteínas de oócitos, para cada espécie, estabelecerá as bases para a compreensão e o mapeamento dos eventos cruciais que definem a competência dos oócitos.(AU)

The present study was conducted to characterize the major proteome of canine oocytes. Ovaries were collected from 120 bitches and only Grade 1 COCs were selected for in vitro culture. After in vitro maturation, oocytes were subjected to protein extraction. Proteins were then trypsin-digested and analyzed by tandem mass spectrometry. Thirty-four proteins were identified in the canine oocytes. These proteins have been grouped into three different categories according to their biological, molecular function and cellular localization. With regard to biological process, we found many proteins involved in cell cycle, fertilization, transcription regulation and signaling pathway. The gene ontology analysis also revealeda high percentage of proteins involved in binding activity. Based on protein–protein network analysis using STRING platform, we found that vimentin presents links with CASP3, CASP6, CASP7 and CASP8, which are involved in apoptosis. Complement component C3, interacted with complement receptors, such as CR1 and CR2. Retinol-binding protein 4 interacted with retinol precursors. Actin potentially interacted with cofil in protein 1 and 2. Keratin 10, in turn, had interacted with CDK9, which are involved in pathway signaling. These proteins are essentials for the complete oocyte development and fertilization. In summary, the present study contains the first description of the main protein composition of canine oocytes. Construction of libraries of oocyte proteins, for each especies, will set the foundations for understanding and mapping the crucial events that define oocyte competence.(AU)

Partial ablation of endometrial glands in dogs after exposure to progestin during the neonatal period

Bitches with uteri devoid of endometrial glands should be sterile, and consequently could contribute to the population control of dogs. Considering that an inadequate exposure of the female reproductive system to steroids can lead to the formation of the uterine gland knock-out (UGKO) phenotype in some species, the aim of this study was to evaluate the effect of serial applications of medroxyprogesterone acetate (MPA) from birth until the age of six months on the development of endometrial glands in bitches. For this purpose, 16 female mongrel dogs from different litters were distributed into either an MPA group (n = 8), animals treated with 10 mg kg sc (Promone-E®, Pfizer, Brasil) at 3-week intervals, from day one after birth until the age of six months, or a control group (n = 8), composed of animals that only received a 0.9% NaCl solution in place of MPA. At six months of age, ovariohysterectomy was performed and uterine horn samples were collected for histological and immunohistochemical examinations. The bitches from the MPA-treated group presented a 35% decrease in the number of endometrial glands, a larger diameter of the endometrial glands, a greater epithelial height, as well as a greater thickness of the uterine wall, endometrium, and myometrium. However, no significant differences were observed between the two groups in the expression of ER-α, ER-β, and PR on the surface epithelium and endometrial stroma. Therefore, the serial application of MPA from birth until the age of 6 months do not completely ablate the development of the endometrial glands in bitches, but impair it by 35%.(AU)

Contracepção em felinos domésticos: novas abordagens / Contraception in domestic felines: new approaches

A população de gatos domésticos já excede a de cães em muitos países do mundo e o crescimentopopulacional dos gatos domésticos domiciliados cresce paralelamente ao da população de animais abandonados.Esse fato nos coloca frente a uma problemática referente a procriação excessiva e a todas as consequênciasrelativas a essa situação. A escolha de métodos contraceptivos adequados para a espécie felina ainda necessitamde experimentos controlados e de observações a longo prazo para a determinação das vantagens e desvantagensde determinados procedimentos e do conhecimento dos mecanismos de ação de fármacos com indicaçãocontraceptiva. A proposta dessa revisão de literatura é abordar os contraceptivos mais utilizados nos felinosdomésticos, enfatizando o mecanismo de ação, dosagens utilizadas, vantagens e desvantagens de cada fármacoconsiderado.(AU)

The number of domestic cats already exceeds dog population in many countries around the world. Alsothe number of housed cats grows in the same scale of abandoned animals. This fact makes us face the problem ofexcessive procreation and all consequences related this issue. The choice of an appropriated contraceptivemethod for felines still needs controlled experiments and long term observations in order to determine all prosand cons of some procedures and to increase the knowledge regarding the action mechanism of drugs that mayact as contraceptive. This review objective is to approach the most used contraceptive treatments in domesticfelines, emphasizing the action mechanism, recommended dosage, pros and cons from each contraceptivemethods.(AU)

Contracepção em felinos domésticos: novas abordagens / Contraception in domestic felines: new approaches

A população de gatos domésticos já excede a de cães em muitos países do mundo e o crescimentopopulacional dos gatos domésticos domiciliados cresce paralelamente ao da população de animais abandonados.Esse fato nos coloca frente a uma problemática referente a procriação excessiva e a todas as consequênciasrelativas a essa situação. A escolha de métodos contraceptivos adequados para a espécie felina ainda necessitamde experimentos controlados e de observações a longo prazo para a determinação das vantagens e desvantagensde determinados procedimentos e do conhecimento dos mecanismos de ação de fármacos com indicaçãocontraceptiva. A proposta dessa revisão de literatura é abordar os contraceptivos mais utilizados nos felinosdomésticos, enfatizando o mecanismo de ação, dosagens utilizadas, vantagens e desvantagens de cada fármacoconsiderado.

The number of domestic cats already exceeds dog population in many countries around the world. Alsothe number of housed cats grows in the same scale of abandoned animals. This fact makes us face the problem ofexcessive procreation and all consequences related this issue. The choice of an appropriated contraceptivemethod for felines still needs controlled experiments and long term observations in order to determine all prosand cons of some procedures and to increase the knowledge regarding the action mechanism of drugs that mayact as contraceptive. This review objective is to approach the most used contraceptive treatments in domesticfelines, emphasizing the action mechanism, recommended dosage, pros and cons from each contraceptivemethods.

Avaliação da atividade da proteína quinase P34Cdc2 na maturação in vitro de oócitos caninos / Evaluation of p34cdc2 kinase activity in the in vitro maturation of canine oocytes

O controle do ciclo celular é regulado por uma cascata de eventos coordenados que podem atuar influenciando na expressão ou repressão da atividade de proteínas relacionadas a retomada da meiose. Estudos indicam que a atividade dessas proteínas mostra-se tempo-dependente no processo de maturação in vitro (MIV). Esse trabalho teve o objetivo de avaliar a cinética da atividade quinase p34cdc2 durante a MIV de oócitos caninos. Ciência Animal 27(1), 2017. Os ovários foram obtidos de 40 cadelas submetidas à ovário-salpingo-histerectomia (OSH) eletiva. Após a OSH, os ovários foram imediatamente transportados a uma temperatura de 4 ºC. No laboratório, os ovários foram seccionados em fatias finas ("slicing"), para a liberação dos complexos cumulus-oócito (COCs). Apenas os COCs grau 1 foram selecionados e colocados em meio de maturação por um período de 24, 48 e 72 h de maturação. Após o cultivo, os COCs foram colocados em placas contendo solução de hialuronidase 0.2% para a retirada completa das células do Cumulus. A atividade da proteína p34cdc2 foi detectada por ELISA. Com base nos resultados verifica-se que a atividade da proteína mostra-se tempo-dependente, atingindo o pico após 48h de MIV (p<0,01). Após 72h, a atividade demonstrou um decréscimo. Com base neste estudo pode-se concluir que a proteína quinase p34cdc2 desempenha uma função de suma importância na progressão da meiose em cadelas. Dessa forma, a compreensão melhor dessa proteína assim como de outra que participam do processo de maturação poderá contribuir para o estabelecimento de meios mais adequados que melhorem significativamente as taxas dematuração.

The control of the cell cycle is regulated by a cascade of coordinated events that can act by influencing the expression or repression of the activity of proteins related to meiosis resumption. Studies have indicated that the activity of these proteins is time-dependent in the in vitro maturation process (IVM). This work aimed to evaluate the kinetics of the p34cdc2 kinase activity during IVM of canine oocytes. Ovaries were obtained from 40 bitches submitted to elective ovary-salpingo-hysterectomy (OSH). After OSH, ovaries were immediately transported at temperature of 4 °C. In the laboratory, ovaries were sliced for the release of cumulus-oocyte complexes (COCs). Only grade 1 COCs were selected and placed in maturation medium for a period of 24, 48 and 72 h of maturation. After culturing, COCs were plated of 0.2% hyaluronidase solution for complete removal of cumulus cells. The activity of the p34cdc2 protein was detected by ELISA. Based on the results, it was observed that the activity of the protein is time-dependent, peaking after 48 hours of IVM (p 0.01). After 72 hours, activity declined. Based on this study, it could be concluded that the p34cdc2 protein kinase plays a very important role in the meiosis progression in bitches. Thus, a better understanding of this protein as well as of others that participate in the maturation process may contribute to the establishment of more adequate media to significantly improve maturation rates.

Influence of epidermal growth factor (EGF) supplementation at different times of in vitro maturation of canine oocytes / Influência da suplementação do fator de crescimento epidermal (EGF) em diferentes momentos da maturação in vitro de oócitos caninos

The aim of this study was to evaluate the influence of epidermal growth factor (EGF) on in vitro maturation of canine oocytes at different times of the process. Ovaries were collected from 55 bitches considered healthy and aseptically isolated, immersed in physiological solution (0.9% NaCl) and transported under refrigeration. Grade 1 cumulus-oocyte complexes (COCs) were selected and divided into two groups: control group (CG) and treatment group (TG). In CG 698 grade I COCs were placed in 4-well plates containing TCM-199 medium supplemented with 25 mM HEPES, 100 IU/mL penicillin, 100 mg/mL streptomycin, 26 mM sodium bicarbonate, 1.5 mM sodium pyruvate, 2.9 mM sodium lactate pentahydrate, 0.6 mM cysteine, 0.03 IU/mL hCG, 0.5 µg/mL FSH, 20 µg/mL estrogen at 38.5ºC in a humidified atmosphere of 5% CO2 in times of 24 h, 48 h, and 72 h. In TG 547 COCs received the same maturation medium plus 10 ηg/mL EGF. Logistic regression models (SAS, 2011) were constructed in order to estimate the chances of oocytes being observed at nuclear maturation stages in different culture times (24 h, 48 h, and 72 h). Based on the results found EGF-supplemented medium showed 2.56 times more chances of having an oocyte at metaphase I (M-I) than medium without EGF (p < 0.0001). The results of this study demonstrated that the time of 72 h showed 5.88 times more chances of having an oocyte at metaphase II (M-II) compared to time of 24 h (p = 0.0001) and 7.69 times more chance than time of 48 h (p = 0.0001). The chances of finding an oocyte at M-II were also 9.09 times higher in medium supplemented with EGF than in medium without EGF (p = 0.0001). Thus, these results demonstrated the essential importance of EGF at different moments of oocyte maturation, being a key component for the acquisition of meiotic competence in bitches, increasing the M-I and M-II rates.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do fator de crescimento epidermal (EGF) em diferentes momentos da maturação in vitro de oócitos caninos. Os ovários foram coletados de 55 cadelas consideradas sadias e isolados assepticamente, imersos em solução fisiológica e transportados refrigerados. Os complexos cumulus-oócito (COCs) grau 1 foram selecionados e divididos em dois grupos, denominados grupo controle (GC) e grupo tratamento (GT). No GC, 698 COCs grau I foram cultivados em placas de quatro poços contendo meio TCM-199 suplementado com 25 mM de HEPES, 100 UI/mL de penicilina, 100 mg/mL de estreptomicina, 26 mM de bicarbonato de sódio, 1,5 mM de piruvato de sódio, 2,9 mM de lactato de sódio penta hidratado, 0,6 mM de cisteína, 0,03 UI/mL de hCG, 0,5 µg/mL de FSH, 20 µg/mL de estrógeno em estufa úmida a 38ºC, 5% de CO2 nos períodos de 24h, 48 h e 72 h . Já no GT, 547 COCs receberam o mesmo meio de maturação acrescido de 10 ηg/mL do EGF. Modelos de regressão logística foram elaborados para estimar as chances do oócito ser observado nos estágios de maturação nuclear em diferentes tempos de cultivo. Com base nos resultados encontrados, o meio suplementado com EGF demonstrou 2,56 vezes mais chances de ter um oócito no estágio de metáfase I (M-I) do que o meio sem EGF (p < 0,0001). Os resultados desse estudo demonstraram também que o tempo de 72 h mostrou 5,88 vezes mais chances de ter um oócito no estágio de metáfase II (M-II) do que o tempo de 2 h (p = 0,0001) e 7,69 vezes mais chance do que o tempo de 48h (p = 0,0001). As chances de se encontrar um oócito em M-II também foram 9,09 vezes maiores no meio suplementado com EGF do que no meio sem EGF (p = 0,0001). Dessa forma, estes resultados demonstraram a importância essencial do EGF em diferentes momentos da maturação oocitária, sendo componente chave para a aquisição da competência meiótica nas cadelas, aumentando os índices de M-I e M-II.(AU)

Avaliação da atividade da proteína quinase P34Cdc2 na maturação in vitro de oócitos caninos / Evaluation of p34cdc2 kinase activity in the in vitro maturation of canine oocytes

O controle do ciclo celular é regulado por uma cascata de eventos coordenados que podem atuar influenciando na expressão ou repressão da atividade de proteínas relacionadas a retomada da meiose. Estudos indicam que a atividade dessas proteínas mostra-se tempo-dependente no processo de maturação in vitro (MIV). Esse trabalho teve o objetivo de avaliar a cinética da atividade quinase p34cdc2 durante a MIV de oócitos caninos. Ciência Animal 27(1), 2017. Os ovários foram obtidos de 40 cadelas submetidas à ovário-salpingo-histerectomia (OSH) eletiva. Após a OSH, os ovários foram imediatamente transportados a uma temperatura de 4 ºC. No laboratório, os ovários foram seccionados em fatias finas ("slicing"), para a liberação dos complexos cumulus-oócito (COCs). Apenas os COCs grau 1 foram selecionados e colocados em meio de maturação por um período de 24, 48 e 72 h de maturação. Após o cultivo, os COCs foram colocados em placas contendo solução de hialuronidase 0.2% para a retirada completa das células do Cumulus. A atividade da proteína p34cdc2 foi detectada por ELISA. Com base nos resultados verifica-se que a atividade da proteína mostra-se tempo-dependente, atingindo o pico após 48h de MIV (p<0,01). Após 72h, a atividade demonstrou um decréscimo. Com base neste estudo pode-se concluir que a proteína quinase p34cdc2 desempenha uma função de suma importância na progressão da meiose em cadelas. Dessa forma, a compreensão melhor dessa proteína assim como de outra que participam do processo de maturação poderá contribuir para o estabelecimento de meios mais adequados que melhorem significativamente as taxas dematuração.(AU)

The control of the cell cycle is regulated by a cascade of coordinated events that can act by influencing the expression or repression of the activity of proteins related to meiosis resumption. Studies have indicated that the activity of these proteins is time-dependent in the in vitro maturation process (IVM). This work aimed to evaluate the kinetics of the p34cdc2 kinase activity during IVM of canine oocytes. Ovaries were obtained from 40 bitches submitted to elective ovary-salpingo-hysterectomy (OSH). After OSH, ovaries were immediately transported at temperature of 4 °C. In the laboratory, ovaries were sliced for the release of cumulus-oocyte complexes (COCs). Only grade 1 COCs were selected and placed in maturation medium for a period of 24, 48 and 72 h of maturation. After culturing, COCs were plated of 0.2% hyaluronidase solution for complete removal of cumulus cells. The activity of the p34cdc2 protein was detected by ELISA. Based on the results, it was observed that the activity of the protein is time-dependent, peaking after 48 hours of IVM (p 0.01). After 72 hours, activity declined. Based on this study, it could be concluded that the p34cdc2 protein kinase plays a very important role in the meiosis progression in bitches. Thus, a better understanding of this protein as well as of others that participate in the maturation process may contribute to the establishment of more adequate media to significantly improve maturation rates.(AU)

Influence of epidermal growth factor (EGF) supplementation at different times of in vitro maturation of canine oocytes / Influência da suplementação do fator de crescimento epidermal (EGF) em diferentes momentos da maturação in vitro de oócitos caninos

The aim of this study was to evaluate the influence of epidermal growth factor (EGF) on in vitro maturation of canine oocytes at different times of the process. Ovaries were collected from 55 bitches considered healthy and aseptically isolated, immersed in physiological solution (0.9% NaCl) and transported under refrigeration. Grade 1 cumulus-oocyte complexes (COCs) were selected and divided into two groups: control group (CG) and treatment group (TG). In CG 698 grade I COCs were placed in 4-well plates containing TCM-199 medium supplemented with 25 mM HEPES, 100 IU/mL penicillin, 100 mg/mL streptomycin, 26 mM sodium bicarbonate, 1.5 mM sodium pyruvate, 2.9 mM sodium lactate pentahydrate, 0.6 mM cysteine, 0.03 IU/mL hCG, 0.5 µg/mL FSH, 20 µg/mL estrogen at 38.5ºC in a humidified atmosphere of 5% CO2 in times of 24 h, 48 h, and 72 h. In TG 547 COCs received the same maturation medium plus 10 ηg/mL EGF. Logistic regression models (SAS, 2011) were constructed in order to estimate the chances of oocytes being observed at nuclear maturation stages in different culture times (24 h, 48 h, and 72 h). Based on the results found EGF-supplemented medium showed 2.56 times more chances of having an oocyte at metaphase I (M-I) than medium without EGF (p < 0.0001). The results of this study demonstrated that the time of 72 h showed 5.88 times more chances of having an oocyte at metaphase II (M-II) compared to time of 24 h (p = 0.0001) and 7.69 times more chance than time of 48 h (p = 0.0001). The chances of finding an oocyte at M-II were also 9.09 times higher in medium supplemented with EGF than in medium without EGF (p = 0.0001). Thus, these results demonstrated the essential importance of EGF at different moments of oocyte maturation, being a key component for the acquisition of meiotic competence in bitches, increasing the M-I and M-II rates.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do fator de crescimento epidermal (EGF) em diferentes momentos da maturação in vitro de oócitos caninos. Os ovários foram coletados de 55 cadelas consideradas sadias e isolados assepticamente, imersos em solução fisiológica e transportados refrigerados. Os complexos cumulus-oócito (COCs) grau 1 foram selecionados e divididos em dois grupos, denominados grupo controle (GC) e grupo tratamento (GT). No GC, 698 COCs grau I foram cultivados em placas de quatro poços contendo meio TCM-199 suplementado com 25 mM de HEPES, 100 UI/mL de penicilina, 100 mg/mL de estreptomicina, 26 mM de bicarbonato de sódio, 1,5 mM de piruvato de sódio, 2,9 mM de lactato de sódio penta hidratado, 0,6 mM de cisteína, 0,03 UI/mL de hCG, 0,5 µg/mL de FSH, 20 µg/mL de estrógeno em estufa úmida a 38ºC, 5% de CO2 nos períodos de 24h, 48 h e 72 h . Já no GT, 547 COCs receberam o mesmo meio de maturação acrescido de 10 ηg/mL do EGF. Modelos de regressão logística foram elaborados para estimar as chances do oócito ser observado nos estágios de maturação nuclear em diferentes tempos de cultivo. Com base nos resultados encontrados, o meio suplementado com EGF demonstrou 2,56 vezes mais chances de ter um oócito no estágio de metáfase I (M-I) do que o meio sem EGF (p < 0,0001). Os resultados desse estudo demonstraram também que o tempo de 72 h mostrou 5,88 vezes mais chances de ter um oócito no estágio de metáfase II (M-II) do que o tempo de 2 h (p = 0,0001) e 7,69 vezes mais chance do que o tempo de 48h (p = 0,0001). As chances de se encontrar um oócito em M-II também foram 9,09 vezes maiores no meio suplementado com EGF do que no meio sem EGF (p = 0,0001). Dessa forma, estes resultados demonstraram a importância essencial do EGF em diferentes momentos da maturação oocitária, sendo componente chave para a aquisição da competência meiótica nas cadelas, aumentando os índices de M-I e M-II.(AU)

Factores que intervienen en los mecanismos de apertura cervical en perras con piometra / Factors involved in opening cervical mechanisms in bitches with pyometra / Fatores envolvidos nos mecanismos de abertura cervical em cadelas com piometra

En Brasil, hay una gran población de perros con riesgo de desarrollar un panorama de la piometra ya que sólo un pequeño porcentaje de perros sanos se presenta generalmente a ovariohisterectomía electiva. La patogénesis de la piometra canina no se entiende completamente y puede presentar una forma abierta o cerrada, caracterizado por la presencia o ausencia de secreción vaginal, respectivamente. El relajamiento cervical es un factor importante para el diagnóstico, para establecer el prognóstico y para elegir el mejor tratamiento. La inducción de la relajación cervical, independiente del ciclo estral, también podría facilitar los examenes citológicos e histopatológicos del endométrio para el diagnóstico de procesos inflamatorios y neoplásicos. Hay numerosos factores que deben tenerse en cuenta al estudiar los mecanismos de apertura y cierre de cuello de útero, como la concentración sérica de estrógeno y progesterona, los receptores de hormonas en el útero, el porcentaje de colágeno en el cuello del útero, infiltrado inflamatorio, prostaglandinas, interleucinas y óxidos de nitrógeno. El propósito de esta revisión de la literatura es dilucidar los factores que intervienen en los mecanismos de la abertura del cuello uterino en las hembras que sufren de piometra.(AU)

In Brazil, there is a large population of female dogs at risk of developing pyometra, since only a small percentage of healthy bitches is usually submitted to elective ovariohysterectomy. Pathogenesis of canine pyometra is not fully understood and can be presented in open or closed forms characterized by the presence or absence of vaginal discharge, respectively. The cervical opening is an important factor for diagnosis, prognosis and for choosing an effective treatment. The cervical opening, regardless of the estrous cycle, would also facilitate cytological and histopathological tests for endometrial inflammatory and neoplastic processes diagnosis. Numerous factors must be considered when studying the mechanisms of cervical opening and closing, such as the serum concentration of estrogen and progesterone hormone, receptors in the uterus, the percentage of collagen in the cervix, inflammatory infiltrate, prostaglandins, interleukins and nitric oxide. The aim of this review is to elucidate the factors involved in the mechanisms of cervical opening in bitches with pyometra.(AU)

No Brasil existe uma grande população de cadelas com risco de desenvolver um quadro de piometra, pois apenas uma pequena porcentagem de cadelas sadias é normalmente submetida à ovariosalpingohisterectomia eletiva. A patogênese da piometra canina não é completamente esclarecida e pode se apresentar de forma aberta ou fechada, caracterizada pela presença ou ausência de secreção vaginal, respectivamente. O relaxamento cervical é um fator importante para o diagnostico, para o estabelecimento de um prognóstico e para a escolha de um tratamento eficiente. O relaxamento cervical, independente do ciclo estral, poderia também facilitar a realização de exames citológicos e histopatológicos do endométrio para diagnóstico de processos inflamatórios e neoplásicos. Inúmeros fatores devem ser considerados quando se estuda os mecanismos de abertura e fechamento cervical, tais como: a concentração sérica de estrógeno e progesterona, os receptores hormonais no útero, a porcentagem de colágeno na cérvix, infiltrado inflamatório, prostaglandinas, interleucinas e óxidos nítricos. O objetivo desta revisão bibliográfica é elucidar possíveis fatores envolvidos nos mecanismos de abertura cervical em cadelas portadoras de piometra.(AU)

Effect of transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes collected in different stages of the estrous cycle / Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

This study evaluated the influence of estrous cycle stage and transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes. The bitches were categorized into two groups based on stage of estrus cycle: diestrus or anestrus. One ovary of each pair collected was transported in saline solution at 4°C while the other was transported at 37°C. Thus, ovarian tissue was sliced in PBS to release cumulus oocyte complexes (COCs). A total of 345 COCs (n = 186 oocytes from ovaries of bitches in anestrus and 159 in diestrus) were cultivated in TCM 199 supplemented with HEPES, sodium pyruvate, cysteine, follicle stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (hCG), estrogen (E2) and epidermal growth factor (EGF). After 72h of maturation, the COCs were denuded, fixed and stained to assess nuclear maturation. The Fisher test was applied to examine the differences between the groups. The significance level adopted was 0.05. The oocytes obtained from the ovaries from bitches in diestrus transported at 4°C shown increased frequency of oocytes in metaphase II stage than those maintained at 37°C (p 0.01). Similarly, there was increased frequency of oocytes in metaphase II (11.1%) stage from the ovaries of bitches in anestrus and transported at 4°C, than those maintained at 37°C (p 0.05). It was concluded that transport temperature influences the results of canine oocyte viability and in vitro maturation, regardless of reproductive stage of the female.(AU)

Foi avaliada a influencia do ciclo estral e temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos. As cadelas foram categorizadas em dois grupos baseados no estagio do ciclo estral anestro ou diestro. Um ovário por par coletado foi transportado em solução fisiológica 0,9% a 4°C enquanto o outro foi transportado a 37°C. Então, os ovários foram seccionados em PBS para a liberação dos complexos cumulus oocito (COCs). Um total de 345 COCs (n = 186 oocitos obtidos de cadelas em anestro e 159 em diestro) foi cultivado em TCM 199 suplementado com HEPES, piruvato de sódio, cisteina, hormônio folículo estimulante (FSH), gonadotrofina coriônica humana (hCG), estrógeno (E2) e fator de crescimento epidermal (EGF). Apos 72h de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados para avaliação da maturação nuclear. O teste de Fisher foi utilizado para avaliar as diferenças entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 0,05. Os oócitos obtidos de cadelas em diestro transportados a 4°C apresentaram maior frequência de oócitos no estagio de metáfase II (21,1%) que os mantidos na temperatura de 37°C (p 0,01). De forma similar, houve maior frequência de oócitos nos estágios de metáfase II (11,2%) nos ovários obtidos de cadelas em anestro e transportados a 4°C que nos ovários mantidos a 37°C (p 0,05). Concluiu-se que a temperatura de transporte influencia os resultados de viabilidade oocitária canina e a maturação in vitro, independentemente do estagio reprodutivo da fêmea.(AU)