Occurrence and molecular characterization of Cryptosporidium spp. isolated from domestic animals in a rural area surrounding Atlantic dry forest fragments in Teodoro Sampaio municipality, State of São Paulo, Brazil

The aim of this study was to assess the occurrence of Cryptosporidium in domestic animals in rural properties surrounding rain forest fragments within the municipality of Teodoro Sampaio, southeastern Brazil. Conventional sucrose flotation method followed by molecular characterization of the parasites by sequencing PCR products amplified from SSU rRNA gene were used. Stool samples were collected from domestic animals raised as pets and livestock in all rural properties surrounding three forest fragments. Samples from cattle (197), equine (63), pigs (25), sheep (11), and dogs (28) were collected from 98 rural properties. The frequency of occurrence of Cryptosporidium within each animal species was 3.0% (6/197) among cattle and 10.7% (3/28) among dogs. Cryptosporidium was not detected in stool samples from equine, sheep, and pigs. All sequences obtained from the six samples of calves showed molecular identity with Cryptosporidium andersoni while all sequences from dog samples were similar to C. canis. The frequency of occurrence of Cryptosporidium in these domestic animal species was low. The absence of C. parvum in the present study suggests that the zoonotic cycle of cryptosporidiosis may not be relevant in the region studied. The presence of Cryptosporidium species seldom described in humans may be, otherwise, important for the wild fauna as these animals are a source of infection and dissemination of this protozoan to other animal species. The impact and magnitude of infection by C. andersoni in wild ruminants and C. canis in wild canids have to be assessed in future studies to better understand the actual importance of these species in this region.

O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Cryptosporidium, em animais domésticos de propriedades rurais ao redor de fragmentos de mata Atlântica de interior no município de Teodoro Sampaio, por exame convencional de flutuação em solução de sacarose, seguido de caracterização molecular dos parasitas através do sequenciamento dos produtos amplificados na PCR do gene SSU rRNA. Foram coletadas amostras fecais de animais domésticos criados para subsistência e estimação nas propriedades rurais do entorno de três fragmentos florestais. Amostras de bovinos (197), equinos (63), suínos (25), ovinos (11) e cães (28) foram coletadas de 98 propriedades rurais. A ocorrência de Cryptosporidium para a espécie bovina foi de 3,0% (6/197); para os cães, de 10,7% (3/28); e para os demais animais os resultados foram negativos. Todas as sequências obtidas das seis amostras de bovinos apresentaram identidade molecular com Cryptosporidium andersoni, enquanto as sequências oriundas de amostras de fezes de cães revelaram-se similares ao C. canis. A ocorrência do Cryptosporidium entre os animais estudados foi baixa. Diante dos resultados do presente estudo, o ciclo zoonótico da criptosporidiose parece ter menos importância nesta região. A presença de espécies de Cryptosporidium ainda pouco relatadas em humanos pode ser, por outro lado, importante para a fauna silvestre, uma vez que estes animais podem ser considerados como uma fonte de infecção e disseminação deste protozoário. O impacto e a magnitude da infecção de C. andersoni, em ruminantes selvagens, e de C. canis, em cães silvestres, deve ser avaliado em estudos futuros, com intuito de verificar a real importância dessas espécies nesta região.

Emprego da RT-PCR em tempo real para a quantificação da expressão de genes associados à resposta imune em bezerros bovinos experimentalmente infectados por Neospora caninum

Neospora caninum is one of the main causes of abortion and natimortality in cattle. Host immune defense is capable to inhibit tachyzoite activity during acute infection, but there is no action against bradyzoites in tissue cysts. Activation and modulation of this response is controlled by cell mediators. The real-time RT-PCR technique was employed to detect some of those mediators during N. caninum infection. Holstein and Nelore calves intramuscularly infected with tachyzoites and uninfected controls were slaughtered at the sixth day post-infection and popliteal lymph node, liver and brain cortex samples were analyzed. Real-time RT-PCR detected gene expression in all tissues. No significant variation of GAPDH gene expression was detected among groups, its amplification efficiency was similar to the other genes tested and it was used as the endogenous control for the analysis. Comparisons between infected and uninfected groups allowed the relative gene expression quantification. IFN- and TNF- genes showed increased expression in some samples. iNOS and TGF-1 genes had some non-significant variations and IL-4 and IL-10 stayed pratically inaltered.

Neospora caninum é um dos principais agentes causadores de abortamentos e natimortalidade em bovinos. A defesa imune do hospedeiro é capaz de inibir a atividade dos taquizoítos na fase aguda da infecção, mas não age sobre os bradizoítos nos cistos teciduais. A ativação e a modulação dessa resposta de defesa são controladas por mediadores celulares. A técnica do RT-PCR em tempo real foi empregada para a detecção de alguns desses mediadores durante a infecção pelo N. caninum. Foram analisadas amostras de linfonodos poplíteos, fígado e córtex cerebral de bezerros Holandeses e Nelores infectados com taquizoítos por via intramuscular e controles não-infectados, abatidos no sexto dia pós-inoculação. A RT-PCR em tempo real detectou a expressão dos genes em todos os tecidos analisados. Não houve variação significativa na expressão do gene GADPH entre os grupos, a eficiência de amplificação desse foi similar aos demais genes testados e foi empregado como controle endógeno na análise. A comparação entre infectados e não-infectados permitiu a quantificação relativa da expressão gênica. A expressão dos genes IFN- e TNF- apresentou elevação significante em algumas amostras. Os genes iNOS e TGF-1 apresentaram algumas variações não-significativas e os valores de IL-4 e IL-10 permaneceram praticamente inalterados.

Experimental rabies in ovine and caprine inoculated with a brazilian fox (Dusicyon vetulus) isolate virus sample / Raiva experimental em caprinos e ovinos inoculados com uma amostra de vírus isolada de raposa (Dusicyon vetulus)

In the region of Patos, northeastern Brazil, ovine and caprine are important for the local economy. The animals are raised freely to find their own food, thus, they are susceptible to the attack ofthe Brazilian fox Dusicyon vetulus, frequently positive for rabies. The symptoms of this disease in those animals are poorly known. In order to better understand the disease in these species, two ovines and two caprines, aged 3-4 months old were inoculated in the masseter muscle with a fox rabies virus isolate and were kept confined. Seventeen days after inoculation, ovine 1 showed signs of loss ofapetite, stertorous, itching, lowered ears, difficulty in biting and swallowing, salivation, cough and failure in vocalization. Death occurred after 24 hours, when the other animals presented symptoms. On the twentieth day, ovine 2 manifested lateral decumbency, cycling movements, bit the hooves and the fence and died. Both caprines presented exacerbation of sexual instinct, priapism, and had to be separated due to agressiveness. Progressively they presented incoordination, decumbent position, opisthotonus, myoclonia and died after three and five days respectively for caprine 1 and 2. Each animal was necropsied and all presented pulmonary oedema and increased volume of cephalorrachidian fluid. Through the RT-PCR technique viral particles were detected in different organs, although virus isol

Na região de Patos-PB, semiárido nordestino, caprinos e ovinos são importante fonte de renda. Criados extensivamente, tornam-se suscetíveis ao ataque de raposas Dusicyon vetulus, frequentemente diagnosticadas com raiva. Os sintomas dessa doença nesses animais são pouco conhecidos. Para melhor compreender a raiva nessas espécies, dois ovinos e dois caprinos entre 3 -4 meses de idade, foram inoculados no masseter com vírus rábico isolado de raposa e mantidos confinados. Dezessete dias após, o ovino 1 apresentou inapetência, estertores, prurido, orelhas caídas, dificuldade em apreensão e deglutição, salivação, tosse, tentativa de vocalizar e morte após 24 horas. No dia seguinte os outros animais iniciaram os sintomas. No vigésimo dia, o ovino 2 posicionou-se em decúbito lateral com movimentos de pedalar, morder os cascos e a gaiola e morreu. as caprinos apresentaram exacerbação da libido, priapismo e agressividade. Progressivamente, houve incoordenação motora, decúbito, opist6tono e contrações musculares. A morte ocorreu após três e cinco dias para os caprinos 1 e 2, respectivamente. À necropsia, observou-se edema pulmonar e aumento do liquor nos quatro animais. Pela técnica de RT-PCR detectou-se RNA viral em vários órgãos; cérebro, coração, pulmão, rins, fígado e glândulas salivares, porem, só foi possível isolar o vírus em camundongo, a partir dos cérebros. Na prova de IFD todos

Characterization of Aujeszky's disease virus isolates from South and Southeast Brazil by RFLP analysis

The genomic DNA of thirty strains of Aujeszky's disease virus (ADV) isolated in the South and Southeast regions of Brazil from 1982 to 1996 were characterized by restriction endonuclease analysis with BamHI. Twenty seven strains were isolated from pigs, 1 from cattle, 1 from cat and 1 from dog. Using a systematization previously described, the 30 ADV strains could be classified as genomic types I (n = 2) and II (n = 28). Genomic type III was not observed. In this first study of genomic type characterization of brazilian ADV strains, we could demonstrate the occurence in Brazil of the genomic types I and II, with a large predominance of genomic type II.

O DNA genômico de 30 amostras do vírus da doença de Aujeszky (VDA), isoladas nas regiões Sul e Sudeste do Brasil no período de 1982 a 1996, foram caracterizadas por análise do perfil de restrição utilizando a enzima BamHI. Vinte e sete amostras foram isoladas de suínos, uma de bovino, uma de felino e uma de canino. Através de uma sistemática previamente descrita, as 30 amostras de VDA foram classificadas como pertencentes ao tipo genômico I (n = 2) e tipo genômico II (n = 28). O tipo genômico III não foi observado. Neste primeiro estudo de caracterização genômica de isolados de VDA do Brasil, foi possível demonstrar a ocorrência dos tipos genômicos I e II, com marcante predomínio do tipo II.

Seroprevalence of holders farms for eastern equine encephalitis and western equine encephalomyelitis in Uruará Municipality, Pará State, Northen Brazil / Soroprevalência da encefalomielite eqüina do leste e do oeste no Município de Uruará, PA, Brasil

The aim of this study was to verify the prevalence of herds with EEEV and WEEV infected animals, in Uruará municipal district, Pará State-Brazil. In view of that, the serum neutralization test was utilized. The following prevalence of positive herds were observed: 17 positive herds for EEEV out of 32 herds, therefore, prevalence is 53.12% (IC 35.03 - 70.49%). One positive herd was found for WEEV out of the 32 studied herds, thus performing 3.12% (IC 0.16 - 18.00%) prevalence. The prevalence of serum reactors animals were observed: 27,37% (IC 15,33 - 39,21%), WEE 1,05% (IC 0,06 - 6,78%).

O objetivo do presente foi estimar a soroprevalência de anticorpos contra o vírus da EEE e da WEE utilizando como unidades de análise os eqüídeos e as propriedades rurais do tipo familiar do município de Uruará, PA. Os anticorpos contra o vírus das EEE e da WEE foram pesquisados pela microtécnica de soroneutralização. As seguintes prevalências de animais sororeatores para os diferentes vírus foram observadas: EEE 27,37% (IC 15,33 - 39,21%), WEE 1,05% (IC 0,06 - 6,78%). Para as propriedades obtivemos as seguintes prevalências: EEE 53,12% (IC 35,03 - 70,49%), WEE 3,12% (IC 0,16 - 18,00%).

Comparison of a commercial enzyme immune assay (ELISA) and serum neutralization techniques for the detection of antibodies against BHV-1 in buffaloes (Bubalus bubalis) sera / Comparação das técnicas de ELISA indireto e de soroneutralização na detecção de anticorpos contra o BHV-1 em amostras de soro bubalino (Bubalus bubalis)

The performance of a commercial ELISA (Bovine Rhinotracheitis virus antibody test Kit, Herdcheck®, IDEXX Laboratories Inc., USA) designed to detect the presence of antibody to the Bovine Herpesvirus type 1 (BHV-1) in bovine serum, was evaluated in samples of buffaloes (Bubalus bubalis) serum. Sera of 133 buffaloes without IBR vaccination were performed both by ELISA and standard serum neutralization technique. Sensitivity and specificity of ELISA were 97.14% and 46.03%, respectively. The estimated concordance between two serologic diagnostic methods by kappa index was 0.44 IC (0.29-0.59) using 95% confidence level.

O desempenho de um ELISA comercial (Bovine Rhinotracheitis virus antibody test Kit, Herdcheck®, IDEXX Laboratories Inc., USA) para a identificação de anticorpos anti-herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1), em soro bovino, foi avaliado em 133 amostras de soro de búfalos (Bubalus bubalis), sem histórico de vacinação para IBR, da Região do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo. Tomando-se a técnica de soroneutralização como referência, o ELISA indireto apresentou sensibilidade e especificidade relativa de 97,14 e 46,03%, respectivamente. A concordância estimada pelo índice kappa, entre os dois métodos, foi de 0,44 IC (0,29-0,59), utilizando um intervalo de confiança de 95%.

Experimental rabies in ovine and caprine inoculated with a brazilian fox (Dusicyon vetulus) isolate virus sample / Raiva experimental em caprinos e ovinos inoculados com uma amostra de vírus isolada de raposa (Dusicyon vetulus)

In the region of Patos, northeastern Brazil, ovine and caprine are important for the local economy. The animals are raised freely to find their own food, thus, they are susceptible to the attack ofthe Brazilian fox Dusicyon vetulus, frequently positive for rabies. The symptoms of this disease in those animals are poorly known. In order to better understand the disease in these species, two ovines and two caprines, aged 3-4 months old were inoculated in the masseter muscle with a fox rabies virus isolate and were kept confined. Seventeen days after inoculation, ovine 1 showed signs of loss ofapetite, stertorous, itching, lowered ears, difficulty in biting and swallowing, salivation, cough and failure in vocalization. Death occurred after 24 hours, when the other animals presented symptoms. On the twentieth day, ovine 2 manifested lateral decumbency, cycling movements, bit the hooves and the fence and died. Both caprines presented exacerbation of sexual instinct, priapism, and had to be separated due to agressiveness. Progressively they presented incoordination, decumbent position, opisthotonus, myoclonia and died after three and five days respectively for caprine 1 and 2. Each animal was necropsied and all presented pulmonary oedema and increased volume of cephalorrachidian fluid. Through the RT-PCR technique viral particles were detected in different organs, although virus isol

Na região de Patos-PB, semiárido nordestino, caprinos e ovinos são importante fonte de renda. Criados extensivamente, tornam-se suscetíveis ao ataque de raposas Dusicyon vetulus, frequentemente diagnosticadas com raiva. Os sintomas dessa doença nesses animais são pouco conhecidos. Para melhor compreender a raiva nessas espécies, dois ovinos e dois caprinos entre 3 -4 meses de idade, foram inoculados no masseter com vírus rábico isolado de raposa e mantidos confinados. Dezessete dias após, o ovino 1 apresentou inapetência, estertores, prurido, orelhas caídas, dificuldade em apreensão e deglutição, salivação, tosse, tentativa de vocalizar e morte após 24 horas. No dia seguinte os outros animais iniciaram os sintomas. No vigésimo dia, o ovino 2 posicionou-se em decúbito lateral com movimentos de pedalar, morder os cascos e a gaiola e morreu. as caprinos apresentaram exacerbação da libido, priapismo e agressividade. Progressivamente, houve incoordenação motora, decúbito, opist6tono e contrações musculares. A morte ocorreu após três e cinco dias para os caprinos 1 e 2, respectivamente. À necropsia, observou-se edema pulmonar e aumento do liquor nos quatro animais. Pela técnica de RT-PCR detectou-se RNA viral em vários órgãos; cérebro, coração, pulmão, rins, fígado e glândulas salivares, porem, só foi possível isolar o vírus em camundongo, a partir dos cérebros. Na prova de IFD todos