Adenocarcinoma pulmonar associado à infecção por Mycobacterium sp. em vaca - relato de caso / [Pulmonary adenocarcinoma associated with infection by Mycobacterium sp. in a cow - case report]

Descrevem-se os aspectos clínicos, anatomopatológicos, imuno-histoquímicos, microbiológicos e moleculares de um caso de adenocarcinoma pulmonar associado à infecção por Mycobacterium sp. em uma vaca. O animal apresentou hiporexia, emagrecimento, vocalizações, postura ortopneica, ingurgitamento da jugular, estase venosa positiva, gemido expiratório e morte. Na necropsia, os pulmões estavam aumentados e apresentavam, na superfície pleural, nódulos branco-amarelados, firmes, multifocais a coalescentes, interpostos por áreas avermelhadas. Ao corte, os nódulos aprofundavam-se ao parênquima e possuíam múltiplos focos de aspecto caseoso e friável e áreas de mineralização. O saco pericárdico e os linfonodos traqueobrônquicos, ilíacos, lombares aórticos e mamários apresentavam lesões semelhantes. Histologicamente, observou-se neoformação carcinomatosa associada a áreas multifocais de necrose e mineralização. As células neoplásicas foram fortemente imunomarcadas pelo anticorpo antipancitoqueratina AE1/AE3. Na cultura microbiológica de fragmentos dos pulmões, houve crescimento de colônias bacterianas compatíveis com micobactérias atípicas. O sequenciamento molecular submetido ao BLASTn identificou o Mycobacterium sp. WCM 7299 (ID: gb|KJ873243.1|).(AU)

The clinical, anatomopathological, immunohistochemical, microbiological and molecular aspects of a case of pulmonary adenocarcinoma associated with infection by Mycobacterium sp. in a cow are described. The animal presented hyporexia, weight loss, vocalizations, orthopneic posture, jugular engorgement, positive venous stasis, expiratory groaning and death. At necropsy, the lungs were enlarged and presented firm, multifocal to coalescent yellowish nodules, interposed by reddish areas on the pleural surface. At cut, the nodules deepened to the parenchyma and had multiple foci of caseous and friable appearance and areas of mineralization. The pericardial sac and tracheobronchial, iliac, aortic lumbar and mammary lymph nodes showed similar lesions. Histologically, a carcinomatous neoformation, associated with multifocal areas of necrosis and mineralization, was observed. Neoplastic cells were strongly immunolabelled by anti-PanCytokeratin antibody AE1/AE3. Microbiological culture of lung fragments showed growth of bacterial colonies compatible with atypical mycobacteria. Molecular sequencing submitted to BLASTn identified the Mycobacterium sp. WCM 7299 (ID: gb|KJ873243.1|).(AU)

Diversidade de carrapatos (Acari: Ixodidae) em animais silvestres recebidos pelo Zoológico Municipal de Guarulhos / Tick diversity (Acari: Ixodidae) on wild animals received by the Municipal Zoo of Guarulhos

O Zoológico Municipal de Guarulhos, localizado no estado de São Paulo, recebe e recupera animais silvestres do próprio município e de alguns municípios limítrofes. Entre os anos de 1997 e 2016 foram coletados carrapatos de animais silvestres (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus e Hydrochoerus hydrochaeris) atendidos pelo Zoológico. Foram identificadas as seguintes espécies de carrapatos: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca e Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899 e Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Apesar de todas as associações carrapato-hospedeiro já terem sido previamente relatadas no território brasileiro, o presente estudo registra pela primeira vez um ginandromorfo de A. dubitatum.

The Municipal Zoo of Guarulhos, located in the state of São Paulo, receives and recovers wild animals from the Guarulhos municipality and from some neighboring municipalities. Between the years of 1997 and 2016 ticks were collected on wild animals (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus, and Hydrochoerus hydrochaeris) attended by the Zoo. The following tick species have been identified: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca and Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899, and Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Although all tick-host associations have previously been reported in Brazilian territory, the present study records for the first time a gynandromorph of A. dubitatum.

Diversidade de carrapatos (Acari: Ixodidae) em animais silvestres recebidos pelo Zoológico Municipal de Guarulhos / Tick diversity (Acari: Ixodidae) on wild animals received by the Municipal Zoo of Guarulhos

O Zoológico Municipal de Guarulhos, localizado no estado de São Paulo, recebe e recupera animais silvestres do próprio município e de alguns municípios limítrofes. Entre os anos de 1997 e 2016 foram coletados carrapatos de animais silvestres (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus e Hydrochoerus hydrochaeris) atendidos pelo Zoológico. Foram identificadas as seguintes espécies de carrapatos: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca e Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899 e Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Apesar de todas as associações carrapato-hospedeiro já terem sido previamente relatadas no território brasileiro, o presente estudo registra pela primeira vez um ginandromorfo de A. dubitatum.(AU)

The Municipal Zoo of Guarulhos, located in the state of São Paulo, receives and recovers wild animals from the Guarulhos municipality and from some neighboring municipalities. Between the years of 1997 and 2016 ticks were collected on wild animals (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus, and Hydrochoerus hydrochaeris) attended by the Zoo. The following tick species have been identified: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca and Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899, and Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Although all tick-host associations have previously been reported in Brazilian territory, the present study records for the first time a gynandromorph of A. dubitatum.(AU)

Determinação da dose inseminante e embriogênese na fertilização artificial de tambaqui (Colossoma macropomum) / Determination of insemination dose and embryonic development in the artificial fertilization of tambaqui (Colossoma macropomum)

Determinou-se a dose inseminante para fertilização artificial e descreveu-se o desenvolvimento embrionário de tambaqui (Colossoma macropomum). Os gametas foram coletados de reprodutores induzidos hormonalmente. Foi realizada fertilização artificial nas proporções de espermatozoides/ovócito de D1-50.666; D2-75.999; D3-101.332; D4-126.665; D5-151.998. O desenvolvimento embrionário foi acompanhado por meio de observações periódicas em estereoscópio até a eclosão dos ovos. Na fase de fechamento do blastóporo foi calculada a taxa de fertilização nas diferentes doses inseminantes. A porcentagem de fertilização aumentou de forma linear segundo a equação Ŷ =0,050 + 0,00000773X (R²=97,5), atingindo um platô em 84% na proporção de 102.486 espermatozoides/ovócito. Os embriões apresentaram segmentação meroblástica discoidal, típica de ovos telolécitos, com eclosão ocorrendo aos 357 horas-grau após a fertilização. Conclui-se que o desenvolvimento embrionário de tambaqui obedece ao esperado para peixes com ovos telolécitos e recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 100.000 espermatozoides/ovócito na rotina de fertilização artificial dessa espécie.(AU)

The objective of this research was to determine the insemination dose for artificial fertilization and describe the embryonic development of tambaqui (Colossoma macropomun). The gametes were collected from induced breeding hormonally. An artificial fertilization was performed with different sperm/oocyte ratios of D1-50666, D2-75999, D3-101 332, 126 665-D4, D5-151 998 sperm/oocyte. Embryonic development was monitored through periodic stereoscopic observations until hatching. When embryos reached the blastopore closure stage, the rate of fertilization in different insemination doses was calculated. A regression equation was estimated to determine the ideal proportion of the gametes. The fertilization rate increased linearly according to the equation Ŷ = 0.050 + 0.00000773 X (R² = 97.5), up to the proportion of 102.486 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 84%. The embryonic development of tambaqui was meroblastic discoidal, as expected from telolecithal eggs and we recommend the use of the insemination dose of approximately 100.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization of tambaqui.(AU)

Efficiency of inactive vaccines against contagious agalactia in Brazil / Eficiência de vacinas inativadas contra agalaxia contagiosa no Brasil

This paper aims to evaluate the efficiency of three inactive vaccines against contagious agalactia prepared with samples of Mycoplasma agalactiae isolated in Brazil and different adjuvants. Vaccine 1 adsorbed with aluminum hydroxide was administered in 23 goats (Gc1) and 13 sheep (Gov1); vaccine 2 containing Montanide IMS-2215-VG was administered in 22 goats (Gc2) and 12 sheep (Gov2) and vaccine 3, containing Montanide Gel-01 was administered in 22 goats (Gc3) and 12 sheep (Gov3). All animals were negative for Ma at indirect ELISA and received two doses of 2mL each, subcutaneously, within a 21 day interval. Five animals from each species were used as control. Seventy-five days after the booster, four animals from each vaccinated group and two from the control group were challenged with 5mL of Ma culture containing 10(7)cfu/mL, orally and through immersion of the female's udder in lactation. The serological response was analyzed during vaccination days (0 and 21) and at 51, 81, 111, 141 and 171 days after vaccination. The collection and analysis of the challenged animals were conducted at the day of the challenge (D0) and 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days after the challenge. The three vaccines induced the production of antibodies, having no significant statistical difference (p<0.05). Animals from groups Gc1, Gc2 and Gov2 developed higher levels of antibodies, with significant statistical difference compared to the other vaccinated group and control group (p<0.05). After the challenge, the animals from the control presented an increase in regional lymph nodes and conjunctivitis, mastitis and arthritis. In four vaccinated animals, discrete conjunctivitis and congestion of the episcleral veins was observed. It is concluded that vaccines 1 and 2 induced levels of protective antibodies in goats and sheep, sufficient for clinical protection of the animals submitted to the experimental infection, indicating its use on the prevention of contagious agalactia.(AU)

Este trabalho tem como objetivo avaliar a eficácia de três vacinas inativadas contra agalaxia contagiosa, preparadas com amostra de Mycoplasma agalactiae isolada no Brasil e diferentes adjuvantes. A vacina 1, adsorvida com hidróxido de alumínio, foi administrada em 23 caprinos (Gc1) e 13 ovinos (Gov1); a vacina 2, contendo Montanide IMS-2215-VG, foi administrada em 22 caprinos (Gc2) e 12 ovinos (Gov2); e a vacina 3, contendo Montanide Gel-01 foi administrada em 22 caprinos (Gc3) e 12 ovinos (Gov3). Todos os animais eram negativos para Ma no ELISA indireto e receberam duas doses de 2mL cada, por via subcutânea, com intervalo de 21 dias. Cinco animais de cada espécie foram utilizados como controle. Setenta e cinco dias após o reforço, quatro animais de cada grupo vacinado e dois do grupo controle foram desafiados com 5mL de cultura de Ma contendo 10(7)ufc/mL, por via oral e pela imersão dos tetos das fêmeas em lactação. A resposta sorológica foi analisada nos dias da vacinação (zero e 21) e aos 51, 81, 111, 141 e 171 dias pós-vacinação. As coletas e análises dos animais desafiados foram realizadas no dia do desafio (D0) e sete, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias pós-desafio. As três vacinas induziram produção de anticorpos, não havendo diferença estatisticamente significativa entre caprinos e ovinos (P>0,05). Animais dos grupos Gc1, Gc2 e Gov2 produziram níveis de anticorpos mais elevados, com diferença estatisticamente significativa em relação aos demais grupos vacinados e ao grupo controle (P<0,05). Após o desafio, os animais do grupo controle apresentaram aumento de linfonodos regionais e conjuntivite, mastite e artrite. Em quatro animais vacinados, foi observada discreta conjuntivite e congestão dos vasos episclerais. Conclui-se que as vacinas 1 e 2 induziram níveis de anticorpos protetores em caprinos e ovinos suficientes para proteção clínica dos animais submetidos à infecção experimental, podendo ser indicadas para prevenção da agalaxia contagiosa.(AU)

Western blot para o diagnóstico das infecções pelos lentivírus de pequenos ruminantes em caprinos: um método simples para a produção de antígeno

ABSTRACT The serodiagnosis of small ruminant lentivirus (SRLV) infections in goats and sheep is usually performed by the agar-gel immunodiffusion technique (AGID) and by ELISA. Therefore, the western blot (WB) is the choice for the definition of antigen recognition patterns during the disease progression, being potentially useful for the diagnosis itself. In the present study, the antigen used for WB was obtained by a novel simple purification procedure: the dialysis of the supernatant of infected cultured cells, followed by centrifugation in sucrose gradient. Proteins in the pellet were separated by SDS-PAGE at 10% density and transferred to nitrocellulose membranes in a semi-dry blotting device. After development, five viral proteins were recognized by the standard positive serum sample, with molecular weights of 14-16, 25, 40, 50 and 70 kDa respectively. All 8 AGID positive goat serum samples recognized at least one band in the immunoblot, with different intensities. The total number of bands recognized by each serum sample varied considerably. A positive reaction to gp40 was observed with 4 sera, although rather weak in 3 cases. Two samples were reactive to p16 and two others to gp50, although weakly. Curiously, no serum was reactive to the 70 kDa antigen, recognized by the standard positive serum sample. These results suggest that the WB can be effectively used for the routine serodiagnosis of viral caprine arthritis encephalitis infection (CAEV). It can also support further studies on antigen recognition patterns with the new antigen provided by the novel simplified purification system of viral components described here.

RESUMO O sorodiagnóstico das lentiviroses de caprinos e ovinos é realizado principalmente pela imunodifusão em gel de agar (AGID) e/ou ELISA. Embora relativamente simples, esses métodos não identificam os antígenos virais reconhecidos na resposta imune do animal examinado, por isso o western blot (WB) vem ganhando maior relevância como ferramenta de diagnóstico dessas enfermidades. Neste trabalho, o antígeno utilizado no WB foi obtido através de um sistema simplificado de purificação: concentração por diálise do sobrenadante de culturas celulares infectadas, seguido de centrifugação em gradiente contínuo de sacarose. A separação das proteínas virais foi obtida por SDS-PAGE a 10% e a transferência para membranas de nitrocelulose realizada pelo sistema semi-úmido. A revelação das membranas mostrou reconhecimento pelo soro padrão positivo de cinco proteínas, com pesos moleculares de 14-16, 25, 40, 50 e 70 kDa. Todas as 8 amostras de soro caprino, positivas na ADIG, reconheceram pelo menos uma banda proteíca no immunoblot, variando contudo o número de bandas reconhecidas. Reação positiva à glícoproteína 40 (gp 40) foi observada em quatro animais, com intensidade de reação discreta em três deles. Dois animais apresentaram reação positiva à proteína 16 (p16), e dois à gp 50, de pouca intensidade. Quanto à gp 70, proteína que, embora reagisse com o soro padrão positivo, não foi reconhecida por nenhum dos soros testados. Estes resultados sugerem que o WB pode ser empregado para o sorodiagnóstico rotineiro das lentiviroses, ensejando estudos mais amplos do padrão de reconhecimento dos antígenos apresentados por este novo sistema de purificação parcial de componentes virais.

Utilização de um contêiner modelo Celle modificado para resfriamento e transporte de sêmen eqüino

A modified Celle container was developed for equine semen cooling and transportation. It was possible to inseminate 100 mares with 148 estral cycles. Each inseminating dose contained 400 million motile spermatozoa in 15ml extended semen in dry skim milk-glucose extender, transported for 215 min at 14ºC. The conception rates, at first cycle, and conception/cycle were 56 and 52%, respectively. During a field trial, the container propitiated a cooling rate of -0,03ºC/min between 19ºC and 9ºC, the cold shock zone. However, in a laboratory assessment the cooling rate was more accelerated. The container allowed cooling, simultaneously, of eight individual insemination doses with minimal aeration.

Desenvolveu-se o contêiner modelo Celle modificado para o resfriamento e transporte de sêmen eqüino. O contêiner possibilitou a inseminação de 100 éguas de diversas categorias reprodutivas, em 148 ciclos estrais. Foram utilizadas doses inseminantes de 400 milhões de espermatozóides móveis em 15ml de sêmen diluído em diluidor de leite em pó desnatado/glicose, transportado por um período médio de 215 minutos e temperatura final de 14ºC. As taxas de concepção ao primeiro ciclo e concepção/ciclo foram de 56 e 52%, respectivamente. O contêiner propiciou, durante seu uso em campo, taxa de resfriamento de -0,03ºC/min entre 19ºC e 9ºC, faixa do choque térmico. No entanto, avaliada em condições de laboratório, a taxa de resfriamento foi mais acelerada. O contêiner utilizado permite o resfriamento simultâneo de oito doses inseminantes individualizadas e com mínima aeração.

DIVERSIDADE DE CARRAPATOS (ACARI: IXODIDAE) EM ANIMAIS SILVESTRES RECEBIDOS PELO ZOOLÓGICO MUNICIPAL DE GUARULHOS

O Zoológico Municipal de Guarulhos, localizado no estado de São Paulo, recebe e recupera animais silvestres do próprio município e de alguns municípios limítrofes. Entre os anos de 1997 e 2016 foram coletados carrapatos de animais silvestres (Cariama cristata, Buteo brachyurus, Alouatta guariba, Bradypus variegatus, Tamandua tetradactyla, Puma concolor, Cerdocyon thous, Nasua nasua, Mazama gouazoubira, Didelphis aurita, Sphiggurus villosus, Myocastor coypus e Hydrochoerus hydrochaeris) atendidos pelo Zoológico. Foram identificadas as seguintes espécies de carrapatos: Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772), Amblyomma calcaratum Neumann, 1899, Amblyomma dubitatum Neumann, 1899, Amblyomma longirostre (Koch, 1844), Amblyomma nodosum Neumann, 1899, Amblyomma parkeri Fonseca e Aragão, 1952, Amblyomma sculptum Berlese, 1888, Amblyomma varium Koch, 1844, Haemaphysalis juxtakochi Cooley, 1946, Ixodes loricatus Neumann, 1899 e Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Latreille, 1806). Apesar de todas as associações carrapato-hospedeiro já terem sido previamente relatadas no território brasileiro, o presente estudo registra pela primeira vez um ginandromorfo de A. dubitatum.