First detection of Trypanosoma vivax in dairy cattle from the northwest region of Minas Gerais, Brazil / Primeira detecção de Trypanosoma vivax em bovinos leiteiros da região noroeste de Minas Gerais, Brasil

A tripanossomíase bovina é causada pelo protozoário Trypanosoma vivax. A transmissão biológica ocorre apenas no continente africano pela mosca Tsé-tsé, de forma mecânica por dípteros hematófagos em todos os continentes, ou pelo compartilhamento de agulhas e por práticas associadas. O estudo teve como objetivo relatar o primeiro diagnóstico parasitológico, sorológico e molecular de T. vivax em bovinos leiteiros provenientes de cinco propriedades do município de Unai, Minas Gerais, Brasil. Cento e quinze animais selecionados por conveniência apresentavam sinais clínicos ou pertenciam a lotes de animais suspeitos. Foram detectados positivos pelos testes parasitológico (técnica de Woo), sorológico (ELISA) e molecular (LAMP). A maior prevalência global para T. vivax foi de 11,11% na propriedade A. O único sinal clínico dos animais positivos estudados foi baixa taxa de concepção. O primeiro diagnóstico de tripanossomíase no noroeste mineiro é extremamente importante, haja vista o tamanho do rebanho leiteiro da região e as possíveis perdas econômicas provocadas pela enfermidade. Ademais, faz-se necessário maior controle sanitário na região, uma vez que a transmissão no Brasil é intimamente ligada às práticas de compartilhamento de agulhas no manejo dos animais e ao parasitismo de moscas hematófagas.

Avaliação comparativa de métodos de ensaio imunoenzimático para theileria equi de amostras de soro equino do estado de São Paulo / Comparative evaluation of methods of immunoenzymatic assay for theileria equi of samples of equine serum of the state of São Paulo

A presente pesquisa teve como objetivo comparar a sensibilidade e especificidade de dois testes diagnósticos, um ELISA indireto e um ELISA competitivo,para Theileria equi,com a finalidade de disponibilizar um teste alternativo para o diagnóstico da babesiose em rebanhos equinos em território nacional. Foram avaliadas 168 amostras de soro equino (suspeitos ou não para babesiose), com idade mínima de um ano, independente de sexo, raça e manejo. Os testes foram realizados segundo especificações de cada fabricante. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Teste do Qui-quadrado. A concordância entre os testes foi de 97,2% entre os animais soropositivos (105 soropositivos no c-ELISA e 108 soropositivos no ELISA indireto) e 95,2% dos animais soronegativos (63 soronegativos no c-ELISA e 60 soronegativos no ELISA indireto). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os dois testes. Concluiu-se que o teste ELISA indireto apresentou alta sensibilidade e especificidade (98,1% e 92,1%, respectivamente) para o diagnóstico de Babesiose por Theileria equi.

The present research had as objective to compare thesensitivity and specicvityof the tests of indirectELISA e competitive ELISA for Theileria equi, with purpose to evaluate an alternative test for control of babesiose in equinos flocks in domestic territory. 168 samples of equine serum had been evaluated (suspected or babesiosis does not stop), with minimum age of one year, independent of sex, race and handling. The tests had been carried through according to specifications of each manufacturer, following orientations of each one. The gotten results had been analyzed statistical by the Test of the Qui-quadrado. As result, agreement was observed enters the tests of 97,2% of soropositives animals (105 soropositives in c-ELISA and 108 soropositives in the indirect ELISA) and 95.2% of the soronegatives animals (63 soronegatives in c-ELISA and 60 soronegatives in the indirect ELISA). Statistical significant differences between Indirect and competitive test ELISA for Theileria equi had not been observed. It is concluded that indirect test ELISA showed high sensitivity and specificity (98,1% e 92,1%, respectively) for the diagnosis of Babesiosis by Theileria equi.

Avaliação comparativa de métodos de ensaio imunoenzimático para theileria equi de amostras de soro equino do estado de São Paulo / Comparative evaluation of methods of immunoenzymatic assay for theileria equi of samples of equine serum of the state of São Paulo

A presente pesquisa teve como objetivo comparar a sensibilidade e especificidade de dois testes diagnósticos, um ELISA indireto e um ELISA competitivo,para Theileria equi,com a finalidade de disponibilizar um teste alternativo para o diagnóstico da babesiose em rebanhos equinos em território nacional. Foram avaliadas 168 amostras de soro equino (suspeitos ou não para babesiose), com idade mínima de um ano, independente de sexo, raça e manejo. Os testes foram realizados segundo especificações de cada fabricante. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Teste do Qui-quadrado. A concordância entre os testes foi de 97,2% entre os animais soropositivos (105 soropositivos no c-ELISA e 108 soropositivos no ELISA indireto) e 95,2% dos animais soronegativos (63 soronegativos no c-ELISA e 60 soronegativos no ELISA indireto). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os dois testes. Concluiu-se que o teste ELISA indireto apresentou alta sensibilidade e especificidade (98,1% e 92,1%, respectivamente) para o diagnóstico de Babesiose por Theileria equi.(AU)

The present research had as objective to compare thesensitivity and specicvityof the tests of indirectELISA e competitive ELISA for Theileria equi, with purpose to evaluate an alternative test for control of babesiose in equinos flocks in domestic territory. 168 samples of equine serum had been evaluated (suspected or babesiosis does not stop), with minimum age of one year, independent of sex, race and handling. The tests had been carried through according to specifications of each manufacturer, following orientations of each one. The gotten results had been analyzed statistical by the Test of the Qui-quadrado. As result, agreement was observed enters the tests of 97,2% of soropositives animals (105 soropositives in c-ELISA and 108 soropositives in the indirect ELISA) and 95.2% of the soronegatives animals (63 soronegatives in c-ELISA and 60 soronegatives in the indirect ELISA). Statistical significant differences between Indirect and competitive test ELISA for Theileria equi had not been observed. It is concluded that indirect test ELISA showed high sensitivity and specificity (98,1% e 92,1%, respectively) for the diagnosis of Babesiosis by Theileria equi.(AU)

Molecular detection of hemoplasma infection among cats from São Luís island, Maranhão, Brazil

Hemoplasmas are bacteria that infect erythrocytes, attaching to the red blood cell. There is a need for more reports of hemoplasma infection prevalence and molecular characterization among cats in Brazil since there are only few published reports. The present work aimed to detect and molecularly characterize the presence of hemotrophic mycoplasmas in domestic cats with outdoor access from São Luís, Maranhão, Brazil. Twenty cats (10%) were positive for Candidatus M. haemominutum, five (2.5%) for M. haemofelis, and four (2.%) for M. turicensis based on 16S rRNA gene PCRs. Five cats (2.5%) were co-positive for Candidatus M. haemominutum and M. haemofelis. PCR diagnosis was confirmed by sequencing; and phylogenetic analysis was based on 16S rRNA and rnpb genes.

Proteinograma sérico de bovinos experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi / Serum protein concentrations in cattle experimentally infected with Trypanosoma evansi

Trypanosoma evansi é patogênico para diversas espécies de animais em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a doença é endêmica no Pantanal Mato-Grossense. Este estudo analisou o perfil eletroforético das proteínas séricas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados oito bovinos, mestiços, com idade aproximada de oito meses, clinicamente sadios e soronegativos (RIFI) para T. evansi. Os animais foram divididos em dois grupos, G1: cinco bovinos inoculados via intravenosa com 2,2 x 107 tripomastigotas de T. evansi, e G2: três bovinos mantidos como controles. Sangue para obtenção do soro foi coletado diariamente até o 15º dia após a inoculação (DAI), e posteriormente a intervalos semanais até o 204º DAI, a cada 14 dias até o 372º DAI e a cada 30 dias até o 522º DAI. Para o fracionamento das proteínas foi utilizada a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Por meio da prova biológica, detectou-se T. evansi nos bovinos 01, 06 e 08 no 15º DAI, 06 e 07 no 30º DAI, 01 e 06 no 45º DAI, 06 no 60º DAI e 01 no 75º DAI. Vinte e seis proteínas com pesos moleculares variando de 20 a 245 kDa foram encontradas nos bovinos, sendo que oito foram identificadas nominalmente: imunoglobulina A (IgA), ceruloplasmina, transferrina, albumina, imunoglobulinas G (IgG) de cadeia pesada e de cadeia leve, haptoglobina e glicoproteína ácida.

Trypanosoma evansi is pathogenic to several animal species in tropical and subtropical areas. In Brazil, the disease is endemic in Pantanal mato-grossense. This study aimed to determine the electrophoretic profile of serum proteins in experimentally infected cattle. Eight crossbred animals, aged approximately eight months, clinically healthy and seronegative (IFAT) for Tripanosoma evansi were used. The animals were divided into two groups, G1: five animals inoculated intravenously with 22 x 106 trypomastigotes of T. evansi, and G2: three animals kept as controls. The blood used to obtain serum samples was collected daily until the 15th day after inoculation (DAI), and subsequently, at weekly intervals until the 204thDAI, every 14 days until the 372ndDAI and every 30 days until the 522ndDAI. Electrophoresis in polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) was used for the purification of proteins. Through the biological test, T. evansi was detected in animals 01, 06 and 08 on the 15th DAI, 06 and 07 on the 30th DAI, 01 and 06 on the 45th DAI, 06 on the 60th DAI and 01 on the 75th DAI. Twenty-six proteins with molecular weights ranging from 20 kDa to 245 kDa were found in cattle. Eight of them were nominally identified as immunoglobulin A (IgA), ceruloplasmin, transferrin, albumin, heavy and light chain immunoglobulin G (IgG), haptoglobin and acid glycoprotein.

SERUM PROTEIN CONCENTRATIONS IN CATTLE EXPERIMENTALLY INFECTED WITH Trypanosoma evansi / Proteinograma sérico de bovinos experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi

Trypanosoma evansi é patogênico para diversas espécies de animais em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a doença é endêmica no Pantanal Mato-Grossense.  Este estudo analisou o perfil eletroforético das proteínas séricas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados oito bovinos, mestiços, com idade aproximada de oito meses, clinicamente sadios e soronegativos (RIFI) para T. evansi. Os animais foram divididos em dois grupos, G1: cinco bovinos inoculados via intravenosa com 2,2 x 107 tripomastigotas de T. evansi, e G2: três bovinos mantidos como controles. Sangue para obtenção do soro foi coletado diariamente até o 15º dia após a inoculação (DAI), e posteriormente a intervalos semanais até o 204º DAI, a cada 14 dias até o 372º DAI e a cada 30 dias até o 522º DAI. Para o fracionamento das proteínas foi utilizada a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Por meio da prova biológica, detectou-se T. evansi nos bovinos 01, 06 e 08 no 15º DAI, 06 e 07 no 30º DAI, 01 e 06 no 45º DAI,

Proteinograma sérico de bovinos experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi / Serum protein concentrations in cattle experimentally infected with Trypanosoma evansi

Trypanosoma evansi é patogênico para diversas espécies de animais em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a doença é endêmica no Pantanal Mato-Grossense. Este estudo analisou o perfil eletroforético das proteínas séricas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados oito bovinos, mestiços, com idade aproximada de oito meses, clinicamente sadios e soronegativos (RIFI) para T. evansi. Os animais foram divididos em dois grupos, G1: cinco bovinos inoculados via intravenosa com 2,2 x 107 tripomastigotas de T. evansi, e G2: três bovinos mantidos como controles. Sangue para obtenção do soro foi coletado diariamente até o 15º dia após a inoculação (DAI), e posteriormente a intervalos semanais até o 204º DAI, a cada 14 dias até o 372º DAI e a cada 30 dias até o 522º DAI. Para o fracionamento das proteínas foi utilizada a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Por meio da prova biológica, detectou-se T. evansi nos bovinos 01, 06 e 08 no 15º DAI, 06 e 07 no 30º DAI, 01 e 06 no 45º DAI, 06 no 60º DAI e 01 no 75º DAI. Vinte e seis proteínas com pesos moleculares variando de 20 a 245 kDa foram encontradas nos bovinos, sendo que oito foram identificadas nominalmente: imunoglobulina A (IgA), ceruloplasmina, transferrina, albumina, imunoglobulinas G (IgG) de cadeia pesada e de cadeia leve, haptoglobina e glicoproteína ácida.(AU)

Trypanosoma evansi is pathogenic to several animal species in tropical and subtropical areas. In Brazil, the disease is endemic in Pantanal mato-grossense. This study aimed to determine the electrophoretic profile of serum proteins in experimentally infected cattle. Eight crossbred animals, aged approximately eight months, clinically healthy and seronegative (IFAT) for Tripanosoma evansi were used. The animals were divided into two groups, G1: five animals inoculated intravenously with 22 x 106 trypomastigotes of T. evansi, and G2: three animals kept as controls. The blood used to obtain serum samples was collected daily until the 15th day after inoculation (DAI), and subsequently, at weekly intervals until the 204thDAI, every 14 days until the 372ndDAI and every 30 days until the 522ndDAI. Electrophoresis in polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) was used for the purification of proteins. Through the biological test, T. evansi was detected in animals 01, 06 and 08 on the 15th DAI, 06 and 07 on the 30th DAI, 01 and 06 on the 45th DAI, 06 on the 60th DAI and 01 on the 75th DAI. Twenty-six proteins with molecular weights ranging from 20 kDa to 245 kDa were found in cattle. Eight of them were nominally identified as immunoglobulin A (IgA), ceruloplasmin, transferrin, albumin, heavy and light chain immunoglobulin G (IgG), haptoglobin and acid glycoprotein.(AU)

In vitro culture, PCR, and nested PCR for the detection of Theileria equi in horses submitted to exercise / Cultivo in vitro, PCR e nested PCR na detecção de Theileria equi em eqüinos submetidos a exercícios

This study compared the usefulness of in vitro culture, PCR, and nested PCR for the diagnosis of Theileria equi in horses submitted to stress during exercise. Blood samples from 15 apparently healthy horses, previously conditioned to a high-speed equine treadmill, were taken prior to and after exercise. The animals were divided into two experimental groups: 30-day training schedule (G1) and 90-day training schedule (G2). Statistical analysis was performed using a chi-square test and kappa statistic was used in order to assess agreement. No significant difference was observed between samples collected at resting or after exercise. In G1, merozoites of T. equi were detected in the blood smears of four horses before in vitro culture, whereas 14 samples were positive, confirmed by culture. In G2, five and 11 horses were positive before and after culture, respectively. No PCR amplified product was observed in any of the tested animals although the PCR system based on the 16S rRNA gene of T. equi detected DNA in blood with an equivalent 8x10-5 percent parasitaemia. The nested PCR based on the T. equi merozoite antigen gene (EMA-1) allowed the visualization of amplified products in all the horses. Therefore, nested PCR should be considered as a means of detection of sub-clinical T. equi infections and in vitro culture could be used as a complement to other methods of diagnosis.(AU)

Comparou-se a utilização do cultivo in vitro, PCR e nested PCR no diagnóstico de Theileria equi em eqüinos submetidos ao estresse induzido por exercícios. Amostras de sangue foram obtidas de 15 eqüinos submetidos a treinamento em esteira rolante de alto desempenho, sendo as amostras colhidas antes e após os exercícios. Os animais foram divididos em dois grupos experimentais: 30 dias de treinamento (G1) e 90 dias de treinamento (G2). O teste do qui-quadrado foi empregado para as análises estatísticas e o índice kappa utilizado para avaliar a concordância. Não houve diferença significativa entre as amostras obtidas em repouso e após exercícios. Merozoítas de T. equi foram detectados em apenas quatro eqüinos do G1 pela microscopia direta realizada antes do cultivo, enquanto 14 animais apresentaram-se positivos pelo cultivo in vitro. No G2, cinco e 11 eqüinos foram positivos antes e após o cultivo, respectivamente. Nenhum produto de amplificação foi observado pela técnica de PCR, apesar do PCR baseado no gene 16S rRNA de T. equi ter detectado DNA em sangue com parasitemia equivalente a 8x10-5 por cento. O nested PCR, baseado na seqüência do gene do antígeno de merozoíta de T. equi (EMA-1,) permitiu a visualização de produtos de amplificação em todos os eqüinos testados. O nested PCR deve ser considerado para a detecção de infecções subclínicas de T. equi e o cultivo in vitro pode ser utilizado como uma ferramenta complementar a outros métodos de diagnóstico.(AU)

Proteinogramas séricos de ratos Wistar experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi / Serum protein concentrations in Wistar rats experimentally infected with Trypanosoma evansi

Estabeleceu-se o perfil eletroforético de proteínas séricas de ratos Wistar experimentalmente infectados com Tripanosoma evansi, utilizando-se 40 ratos, distribuídos em oito grupos de cinco animais cada. Um grupo foi mantido como testemunho (G1), e os demais (G2 a G8) foram inoculados, via intraperitoneal, com cerca de 10³tripomastigota de T. evansi. Amostras de sangue para obtenção de soro foram coletadas no quinto (G2), 10º (G3), 15º (G4), 30º (G5), 45º (G6), 60º (G7) e 75º (G1 e G8) dia após as inoculações. O fracionamento das proteínas foi realizado pela técnica SDS-PAGE. Foram identificadas 31 proteínas, sendo sete de fase aguda: ceruloplasmina (101KD), hemopexina (83KD), transferrina (75KD), albumina (66KD), antitripsina (60KD), haptoglobina (44KD) e glicoproteína ácida (38KD). As proteínas com pesos moleculares 12KD; 22KD; 25KD; 28KD; 32,5KD; 35KD; 53,5KD; 63KD e 72KD apareceram apenas nos ratos inoculados com T. evansi.(AU)

This study established the electrophoretic profile of serum proteins of Wistar rats experimentally infected with Tripanosoma evansi. For such, 40 rats were allocated into eight groups of five animals. A group was kept as control (G1) and the others (G2 to G8) were intraperitoneally inoculated with 1.0 x 10³ tripomastigote of T. evansi. Blood samples were collected at 5th (G2), 10th (G3), 15th (G4), 30th (G5), 45th (G6), 60th (G7), and 75th (G1 and G8) days after inoculation (DAI). The serum protein concentrations were determined by means of sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis. Thirty-one distinct proteins were identified, seven of these were identified as acute phase proteins: ceruloplasmin (110KD), hemopexin (83KD), transferrin (75KD), albumin (66KD), antitrypsin (60KD), haptoglobin (44KD), and acid glycoprotein (38KD). The proteins with molecular weights 12KD; 22KD; 25KD; 28KD; 32,5KD; 35KD; 53,5KD; 63KD, and 72KD were found only in infected rats.(AU)

Experimental Trypanosoma evansi infection in donkeys: hematological, biochemical and histopathological changes / Infecção experimental em jumentos com Trypanosoma evansi: alterações hematológicas, bioquímicas e histopatológicas

Five adult donkeys were experimentally infected with Brazilian strain of Trypanosoma evansi originally isolated from a naturally infected dog to study the hematological biochemical and histopathological alterations during the evolution of the disease. The course of the experimental infection was followed up to 145 days. Hematological analyses of the infected donkeys revealed a marked decline in hemoglobin, packed-cell volume, and erythrocyte count. Anemia was observed after successive peaks of parasitemia. Biochemical analyses showed increased levels of icterus index, serum globulins and decreased serum albumin and glucose values. All infected donkeys revealed enlargement of spleen and its white pulp, enlargement of mediastinal lymph nodes and lungs congestion. The main histopathological features consisted of meningoencephalitis. Demyelination in some areas of the cerebellum pediculus and neuropil vacuolization were observed. This study showed that donkeys infected with a Brazilian strain of T. evansi developed a chronic disease.(AU)

Cinco jumentos, adultos foram infectados experimentalmente com cepa brasileira de Trypanosoma evansi, isolada de um cão naturalmente infectado, com o intuito de observar as alterações hematológicas, bioquímicas e histopatológicas durante a evolução da enfermidade. O curso da infecção experimental foi de 145 dias. Análise hematológica dos jumentos infectados revelou declínio nos valores de hemoglobina, hematócrito e contagem total de eritrócitos. Notou-se anemia após sucessivos picos de parasitemia. Análise bioquímica indicou aumento dos níveis de índice ictérico, globulinas séricas e diminuição dos valores séricos de albumina e glicose. Todos os jumentos infectados apresentaram aumento do baço e de sua polpa branca, aumento de linfonodos mediastínicos e congestão pulmonar. Meningoencefalite foi o principal achado histopatológico. Em algumas áreas do pedículo cerebelar foram observadas desmielinização, além de vacuolização do neurópilo. O estudo mostrou que jumentos infectados com a cepa brasileira do T. evansi desenvolveram doença crônica.(AU)

EVALUATION OF ANTIBODY RESPONSE AND ANTIGENIC CHARACTERIZATION OF TOXOPLASMA GONDII IN EXPERIMENTALLY INFECTED PRIMATES / AVALIAÇÃO DA RESPOSTA DE ANTICORPOS E CARACTERIZAÇÃO ANTIGÊNICA DO TOXOPLASMA GONDII EM PRIMATAS EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS

This study investigated the presence of Toxoplasma gondii antibodies in experimentally infected New World primates, by means of an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for IgG and IgM, and the pattern of polypeptide recognition using Western-blotting. Seven days after infection all primates yielded positive results in both ELISA-IgG and ELISA-IgM. Western blotting documented four major polypeptides with apparent molecular weight of 160, 120, 80 and 35- 30 kDa. The 35-30 kDa polypeptide was identified by antibodies from all infected primates and should be further evaluated for use in specific diagnosis of T. gondii infection.

O presente estudo investigou a presença de anticorpos para Toxoplasma gondii em primatas do Novo Mundo experimentalmente infectados, por meio de um ensaio imunoenzimático (ELISA) para as classes de imunoglobulina IgG e IgM, e o padrão de reconhecimento de polipeptídeos no soro desses mesmos animais utilizando a técnica de "Westernblotting. Todos os primatas mostraram-se positivos aos sete dias de infecção tanto no ELISA-IgG como no ELISA-IgM. O "Western blotting" revelou quatro principais polipeptídeos com pesos moleculares aparentes de 160, 120, 80 e 35-30 kDa. O polipeptídeo de 35-30 kDa foi identificado pelos anticorpos de todos os primatas infectados e deve ser melhor investigado para uso no diagnóstico específico de infecções por T. gondii.

COMPARATIVE STUDY OF DNA EXTRACTION TECHNIQUES AND ITS USE IN THE POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) FOR THE DIAGNOSIS OF Theileria equi AND Babesia caballi. / ESTUDO COMPARATIVO ENTRE TÉCNICAS DE EXTRAÇÃO DE DNA E REALIZAÇÃO DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) PARA O DIAGNÓSTICO DE Theileria equi E Babesia caballi.

Theileira equi and Babesia caballi are the causing agents of equine babesiosis. It is a cosmopolitan disease transmitted by ticks present in areas that range 90% of the world equine population. The diagnosis of equine babesiosis might be done laboratorially in its clinical and subclinical forms by direct and indirect methods. In this study the usefulness of four different methodologies of DNA extraction (phenol-chloroform method; CHELEX 100 method; DNAzol® BD Reagent and GFX Genomic Blood DNA Purification Kit) was evaluated using control blood samples. Additionally, blood from 25 apparently healthy horses from the northeast region of São Paulo State (Brazil)was examined for the presence of both T. equi and B. caballi. The phenol-chloroform method showed the best results in extracting babesial DNA. No PCR amplified product was observed in any of the animals tested, although the PCR system was able to detect T. equi and B. caballi DNA in. control blood samples. KEY WORDS: Equine. Theileria equi. Babesia caballi. PCR.

AVALIAÇÃO COMPARATIVA DE MÉTODOS DE ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO PARA THEILERIA EQUI DE AMOSTRAS DE SORO EQUINO DO ESTADO DE SÃO PAULO.

A presente pesquisa teve como objetivo comparar a sensibilidade e especificidade de dois testes diagnósticos, um ELISA indireto e um ELISA competitivo,para Theileria equi,com a finalidade de disponibilizar um teste alternativo para o diagnóstico da babesiose em rebanhos equinos em território nacional. Foram avaliadas 168 amostras de soro equino (suspeitos ou não para babesiose), com idade mínima de um ano, independente de sexo, raça e manejo. Os testes foram realizados segundo especificações de cada fabricante. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Teste do Qui-quadrado. A concordância entre os testes foi de 97,2% entre os animais soropositivos (105 soropositivos no c-ELISA e 108 soropositivos no ELISA indireto) e 95,2% dos animais soronegativos (63 soronegativos no c-ELISA e 60 soronegativos no ELISA indireto). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os dois testes. Concluiu-se que o teste ELISA indireto apresentou alta sensibilidade e especificidade (98,1% e 92,1%, respectivamente) para o diagnóstico de Babesiose por Theileria equi.

Hematological, biochemical and anatomopathological aspects of the experimental infection with Trypanosoma evansi in dogs / Aspectos hematológicos, bioquímicos e anatomopatológicos da infecção experimental por Trypanosoma evansi em cães

The course of experimental T. evansi infection in four dogs was followed for 82 days and hematological, biochemical and anatomopathological findings were studied. Infected animals showed progressive decrease in red blood cell count and hemoglobin concentration, leading to anemia which persisted from the third week post-infection until the end of the study. Leucopenia and neutropenia were observed between weeks 2 and 5 of the infection. The infected dogs developed hyperproteinemia and a decrease in the albumin:globulin ratio was observed. Aspartate aminotransferase and alamine aminotransferase levels increased significantly in infected dogs in comparison to control dogs. Histological changes observed in all infected animals consisted of lymphoid hyperplasia in spleens and lymph nodes and centrilobular degeneration and periportal mononuclear cell accumulation in the liver. A massive mononuclear cell infiltration of the myocardium was seen in three dogs and a nonsuppurative meningoencephalitis was evidente in two infected animals.(AU)

O presente estudo acompanhou durante 82 dias o curso da infecção experimental com T. evansi em quatro cães, realizando a avaliação dos achados hematológicos, bioquímicos e anatomopatológicos. Os animais infectados mostraram declínio acentuado na contagem de hemácias, hematócrito e teor de hemoglobina, permanecendo anêmicos a partir da terceira semana de infecção até o final do período experimental. Leucopenia com neutropenia foram observadas entre a segunda e a quinta semanas após a infecção. Os cães inoculados desenvolveram hiperproteinemia, sendo constatada diminuição na relação albumina:globulina. As atividades séricas de alamina aminotransferase e aspartato aminotransferase aumentaram significativamente nos cães infectados em relação aos animais controle. O exame histopatológico revelou hiperplasia linfóide no baço e linfonodos e infiltrado mononuclear periportal e esteatose de padrão centrolobular no fígado de todos os cães infectados. Intenso infiltrado mononuclear foi observado no miocárdio de três cães e acúmulos de células mononucleares junto às meninges foram evidenciados em dois animais infectados.(AU)

SERUM PROTEIN CONCENTRATIONS IN CATTLE EXPERIMENTALLY INFECTED WITH Trypanosoma evansi / Proteinograma sérico de bovinos experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi.

Trypanosoma evansi é patogênico para diversas espécies de animais em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a doença é endêmica no Pantanal Mato-Grossense.  Este estudo analisou o perfil eletroforético das proteínas séricas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados oito bovinos, mestiços, com idade aproximada de oito meses, clinicamente sadios e soronegativos (RIFI) para T. evansi. Os animais foram divididos em dois grupos, G1: cinco bovinos inoculados via intravenosa com 2,2 x 107 tripomastigotas de T. evansi, e G2: três bovinos mantidos como controles. Sangue para obtenção do soro foi coletado diariamente até o 15º dia após a inoculação (DAI), e posteriormente a intervalos semanais até o 204º DAI, a cada 14 dias até o 372º DAI e a cada 30 dias até o 522º DAI. Para o fracionamento das proteínas foi utilizada a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Por meio da prova biológica, detectou-se T. evansi nos bovinos 01, 06 e 08 no 15º DAI, 06 e 07 no 30º DAI, 01 e 06 no 45º DAI,

HUMORAL IMMUNE RESPONSE OF SHEEPS EXPERIMENTALY INFECTED WITH TRYPANOSOMA EVANSI. / RESPOSTA IMUNITÁRIA HUMORAL DE OVINOS EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS COM TRYPANOSOMA EVANSI.

This research investigated the humoral immune response in sheep experimentally infected with Trypanosoma evansi. Ten healthy eight-months-old crossbred ewes were used. The animals were previously tested by fluorescent antibody test (IFAT) and were serum negative for T. evansi. Four of them were kept as non-infected controls; three animals were experimentally infected by intravenous route with approximately 2.4 x 106 and the remaining three with 2.4 x 107 trypomastigotes of T. evansi. Serum samples of the experimentally T. evansi-infected and non-infected sheeps were obtained before inoculation and daily thereafter until 14 days post infection (DPI). Later, the serum samples were obtained weekly and biweekly until the 133rd and 253rd DPI, respectively. No clinical signs were observed. The immune responses started on the 14th DPI and progressive increases in antibodies levels were documented between the 30th and the 90th DPI. After this period the levels of antibodies remained high up to the end of the observation period. Sheeps experimentally infected with 2.4 x 107 trypomastigotes of T. evansi showed the highest IFAT values. KEY-WORDS: Trypanosoma evansi. Trypanosomiasis. Sheep. Immune response

A presente pesquisa objetivou estudar a resposta imunitária humoral de ovinos experimentalmente infectados com T.evansi. Para tal, foram utilizadas dez fêmeas, com idade aproximada de oito meses, com variado grau de mestiçagem, clinicamente sadias e sorologicamente negativas para a presença de anticorpos anti-T. evansi (Reação de Imunofluorescência Indireta - RIFI). Desses dez animais, quatro foram utilizados como testemunhos (G3) e os seis restantes constituíram os grupos G1 e G2. As ovelhas do G1 e G2 foram inoculadas via intravenosa, com cerca de 2,4 x 106 e 2,4 x 107 tripomastigotas de T. evansi, respectivamente. A pesquisa de anticorpos anti-T. evansi foi realizada diariamente até o 14º dia após as inoculações (DAI), semanalmente até 133º DAI e a cada 15 dias até o 253º DAI. O curso da doença foi assintomático e anticorpos anti-T. evansi foram identificados no soro dos ovinos inoculados a partir do 14º DAI. Títulos crescentes foram verificados entre o 30º e 90º DAI e, após esse período, mantiveram-se elevados até o final do período de observação. Os ovinos que receberam maior inóculo (G2) apresentaram em média maiores títulos de anticorpos anti-T. evansi.PALAVRAS CHAVE: Trypanosoma evansi. Tripanossomíase. Ovinos. Resposta imune.