Variability of individuals from a population Varronia curassavica Jacq considering volatile compounds / Variabilidade de indivíduos de uma população de Varonia curassavica Jacq a partir de compostos voláteis

Varronia curassavica is a medicinal species native to Brazil; its anti-inflammatory properties are attributed to α-humulene and ß-caryophyllene. This study to investigated the population variability of V. curassavica. Leaves were collected from 40 individuals of a natural population and transferred to glass flasks (2 mL). The volatiles were extracted and analyzed using static headspace gas chromatography coupled with mass spectrometry (HS-GC-MS). A total of 17 compounds were detected: monoterpenes (1.6% - 68%) and sesquiterpenes (25.7% - 79.0%), including α-humulene and ß-caryophyllene. Multivariate analysis was performed to estimate the dissimilarity of individuals separated the compounds into four groups. Group I was characterized by the content of α-pinene, groups II and IV by ß-caryophyllene, and group III by ß-pinene. The abundance of α-humulene showed small variations; while ß-caryophyllene showed larger variations that contributed to the population variability. This is the first report on the chemical composition analysis of volatile compounds in V. curassavica using the HS-GC-MS technique.

Varronia curassavica é uma espécie medicinal nativa no Brasil e sua propriedade anti-inflamatória é atribuída aos compostos α-humuleno e ß-cariofileno. O objetivo foi estudar a variabilidade de população de V. curassavica. Foram coletadas folhas de 40 indivíduos de população natural, sendo estas transferidas para frascos de vidro (2 mL). Os voláteis foram extraídos e analisados por headspace estático, associado à cromatografia gasosa, acoplada à espectrometria de massas (HS-CG-EM). Detectou-se 17 compostos: monoterpenos (1,6% - 68%) e sesquiterpenos (25,7% - 79,0%), incluindo o α-humuleno e o ß-cariofileno. A análise multivariada foi realizada para estimar a dissimilaridade dos indivíduos, a qual separou quatro grupos. O grupo I foi caracterizado pela presença do α-pineno, os grupos II e IV do ß-cariofileno e o grupo III do ß-pineno. O teor do α-humuleno apresentou pequenas variações, enquanto o do ß-cariofileno contribuiu mais para a variabilidade da população. É o primeiro relato de análise da composição química de compostos voláteis de V. curassavica utilizando a técnica HS-GC-MS.

Influence of base saturation on buckwheat grain and flavonoid production / Influência da saturação por bases na produção de grãos e de flavonoides de trigo-mourisco

Fagopyrum esculentum is highly nutritious due to its proteins of high biological value and high fiber content. Its most relevant property is nonetheless its antioxidant activity, provided by the presence of flavonoids. It is an important pseudocereal in agriculture, animal production, and human food. The objective of study was to evaluate the grain yield and flavonoid production of Fagopyrum esculentum cultivars as a function of base saturation. The experiment was carried out in a greenhouse, in a completely randomized design with four replicates. Treatments were represented by cultivars IPR 91 and IPR 92 and five base saturation levels (9, 31, 53, 75, and 97 %), in a factorial arrangement (2 × 5). Agronomic attributes and total-flavonoid and rutin contents and production were evaluated. Subsequently, the data were subjected to statistical analysis. Base saturation does not affect flavonoid production. However, base saturation influences shoot dry matter yield (maximum at 62.0% base saturation) and grain yield (maximum at 9.00%) in IPR 92. The higher-yielding cultivar is IPR 92. This is the first scientific report of base saturation in the species.(AU)

Fagopyrum esculentum é muito nutritivo por conter proteínas com alto valor biológico e alto teor de fibras, a propriedade mais relevante dele é a atividade antioxidante, devido à presença de flavonoides. É um pseudocereal importante na agricultura, produção animal e alimentação humana. O objetivo desse trabalho foi avaliar a produção de grãos e de flavonoides em cultivares de Fagopyrum esculentum em função da saturação por bases. O experimento foi realizado em casa de vegetação em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições. Os tratamentos foram as cultivares IPR 91 e IPR 92 e cinco saturações por bases (9, 31, 53, 75 e 97 %), em esquema fatorial (2 × 5). Foram avaliados atributos agronômicos e teor e produção de flavonoides totais e de rutina. Posteriormente os dados foram submetidos a análises estatísticas. Para a produção de flavonoides, a saturação por bases não influencia nos resultados. Porém, para a produção de matéria seca da parte aérea (produção máxima aos 62,0 % de saturação por bases) e para a produção de grãos da IPR 92 (produção máxima aos 9,00 %), a saturação por bases influencia. A cultivar de maior produção é a IPR 92. Esse é o primeiro relato científico de saturação por bases da espécie.(AU)

Genetic diversity of Lippia rotundifolia Cham. in Minas Gerais, Brazil

Lippia rotundifolia is an aromatic species, endemic from Campos rupestres and isolated by mountains. We aimed with the research to study the genetic variability of chá-de-pedestre (Lippia rotundifolia Cham.) with natural occurrence in ten places of the State of Minas Gerais, from molecular markers of ISSR type. The places of collection were: Parque Estadual de Serra Nova; Parque Estadual Veredas do Peruaçu; Abóboras community; Gigante community; edge of Rio do Peixe; environmental preservation area of Olhos d´água; private property in Joaquim Felício; Parque Estadual do Rio Preto; São Gonçalo do Rio das Pedras and brook of Rio Tigre. After the establishment of the extraction and amplification of DNA fragments with primers ISSR, an array of genetic distance was built. From this matrix, we analyzed the genetic diversity index as the allelic frequency (Na and Ne), Shannos´s index (H´), polymorphism (PLP), heterozygosity (He) and gene flow (Nm). The result showed higher genetic variability within the population (93%). The genetic diversity index was low (He = 0.132; H´= 0.214; Na = 1.111; Ne = 1.183; PLP = 56.67%). In general the species have low genetic diversity. The greatest diversity in populations occurred with an average temperature of 20°C. The Rio Tigre showed higher genetic distance and isolation.

Genetic diversity of Lippia rotundifolia Cham. in Minas Gerais, Brazil

Lippia rotundifolia is an aromatic species, endemic from Campos rupestres and isolated by mountains. We aimed with the research to study the genetic variability of chá-de-pedestre (Lippia rotundifolia Cham.) with natural occurrence in ten places of the State of Minas Gerais, from molecular markers of ISSR type. The places of collection were: Parque Estadual de Serra Nova; Parque Estadual Veredas do Peruaçu; Abóboras community; Gigante community; edge of Rio do Peixe; environmental preservation area of Olhos d´água; private property in Joaquim Felício; Parque Estadual do Rio Preto; São Gonçalo do Rio das Pedras and brook of Rio Tigre. After the establishment of the extraction and amplification of DNA fragments with primers ISSR, an array of genetic distance was built. From this matrix, we analyzed the genetic diversity index as the allelic frequency (Na and Ne), Shannos´s index (H´), polymorphism (PLP), heterozygosity (He) and gene flow (Nm). The result showed higher genetic variability within the population (93%). The genetic diversity index was low (He = 0.132; H´= 0.214; Na = 1.111; Ne = 1.183; PLP = 56.67%). In general the species have low genetic diversity. The greatest diversity in populations occurred with an average temperature of 20°C. The Rio Tigre showed higher genetic distance and isolation.(AU)

Antioxidant activity of essential oils from condiment plants and their effect on lactic cultures and pathogenic bacteria / Atividade antioxidante do óleo essencial de plantas condimentares e efeito sobre culturas lácticas e bactérias patogênicas

Studies about preservative and antioxidant activity of essential oils have been encouraged in recent years, given their importance to food industry. The aim of the current study was to evaluate the antioxidant properties and antimicrobial activity of essential oils deriving from Syzygium aromaticum, Cymbopogon citratus and Lippia alba against lactic and pathogenic bacteria responsible for food-borne diseases. Essential oil antibacterial activity was assessed through disc diffusion and macrodilution tests conducted in a mixed lactic culture of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus thermophilus (YF-L903) and of Escherichia coli (ATCC 8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Salmonella enterica (ATCC 6017) strains. Based on the chromatographic analysis results, the essential oils shown to be composed of eugenol (79.41%) which was the prevalent compound in S. aromaticum, geranial (31.89%), neral (24.52%) and β-myrcene (25.37%) in C. citratus, as well as of geranial (33.80%) and neral (25.63%) in L. alba. The observed antibacterial activity confirmed the dose-dependent effect of these three oils on all the assessed bacteria; there was halo inhibition at concentration 20μL mL-1. The essential oil of S. aromaticum presented better antioxidant activity, with IC50 equal to 5.76μg mL-1 and antioxidant activity index of 6.94, and it was considered strong (AAI>2.0) in comparison to the other evaluated oils. This essential oil also presented excellent antioxidant activity at concentrations lower than the one required to inhibit lactic cultures. Based in this outcome, the essential oil from S. aromaticum can be used as preservative agent in processed food whose formulation presents lactic cultures.(AU)

A atividade conservante e antioxidante de óleos essenciais são importantes ferramentas para uso na indústria de alimentos e pesquisas são estimuladas na atualidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar as propriedades antioxidantes e a atividade antimicrobiana de óleos essenciais de Syzygium aromaticum, Cymbopogon citratuse Lippia alba (LA) contra bactérias lácticas e patogênicas com importância em doenças transmitidas por alimentos. A atividade antibacteriana dos óleos foi avaliada por testes de disco-difusão e macrodiluição em caldo, utilizando-se cultura láctica mista de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus e Streptococcus thermophilus (YF-L903), e Escherichia coli (ATCC 8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Salmonella enterica (ATCC 6017). Os compostos dos óleos essenciais foram identificados por cromatografia, mostrando eugenol (79,41%) como composto predominante em S. aromaticum, geranial (31,89%), neral (24,52%) e β-mirceno (25,37%) em C. citratus, e o geranial (33,80%) e neral (25,63%) em L. alba. A atividade antibacteriana confirmou o efeito dose-dependente dos três óleos para todas as bactérias avaliadas, apresentando halos de inibição a partir da concentração de 20μL mL-1. O óleo essencial de S. aromaticum apresentou melhor atividade antioxidante, com IC 50 IC50 (at concentration capable of generating 50% inhibition) igual a 5.76μg mL-1 e índice de atividade antioxidante (AAI) de 6,94, considerado forte (AAI>2,0) em relação aos demais óleos avaliados. O óleo essencial de S. aromaticum apresentou excelente atividade antioxidante em menor concentração que anecessário para inibir a cultura láctica, indicando que este óleo pode ser usado como conservante em alimentos processados contendo culturas lácticas.(AU)

Ecogeography of Lippia rotundifolia Cham. in Minas Gerais, Brazil / Ecogeografia de Lippia rotundifolia Cham. (Verbenaceae) em Minas Gerais, Brasil

ABSTRACT: Lippia rotundifolia is a specie native to the Brazilian Cerrado, endemic to the Cadeia do Espinhaço mountain range. Due to the limited information about the species, the present study aimed to characterize the ecogeography, climate conditions and physical and chemical characteristics of the soil of Lippia rotundifolia in the state of Minas Gerais, Brazil. Thirteen sites were ecogeographically characterized: Parque Estadual Veredas do Peruaçu; Gigante; Rio do Peixe; AEP of Olhos Dágua; Joaquim Felício; Parque Estadual do Rio Preto; São Gonçalo do Rio das Pedras; Rio Tigre; RPPN Brumas do Espinhaço; Lapinha; Poço Bonito; Abóboras; and Parque Estadual de Serra Nova. Environments belonged to Cerrado and Caatinga biomes, specifically in rocky and altitude fields. The species occurs at altitudes between 691-1311m, with precipitation between 700 to 1600mm and average temperature between 14.5 to 24°C. In these vegetation types, the soils were sandy, hyper dystrophic and highly toxic with a low cation exchange capacity. These characteristics make the species undemanding with regard to edaphoclimatic and ecogeographic factors.

RESUMO: Lippia rotundifolia é uma espécie nativa do Cerrado e endêmica da Cadeia do Espinhaço. Devido a poucas informações acerca da espécie, objetivou-se caracterizar as condições ecogeográficas e edafoclimáticas bem como os atributos físico-químicos do solo da Lippia rotundifolia no estado de Minas Gerais, Brasil. Realizou-se o levantamento ecogeográfico em 13 locais (Parque Estadual Veredas do Peruaçu, Gigante, Rio do Peixe, APA de Olhos dÁgua, Joaquim Felício, Parque Estadual do Rio Preto, São Gonçalo do Rio das Pedras, Rio Tigre, RPPN Brumas do Espinhaço, Lapinha, Poço Bonito, Abóboras e Parque Estadual de Serra Nova). Os resultados identificaram os ambientes pertencentes aos biomas Cerrado e Caatinga especificamente nos campos rupestres e de altitude. A espécie ocorre entre as altitudes de 691 a 1311 metros, precipitação entre 700 a 1600 milímetros e temperatura média variando entre 14,5 a 24 graus. Nestas fitofisionomias os solos apresentam textura arenosa, são hiperdistrófico, altamente tóxico com baixa capacidade de troca de cátions, que faz a espécie ser pouco exigente quanto aos fatores edafoclimáticos e ecogeográficos.

Ecogeography of Lippia rotundifolia Cham. in Minas Gerais, Brazil / Ecogeografia de Lippia rotundifolia Cham. (Verbenaceae) em Minas Gerais, Brasil

ABSTRACT: Lippia rotundifolia is a specie native to the Brazilian Cerrado, endemic to the Cadeia do Espinhaço mountain range. Due to the limited information about the species, the present study aimed to characterize the ecogeography, climate conditions and physical and chemical characteristics of the soil of Lippia rotundifolia in the state of Minas Gerais, Brazil. Thirteen sites were ecogeographically characterized: Parque Estadual Veredas do Peruaçu; Gigante; Rio do Peixe; AEP of Olhos Dágua; Joaquim Felício; Parque Estadual do Rio Preto; São Gonçalo do Rio das Pedras; Rio Tigre; RPPN Brumas do Espinhaço; Lapinha; Poço Bonito; Abóboras; and Parque Estadual de Serra Nova. Environments belonged to Cerrado and Caatinga biomes, specifically in rocky and altitude fields. The species occurs at altitudes between 691-1311m, with precipitation between 700 to 1600mm and average temperature between 14.5 to 24°C. In these vegetation types, the soils were sandy, hyper dystrophic and highly toxic with a low cation exchange capacity. These characteristics make the species undemanding with regard to edaphoclimatic and ecogeographic factors.(AU)

RESUMO: Lippia rotundifolia é uma espécie nativa do Cerrado e endêmica da Cadeia do Espinhaço. Devido a poucas informações acerca da espécie, objetivou-se caracterizar as condições ecogeográficas e edafoclimáticas bem como os atributos físico-químicos do solo da Lippia rotundifolia no estado de Minas Gerais, Brasil. Realizou-se o levantamento ecogeográfico em 13 locais (Parque Estadual Veredas do Peruaçu, Gigante, Rio do Peixe, APA de Olhos dÁgua, Joaquim Felício, Parque Estadual do Rio Preto, São Gonçalo do Rio das Pedras, Rio Tigre, RPPN Brumas do Espinhaço, Lapinha, Poço Bonito, Abóboras e Parque Estadual de Serra Nova). Os resultados identificaram os ambientes pertencentes aos biomas Cerrado e Caatinga especificamente nos campos rupestres e de altitude. A espécie ocorre entre as altitudes de 691 a 1311 metros, precipitação entre 700 a 1600 milímetros e temperatura média variando entre 14,5 a 24 graus. Nestas fitofisionomias os solos apresentam textura arenosa, são hiperdistrófico, altamente tóxico com baixa capacidade de troca de cátions, que faz a espécie ser pouco exigente quanto aos fatores edafoclimáticos e ecogeográficos.(AU)

Influence of water regime on initial growth and essential oil of Eucalyptus globulus / Influência do regime hídrico sobre o crescimento inicial e óleo essencial de Eucalyptus globulus

Understanding the water requirement of forest species in the seedling stage supports cost reduction by eliminating unnecessary irrigation in addition to providing higher productivity. This study was carried out to evaluate the effect of the water regime on initial growth, leaf production and content and chemical composition of the essential oil of Eucalyptus globulus , during the first 120 days of cultivation. The experiment employed a completely randomized design and was carried out at the Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros, MG. Treatments consisted of six different water regimes (50%, 75%, 100%, 125%, 150% and 175% of the reference evapotranspiration - ETo) with four replicates. Plant growth was evaluated by measuring linear dimensions - height, stem diameter and number of leaves. The essential oil was extracted from fresh leaves by hydrodistillation in a Clevenger apparatus. The present study demonstrated that irrigation depths corresponding to 75% of the ETo are responsible for increased growth of E. globulus and increased dry matter production of leaves. The lowest irrigation levels were responsible for the greatest essential oil content. The essential oil was analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (CG- MS), and eucalyptol (40.84% to 55.72%) was reported to be the major compound for all treatments. Compounds such as β-myrcene, α-Gurgujeno, Alloromadendreno, Varidiflorene appear under specific irrigation conditions.

Conhecer a exigência hídrica de espécies florestais na fase de muda, além de proporcionar maior produtividade, possibilita reduzir custos, eliminando irrigações desnecessárias. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito dos regimes hídricos no crescimento inicial, produção de folhas, teor e composição química do óleo essencial de Eucalyptus globulus , nos primeiros 120 dias de cultivo. O trabalho foi conduzido no Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros, MG, empregando o delineamento inteiramente casualizado. Os tratamentos consistiram em seis regimes hídricos (50%, 75%, 100%, 125%, 150% e 175% da Evapotranspiração de referência - ETo), com quatro repetições. O crescimento das plantas foi avaliado por meio de dimensões lineares - altura, diâmetro do coleto e número de folhas. O óleo essencial foi extraído das folhas frescas e obtido pelo processo de hidrodestilação , em aparelho Clevenger. Neste estudo, foi observado que lâminas de irrigação correspondentes a 75% da ETo são responsáveis por maior crescimento do E. globulus e maior produção de matéria seca das folhas. As menores lâminas de irrigação foram responsáveis pelos maiores teores de óleo essencial. O óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), e apontou o eucaliptol (40,84 a 55,72%) como composto majoritário para todos os tratamentos. Os compostos como β-mirceno, α-Gurgujeno, Alloromadendreno e Varidiflorene apareceram em condições específicas de irrigação.

Influence of water regime on initial growth and essential oil of Eucalyptus globulus / Influência do regime hídrico sobre o crescimento inicial e óleo essencial de Eucalyptus globulus

Understanding the water requirement of forest species in the seedling stage supports cost reduction by eliminating unnecessary irrigation in addition to providing higher productivity. This study was carried out to evaluate the effect of the water regime on initial growth, leaf production and content and chemical composition of the essential oil of Eucalyptus globulus , during the first 120 days of cultivation. The experiment employed a completely randomized design and was carried out at the Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros, MG. Treatments consisted of six different water regimes (50%, 75%, 100%, 125%, 150% and 175% of the reference evapotranspiration - ETo) with four replicates. Plant growth was evaluated by measuring linear dimensions - height, stem diameter and number of leaves. The essential oil was extracted from fresh leaves by hydrodistillation in a Clevenger apparatus. The present study demonstrated that irrigation depths corresponding to 75% of the ETo are responsible for increased growth of E. globulus and increased dry matter production of leaves. The lowest irrigation levels were responsible for the greatest essential oil content. The essential oil was analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (CG- MS), and eucalyptol (40.84% to 55.72%) was reported to be the major compound for all treatments. Compounds such as β-myrcene, α-Gurgujeno, Alloromadendreno, Varidiflorene appear under specific irrigation conditions. (AU)

Conhecer a exigência hídrica de espécies florestais na fase de muda, além de proporcionar maior produtividade, possibilita reduzir custos, eliminando irrigações desnecessárias. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito dos regimes hídricos no crescimento inicial, produção de folhas, teor e composição química do óleo essencial de Eucalyptus globulus , nos primeiros 120 dias de cultivo. O trabalho foi conduzido no Instituto de Ciências Agrárias da Universidade Federal de Minas Gerais (ICA/UFMG), Montes Claros, MG, empregando o delineamento inteiramente casualizado. Os tratamentos consistiram em seis regimes hídricos (50%, 75%, 100%, 125%, 150% e 175% da Evapotranspiração de referência - ETo), com quatro repetições. O crescimento das plantas foi avaliado por meio de dimensões lineares - altura, diâmetro do coleto e número de folhas. O óleo essencial foi extraído das folhas frescas e obtido pelo processo de hidrodestilação , em aparelho Clevenger. Neste estudo, foi observado que lâminas de irrigação correspondentes a 75% da ETo são responsáveis por maior crescimento do E. globulus e maior produção de matéria seca das folhas. As menores lâminas de irrigação foram responsáveis pelos maiores teores de óleo essencial. O óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), e apontou o eucaliptol (40,84 a 55,72%) como composto majoritário para todos os tratamentos. Os compostos como β-mirceno, α-Gurgujeno, Alloromadendreno e Varidiflorene apareceram em condições específicas de irrigação. (AU)

Antibacterial activity and stability of microencapsulated lemon grass essential oil in feeds for broiler chickens / Atividade antimicrobiana e estabilidade do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon citratus) microencapsulados em ração para frangos de corte

The antibacterial effect of microencapsulated lemon grass (Cymbopogon citratus) essential oil on strains of Escherichia coli (ATCC8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538) and Salmonella enterica subsp. enterica (ATCC 6017), and the stability of this oil in feeds for broiler chickens were evaluated. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined by the macrodilution method, using the microencapsulated lemon grass essential oil at concentrations of 160 μL mL−1, 80 μL mL−1, 40 μL mL−1, 20 μL mL−1, and 10 μL mL−1. The oil concentration of 80 μL mL−1 presented the best results against the three bacteria evaluated. Samples of 200 g of feed mixed with 120 μL g−1 of the microencapsulated lemon grass essential oil was stored to evaluate the oil stability. Feed without microencapsulated lemon grass essential oil was prepared as control. The oil remained active for seven days, with significant reduction of S. aureus (3.08 CFU), E. coli (3.01 CFU), and S. enterica (3.10 CFU). The microencapsulated lemon grass essential oil at concentration of 80 μL mL−1 had antibacterial effect against the E. coli, S. enterica and S. aureus, and maintained stability of the feed for seven days, even with presence of organic matter, which is source of nutrients for pathogens.(AU)

No trabalho foi avaliado o efeito antimicrobiano do óleo capim limão (Cymbopogon citratus) microencapsulado frente a cepas de Escherichia coli (ATCC8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538) e Salmonella enterica subsp. enterica (ATCC 6017), e a estabilidade do óleo em ração de frangos de corte. O teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) do óleo essencial de capim-limão microencapsulado foi determinado pelo método de macrodiluição (tubo) utilizando as concentrações de 160μL/mL, 80μL/mL, 40μL/mL, 20μL/mLe 10μL/mL. A concentração do óleo de 80μL/mL apresentou melhores resultados frente às três bactérias. Para a avaliação da estabilidade foram separados e armazenadas porções de 200g de ração misturadas com o óleo essencial de capim limão na dosagem de 120μL/g de ração, foram preparadas porções de ração sem a presença do óleo essencial para teste controle, os resultados mostraram que o óleo permaneceu ativo até sete dias, com redução significativa de 3,08 UFC para S. aureus, 3, 01 para E. coli e 3,10 S. entérica. Conclui-se que, óleo essencial de capimlimão microencapuslado tem atividade antibacteriana na concentração de 80 μL/mL frente à Escherichia coli, S. entérica e S. aureus e promove a estabilidade da ração no período de sete dias mesmo na presença da matéria orgânica que é fonte de nutrientes para patógenos.(AU)

Antibacterial activity and stability of microencapsulated lemon grass essential oil in feeds for broiler chickens / Atividade antimicrobiana e estabilidade do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon citratus) microencapsulados em ração para frangos de corte

The antibacterial effect of microencapsulated lemon grass (Cymbopogon citratus) essential oil on strains of Escherichia coli (ATCC8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538) and Salmonella enterica subsp. enterica (ATCC 6017), and the stability of this oil in feeds for broiler chickens were evaluated. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined by the macrodilution method, using the microencapsulated lemon grass essential oil at concentrations of 160 μL mL−1, 80 μL mL−1, 40 μL mL−1, 20 μL mL−1, and 10 μL mL−1. The oil concentration of 80 μL mL−1 presented the best results against the three bacteria evaluated. Samples of 200 g of feed mixed with 120 μL g−1 of the microencapsulated lemon grass essential oil was stored to evaluate the oil stability. Feed without microencapsulated lemon grass essential oil was prepared as control. The oil remained active for seven days, with significant reduction of S. aureus (3.08 CFU), E. coli (3.01 CFU), and S. enterica (3.10 CFU). The microencapsulated lemon grass essential oil at concentration of 80 μL mL−1 had antibacterial effect against the E. coli, S. enterica and S. aureus, and maintained stability of the feed for seven days, even with presence of organic matter, which is source of nutrients for pathogens.

No trabalho foi avaliado o efeito antimicrobiano do óleo capim limão (Cymbopogon citratus) microencapsulado frente a cepas de Escherichia coli (ATCC8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538) e Salmonella enterica subsp. enterica (ATCC 6017), e a estabilidade do óleo em ração de frangos de corte. O teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) do óleo essencial de capim-limão microencapsulado foi determinado pelo método de macrodiluição (tubo) utilizando as concentrações de 160μL/mL, 80μL/mL, 40μL/mL, 20μL/mLe 10μL/mL. A concentração do óleo de 80μL/mL apresentou melhores resultados frente às três bactérias. Para a avaliação da estabilidade foram separados e armazenadas porções de 200g de ração misturadas com o óleo essencial de capim limão na dosagem de 120μL/g de ração, foram preparadas porções de ração sem a presença do óleo essencial para teste controle, os resultados mostraram que o óleo permaneceu ativo até sete dias, com redução significativa de 3,08 UFC para S. aureus, 3, 01 para E. coli e 3,10 S. entérica. Conclui-se que, óleo essencial de capimlimão microencapuslado tem atividade antibacteriana na concentração de 80 μL/mL frente à Escherichia coli, S. entérica e S. aureus e promove a estabilidade da ração no período de sete dias mesmo na presença da matéria orgânica que é fonte de nutrientes para patógenos.

Physical and physiological quality of the Lippia rotundifolia seeds according to the osmotic conditioning and electrical conductivity / Qualidade física e fisiológica das sementes de Lippia rotundifolia em função do condicionamento osmótico e condutividade elétrica

Lippia rotundifolia is a native species of the Cerrado, endemic to the chain backbone and highly aromatic, whose essential oil has medicinal properties of high pharmacological value, but because it is a non-domesticated species, little is known about its spread. Due to its importance, the objective was to evaluate the effect of the osmotic conditioning on the physical and physiological quality of seeds. The experimental design was completely randomized with four replications of 100 seeds, being treatments consisted of two kinds of seeds (with and without tegument) subjected to ten days of immersion in water (0, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours). After each period, the seeds were submitted to the electrical conductivity test and germination. Electrical conductivity and germination there is a directly proportional relationship, while the best osmotic conditioning time is achieved with the seed husk and immersed in water for 48 hours.(AU)

Lippia rotundifolia é uma espécie nativa do Cerrado, endêmica da cadeia do espinhaço e altamente aromática, cujo óleo essencial possui propriedades medicinais de alto valor farmacológico, mas, por tratar-se de uma espécie não domesticada, pouco se sabe quanto a sua propagação. Devido a sua importância, objetivou-se avaliar o efeito do condicionamento osmótico sobre a qualidade física e fisiológica de suas sementes. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com quatro repetições de 100 sementes, sendo que os tratamentos consistiram em dois tipos de sementes (com e sem tegumento) submetidas a dez tempos de embebição em água (0, 2, 4, 6, 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas). Após cada período, as sementes foram submetidas ao teste de condutividade elétrica e de germinação. Entre a condutividade elétrica e a porcentagem de germinação há relação diretamente proporcional, enquanto o melhor tempo de condicionamento osmótico é alcançado nas sementes com tegumento e imersas em água, durante 48 horas.(AU)

In vitro effect of "capim-limão" (Cymbopogon flexuosus Steud. Wats.) essential oil against enteric bacteria from avian source / Eficácia in vitro do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon flexuosus Steud. Wats.) frente a bactérias entéricas de origem avícola

The use of antimicrobials as performance enhancers has represented a risk to public health due to their association with the emergence of bacterial resistance and residues in products. Alternatively, researches have indicated the use of natural food additives, such as capim-limão essential oil. This paper aims to evaluate the antimicrobial activity of capim-limão essential oil (Cymbopogon flexuosus) against enteric Staphylococcus aureus and Escherichia coli isolated from laying hens (Gallus gallus domesticus). Five concentrations of the essential oil (160; 80; 40; 20 and 10 µL mL-1 ) were prepared and then in vitro disk diffusion tests and determination of both Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were performed. The results showed that the concentration of 160 µL mL-1 provides the largest inhibition zone diameters in disk diffusion, showing statistical differences in relation to the other concentrations (p 0.05). There was inhibitory effect (MIC) at the concentration of 80 µL mL-1 , but the bactericidal effect was not found. The conclusion was that the capim-limão essential oil has antimicrobial activity against S. aureus and E. coli isolated from poultry at the concentration of 160 µL mL-1 . Further studies are needed to evaluate the efficacy of using higher doses and indicate that oil as an additive in poultry diets

O uso de antimicrobianos como melhoradores de desempenho tem representado um risco à saúde pública devido à associação destes com o surgimento de resistência bacteriana e resíduos nos produtos. Como alternativa, pesquisas têm indicado a utilização de aditivos alimentares naturais, como o óleo essencial de capimlimão. Objetivou-se neste artigo avaliar a atividade antimicrobiana do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon flexuosus) frente a Staphylococcus aureus e Escherichia coli entéricas isoladas de aves de postura (Gallus gallus domesticus). Foram preparadas cinco concentrações do óleo essencial (160; 80; 40; 20 e 10 µL mL-1 ) e então realizados testes in vitro de difusão em disco e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Bactericida Mínima (CBM). Os resultados indicaram que a concentração de 160 µL mL-1 propiciou os maiores diâmetros de halos de inibição na difusão em disco, diferindo-se estatisticamente das demais concentrações (p 0,05). Houve efeito inibitório (CIM) a partir da concentração de 80 µL mL-1 de óleo para todas as bactérias mas a CBM não foi detectada. Conclui-se que o óleo essencial de capim-limão apresenta atividade antimicrobiana in vitro frente a S. aureus e E. coli isoladas de aves na concentração de 160 µL mL-1 . Novos estudos são necessários para avaliar a eficácia do uso de doses superiores e indicar esse óleo como aditivo em dietas de aves

Atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides Cham. (Alecrim-pimenta) na presença de leite bovino / Antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk

Objetivou-se determinar atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides na presença de leite bovino. A composição química do óleo essencial de alecrim pimenta foi determinada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), sendo detectados 53 compostos, dos quais 16 foram identificados (>0,1% área total). O carvacrol (32,7%), p-cimeno (23%), timilmetil éter, cariofileno (7,98%) e o γ-terpineno (5,40%) foram os componentes mais abundantes. A concentração inibitória mínima para Staphylococcus aureus ATCC 25923 e E. coli ATCC 8739 foi de 60µL/mL, enquanto para Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 foi de 90µL/mL. A concentração bactericida mínima foi de 120µL/mL para as três bactérias. Avaliou-se a atividade antisséptica do óleo essencial na concentração de 120µL/mL na presença de leite bovino sobre as mesmas cepas bacterianas. O óleo em estudo apresentou efeito inibitório do crescimento das cepas em diferentes tempos de ação (p<0,05). S. aureus apresentou maiores índices de inibição após 5 min de contato e Escherichia coli e Salmonella Choleraesuis após 15 min. O óleo essencial de alecrim-pimenta revelou ser um potencial antimicrobiano natural, mesmo na presença de matéria orgânica constituída de uma matriz nutricional complexa que é o leite bovino.(AU)

This study aimed to determine the antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk. The essential oil chemical composition was determined by gas chromatography-mass spectrometry (CG EM) 53 compounds were detected, of which 16 were identified (>0.1% total area). The carvacrol (32.7%), p-cymene (23%), thymil methyl ether (10.03%), caryophyllene (7.98 %) and γ-terpinene (5.40%) were the most abundant components. The minimum inhibitory concentration for Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 8739 was 60uL/mL, as for this Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 was 90uL/mL. The minimum bactericidal concentration was 120µL/mL for all three bacteria. We evaluated the antiseptic activity of the essential oil in the concentration of 120µL/mL in the presence of bovine milk for the same bacterial strains. The oil under study It showed an inhibitory effect of growth of the strains in different action times (p <0.05). S. aureus showed higher inhibition rates after 5 min of contact and E. coli and Salmonella Choleraesuis after 15 min. The essential oil Lippia origanoides proved to be a natural antimicrobial potential even in the presence of organic matter consists of a complex nutritional matrix is bovine milk.(AU)

Atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides Cham. (Alecrim-pimenta) na presença de leite bovino / Antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk

This study aimed to determine the antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk. The essential oil chemical composition was determined by gas chromatography-mass spectrometry (CG EM) 53 compounds were detected, of which 16 were identified (>0.1% total area). The carvacrol (32.7%), p-cymene (23%), thymil methyl ether (10.03%), caryophyllene (7.98 %) and γ-terpinene (5.40%) were the most abundant components. The minimum inhibitory concentration for Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 8739 was 60uL/mL, as for this Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 was 90uL/mL. The minimum bactericidal concentration was 120μL/mL for all three bacteria. We evaluated the antiseptic activity of the essential oil in the concentration of 120μL/mL in the presence of bovine milk for the same bacterial strains. The oil under study It showed an inhibitory effect of growth of the strains in different action times (p <0.05). S. aureus showed higher inhibition rates after 5 min of contact and E. coli and Salmonella Choleraesuis after 15 min. The essential oil Lippia origanoides proved to be a natural antimicrobial potential even in the presence of organic matter consists of a complex nutritional matrix is bovine milk.(AU)

Objetivou-se determinar atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides na presença de leite bovino. A composição química do óleo essencial de alecrim pimenta foi determinada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), sendo detectados 53 compostos, dos quais 16 foram identificados (>0,1% área total). O carvacrol (32,7%), p-cimeno (23%), timilmetil éter, cariofileno (7,98%) e o γ-terpineno (5,40%) foram os componentes mais abundantes. A concentração inibitória mínima para Staphylococcus aureus ATCC 25923 e E. coli ATCC 8739 foi de 60μL/mL, enquanto para Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 foi de 90μL/mL. A concentração bactericida mínima foi de 120μL/mL para as três bactérias. Avaliou-se a atividade antisséptica do óleo essencial na concentração de 120μL/mL na presença de leite bovino sobre as mesmas cepas bacterianas. O óleo em estudo apresentou efeito inibitório do crescimento das cepas em diferentes tempos de ação (p<0,05). S. aureus apresentou maiores índices de inibição após 5 min de contato e Escherichia coli e Salmonella Choleraesuis após 15 min. O óleo essencial de alecrim-pimenta revelou ser um potencial antimicrobiano natural, mesmo na presença de matéria orgânica constituída de uma matriz nutricional complexa que é o leite bovino.(AU)

In vitro effect of "capim-limão" (Cymbopogon flexuosus Steud. Wats.) essential oil against enteric bacteria from avian source / Eficácia in vitro do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon flexuosus Steud. Wats.) frente a bactérias entéricas de origem avícola

The use of antimicrobials as performance enhancers has represented a risk to public health due to their association with the emergence of bacterial resistance and residues in products. Alternatively, researches have indicated the use of natural food additives, such as capim-limão essential oil. This paper aims to evaluate the antimicrobial activity of capim-limão essential oil (Cymbopogon flexuosus) against enteric Staphylococcus aureus and Escherichia coli isolated from laying hens (Gallus gallus domesticus). Five concentrations of the essential oil (160; 80; 40; 20 and 10 µL mL-1 ) were prepared and then in vitro disk diffusion tests and determination of both Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were performed. The results showed that the concentration of 160 µL mL-1 provides the largest inhibition zone diameters in disk diffusion, showing statistical differences in relation to the other concentrations (p 0.05). There was inhibitory effect (MIC) at the concentration of 80 µL mL-1 , but the bactericidal effect was not found. The conclusion was that the capim-limão essential oil has antimicrobial activity against S. aureus and E. coli isolated from poultry at the concentration of 160 µL mL-1 . Further studies are needed to evaluate the efficacy of using higher doses and indicate that oil as an additive in poultry diets(AU)

O uso de antimicrobianos como melhoradores de desempenho tem representado um risco à saúde pública devido à associação destes com o surgimento de resistência bacteriana e resíduos nos produtos. Como alternativa, pesquisas têm indicado a utilização de aditivos alimentares naturais, como o óleo essencial de capimlimão. Objetivou-se neste artigo avaliar a atividade antimicrobiana do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon flexuosus) frente a Staphylococcus aureus e Escherichia coli entéricas isoladas de aves de postura (Gallus gallus domesticus). Foram preparadas cinco concentrações do óleo essencial (160; 80; 40; 20 e 10 µL mL-1 ) e então realizados testes in vitro de difusão em disco e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Bactericida Mínima (CBM). Os resultados indicaram que a concentração de 160 µL mL-1 propiciou os maiores diâmetros de halos de inibição na difusão em disco, diferindo-se estatisticamente das demais concentrações (p 0,05). Houve efeito inibitório (CIM) a partir da concentração de 80 µL mL-1 de óleo para todas as bactérias mas a CBM não foi detectada. Conclui-se que o óleo essencial de capim-limão apresenta atividade antimicrobiana in vitro frente a S. aureus e E. coli isoladas de aves na concentração de 160 µL mL-1 . Novos estudos são necessários para avaliar a eficácia do uso de doses superiores e indicar esse óleo como aditivo em dietas de aves(AU)

Ecogeografia de populações de erva-baleeira (Varronia curassavica) no Norte e Vale do Jequitinhonha em Minas Gerais / Ecogeography populations of Cordia (Varronia curassavica) in North and Jequitinhonha Valley in Minas Gerais, Brazil

O objetivo deste estudo foi avaliar as condições ecogeográficas e edafoclimáticas dos ambientes de ocorrência da erva-baleeira (Varronia curassavica) nas mesorregiões Norte e Vale do Jequitinhonha de Minas Gerais. O estudo foi efetuado em 15 sítios de ocorrência dessa espécie, localizados em 14 municípios sob o bioma Cerrado e ocorreu nos tipos de vegetação Cerrado, Caatinga, restinga e floresta. Os sítios estão localizados predominantemente entre 495 e 895m de altitude, e as plantas localizam-se sempre na parte inferior da topossequência. A precipitação média anual variou de <1.000mm a 1.500mm e a temperatura média anual variou de <19 a 24°C. A espécie tolera solos fortemente ácidos e com alta saturação de alumínio, ocorrendo em diferentes níveis de fertilidade e classes de solo. Nas mesorregiões Norte e Vale Jequitinhonha de Minas Gerais, a erva-baleeira não apresentou condições ecogeográficas e edafoclimáticas específicas para a sua ocorrência.(AU)

The objective of this study was to evaluate the ecogeographic and edaphoclimatic conditions of the environments of occurrence of Cordia (Varronia curassavica) at the mesoregions Northern and Jequitinhonha Valley in Minas Gerais. The study was conducted in 15 places of occurrence of this species, located in 14 municipalities under the Cerrado biome and occurred in the Cerrado, Caatinga, marsh and, forest vegetation types. The places are located predominantly between 495 and 895m of altitude, and the plants are located always at the bottom of the top sequence. The annual average rainfall ranged from <1,000mm to 1,500mm and the annual average temperature ranged from <19 to 24°C. The species tolerates acid soils with high aluminum saturation, occurring at different fertility levels and soil types. In the mesoregions Northern and Jequitinhonha Valley in Minas Gerais the Cordia showed no ecogeographic and climatic specific conditions for its occurrence.(AU)

Produção de biomassa e do rendimento do óleo essencial de melissa em cultivo solteiro e consorciado com mil-folhas e alface / Biomass production and essential melissa oil output evaluation in a single and linked crop cultivation to both yarrow and lettuce

O trabalho teve como objetivo avaliar a produção da biomassa e o rendimento de óleo essencial da melissa, quando em cultivo solteiro e consorciada com mil-folhas e alface. Os tratamentos consistiram em melissa em cultivo solteiro, melissa em consórcio com mil-folhas, melissa consorciada com alface, mil-folhas e alface em cultivo solteiro. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado com cinco tratamentos e seis repetições. Foram avaliados o teor e o rendimento do óleo essencial da melissa e a matéria fresca e a matéria seca da parte aérea de todas as espécies. Notou-se, a partir dos valores das médias, que o cultivo consorciado de melissa com alface proporcionou maior rendimento de óleo essencial, matéria fresca e matéria seca. Os menores valores de todas as variáveis foram observados no cultivo solteiro da melissa. Considerando o Uso Eficiente da Terra (UET), o cultivo consorciado da mil-folhas e da alface com a melissa gerou bons rendimentos de biomassa das plantas, pois os valores calculados para as espécies foram superiores a 1,0. O cultivo consorciado das espécies não interferiu significativamente no teor do óleo essencial da melissa.(AU)

The research aimed to evaluate melissa's biomass production and its essential oil output, both single cultivation and linked cultivation to yarrow and lettuce. The treatments were consisted in single cultivantion melissa, melissa linked to yarrow, melissa linked to lettuce, yarrow and lettuce in single cultivation. The experimental design used was a totally randomized design with five treatment and six repetitions. Was evaluated the content and the yield of essential oil of melissa, the fresh matter and the dry matter of the aerial part of all species. It was seen from the average valuations that the melissa linked cultivation to the lettuce obtained the greatest output, fresh matter and dry matter. The smaller values of all variables was observed in melissa in single cultivation. To the the Effective Land Use (ELU), the yarrow and lettuce linking cultivated to the melissa generated good species biomass output, because the calculated results to the plants were higher than 1,0. The species linking cultivation did not interfere significantly in melissa's essential oil content.(AU)

Essential oil of Rosmarinus officinalis L. as natural sanitizer for controlling the sessile bacteria and as antimicrobial on the food-cutting surfaces / Óleo essencial de Rosmarinus officinalis L. como sanitizante natural para controle de bactérias sésseis em superfície utilizada para corte de alimentos

The objective of this study was to determine the minimum inhibitory concentrations (MIC) and the minimum bactericidal concentrations (MBC) by using broth macro-dilution method in essential oil (EO) of Rosmarinus officinalis L. on the standard strains of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella Choleraesuis and Pseudomonas aeruginosa. The antibacterial activity of EO solutions on these bacteria adhered to the polypropylene surface used for cutting food was also evaluated, after 12 h at 37º C under shaking on. The sanitizers EO solutions were formulated based on MBC findings, separately for each bacterial strain. The sanitizing action of the solutions on the bacterial cells-adhered surface was evaluated after being contacted for 20 and 40 min. For E. coli, S. Choleraesuis and P. aeruginosa, the contact for 20 min was sufficient for inducing complete elimination of adhered cells, and S. aureus populations were significantly reduced at both evaluated periods of time. The EO of R. officinalis may represent as natural alternative form to carry out the pathogenic and contaminants bacteria control in food industry.(AU)

Objetivou-se neste estudo determinar as concentrações mínimas inibitórias (CMI) e as concentrações bactericidas mínimas (CBM) pela técnica de macrodiluição em caldo do óleo essencial (OE) de Rosmarinus officinalis L. sobre as cepas padrões de Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella Choleraesuis e Pseudomonas aeruginosa. Avaliou-se também a ação antibacteriana de soluções do OE sobre estes micro-organismos aderidos, por 12 h a 37º C sob agitação, em superfície de polipropileno utilizada para corte de alimentos. As soluções sanitizantes de OE foram formuladas com base nos valores encontrados nas CBM, para cada estirpe bacteriana separadamente. A ação sanitizante da solução contra as células aderidas à superfície foi avaliada após 20 e 40 minutos de contato. Para E. coli, S. Choleraesuis e P. aeruginosa, o tempo de 20 minutos de contato foi suficiente para a remoção total das células aderidas, e para S. aureus houve redução significativa para ambos os períodos avaliados. O OE de alecrim pode ser considerado como alternativa natural para realizar o controle de bactérias patogênicas e contaminantes na indústria de alimentos.(AU)

In vitro efficacy of aqueous plants extracts in the control of gastrointestinal nematodes of cattle / Eficácia in vitro de extratos aquosos de plantas no controle de nematódeos gastrintestinais de bovinos

Background: Gastrointestinal helminthes in cattle had prejudge performance and productivity of animals. Affect beef cattleand dairy, generating huge economic losses. Commercial anthelmintics have been administered improperly, promotingthe selection of resistant populations, in addition to increasing production costs and waste accumulate in animal productsand the environment. It is therefore of great importance to find new alternatives as control. In this quest, was aimed withthis study to evaluate the in vitro efficacy of plant aqueous extracts in the inhibition of larval development assay (ILDA)and inhibition of hatchability assay (IHA) of gastrointestinal nematodes of cattle.Materials, Methods & Results: The ILDA was performed by quantitative coproculture , with aqueous extracts of the leavesof Acrocomia aculeata, Anacardium occidentale, Caryocar brasiliense, Cymbopogon citratus, Mangifera indica var. Ubáand Musa spp. cv. Prata-anã on the concentration of 100 mg/mL. In the IHA was evaluated the aqueous extracts of leavesand fruit peels of C. brasiliense, at the concentrations 15.00, 7.50, 3.75 and 1.88 mg/mL. The controls of assays wereivermectin (16 μg/mL) and levamisole phosphate solution (15 mg/ml), respectively, and water in both tests. Efficiencieswere calculated and count data submitted to analysis of variance and the means were compared by Tukey test (P < 0.01).With the probit regression analysis, we determined the lethal concentration for inhibition of 50 and 90% hatchability (LC50and LC90). Still, the levels of condensed tannins from aqueous extracts of the leaves and fruit peels of C. brasiliense werequantified. In ILDA, the extract of C. brasiliense showed efficacy of 91.29% and did not differ from ivermectin (P < 0.01).The other extracts did not obtain satisfactory efficacy and were similar to water (P < 0.01). In IHA the efficacy was over...