Molecular and serological diagnosis for Leptospira spp. in biological samples of cattle collected during the slaughter line / Diagnóstico molecular e sorológico para Leptospira spp. em amostras biológicas de bovinos coletadas durante a linha de abate / Diagnóstico molecular y serológico para Leptospira spp. en muestras biológicas de bovinos recogidas durante la línea de sacrificio

A leptospirose é considerada uma zoonose bacteriana de importância para a saúde pública. É comum em áreas tropicais, especialmente em países em desenvolvimento com escassos recursos de saúde e saneamento. Este estudo avaliou a presença de Leptospira spp. em bovinos abatidos em frigorífico da região Centro-Oeste de São Paulo, Brasil, e identificou animais positivos tanto por sorologia quanto em análise molecular. Amostras biológicas de sangue, fígado e rins de 150 bovinos foram investigadas pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM) e Reação em Cadeia da Polimerase convencional (cPCR). Os resultados sorológicos mostraram que dos 150 animais, 71 (47,3%) foram reagentes. Os resultados moleculares mostraram a presença de Leptospira spp. nos rins de 21 animais (14%), no fígado de 5 animais (3,3%), no fígado e rins em 2 animais (1,3%) e no sangue em 1 animal (0,7%). Esses resultados indicam um alerta sobre a saúde dos bovinos de corte devido à possibilidade desses animais serem fonte de infecção e a importância da característica ocupacional desta doença. Verificou-se também a importância de complementar as técnicas sorológicas e moleculares.

Leptospirosis is considered a bacterial zoonosis of public health importance. It is common in tropical areas, especially in developing countries with scarce health and sanitation resources. This study evaluated the presence of Leptospira spp. in slaughtered bovine in a slaughterhouse in the Midwest region of São Paulo, Brazil, as well as identified positive animals both in serology and by molecular analysis. Biological samples of blood, liver and kidneys from 150 cattle were investigated by the technique of Microscopic Agglutination Test (MAT) and conventional Polymerase Chain Reaction (cPCR). The serological results showed that of the 150 animals, 71 (47.3%) were reactive. The molecular results showed the presence of Leptospira spp. in kidneys of 21 (14%) animals, in liver of five (3.3%) animals, in liver and kidneys in two animals (1.3%) and in blood, in one (0.7%) animal. These results indicate a warning about the health of beef cattle due to the possibility of these animals being the source of infection and the importance of the occupational characteristic of this disease. It was also verified the importance of complementing serological and molecular techniques.

La leptospirosis es considerada una zoonosis bacteriana de importancia en salud pública. Es común en áreas tropicales, especialmente en países en desarrollo con escasos recursos de salud y saneamiento. Este estudio evaluó la presencia de Leptospira spp. en bovinos sacrificados en un matadero de región Centro-Oeste de São Paulo, Brasil, así como animales positivos identificados tanto en serología como por análisis molecular. Se investigaron muestras biológicas de sangre, hígado y riñones de 150 bovinos mediante la técnica de Aglutinación Microscópica (MAT) y Reacción en Cadena de la Polimerasa convencional (cPCR). Los resultados serológicos mostraron que de los 150 animales, 71 (47,3%) fueron reactivos. Los resultados moleculares mostraron la presencia de Leptospira spp. en riñones de 21 (14%) animales, en hígado de cinco (3,3%) animales, en hígado y riñones en dos animales (1,3%) y en sangre, en un (0,7%) animal. Estos resultados indican una alerta sobre la salud de los bovinos de carne debido a la posibilidad de que estos animales sean fuente de infección y la importancia de la característica ocupacional de esta enfermedad. También se verificó la importancia de complementar las técnicas serológicas y moleculares.

Isolation and identification of Yersinia enterocolitica in bovine milk samples of bulk tanks from dairy farms in São Paulo, Brazil / Isolamento e identificação de Yersinia enterocolitica em amostras de leite cru bovino a partir de tanques de expansão, São Paulo, Brasil

Milk and its derivatives are good substrates for the proliferation of pathogenic and quality-deteriorating microorganisms, demanding rigorous care with milking, processing, and storage. Among the various bacteria that can grow in raw refrigerated milk, Yersinia enterocolitica, is an invasive enteropathogen of humans. This bacterium can cause a number of intestinal and extraintestinal clinical symptoms, ranging from mild gastroenteritis to mesenteric lymphadenitis, similar to appendicitis. To evaluate the prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica in raw milk from bulk milk tanks located in the State of São Paulo, 102 bovine milk samples (one per dairy farm) were evaluated by microbiological analyses, followed by biochemical tests PCR and genetic sequencing. Microbiological testing did not isolate Y. enterocolitica. However, PCR analysis revealed six samples that were positive for Y. enterocolitica (5.9%), confirmed by genetic sequencing. Only the inv gene was detected, which is present in virulent and avirulent Y. enterocolitica strains. There was great difficulty in microbiological isolation due to the difficulty of competitiveness of Y. enterocolitica in a very rich microbiota of raw milk. Although virulence genes known to be present in potentially pathogenic strains of Y. enterocolitica have not been identified, the presence of this pathogen in milk from expansion tanks...(AU)

O leite e seus derivados possuem substratos que favorecem o desenvolvimento de micro-organismos patogênicos e deteriorantes, devido a isso, cuidados rigorosos são exigindo durante a ordenha, processamento e seu armazenamento. Dentre os vários grupos de bactérias que podem contaminar o leite refrigerado cru está Yersinia enterocolitica. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante à apendicite. Para avaliar a prevalência de Y. enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, por análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Y. enterocolitica pelas provas microbiológicas clássicas. No entanto, a análise de PCR, realizada diretamente do leite, revelou seis (6) amostras positivas para Y. enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, que pode estar presente em cepas virulentas e avirulentas. Houve dificuldade de isolamento microbiológico devido à dificuldade de competitividade da Y. enterocolitica em uma microbiota muito rica do leite cru. Ainda que não tenham sido identificados os genes de virulência que sabidamente estão...(AU)

Detecção de Listeria spp de importância em saúde pública em diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas Frescal / Detection of Listeria spp important in public health from different points of milk obtaining and elaboration of Minas Frescal cheese

Queijos tipo Minas frescal podem veicular microrganismos patogênicos. Este estudo objetivou isolar Listeria spp. e identificar as espécies L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii e L. monocytogenes na obtenção do leite e na elaboração de queijos tipo Minas frescal e detectar a presença de genes de virulência. Foram realizadas coletas em cinco pequenas propriedades rurais produtoras deste tipo de queijo em Jaboticabal-São Paulo. Foram coletadas amostras de suabes de fezes bovinas, amostras de mãos de ordenhador, balde de ordenha, leite, água, superfície de elaboração de queijos, mãos de manipulador do queijo, peneiras, bandejas, fôrmas e escumadeiras. O gênero Listeria spp. teve alta prevalência nas amostras, entretanto, nenhuma das espécies pesquisadas foi identificada. Assim, conclui-se que a presença de Listeria spp. em alta percentagem representa potencial risco de contaminação de Queijos tipo Minas frescal e exige uma vigilância contínua para a presença deste gênero.(AU)

Detecção de Listeria spp de importância em saúde pública em diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas Frescal / Detection of Listeria spp important in public health from different points of milk obtaining and elaboration of Minas Frescal cheese

Queijos tipo Minas frescal podem veicular microrganismos patogênicos. Este estudo objetivou isolar Listeria spp. e identificar as espécies L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii e L. monocytogenes na obtenção do leite e na elaboração de queijos tipo Minas frescal e detectar a presença de genes de virulência. Foram realizadas coletas em cinco pequenas propriedades rurais produtoras deste tipo de queijo em Jaboticabal-São Paulo. Foram coletadas amostras de suabes de fezes bovinas, amostras de mãos de ordenhador, balde de ordenha, leite, água, superfície de elaboração de queijos, mãos de manipulador do queijo, peneiras, bandejas, fôrmas e escumadeiras. O gênero Listeria spp. teve alta prevalência nas amostras, entretanto, nenhuma das espécies pesquisadas foi identificada. Assim, conclui-se que a presença de Listeria spp. em alta percentagem representa potencial risco de contaminação de Queijos tipo Minas frescal e exige uma vigilância contínua para a presença deste gênero.

Degradabilidade in situ do híbrido de sorgo e do capim-Tanzânia em vacas suplementadas no outono / In situ degrability of sorghum hybrid and Tanzânia guinea-grass in supplented cows during autumn

O experimento foi conduzido na Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios, em Ribeirão Preto, com objetivo de avaliar o efeito da suplementação concentrada na degradabilidade in situ dos colmos e das folhas do híbrido de sorgo e do capim-tanzânia colhidos no outono com e sem suplementação de concentrado em vacas. Amostras de folhas e colmos das gramíneas colhidas no início do outono foram incubadas em quatro vacas mestiças canuladas no rúmen, avaliando-se a fração solúvel, fração potencialmente degradável, taxa de degradação (kd) e a degradabilidade efetiva (DE), utilizando-se o delineamento em quadrado latino (4x4). Houve diferença (P<0,001) da fração solúvel do colmo entre as gramíneas, e o híbrido de sorgo apresentou maior resultado. Não houve efeito dos tratamentos (P=0,52) na taxa de degradação (kd), mas houve diferença (P<0,0001) entre os tratamentos para as degradações efetivas a 2%/h, 5%/h, e 8%/h, sendo as degradabilidades efetivas do colmo do capim-tanzânia menores que do híbrido de sorgo. Os resultados observados para fração solúvel, fração potencialmente degradável e DE com taxa de passagem de 2%/h para o hibrido de sorgo foram em média 25,12%; 48,78% e 52,5%/h para colmo e 18,6%; 64,54% e 56,9%/h para as folhas, respectivamente. Para o capim-tanzânia as médias obtidas foram de 12,27%; 43,33% e 36,6%/h para colmo e 14,96%; 60,95% e 54,3%/h para as folhas, respectivamente. A fração solúvel do colmo e das folhas é maior no híbrido de sorgo, e a degradabilidade efetiva é maior apenas no colmo do sorgo. O uso de suplementação concentrada não interfere na degradabilidade ruminal quando os animais consomem folhas e colmos de híbrido de sorgo ou capim-tanzânia em sistema de pastejo no outono.

The trial was carried out at Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios, Ribeirão Preto, to compare in situ degradability of dry matter of hybrid sorghum and Tanzania guinea grass, stem and leaves, on fall with and without concentrate on the diet of the cows. Samples of stem and leaves, harvested on fall, were incubated in four rumen-canulated cows, using a latin square design (4x4). The soluble fraction, the insoluble fraction potentially degradable, degradation rate (kd) and the effective degradation (ED) was estimated. There was difference (P<0.001) between grass species for soluble fraction of the stem and it was higher for hybrid sorghum. No influence of treatments (P=0.52) was met for degradation rate (kd) for stem fraction, but the effective (P<0.0001) degradation rate at 2%/h, 5%/h and 8%/h was higher for stem hybrid sorghum. The degradability of leaves was similar for grasses species. The results for soluble fraction, insoluble fraction potentially degradable and ED with passage rate of 2%/h for hybrid sorghum were 25.12%, 48.78% and 52.5% for stem and 18.6%, 64.54% and 56.9% for leaf, respectively. For Tanzania guinea grass the averages were 12.27%, 43.33% and 36.6% for stem and 14.96%, 60.95% and 54.3% for leaves, respectively. The soluble fraction is higher for stem and leaves of hybrid sorghum but the effective degradability is higher just for stem fraction of hybrid sorghum. The use of concentrate supplementation does not interfere in the rumen when animals consume leaves and stem of the sorghum hybrid or Tanzania grass in grazing systems in the fall.

Degradabilidade in situ do híbrido de sorgo e do capim-Tanzânia em vacas suplementadas no outono / In situ degrability of sorghum hybrid and Tanzânia guinea-grass in supplented cows during autumn

O experimento foi conduzido na Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios, em Ribeirão Preto, com objetivo de avaliar o efeito da suplementação concentrada na degradabilidade in situ dos colmos e das folhas do híbrido de sorgo e do capim-tanzânia colhidos no outono com e sem suplementação de concentrado em vacas. Amostras de folhas e colmos das gramíneas colhidas no início do outono foram incubadas em quatro vacas mestiças canuladas no rúmen, avaliando-se a fração solúvel, fração potencialmente degradável, taxa de degradação (kd) e a degradabilidade efetiva (DE), utilizando-se o delineamento em quadrado latino (4x4). Houve diferença (P<0,001) da fração solúvel do colmo entre as gramíneas, e o híbrido de sorgo apresentou maior resultado. Não houve efeito dos tratamentos (P=0,52) na taxa de degradação (kd), mas houve diferença (P<0,0001) entre os tratamentos para as degradações efetivas a 2%/h, 5%/h, e 8%/h, sendo as degradabilidades efetivas do colmo do capim-tanzânia menores que do híbrido de sorgo. Os resultados observados para fração solúvel, fração potencialmente degradável e DE com taxa de passagem de 2%/h para o hibrido de sorgo foram em média 25,12%; 48,78% e 52,5%/h para colmo e 18,6%; 64,54% e 56,9%/h para as folhas, respectivamente. Para o capim-tanzânia as médias obtidas foram de 12,27%; 43,33% e 36,6%/h para colmo e 14,96%; 60,95% e 54,3%/h para as folhas, respectivamente. A fração solúvel do colmo e das folhas é maior no híbrido de sorgo, e a degradabilidade efetiva é maior apenas no colmo do sorgo. O uso de suplementação concentrada não interfere na degradabilidade ruminal quando os animais consomem folhas e colmos de híbrido de sorgo ou capim-tanzânia em sistema de pastejo no outono.(AU)

The trial was carried out at Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios, Ribeirão Preto, to compare in situ degradability of dry matter of hybrid sorghum and Tanzania guinea grass, stem and leaves, on fall with and without concentrate on the diet of the cows. Samples of stem and leaves, harvested on fall, were incubated in four rumen-canulated cows, using a latin square design (4x4). The soluble fraction, the insoluble fraction potentially degradable, degradation rate (kd) and the effective degradation (ED) was estimated. There was difference (P<0.001) between grass species for soluble fraction of the stem and it was higher for hybrid sorghum. No influence of treatments (P=0.52) was met for degradation rate (kd) for stem fraction, but the effective (P<0.0001) degradation rate at 2%/h, 5%/h and 8%/h was higher for stem hybrid sorghum. The degradability of leaves was similar for grasses species. The results for soluble fraction, insoluble fraction potentially degradable and ED with passage rate of 2%/h for hybrid sorghum were 25.12%, 48.78% and 52.5% for stem and 18.6%, 64.54% and 56.9% for leaf, respectively. For Tanzania guinea grass the averages were 12.27%, 43.33% and 36.6% for stem and 14.96%, 60.95% and 54.3% for leaves, respectively. The soluble fraction is higher for stem and leaves of hybrid sorghum but the effective degradability is higher just for stem fraction of hybrid sorghum. The use of concentrate supplementation does not interfere in the rumen when animals consume leaves and stem of the sorghum hybrid or Tanzania grass in grazing systems in the fall.(AU)

Epidemiologia molecular aplicada ao monitoramento de estirpes de Staphylococcus aureus na produção de queijo Minas frescal / Molecular epidemiology applied to monitoring strains of Staphylococcus aureus in Minas frescal cheese production

Foi realizado o monitoramento epidemiológico molecular de estirpes de Staphylococcus aureus potencialmente toxigênicas isoladas no processo de produção do queijo Minas frescal em micro-usina do Estado de São Paulo. Para tanto, foram realizadas seis amostragens durante o período de junho de 2008 a julho de 2009, de modo a perfazer um total de 140 amostras. Essas amostras foram colhidas da superfície dos tanques de recepção e estocagem do leite cru, da superfície do tanque de equilíbrio do leite pasteurizado, da rede de abastecimento de água, das tubulações e equipamentos, das mãos do manipulador e de queijos embalados prontos para consumo. As colônias isoladas em Agar Baird-Parker confirmadas como cocos Gram positivos e que mostravam-se positivas às provas de catalase, coagulase e da produção de acetoína, foram submetidas à extração do DNA bacteriano através da utilização do Kit Invitek - Uniscience®. A confirmação molecular da espécie dos isolados e a presença de enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e da toxina TSST-1 foi realizada a partir da amplificação dos fragmentos de DNA cromossômico específico. Entre as 74 estirpes de estafilococos coagulase positivos isoladas, somente 41 (55.4%) amostras foram confirmadas como sendo Staphylococcus aureus, das quais 25 (61,0%) mostraram-se positivas na pesquisa de toxinas estafilocócicas. A enterotoxina de maior frequência identificada foi a SEA. As estirpes de Staphylococcus aureus toxigênico foram mais isoladas nas mãos do manipulador (16,0%), no leite cru do tanque de recepção (12,0%), no leite pasteurizado para elaboração do queijo (12,0%) e no queijo Minas frescal pronto para consumo (12,0%).

We studied the molecular epidemiology of Staphylococcus aureus strains potentially toxigenic, isolated from the production process of Minas frescal cheese in a small dairy plant in the state of São Paulo. For this, samples were taken during the period from June 2008 to July 2009. Samples were collected from the surface of the receiving and storage tanks of raw milk, the surface of the balance tank of pasteurized milk, the water supply system, the pipes and equipments, the hands of the handler and from the packaged cheese, totaling 140 samples. The colonies isolated on Baird-Parker Agar confirmed as Gram positive and positive for catalase, coagulase and acetoin production, were submitted to extraction of bacterial DNA using the Invitek - Uniscience® kit. Confirmation of the isolated species and enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED and TSST-1 toxin was carried out through the amplification of specific fragments of chromosomal DNA. Among the 74 strains of isolated coagulase-positive staphylococci, only 41 (55.4%) strains were confirmed as Staphylococcus aureus, of which 25 (61.0%) were positive to the presence of staphylococcal toxins. The most frequently identified enterotoxin was SEA. The toxigenic strains of Staphylococcus aureus were more frequently isolated from hands of the handler (16.0%), raw milk receiving tank (12.0%), pasteurized milk for cheese making (12.0%) and fresh white cheese ready for consumption (12.0%).

Epidemiologia molecular aplicada ao monitoramento de estirpes de Staphylococcus aureus na produção de queijo Minas frescal / Molecular epidemiology applied to monitoring strains of Staphylococcus aureus in Minas frescal cheese production

Foi realizado o monitoramento epidemiológico molecular de estirpes de Staphylococcus aureus potencialmente toxigênicas isoladas no processo de produção do queijo Minas frescal em micro-usina do Estado de São Paulo. Para tanto, foram realizadas seis amostragens durante o período de junho de 2008 a julho de 2009, de modo a perfazer um total de 140 amostras. Essas amostras foram colhidas da superfície dos tanques de recepção e estocagem do leite cru, da superfície do tanque de equilíbrio do leite pasteurizado, da rede de abastecimento de água, das tubulações e equipamentos, das mãos do manipulador e de queijos embalados prontos para consumo. As colônias isoladas em Agar Baird-Parker confirmadas como cocos Gram positivos e que mostravam-se positivas às provas de catalase, coagulase e da produção de acetoína, foram submetidas à extração do DNA bacteriano através da utilização do Kit Invitek - Uniscience®. A confirmação molecular da espécie dos isolados e a presença de enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e da toxina TSST-1 foi realizada a partir da amplificação dos fragmentos de DNA cromossômico específico. Entre as 74 estirpes de estafilococos coagulase positivos isoladas, somente 41 (55.4%) amostras foram confirmadas como sendo Staphylococcus aureus, das quais 25 (61,0%) mostraram-se positivas na pesquisa de toxinas estafilocócicas. A enterotoxina de maior frequência identificada foi a SEA. As estirpes de Staphylococcus aureus toxigênico foram mais isoladas nas mãos do manipulador (16,0%), no leite cru do tanque de recepção (12,0%), no leite pasteurizado para elaboração do queijo (12,0%) e no queijo Minas frescal pronto para consumo (12,0%).(AU)

We studied the molecular epidemiology of Staphylococcus aureus strains potentially toxigenic, isolated from the production process of Minas frescal cheese in a small dairy plant in the state of São Paulo. For this, samples were taken during the period from June 2008 to July 2009. Samples were collected from the surface of the receiving and storage tanks of raw milk, the surface of the balance tank of pasteurized milk, the water supply system, the pipes and equipments, the hands of the handler and from the packaged cheese, totaling 140 samples. The colonies isolated on Baird-Parker Agar confirmed as Gram positive and positive for catalase, coagulase and acetoin production, were submitted to extraction of bacterial DNA using the Invitek - Uniscience® kit. Confirmation of the isolated species and enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED and TSST-1 toxin was carried out through the amplification of specific fragments of chromosomal DNA. Among the 74 strains of isolated coagulase-positive staphylococci, only 41 (55.4%) strains were confirmed as Staphylococcus aureus, of which 25 (61.0%) were positive to the presence of staphylococcal toxins. The most frequently identified enterotoxin was SEA. The toxigenic strains of Staphylococcus aureus were more frequently isolated from hands of the handler (16.0%), raw milk receiving tank (12.0%), pasteurized milk for cheese making (12.0%) and fresh white cheese ready for consumption (12.0%).(AU)

Epidemiologia molecular aplicada ao estudo de estirpes de Staphylococcus aureus na produção de queijo tipo Minas Frescal

Foi realizado o estudo epidemiológico molecular de estirpes de Staphylococcus aureus potencialmente toxigênicas isoladas no processo de produção do Queijo Tipo Minas Frescal em uma micro-usina no Estado de São Paulo. Para tanto, foram realizadas seis amostragens durante o período de junho de 2008 a julho de 2009, de modo a perfazer um total de 140 amostras, as quais foram colhidas do leite cru e pasteurizado, mãos do manipulador, queijo embalado para consumo e diversos pontos do fluxograma de seu processamento. A confirmação molecular da espécie dos isolados e a presença de genes codificadores das enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED e da toxina TSST-1, foram realizadas a partir da amplificação dos fragmentos de DNA genômico específico. Entre as 41 (29,3,4%) das estirpes confirmadas como sendo S. aureus, 25 (61%) mostraram-se positivas na pesquisa de genes codificadores de toxinas estafilocócicas. Os pontos de maior frequência de estirpes de S. aureus toxigênico foram as mãos do manipulador (16,0%), o leite cru do tanque de recepção (12,0%), o leite pasteurizado (12,0%) e o Queijo Tipo Minas Frescal pronto para consumo (12,0%). O gene codificador de enterotoxina de maior frequência identificada foi o sea. Na determinação do potencial toxigênico das estirpes com genes codificadores de enterotoxinas por imunodifusão, apenas uma estirpe isolada da superfície interna do tanque de estocagem do leite cru foi produtora da enterotoxina SEC. Houve variabilidade genética entre as 41 estirpes de S. aureus isoladas, uma vez que foram identificados 22 pulsotipos diferentes pelo PFGE. Os resultados obtidos permitem a adoção de medidas para a melhoria do processamento do Queijo Tipo Minas Frescal de modo a reduzir o risco potencial que estas toxinas podem representar para a saúde da população consumidora deste produto

We performed molecular epidemiological study of strains of Staphylococcus aureus isolated toxigenic potential in the process of producing the Frescal Minas Type Cheese in a micro-mill in State of São Paulo. For this, six samples were taken during the period June 2008 to July 2009 in order to make a total of 140 samples, which were collected raw and pasteurized milk, the handler's hands, cheese packaged for consumption and different points flowchart of processing. Confirmation of the molecular species of the isolates and the presence of genes encoding enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED and TSST-1 toxin, were made from the amplification of specific fragments of genomic DNA. Among the 41 (29.3%) of strains confirmed as S. aureus, 25 (61%) were positive in the research of genes encoding staphylococcal toxins. Points higher frequency of toxigenic strains of S. aureus were the hands of the handler (16.0%), raw milk receiving tank (12.0%), pasteurized milk (12.0%) and Frescal Minas Type Cheese ready for consumption (12.0%). The gene encoding enterotoxin most frequently identified was the sea. In determining the potential toxigenic strains with genes encoding enterotoxins by immunodiffusion, only one strain isolated from the inside surface of the storage tank of raw milk was the producer of enterotoxin SEC. There was genetic variability among the 41 strains of S. aureus isolated, since they were identified by 22 different PFGE pulsotypes. The results obtained allow the adoption of measures to improve the processing of Frescal Minas Type Cheese to reduce the potential risk that these toxins can pose to the health of consumers of this product

Isolation and identification of Yersinia enterocolitica in bovine milk samples of bulk tanks from dairy farms in São Paulo, Brazil / Isolamento e identificação de Yersinia enterocolitica em amostras de leite cru bovino a partir de tanques de expansão, São Paulo, Brasil

Milk and its derivatives are good substrates for the proliferation of pathogenic and quality-deteriorating microorganisms, demanding rigorous care with milking, processing, and storage. Among the various bacteria that can grow in raw refrigerated milk, Yersinia enterocolitica, is an invasive enteropathogen of humans. This bacterium can cause a number of intestinal and extraintestinal clinical symptoms, ranging from mild gastroenteritis to mesenteric lymphadenitis, similar to appendicitis. To evaluate the prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica in raw milk from bulk milk tanks located in the State of São Paulo, 102 bovine milk samples (one per dairy farm) were evaluated by microbiological analyses, followed by biochemical tests PCR and genetic sequencing. Microbiological testing did not isolate Y. enterocolitica. However, PCR analysis revealed six samples that were positive for Y. enterocolitica (5.9%), confirmed by genetic sequencing. Only the inv gene was detected, which is present in virulent and avirulent Y. enterocolitica strains. There was great difficulty in microbiological isolation due to the difficulty of competitiveness of Y. enterocolitica in a very rich microbiota of raw milk. Although virulence genes known to be present in potentially pathogenic strains of Y. enterocolitica have not been identified, the presence of this pathogen in milk from expansion tanks...

O leite e seus derivados possuem substratos que favorecem o desenvolvimento de micro-organismos patogênicos e deteriorantes, devido a isso, cuidados rigorosos são exigindo durante a ordenha, processamento e seu armazenamento. Dentre os vários grupos de bactérias que podem contaminar o leite refrigerado cru está Yersinia enterocolitica. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante à apendicite. Para avaliar a prevalência de Y. enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, por análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Y. enterocolitica pelas provas microbiológicas clássicas. No entanto, a análise de PCR, realizada diretamente do leite, revelou seis (6) amostras positivas para Y. enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, que pode estar presente em cepas virulentas e avirulentas. Houve dificuldade de isolamento microbiológico devido à dificuldade de competitividade da Y. enterocolitica em uma microbiota muito rica do leite cru. Ainda que não tenham sido identificados os genes de virulência que sabidamente estão...

Associação de agentes patogênicos isolados em análise microbiológica da água, com a presença de mastite clínica ou subclínica, em propriedades leiteiras da região de Cerqueira César-SP

Este trabalho objetivou pesquisar a relação entre os microrganismos patogênicos isolados e identificados em água utilizada na ordenha, com o isolamento e identificação dos mesmos em amostras de leite, de quartos mamários apresentando mastite clínica ou subclínica nas mesmas propriedades. Foram utilizadas 16 propriedades rurais leiteiras, escolhidas aleatoriamente, na região de Cerqueira César - SP, que utilizavam ordenha mecânica. A água utilizada na ordenha foi classificada em relação à presença de coliformes totais e fecais, como: dentro dos padrões ou fora dos padrões de potabilidade humana. Nos resultados obtidos, 94% das amostras foram classificadas como fora dos padrões em relação a coliformes totais e fecais. Os microrganismos identificados foram: Escherichia coli (51%), Enterobacter spp (25%), Enterobacter cloacae (8%) Edwardsiella tarda (8%) e Klebsiella oxytoca (8%). Em relação ao leite, foram analisadas 373 amostras provenientes de vacas em lactação, com mastite clínica (n=19; 5%) e subclínica (n=354; 95%). Os animais com mastite subclínica foram identificados pela contagem de células somáticas (CCS), utilizando-se o aparelho eletrônico (Somacount 300, Bentley), onde a média observada foi de 1.631 x 103 células/mL. Os principais microrganismos identificados foram: Staphylococcus aureus (30%), Corynebacterium bovis (23%) e Staphylococcus spp (15%). Conforme os dados obtidos, os agentes coliformes encontrados na água, utilizada na ordenha, não estavam presentes nas análises das amostras de leite dos quartos mamários com mastite clínica ou subclínica das respectivas propriedades, demonstrando não haver associação entre a qualidade da água e a ocorrência de mastite

The aim of present study was to research the relation between isolated and identified pathogenic microorganisms on the water utilized in milking with isolation and identification of the ones on milk samples of teats showing clinic or subclinic mastitis. Sixteen milk farms were chose in a randomized way, in Cerqueira Cesar - SP town, that used mechanical milking. Water of the farms was classified in relation to presence of totals and fecal coliforms such as: in the standard or out of the standard of human potability. On the results obtained, 94% of the samples were classified as being out of the standards related to total and fecal coliforms. The identified microorganisms were Escherichia coli (51%), Enterobacter spp (25%), Enterobacter cloacae (8%), Edwardsiella tarda (8%) and Klebsiella oxytoca (8%). Related to the milk samples, 373 samples by cows in sukling were analyzed, presenting clinic mastitis (n=19; 5%) and subclinic mastitis (n=354; 95%). Animals presenting subclinic mastitis were identified by count of somatic cells (CSC), utilizing electronic equipment (Somacount 300 - Bentley), where the mean found was 1.631 thousand cells/mL. The main identified microorganisms were Staphylococcus aureus (30%), Corynebacterium bovis (23%) and Staphylococcus spp (15%). As according to the resulted obtained, coliforms agents found on the water, used in the milking, weren't present on the analysis of the milk samples of quarter presenting clinic or subclinic mastitis on the respective farms, showing that there wasnþt an association between water quality and mastitis occurrence