Resumo
Em busca de adjuvantes de nova geração para uso na formulação de vacinas contra patógenos virais, o trabalho teve como objetivo preparar nanopartículas de quitosana para encapsular o VBI. Foi utilizado uma suspensão da estirpe H120 atenuada do VBI em líquido córion-alantóide (LCA) para a formulação das nanopartículas por meio da técnica de gelificação iônica. Foram testadas diferentes concentrações de quitosana, ácido acético e tripolifosfato de sódio (TPP) e em diferentes condições de pH. Para o preparo das nanopartículas, um volume da suspensão viral em LCA foi adicionado a 10 volumes da solução de quitosana previamente preparada e, a essa mistura depois de agitada, foram adicionados 5 volumes de TPP, deixando-se essa mistura sob agitação por mais 10 minutos. As nanopartículas foram separadas por duas centrifugações seguidas, sendo armazenado o sobrenadante enquanto que o precipitado, contendo as nanopartcículas foi ressuspendido em PBS. O tamanho das nanopartículas foi medido no aparelho Zetasizer e a eficiência do encapsulamento foi avaliada pela dosagem de proteína presente no sobrenandante através da técnica de Bradford e pela detecção do RNA genômico viral por RT-PCR. Os resultados demonstraram que as concentrações de quitosana e TPP e o pH influenciaram na geração das nanopartículas, sendo que a melhor formulação foi obtida com a quitosana a 0,2%, o TPP a 0,2% e em p
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Um grande número de genótipos e fenótipos do VBI (sorotipos e patótipos) aparece com frequência em todo o mundo, incluindo as cepas variantes encontradas no Brasil, apesar da vacinação rotineira que acontece neste país com estirpes do VBI Massachusetts. No entanto, agrupar isolados do VBI em imunotipos ou protetotipos é mais relevante do ponto de vista prático, porque fornece informações diretas sobre a eficácia de uma vacina contra o VBI. Cepas do VBI que induzem proteção contra o outro pertencem ao mesmo imunotipo. Neste estudo, a proteção induzida pela vacina da estirpe Massachusetts (H120) foi avaliada após o desafio com uma estirpe variante do VBI isolado no Brasil. Doze frangos LPE (livres de patógenos específicos) foram vacinados via óculo-nasal aos 21 dias de idade e desafiados com isolados de campo 21 dias pós-vacinação. Três frangos foram sacrificados aos 4, 7, 11, 14 dias pós-infecção (dpi). Os sinais clínicos foram registrados e amostras de tecidos foram coletadas da traqueia, rins e gônadas, e avaliadas quanto à presença d
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O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes doenças de aves domésticas e silvestres e representa uma ameaça para a avicultura. Os pombos (Columba livia) são susceptíveis ao VDN, sendo considerados disseminadores em potencial desse vírus e por esse motivo tem um importante papel na cadeia epidemiológica dessa enfermidade que é capaz de causar impactos econômicos negativos para a indústria avícola. Este estudo teve por objetivo investigar a presença do VDN em suabes cloacais de 101 pombos capturados em Jaboticabal-SP, com base na técnica molecular Semi-nested-RT-PCR, tendo como alvo a amplificação da região codificadora da proteína de Fusão de 196 pb. Foram avaliadas quatro combinações de primers externos com os internos na técnica de Semi-Nested-RT-PCR, testando-as em diluições seriadas de amostras de líquido córion-alantóide (LCA) infectado com a estirpe LaSota do VDN. Escolhendo-se a combinação de primers externos e internos que revelou uma maior sensibilidade analítica para ser ap
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Os Coronavírus são um dos mais importantes patógenos virais causadores de doenças infecciosas em mamíferos e aves, especialmente os coronavírus aviários, como o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). Um amplo conhecimento sobre as características genotípicas e fenotípicas está disponível para os coronavírus oriundos de aves domésticas. No entanto, em se tratando de aves silvestres, pouco é conhecido, principalmente no Brasil; apesar de já ter sido demonstrado que algumas espécies dessas aves podem ser portadoras assintomáticas desses vírus, inclusive do VBI, que é um importante patógeno para as galinhas domésticas, especialmente as destinadas à avicultura industrial. Assim, é importante que seja melhor compreendido o papel das aves silvestres na epidemiologia da infecção por coronavírus aviários. Dessa forma, este estudo foi realizado com o objetivo de investigar a presença de coronavírus do grupo 3, com base em técnicas moleculares como RT-PCR e Nested-PCR e
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O IBV é um coronavírus (CoV) que infecta aves da espécie Gallus gallus, causando perdas econômicas relevantes para a produção de aves. Os COVs têm uma elevada taxa de variabilidade genética, levando ao aparecimento de estirpes variantes genéticas que podem apresentar diferentes patogenicidades e tropismo do tecido. Este estudo tem como objetivo avaliar um isolado Brasileiro do IBV (IBVPR-12), anteriormente caracterizados como genótipo S1-variante, a fim de determinar a distribuição do tecido após a infecção experimental em galinhas Leghorn da cor branca, livre de patógenos específicos. A carga viral foi medida pelo tempo real de RT-qPCR. Amostras de traquéia, pulmão, baço, rins, gônadas e amígdalas cecais (CT) foram coletadas, em intervalos de 4, 7, 11, 14 e 21 dias após a infecção (dpi). O pico de replicação viral na traquéia foi detectado aos 4 dpi, recusando-se a concluir a limpeza viral em 21 dpi. O pulmão apresentou a maior carga viral aos 7 dpi e replicação do vírus inferior foi detectado até 21 dpi. No entanto, as car
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A bronquite infecciosa é causada pelo VBI, que é classificado no gênero Gammacoronavirus da Família Coronaviridae. Essa enfermidade está distribuída mundialmente e destaca-se como um dos mais importantes problemas sanitários para o plantel avícola industrial. Recentemente tem sido identificado no Brasil um número elevado de variantes do VBI, diferindo na análise filogenética com base no gene S1 de estirpes Americanas, Europeias, Asiáticas e Australianas. No entanto, pouco tem sido investigado com relação a outros genes codificadores de proteínas importantes como a nucleoproteina (N), que é fator chave nos processos de replicação e montagem de novas partículas virais, e contém epítopos importantes para interação com as células T e B. O objetivo do presente estudo foi determinar as seqüências 3-terminal do gene da proteina N de isolados do VBI no Brasil e compará-las com as de estirpes do VBI de outras regiões do mundo. Para tanto, foram submetidos à análise molecular, 15 isolados do VBI obtidos durante o período de 1988 a 2000, de surtos à campo da Bronquite Infecciosa (BI), em aves de corte ou de postura das regiões Sul e Sudeste do Brasil. A análise filogenética de sequências parciais do gene N resultou na segregação dos 15 isolados brasileiros do VBI em cinco grupos diferentes, sendo que três desses grupos são relacionados a estirpes do genótipos Massachusetts, enquanto que os outros dois grupos são associados aos genótipos Connecticut ou Variante Brasileira. Esses grupos genotípicos coincidiram na sua maior parte com os que foram previamente determinados pela análise filogenética com base no gene S1. Concluindo, a análise filogenética do gene N é capaz de diferenciar estirpes brasileiras do VBI e avaliar a sua evolução, especialmente nos casos em que a amplificação do gene S1 é mais difícil por causa da sua variabilidade entre estirpes muito diferentes do VBI.
Infectious bronchitis is caused by IBV, which is classified in the genus Gammacoronavirus, Family Coronaviridae. This disease is distributed worldwide and stands as one of the most important health problems for the poultry industry. Recently, researchers in Brazil have identified a large number of IBV variants, the phylogenetic analysis based on the S1 gene shows that they differ from the American, European, Asian and Australian strains. However, little research has been conducted about other encoding genes of important proteins such as the nucleoprotein (N), which is a key factor in replication and assembly processes of new viral particles, and contains epitopes important for interaction with T and B cells. The aim of this study was to determine the 3'-terminal sequences of the N protein gene isolated from IBV in Brazil and compare them with those of IBV strains from other regions of the world. So, 15 IBV isolates obtained from 1988 to 2000, during outbreaks of Infectious Bronchitis (IB) in broilers or laying birds in Southern and Southeastern Brazil, were submitted to molecular analysis. Phylogenetic analysis of partial sequences of the N gene resulted in the separation of the 15 Brazilian IBV isolates in five different groups while three of these groups are related to strains of the Massachusetts genotypes, whereas the other two groups are associated with the Connecticut genotypes or a Brazilian variant. These genotypic groups mostly coincided with those previously determined by phylogenetic analysis based on the S1 gene. In conclusion, the phylogenetic analysis of the N gene can differentiate Brazilian strains of IBV and evaluate its development, especially in cases where the S1 gene amplification is more difficult due to wide variability between different IBV strains.
Assuntos
Animais , Bronquite/veterinária , Nucleoproteínas/efeitos adversos , Nucleoproteínas/genéticaResumo
A proteção contra as cepas homólogas de IBV é geralmente obtida pela imunização com vacinas contendo cepas atenuadas. No entanto, a variação em algumas proteínas estruturais do IBV resulta em falha da vacina contra cepas heterólogas circulantes no campo. Neste estudo, foram medidas as respostas imunitárias humorais, utilizando um teste ELISA em aves vacinadas e não vacinadas com a cepa Massachusetts H120 e desafiados com uma cepa virulenta de Massachusetts, ou com uma cepa variante. Os grupos experimentais de galinhas SPF vacinadas ou não com a cepa Massachusetts no dia 2 e desafiados no dia 21 com a cepa variante, ou com a cepa virulenta de Massachusetts, foram testadas. Amostras de sangue e lágrimas foram coletadas aos 4, 7, 11, 14 e 21 dias pós-infecção (dpi), para medir os níveis de IgM, IgA e anticorpos anti-IBV IgG. Os resultados mostraram que a IgM sérica e lacrimal, começou a aumentar no quarto dpi, atingindo o pico de concentração no sétimo dpi e em seguida diminuído para os níveis basais até 21 dpi. A IgA foi detectada somente na lágrima, alcançando seu pico aos 14
Resumo
A bronquite infecciosa é causada pelo VBI, que é classificado no gênero Gammacoronavirus da Família Coronaviridae. Essa enfermidade está distribuída mundialmente e destaca-se como um dos mais importantes problemas sanitários para o plantel avícola industrial. Recentemente tem sido identificado no Brasil um número elevado de variantes do VBI, diferindo na análise filogenética com base no gene S1 de estirpes Americanas, Europeias, Asiáticas e Australianas. No entanto, pouco tem sido investigado com relação a outros genes codificadores de proteínas importantes como a nucleoproteina (N), que é fator chave nos processos de replicação e montagem de novas partículas virais, e contém epítopos importantes para interação com as células T e B. O objetivo do presente estudo foi determinar as seqüências 3-terminal do gene da proteina N de isolados do VBI no Brasil e compará-las com as de estirpes do VBI de outras regiões do mundo. Para tanto, foram submetidos à análise molecular, 15 isolados do VBI obtidos durante o período de 1988 a 2000, de surtos à campo da Bronquite Infecciosa (BI), em aves de corte ou de postura das regiões Sul e Sudeste do Brasil. A análise filogenética de sequências parciais do gene N resultou na segregação dos 15 isolados brasileiros do VBI em cinco grupos diferentes, sendo que três desses grupos são relacionados a estirpes do genótipos Massachusetts, enquanto que os outros dois grupos são associados aos genótipos Connecticut ou Variante Brasileira. Esses grupos genotípicos coincidiram na sua maior parte com os que foram previamente determinados pela análise filogenética com base no gene S1. Concluindo, a análise filogenética do gene N é capaz de diferenciar estirpes brasileiras do VBI e avaliar a sua evolução, especialmente nos casos em que a amplificação do gene S1 é mais difícil por causa da sua variabilidade entre estirpes muito diferentes do VBI.(AU)
Infectious bronchitis is caused by IBV, which is classified in the genus Gammacoronavirus, Family Coronaviridae. This disease is distributed worldwide and stands as one of the most important health problems for the poultry industry. Recently, researchers in Brazil have identified a large number of IBV variants, the phylogenetic analysis based on the S1 gene shows that they differ from the American, European, Asian and Australian strains. However, little research has been conducted about other encoding genes of important proteins such as the nucleoprotein (N), which is a key factor in replication and assembly processes of new viral particles, and contains epitopes important for interaction with T and B cells. The aim of this study was to determine the 3'-terminal sequences of the N protein gene isolated from IBV in Brazil and compare them with those of IBV strains from other regions of the world. So, 15 IBV isolates obtained from 1988 to 2000, during outbreaks of Infectious Bronchitis (IB) in broilers or laying birds in Southern and Southeastern Brazil, were submitted to molecular analysis. Phylogenetic analysis of partial sequences of the N gene resulted in the separation of the 15 Brazilian IBV isolates in five different groups while three of these groups are related to strains of the Massachusetts genotypes, whereas the other two groups are associated with the Connecticut genotypes or a Brazilian variant. These genotypic groups mostly coincided with those previously determined by phylogenetic analysis based on the S1 gene. In conclusion, the phylogenetic analysis of the N gene can differentiate Brazilian strains of IBV and evaluate its development, especially in cases where the S1 gene amplification is more difficult due to wide variability between different IBV strains.(AU)
Assuntos
Animais , Bronquite/veterinária , Nucleoproteínas/efeitos adversos , Nucleoproteínas/genéticaResumo
O gene da proteína de nucleocapsídeo (1.230 pb) da estirpe M41 do vírus da bronquite infecciosa (VBI) foi amplificado pelas reações de transcrição reversa e em cadeia da polimerase (RT-PCR) e clonado, em seguida, em dois sistemas; pET28a - Escherichia coli e pFLD -Pichia pastoris. Os produtos recombinantes construídos para expressão (pET28a-N ou pFLD-N) foram identificados por análises de PCR e de sequenciamento de nucleotídeos. Os clones transformantes da linhagem BL21 de E. coli e da linhagem GS115 de P. pastoris foram submetidos aos protocolos apropriados de indução. A expressão da proteína N de fusão com etiqueta de poli-histidina e com massa molecular de 54 kDa foi determinada pelas técnicas de SDS-PAGE e de Western blotting, confirmando-se que ambas proteínas N recombinantes apresentaram tamanhos e antigenicidade compatíveis com a proteína N nativa do próprio VBI. O sistema E. coli expressou uma quantidade relevante da proteína N recombinante, enquanto que o sistema P. pastoris produziu uma baixa recuperação dessa proteína recombinante. A proteína N recombinante gerada pelo sistema bacteriano foi purificada em resina de níquel-sepharose. O conjunto de resultados indica que o sistema de expressão constituído por pET28a E. coli é mais efetivo para produzir a proteína N recombinante do VBI destinada ao uso como antígeno para detectar anticorpos anti-virais específicos em ensaios de imunodiagnóstico para essa infecção viral.
The nucleocapsid protein (N) gene (1,230 bp) of the M41 strain of infectious bronchitis virus (IBV) was amplified by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), and cloned in two systems; pET28a Escherichia coli and pFLD Pichia pastoris. The recombinant expression constructs (pET28a-N or pFLD-N) were identified by PCR and sequencing analysis. The transformant clones of BL21 strain of E. coli or GS115 of P. pastoris were submitted to appropriate inducting protocols. Expression of histidine-tagged fusion N proteins with a molecular mass of 54 kDa was determined by SDS-PAGE and Western blotting analysis, confirming that both recombinant N proteins were comparable in size and antigenicity to native IBV N protein. The E. coli system overexpressed the recombinant N protein, while the P. pastoris system produced a low yield of this recombinant protein. The bacteria expressed N protein was purified by chromatography on nickel-sepharose resin. These results indicated that the pET28a E. coli expression system is more effective to generate N recombinant protein for using as an antigen to detect anti-IBV antibodies in immuno-assays for this viral infection.
Assuntos
Pichia/genética , Vírus da Bronquite Infecciosa/ultraestrutura , Proteínas do Nucleocapsídeo/ultraestrutura , Escherichia coli/genética , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Clonagem MolecularResumo
Variações genética e antigênica são observadas com frequência elevada entre estirpes do VBIG e envolvem principalmente a glicoproteína S1. Com o objetivo de contribuir com a disponibilidade de ferramentas para o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia da bronquite infecciosa das galinhas foi desenvolvida uma metodologia para expressão recombinante da glicoproteína S1 na levedura Picchia pastoris. O cDNA do gene codificador dessa proteína foi obtido a partir de RNA viral de ovos embrionados infectados com a estirpe M41 do VBIG submetido à transcrição reversa (RT) e reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificando-se a sequência codificadora de S1 acrescida de extremidades compatíveis com a clonagem no vetor usado na transformação de leveduras. A indução com metanol resultou na produção de uma proteína detectada como banda única do tamanho previsto, em western-blot, no lisado celular das leveduras transformadas. A expressão em P. pastoris mostrou ser um método eficaz para a produção recombinante da proteína S1 do VBIG, com potencial para utilização em técnicas de imunodiagnóstico da bronquite infecciosa das galinhas.
Genetic and antigenic variation are very frequently observed among IBV strains and affect mainly the S1 glycoprotein. In order to contribute to the availability of tools for immunodiagnosis and immunoprophylaxis of chicken infectious bronchitis we developed an expression system for production of recombinant S1 glycoprotein in Pichia pastoris. We obtained the cDNA from viral RNA on embryonated eggs infected with the M41 strain of IBV, by reverse transcription (RT) and polymerase chain reaction (PCR), amplifying the S1 coding sequence with extremities compatible with the vector used to transform yeast. Induction with methanol led to the production of a protein with the predicted molecular weight that was detected by Western blot in the cell lysate of transformed yeast. Expression in P. pastoris proved to be an effective method for recombinant production of S1 protein from IBV, with potential for use in immuno-diagnosis of chicken infectious bronchitis virus.
Assuntos
Animais , Pichia/ultraestrutura , Glicoproteínas/análise , Galinhas/virologia , Proteínas Virais de Fusão/análise , Vírus da Bronquite Infecciosa/genéticaResumo
ABSTRACT Genetic and antigenic variation are very frequently observed among IBV strains and affect mainly the S1 glycoprotein. In order to contribute to the availability of tools for immunodiagnosis and immunoprophylaxis of chicken infectious bronchitis we developed an expression system for production of recombinant S1 glycoprotein in Pichia pastoris. We obtained the cDNA from viral RNA on embryonated eggs infected with the M41 strain of IBV, by reverse transcription (RT) and polymerase chain reaction (PCR), amplifying the S1 coding sequence with extremities compatible with the vector used to transform yeast. Induction with methanol led to the production of a protein with the predicted molecular weight that was detected by Western blot in the cell lysate of transformed yeast. Expression in P. pastoris proved to be an effective method for recombinant production of S1 protein from IBV, with potential for use in immuno-diagnosis of chicken infectious bronchitis virus.
RESUMO Variações genética e antigênica são observadas com frequência elevada entre estirpes do VBIG e envolvem principalmente a glicoproteína S1. Com o objetivo de contribuir com a disponibilidade de ferramentas para o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia da bronquite infecciosa das galinhas foi desenvolvida uma metodologia para expressão recombinante da glicoproteína S1 na levedura Picchia pastoris. O cDNA do gene codificador dessa proteína foi obtido a partir de RNA viral de ovos embrionados infectados com a estirpe M41 do VBIG submetido à transcrição reversa (RT) e reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificando-se a sequência codificadora de S1 acrescida de extremidades compatíveis com a clonagem no vetor usado na transformação de leveduras. A indução com metanol resultou na produção de uma proteína detectada como banda única do tamanho previsto, em western-blot, no lisado celular das leveduras transformadas. A expressão em P. pastoris mostrou ser um método eficaz para a produção recombinante da proteína S1 do VBIG, com potencial para utilização em técnicas de imunodiagnóstico da bronquite infecciosa das galinhas.
Resumo
ABSTRACT The nucleocapsid protein (N) gene (1,230 bp) of the M41 strain of infectious bronchitis virus (IBV) was amplified by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), and cloned in two systems; pET28a Escherichia coli and pFLD Pichia pastoris. The recombinant expression constructs (pET28a-N or pFLD-N) were identified by PCR and sequencing analysis. The transformant clones of BL21 strain of E. coli or GS115 of P. pastoris were submitted to appropriate inducting protocols. Expression of histidine-tagged fusion N proteins with a molecular mass of 54 kDa was determined by SDS-PAGE and Western blotting analysis, confirming that both recombinant N proteins were comparable in size and antigenicity to native IBV N protein. The E. coli system overexpressed the recombinant N protein, while the P. pastoris system produced a low yield of this recombinant protein. The bacteria expressed N protein was purified by chromatography on nickel-sepharose resin. These results indicated that the pET28a E. coli expression system is more effective to generate N recombinant protein for using as an antigen to detect anti-IBV antibodies in immuno-assays for this viral infection.
RESUMO O gene da proteína de nucleocapsídeo (1.230 pb) da estirpe M41 do vírus da bronquite infecciosa (VBI) foi amplificado pelas reações de transcrição reversa e em cadeia da polimerase (RT-PCR) e clonado, em seguida, em dois sistemas; pET28a - Escherichia coli e pFLD -Pichia pastoris. Os produtos recombinantes construídos para expressão (pET28a-N ou pFLD-N) foram identificados por análises de PCR e de sequenciamento de nucleotídeos. Os clones transformantes da linhagem BL21 de E. coli e da linhagem GS115 de P. pastoris foram submetidos aos protocolos apropriados de indução. A expressão da proteína N de fusão com etiqueta de poli-histidina e com massa molecular de 54 kDa foi determinada pelas técnicas de SDS-PAGE e de Western blotting, confirmando-se que ambas proteínas N recombinantes apresentaram tamanhos e antigenicidade compatíveis com a proteína N nativa do próprio VBI. O sistema E. coli expressou uma quantidade relevante da proteína N recombinante, enquanto que o sistema P. pastoris produziu uma baixa recuperação dessa proteína recombinante. A proteína N recombinante gerada pelo sistema bacteriano foi purificada em resina de níquel-sepharose. O conjunto de resultados indica que o sistema de expressão constituído por pET28a E. coli é mais efetivo para produzir a proteína N recombinante do VBI destinada ao uso como antígeno para detectar anticorpos anti-virais específicos em ensaios de imunodiagnóstico para essa infecção viral.
Resumo
A Doença de Newcastle (DN) é uma das doenças mais importantes das aves, afetando negativamente a produção avícola mundial. O agente etiológico é o vírus da doença de Newcastle (VDN), um paramixovírus aviário do tipo 1 (APMV-1), pertencente ao gênero Avulavirus, da família Paramyxoviridae. Na década de 70 foram registrados no Brasil focos de forma mais severa da DN e dos quais foi isolado a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 do VDN, que foi caracterizada posteriormente como altamente patogênica para embriões de galinha e para pintinhos e galinhas adultas, mas não patogênicas para outras espécies de aves. Nesse estudo, foi feito o sequenciamento completo do genoma dessa estirpe, seguido da análise filogenética. Os resultados revelaram que o genoma da estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 está constituído por 15.174 nucleotídeos, consistindo de seis genes na ordem 3'-N-P-M-F-HN-L-5'. O local provável de clivagem da proteína de fusão (F) apresenta a sequência de aminoácidos correspondente às das sequências de aminoácid
Resumo
A Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é incriminada por uma variedade de doenças extra-intestinais em aves, que podem causar tanto infecções localizadas, quanto generalizadas denominadas colibacilose. Os mecanismos de virulência têm sido continuamente estudados e considerados multifatoriais, assim sendo, o conhecimento da genética bacteriana capaz de gerar tais mecanismos, pode auxiliar na identificação de cepas patogênicas isoladas de aves. O presente trabalho foi delineado com o objetivo de investigar a distribuição de 17 genes de virulência em 72 cepas isoladas de galinhas caipiras pela PCR-multiplex e classificar-las nos grupos filogenéticos A, B1, B2 e D pela detecção de três marcadores de patogenicidade: chuA, yjaA e um fragmento anônimo de DNA designado TSPE4.C2. Todos os isolados apresentaram os genes iss (resistência sérica), ompT (protease de membrana externa) e hlyF (hemolisina F). A freqüência dos demais genes foi 66,7% cvaC, 87,5% iroN, 88,9% iutA, 88,9% sitA, 29,2% tsh, 58,3% iucC, 83,3% traT, 72,2% iucD, 81,9% fimH, 38,9% fyuA, 77,8% irp2, 16,7% vat, 15,3% astA e 1,4% papC. A análise filogenética revelou que a maioria dos isolados pertence ao grupo filogenético B2 (39/72), seguido pelo grupo A (17/72), grupo B1 (14/72) e grupo D (2/72). Os isolados dos grupos filogenéticos B2 e D estiveram associados a um maior número de genes de virulência, apresentando
Resumo
Um grande número de genótipos e fenótipos do VBI (sorotipos e patótipos) aparece com frequência em todo o mundo, incluindo as cepas variantes encontradas no Brasil, apesar da vacinação rotineira que acontece neste país com estirpes do VBI Massachusetts. No entanto, agrupar isolados do VBI em imunotipos ou protetotipos é mais relevante do ponto de vista prático, porque fornece informações diretas sobre a eficácia de uma vacina contra o VBI. Cepas do VBI que induzem proteção contra o outro pertencem ao mesmo imunotipo. Neste estudo, a proteção induzida pela vacina da estirpe Massachusetts (H120) foi avaliada após o desafio com uma estirpe variante do VBI isolado no Brasil. Doze frangos LPE (livres de patógenos específicos) foram vacinados via óculo-nasal aos 21 dias de idade e desafiados com isolados de campo 21 dias pós-vacinação. Três frangos foram sacrificados aos 4, 7, 11, 14 dias pós-infecção (dpi). Os sinais clínicos foram registrados e amostras de tecidos foram coletadas da traqueia, rins e gônadas, e avaliadas quanto à presença d
Resumo
Há atualmente no Brasil, uma predominância de infecções causadas por estirpes do VBI classificadas no genótipo variante (BR-I), que revelam diferenças marcantes de antigenicidade com relação à estirpe vacinal Massachusetts, rotineiramente usada em nosso país. Isso resulta em uma baixa imunidade-cruzada e consequentemente em um menor nível de proteção contra isolados desse genótipo. O propósito deste trabalho foi testar uma vacina inativada contendo uma estirpe variante do VBI pertencente ao genótipo BR-I, e avaliar o estado de proteção induzido por esta vacina em combinação com a vacina atenuada Massachusetts em aves desafiadas com estirpe homóloga. Foram testadas aves SPF distribuídas em três grupos: grupo A (aves vacinadas ao 1º dia de idade com vacina atenuada comercial, revacinadas com 14 dias de idade com vacina inativada experimental e desafiadas aos 35 dias de idade); grupo B (aves não vacinadas e desafiadas aos 35 dias de idade); grupo C (controle). As aves de cada grupo foram sacrificadas aos 3, 7 e 11 dias pós-infecção, para colheita de amostras de traquéia, rins, soro e lágrima, e posteriormente avaliação histopatológica e das respostas imunes humoral(RIH) pelo ELISA e celular(RIC) pela expressão de genes de RIC. Os resultados deste estudo demonstraram que esse esquema imunoprofilático induziu aumentos significativos nos níveis de anticorpos lacrimais e séricos do i
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O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes doenças de aves domésticas e silvestres e representa uma ameaça para a avicultura. Os pombos (Columba livia) são susceptíveis ao VDN, sendo considerados disseminadores em potencial desse vírus e por esse motivo tem um importante papel na cadeia epidemiológica dessa enfermidade que é capaz de causar impactos econômicos negativos para a indústria avícola. Este estudo teve por objetivo investigar a presença do VDN em suabes cloacais de 101 pombos capturados em Jaboticabal-SP, com base na técnica molecular Semi-nested-RT-PCR, tendo como alvo a amplificação da região codificadora da proteína de Fusão de 196 pb. Foram avaliadas quatro combinações de primers externos com os internos na técnica de Semi-Nested-RT-PCR, testando-as em diluições seriadas de amostras de líquido córion-alantóide (LCA) infectado com a estirpe LaSota do VDN. Escolhendo-se a combinação de primers externos e internos que revelou uma maior sensibilidade analítica para ser ap
Resumo
A proteção contra as cepas homólogas de IBV é geralmente obtida pela imunização com vacinas contendo cepas atenuadas. No entanto, a variação em algumas proteínas estruturais do IBV resulta em falha da vacina contra cepas heterólogas circulantes no campo. Neste estudo, foram medidas as respostas imunitárias humorais, utilizando um teste ELISA em aves vacinadas e não vacinadas com a cepa Massachusetts H120 e desafiados com uma cepa virulenta de Massachusetts, ou com uma cepa variante. Os grupos experimentais de galinhas SPF vacinadas ou não com a cepa Massachusetts no dia 2 e desafiados no dia 21 com a cepa variante, ou com a cepa virulenta de Massachusetts, foram testadas. Amostras de sangue e lágrimas foram coletadas aos 4, 7, 11, 14 e 21 dias pós-infecção (dpi), para medir os níveis de IgM, IgA e anticorpos anti-IBV IgG. Os resultados mostraram que a IgM sérica e lacrimal, começou a aumentar no quarto dpi, atingindo o pico de concentração no sétimo dpi e em seguida diminuído para os níveis basais até 21 dpi. A IgA foi detectada somente na lágrima, alcançando seu pico aos 14