Cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por técnicas de recuperação epididimária / Kinetics of cryopreserved dog spermatozoa obtained by epididymal recovering techniques

Técnicas de coleta de espermatozoides epididimários são utilizadas em diversas espécies animais, sendo ferramentas de biotecnologias importantes aplicadas em casos de animais que precisam ser castrados ou que vieram a óbito. O objetivo deste trabalho foi avaliar a cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por meio de técnicas de recuperação epididimária. Foram coletados 30 complexos testículo-epidídimos (CTE) de cães saudáveis, sendo que cada CTE de determinado animal foi destinado para cada técnica utilizada, 15 direcionados para a técnica de recuperação de espermatozoides epididimários por fluxo retrógrado (FR) e 15 por flutuação (FL). Os CTE foram acondicionados em sacos plásticos identificados, contendo solução salina e levados ao Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal da Universidade Federal do Piauí (LBRA/UFPI) para a realização da diluição e criopreservação espermática após a recuperação epididimária. A congelação foi realizada por meio de uma rampa manual, com as amostras refrigeradas a 5 °C, mantidas em vapor de nitrogênio por 5 minutos e, posteriormente, colocadas no botijão. A análise computadorizada do sêmen (CASA) nas amostras descongeladas foi realizada na Universidade Estadual do Ceará (UECE), sendo avaliados dez parâmetros seminais. Foi empregada a análise de variância, aplicando o teste de Tukey. Nessas amostras, houve diferença significativa quanto à motilidade progressiva entre as técnicas testadas e a motilidade total apresentou valores superiores a 30%, não havendo influência das técnicas nos demais parâmetros seminais. Concluise que a cinética de espermatozoides de cães obtidos por recuperação epididimária avaliados pelo CASA apresentou resultados satisfatórios após a criopreservação.(AU)

Epididymal sperm collection techniques are used in several animal species and are important biotechnology tools applied to animals that needed to be castrated or that died. The objective of this study was to evaluate the kinetics of cryopreserved dog sperm obtained by epididymal recovery techniques. Thirty testicular-epididymal complexes (CTE) were collected from healthy dogs, with each CTE of a given animal being assigned to each technique used, 15 of them directed to the retrograde flow epididymal sperm recovery technique and 15 by fluctuation technique. The CTE were placed in identified plastic bags, containing saline solution and taken to the Animal Reproduction Biotechnology Laboratory of the Federal University of Piauí (LBRA/UFPI) for sperm dilution and cryopreservation after epididymal recovery. The freezing was carried out using a manual ramp, with the samples refrigerated at 5 °C, maintained in nitrogen vapor exposition five minutes and, later, placed in the container. Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was performed in the thawed samples at the State University of Ceará (UECE) and ten seminal parameters were evaluated. Analysis of variance was applied by the Tukey test. In thawed samples, there was a significant difference in progressive motility between the tested techniques and total motility presented values greater than 30%, with no influence of the recovery technique on remaining parameters. It was concluded that the sperm kinetics of dogs obtained by epididymal recovery evaluated by CASA presented satisfactory results after cryopreservation.(AU)

Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por técnicas de recuperação epididimária / Kinetics of cryopreserved dog spermatozoa obtained by epididymal recovering techniques

Técnicas de coleta de espermatozoides epididimários são utilizadas em diversas espécies animais, sendo ferramentas de biotecnologias importantes aplicadas em casos de animais que precisam ser castrados ou que vieram a óbito. O objetivo deste trabalho foi avaliar a cinética de espermatozoides criopreservados de cães obtidos por meio de técnicas de recuperação epididimária. Foram coletados 30 complexos testículo-epidídimos (CTE) de cães saudáveis, sendo que cada CTE de determinado animal foi destinado para cada técnica utilizada, 15 direcionados para a técnica de recuperação de espermatozoides epididimários por fluxo retrógrado (FR) e 15 por flutuação (FL). Os CTE foram acondicionados em sacos plásticos identificados, contendo solução salina e levados ao Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal da Universidade Federal do Piauí (LBRA/UFPI) para a realização da diluição e criopreservação espermática após a recuperação epididimária. A congelação foi realizada por meio de uma rampa manual, com as amostras refrigeradas a 5 °C, mantidas em vapor de nitrogênio por 5 minutos e, posteriormente, colocadas no botijão. A análise computadorizada do sêmen (CASA) nas amostras descongeladas foi realizada na Universidade Estadual do Ceará (UECE), sendo avaliados dez parâmetros seminais. Foi empregada a análise de variância, aplicando o teste de Tukey. Nessas amostras, houve diferença significativa quanto à motilidade progressiva entre as técnicas testadas e a motilidade total apresentou valores superiores a 30%, não havendo influência das técnicas nos demais parâmetros seminais. Concluise que a cinética de espermatozoides de cães obtidos por recuperação epididimária avaliados pelo CASA apresentou resultados satisfatórios após a criopreservação.

Epididymal sperm collection techniques are used in several animal species and are important biotechnology tools applied to animals that needed to be castrated or that died. The objective of this study was to evaluate the kinetics of cryopreserved dog sperm obtained by epididymal recovery techniques. Thirty testicular-epididymal complexes (CTE) were collected from healthy dogs, with each CTE of a given animal being assigned to each technique used, 15 of them directed to the retrograde flow epididymal sperm recovery technique and 15 by fluctuation technique. The CTE were placed in identified plastic bags, containing saline solution and taken to the Animal Reproduction Biotechnology Laboratory of the Federal University of Piauí (LBRA/UFPI) for sperm dilution and cryopreservation after epididymal recovery. The freezing was carried out using a manual ramp, with the samples refrigerated at 5 °C, maintained in nitrogen vapor exposition five minutes and, later, placed in the container. Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was performed in the thawed samples at the State University of Ceará (UECE) and ten seminal parameters were evaluated. Analysis of variance was applied by the Tukey test. In thawed samples, there was a significant difference in progressive motility between the tested techniques and total motility presented values greater than 30%, with no influence of the recovery technique on remaining parameters. It was concluded that the sperm kinetics of dogs obtained by epididymal recovery evaluated by CASA presented satisfactory results after cryopreservation.