Development of tetra-primer ARMS-PCR protocol to genotype the prolactin receptor SNP 39136666 and assessment of this SNP in Brazilian locally adapted cattle breeds / [Desenvolvimento de protocolo de tetra-primer ARMS- PCR para genotipagem do SNP 39136666 do receptor da prolactina e avaliação desse SNP em raças bovinas brasileiras localmente adaptadas]

As raças taurinas de origem ibérica Limonero e Carora (Bos primigenius taurus) possuem o fenótipo de pelo curto, liso e com baixa densidade folicular, o que confere a esses animais maior tolerância térmica e melhor produtividade em regiões quentes. Diferentes mutações associadas a esse fenótipo foram descritas no gene do receptor de prolactina PRLR, localizado no cromossomo bovino BTA20. Uma mutação recentemente encontrada é a substituição do nucleotídeo C por T, SNP 39136666 (p. R497*), no exon 11, que gera um códon de parada e, consequentemente, uma menor isoforma desse receptor. Neste trabalho, desenvolveu-se um protocolo rápido e de baixo custo para detecção desse SNP, utilizando-se a técnica de tetra-primer ARMS-PCR. Assim, foi possível detectar essa mutação nas raças brasileiras de origem ibérica localmente adaptadas: Caracu, Crioulo Lageano, Mocho Nacional e Pantaneiro. O alelo T foi mais frequente na raça Caracu (80%), enquanto o alelo C foi mais frequente na raça Crioulo Lageano (84%). Essa simples metodologia pode ser usada para genotipar esse SNP e ajudar na aplicação dessas informações moleculares em programas de melhoramento focados na tolerância térmica em bovinos taurinos e seus mestiços.(AU)

Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Porcentagem de cães soropositivos para Brucella canis apresentando problemas reprodutivos atendidos no hospital veterinário da universidade estadual de Londrina / Percentage of dogs seropositives for Brucella canis that presented reproductive problems that were attended at veterinary teaching hospital of the state university of Londrina

A brucelose canina é uma doença infectocontagiosa, tendo como principal agente a Brucella canis. É caracterizada principalmente por abortamentos e esterilidade nas fêmeas, e orquite e epididimite nos machos. Possui caráter zoonótico e está mundialmente distribuída. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella canis em animais que apresentavam problemas reprodutivos e avaliar as características dos animais estudados, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina. Foram colhidas 22 amostras sanguíneas de cães machos e fêmeas, de idades, raças variadas, e sem raça definida. Estas amostras foram armazenadas e avaliadas pelo teste sorológico de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). A soropositividade encontrada foi de 4,54%. Concluiu-se que apesar da baixa amostragem e baixa soropositividade, a infecção por Brucella canis ocorre em cães da cidade de Londrina e devem ser empregados estudos posteriores na cidade, bem como medidas de controle e profilaxia para evitar a disseminação do agente.

Canine brucellosis is an infectious disease, the main agent is Brucella canis. It is mainly characterized by abortion and sterility in females and orchitis and epididymitis in males. It`s a zoonotic disease distributed worldwide. This study aimed to investigate the occurrence of antibodies to Brucella canis in animals that presented reproductive problems and evaluated the characteristics of these animals, that were attended in the Veterinary Teaching Hospital of the State University of Londrina. 22 blood samples were collected from male and female dogs of various breeds and ages, showing reproductive problems. These samples were stored and evaluated by serologic testing in agarose gel immunodiffusion (AGID). The seroprevalence found was 4.54%. It was concluded that despite the low sampling and low prevalence the Brucella canis infection occurs in animals of Londrina and further studies should be employed in the city, as well as prevention and in order to control to prevent the spread of the agent.

PERCENTAGE OF DOGS SEROPOSITIVES FOR BRUCELLA CANIS THAT PRESENTED REPRODUCTIVE PROBLEMS THAT WERE ATTENDED AT VETERINARY TEACHING HOSPITAL OF THE STATE UNIVERSITY OF LONDRINA / Porcentagem de cães soropositivos para brucella canis apresentando ..

A brucelose canina é uma doença infectocontagiosa, tendo como principal agente a Brucella canis. É caracterizada principalmente por abortamentos e esterilidade nas fêmeas, e orquite e epididimite nos machos. Possui caráter zoonótico e está mundialmente distribuída. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella canis em animais que apresentavam problemas reprodutivos e avaliar as características dos animais estudados, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina. Foram colhidas 22 amostras sanguíneas de cães machos e fêmeas, de idades, raças variadas, e sem raça definida. Estas amostras foram armazenadas e avaliadas pelo teste sorológico de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). A soropositividade encontrada foi de 4,54%.  Concluiu-se que apesar da baixa amostragem e baixa soropositividade, a infecção por Brucella canis ocorre em cães da cidade de Londrina e devem ser empregados estudos posteriores na cidade, bem como medidas de controle e profilaxia para evitar a disseminação do agente. SUMMARY Canine brucellosis is an infectious disease, the m

Porcentagem de cães soropositivos para Brucella canis apresentando problemas reprodutivos atendidos no hospital veterinário da universidade estadual de Londrina / Percentage of dogs seropositives for Brucella canis that presented reproductive problems that were attended at veterinary teaching hospital of the state university of Londrina

A brucelose canina é uma doença infectocontagiosa, tendo como principal agente a Brucella canis. É caracterizada principalmente por abortamentos e esterilidade nas fêmeas, e orquite e epididimite nos machos. Possui caráter zoonótico e está mundialmente distribuída. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella canis em animais que apresentavam problemas reprodutivos e avaliar as características dos animais estudados, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina. Foram colhidas 22 amostras sanguíneas de cães machos e fêmeas, de idades, raças variadas, e sem raça definida. Estas amostras foram armazenadas e avaliadas pelo teste sorológico de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). A soropositividade encontrada foi de 4,54%. Concluiu-se que apesar da baixa amostragem e baixa soropositividade, a infecção por Brucella canis ocorre em cães da cidade de Londrina e devem ser empregados estudos posteriores na cidade, bem como medidas de controle e profilaxia para evitar a disseminação do agente.(AU)

Canine brucellosis is an infectious disease, the main agent is Brucella canis. It is mainly characterized by abortion and sterility in females and orchitis and epididymitis in males. It`s a zoonotic disease distributed worldwide. This study aimed to investigate the occurrence of antibodies to Brucella canis in animals that presented reproductive problems and evaluated the characteristics of these animals, that were attended in the Veterinary Teaching Hospital of the State University of Londrina. 22 blood samples were collected from male and female dogs of various breeds and ages, showing reproductive problems. These samples were stored and evaluated by serologic testing in agarose gel immunodiffusion (AGID). The seroprevalence found was 4.54%. It was concluded that despite the low sampling and low prevalence the Brucella canis infection occurs in animals of Londrina and further studies should be employed in the city, as well as prevention and in order to control to prevent the spread of the agent.(AU)

Quantificação de transcritos maternos em oócitos bovinos submetidos a diferentes condições de maturação / Quantification of maternal transcripts in bovine oocytes under different maturation systems

Comparou-se a quantidade relativa de transcritos de origem materna entre oócitos bovinos maturados in vivo e maturados em diferentes condições in vitro. Avaliou-se também o efeito dos sistemas de maturação in vitro sobre a viabilidade das células do cumulus. Para a maturação in vivo, os oócitos foram coletados 19-20h após aplicação de gonadorelina em doadoras superestimuladas com FSH e sincronizadas com implante de progesterona. Para a maturação in vitro, oócitos imaturos, obtidos de ovários coletados em matadouro, foram maturados sob diferentes tensões de oxigênio e suplementação proteica. Avaliou-se a abundância dos transcritos de Zar1, MATER e GDF9 por PCR em tempo real. A viabilidade das células do cumulus de oócitos maturados in vitro foi analisada pela coloração de Azul de Tripan. Observou-se sub-regulação (P<0,05) dos transcritos em oócitos submetidos às diferentes condições de maturação in vitro em relação aos maturados in vivo. Não houve diferença (P>0,05) na viabilidade das células do cumulus. Conclui-se que o sistema de maturação influencia a quantidade de transcritos de origem materna armazenados no citoplasma de oócitos bovinos.(AU)

The relative abundance of maternal transcripts among bovine oocytes in vivo matured or under different in vitro conditions was compared. Viability of cumulus cells of in vitro matured oocytes was also evaluated. For in vivo maturation, oocytes were recovered from 19 to 20h after gonadorelin injection in donor cows, which were previously superestimulated with FSH and synchronized with progesterone implant. For in vitro maturation, immature cumulus-oocyte complexes, obtained from ovaries collected at slaughterhouse, were matured under different oxygen tensions and protein supplementation. Relative amount of Zar1, MATER, and GDF9 transcrispts were analyzed by real time PCR. Cumulus cell viability was analyzed by trypan blue. The expression of maternal effect genes were down-regulated (P<0.05) in oocytes matured under different in vitro conditions when compared to those in vivo matured. There was no difference (P>0.05) on cumulus cell viability among different in vitro maturation conditions. In conclusion, different maturation conditions affect the relative abundance of maternal transcripts stored into oocyte cytoplasm.(AU)

Detecção de QTL em dados de famílias estruturadas como as de um núcleo MOET por meio do método da regressão / QTL detection in MOET nucleus family structure-like data using the regression method

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência do método de regressão em detectar QTL com base na utilização de dados da estrutura de família (irmãos completos e meios-irmãos), como aqueles gerados em um núcleo MOET. Foram simulados dados fenotípicos e genotípicos em uma estrutura de núcleo MOET fechado de seleção. Três arquivos foram analisados, contendo: a) informações conjuntas de irmãos completos e meios-irmãos; b) apenas informações de irmãos completos e c) apenas informações de meios-irmãos. Verificou-se que o método da regressão, para dados discretos ou contínuos, foi capaz de detectar associações entre marcador e QTL em níveis bastante expressivos de significância (P<0.001 e P<0,0001), quando se utilizou o arquivo que continha informações conjuntas de irmãos completos e meios-irmãos. Os resultados indicaram a possibilidade de utilização dessa metodologia para estudos de detecção/validação de QTL em rebanhos ou núcleos de seleção que utilizam MOET.(AU)

The objective of this study was to evaluate the efficiency of the regression method to detect QTL using data from full and half-sib families, like those generated in a MOET nucleus. For this study, genotypic and phenotypic data were simulated in a structure of a closed selection MOET nucleus. Three files were analyzed containing: a) the joint information of full and half sibs; b) only full sibs data; and c) only half sibs data. The method of regression, for continuous or discrete data, was able to detect associations of marker and QTL in very expressive levels of significance (P<0.001 P<0.0001), when the file containing the joint information of full and half sisters was used. The results indicated the possibility of using this methodology for studies of QTL detection / validation in MOET nucleus or herds under selection.(AU)

Associação do loco BoLA-DRB3.2 com produção de leite em bovinos da raça Gir / Association of BoLA-DRB3.2 locus with bovine milk production in Gir breed

A associação entre os alelos do loco BoLA-DRB3.2, identificados pela técnica de PCR-RFLP, e a produção de leite na raça Gir foi estudada por meio da análise de dados moleculares e fenotípicos de 424 vacas Gir, utilizando um modelo misto, sob modelo animal. Os dados moleculares consistiam dos genótipos dos animais para os alelos do loco BoLA-DRB3.2 e os dados fenotípicos eram referentes à produção de leite em até 305 dias de lactação. O loco é altamente polimórfico nesta raça, sendo identificados sete alelos (BoLA-DRB3.2*4, *8, *11, *19, *28, *41 e *48) que não haviam sido encontrados em animais zebuínos. Dois alelos (*16 e *29) estavam significativamente associados com maiores produções de leite, sugerindo que o próprio loco BoLA-DRB3.2 ou um QTL a ele ligado influencia a produção de leite de vacas Gir.(AU)

The association between BoLA-DRB3.2 alleles identified by PCR-RFLP and milk production in Gir breed was studied using molecular and phenotypic data of 424 Gir cows. Genetic data consisted of animal genotypes for BoLA-DRB3.2 alleles and 305-day-milk-yield. The association between BoLA-DRB3.2 alleles and a putative QTL affecting the trait was investigated by mixed model with an animal model. BoLA-DRB3.2 locus was found to be highly polymorphic in Gir breed, showing seven alleles (BoLA-DRB3.2*4, *8, *11, *19, *28, *41 e *48) that have not been yet described in Zebu animals. Two BoLA-DRB3 alleles (*16 e *29) were significantly associated with milk production, suggesting that BoLA-DRB3.2 locus itself or a linked QTL influences 305-day-milk yield of Gir cows.(AU)

Mapeamento de QTL em famílias de irmãos completos por meio de modelos aleatórios / Mapping QTL in full-sib families using random model approach

Foi realizado um estudo por meio de simulação para avaliar a eficiência e o poder dos modelos aleatórios na estimação da localização e dos componentes de variância relativos a dois QTLs presentes no mesmo cromossomo, posicionados no mesmo intervalo, em intervalos adjacentes ou não. Admitiram-se diferentes tamanhos e números de famílias de irmãos completos e variâncias dos QTLs, em característica com herdabilidade igual a 0,25. A estimação dos parâmetros foi obtida por meio do método da máxima verossimilhança, baseado no quadrado da diferença de pares de irmãos, sob mapeamento por intervalo. As proporções de genes idênticos por descendência (IBD) dos QTLs foram estimadas a partir da proporção IBD de dois marcadores flanqueadores. Os fatores que mais influenciaram as estimativas dos parâmetros foram a proporção da variância atribuída aos QTLs e o número e o tamanho das famílias. Com número suficiente de famílias e de indivíduos nas famílias e altas proporções de variância genética, o modelo aleatório pode detectar QTLs com alto poder, apresentando estimativas das posições com boa acurácia.(AU)

A study was carried out by simulation to evaluate the efficiency and robustness of the random model approach for estimation of the QTL location and variance components in an outbred population with full-sib family structure. Two QTL were positioned in the chromosome in the same interval, in adjacent and at no adjacent intervals. The population was created with different sizes and numbers of families and variances due to QTL in a trait with h2 = 0.25. The estimations of QTL parameters (locations and variance components) were based on the sib-pair approach. The proportions of genes identical-by-descent (IBD) at the two QTL were estimated from the IBD at two flanking markers. The most important factors afeccting the estimates of QTL parameters and power of detection were the proportion of variance due to QTL, and the number and size of the full-sibs families. Given a sufficient number of families and high proportions of genetic variance due to QTL, the random model approach can detect a QTL with high power and provides accurate estimates of the QTL position if there are no two QTL in the same interval.(AU)

Efeito de diferentes meios de cultivo no desenvolvimento e proporção do sexo de embriões bovinos produzidos in vitro / Effect of different culture media on development and sex ratio of bovine embryos fertilized in vitro

Avaliou-se o efeito da suplementação de meios de cultivo sobre o desenvolvimento e proporção do sexo de embriões bovinos fertilizados in vitro. Complexos cumulus-oócitos obtidos de ovários de matadouro foram maturados e fertilizados in vitro. Os zigotos (n= 484) foram distribuídos aleatoriamente em meio CR2aa, contendo soro fetal bovino (SFB) (T1), albumina sérica bovina (BSA) (T2) ou BSA mais insulina:transferrina:selênio e vitaminas (BSA+) (T3), no cultivo embrionário in vitro, a uma atmosfera de 5% CO2 a 38,8ºC em ar. A taxa de clivagem foi observada 72-76 horas pós-fertilização (PF) e a taxa de blastocistos com sete e oito dias PF. Os blastocistos (n= 63) foram sexados pela técnica de reação em cadeia de polimerase. A taxa de clivagem em T2 foi maior (P<0,05) do que em T1 e T3. A taxa de blastocistos foi similar (P>0,05) entre T2 e T3, porém menor (P<0,01) do que em T1. A proporção do sexo dos embriões não diferiu (P>0,05) entre os tratamentos. O T1 influenciou o desenvolvimento de blastocistos, mas não teve efeito sobre a proporção do sexo.(AU)

The effect of culture media on the development and on the sex ratio of bovine embryos fertilized in vitro was studied. Cumulus oocyte-complexes from slaughterhouse ovaries were matured and fertilized in vitro. Zygotes (n= 484) were randomly allotted to different culture media and cultured with their cumulus cells in CR2aa medium and an atmosphere of 5% CO2 in air at 38.8ºC. The fetal calf serum (FCS), bovine seric albumin (BSA) or BSA plus insulin:transferrin:selenium and vitamins (BSA+) supplementation effect on embryo culture was evaluated. Cleavage rate was assessed at 72-76h post-fertilization (PF) and blastocyst rate on days 7 and 8 PF. The blastocysts (n= 63) were also sexed using polymerase chain reaction. Cleavage rate for BSA medium supplemented was higher (P<0.05) than FCS and BSA+. Blastocyst rates for BSA and BSA+ media were similar (P>0.05), but lower (P<0.01) than FCS. Culture medium FCS supplemented affected blastocyst development but not the sex ratio.(AU)

PERCENTAGE OF DOGS SEROPOSITIVES FOR BRUCELLA CANIS THAT PRESENTED REPRODUCTIVE PROBLEMS THAT WERE ATTENDED AT VETERINARY TEACHING HOSPITAL OF THE STATE UNIVERSITY OF LONDRINA / Porcentagem de cães soropositivos para brucella canis apresentando ...

A brucelose canina é uma doença infectocontagiosa, tendo como principal agente a Brucella canis. É caracterizada principalmente por abortamentos e esterilidade nas fêmeas, e orquite e epididimite nos machos. Possui caráter zoonótico e está mundialmente distribuída. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos anti-Brucella canis em animais que apresentavam problemas reprodutivos e avaliar as características dos animais estudados, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina. Foram colhidas 22 amostras sanguíneas de cães machos e fêmeas, de idades, raças variadas, e sem raça definida. Estas amostras foram armazenadas e avaliadas pelo teste sorológico de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). A soropositividade encontrada foi de 4,54%.  Concluiu-se que apesar da baixa amostragem e baixa soropositividade, a infecção por Brucella canis ocorre em cães da cidade de Londrina e devem ser empregados estudos posteriores na cidade, bem como medidas de controle e profilaxia para evitar a disseminação do agente. SUMMARY Canine brucellosis is an infectious disease, the m