Ativação de células de memória na produção de anticorpos e na expressão de células IgM positivas no baço de tilápias-do-nilo / Activation of memory cells in the antibody production and the expression of IgM positive cells in Nile tilapia spleen

O presente trabalho avaliou o papel do baço no armazenamento e na reativação das linhagens de células B, representadas por células IgM positivas imunomarcadas no tecido esplênico, bem como a funcionalidade dessas células, sobre a cinética dos linfócitos e na produção sistêmica de anticorpos em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus). Foram separados dois grupos: grupo memória, constituído por peixes previamente imunizados com hemácia de carneiro a 2,5%, para a geração da memória imune, e o grupo naive, que recebeu o mesmo volume de solução salina a 0,65%. Após 32 dias, os dois grupos foram submetidos a uma nova dose do antígeno na mesma concentração, volume e via de inoculação. A reativação dos clones de memória foi evidenciada pelo aumento do número de células IgM positivas no baço do grupo memória no dia zero/pré-imune. Além disso, o mesmo grupo apresentou aumento dos títulos de anticorpos séricos no 14º dia e no número absoluto de linfócitos no 21º dia em relação ao grupo naive. Esses resultados sugerem que o baço não seja apenas um local de armazenamento, mas também de reativação de células B de memória em tilápia-do-nilo.(AU)

This work aimed to evaluate the role of the spleen in storage and reactivation of the memory B cells, represented by IgM positive cells and the systemic production of sheep antibodies anti-red cell in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Two groups were established: the memory group, containing fish previously immunized with a 2,5% sheep anti-red cell, to generate the immune memory; and the naive group, containing fish that received a 0,65% saline solution. After 32 days, both groups were subjected to a new dose of the same antigen at the same concentration, volume, and inoculation via. The memory clones reactivation was correlated to the increase of the IgM positive cells in the spleen in the memory group at 0 day. The memory group showed an increase in the absolute number of lymphocytes at 21 days and an increase in the antibodies at 14 days after inoculation when compared to the naive group. The results suggest that the spleen may be a storage and reactivation place of memory B cells in Nile tilapia.(AU)

Deformities in reared cobia, Rachycentron canadum L. and grouper, Epinephelus marginatus, in São Paulo state coast, Brazil: case report / Deformidades em cobias, Rachycentron canadum L, e garoupas, Epinephelus marginatus, cultivadas na costa do estado de São Paulo, Brasil: relato de caso

Skeletal deformities are frequent problems in cultured fish populations due mainly to unfavorable abiotic conditions, inappropriate nutrition, and genetic factors. These may cause erratic swimming, decrease of conversion rate, growth, and market value. The aim of this case report was to present the occurrence of deformities in juvenile cobia and groupers from an offshore marine farm in Ilhabela, São Paulo, Brazil. Nine cobias and seven juvenile groupers, that presented deformities, were euthanized and fixed in 10% formaldehyde. They were tagged, processed, and stained with "Alcian Blue" (AB) and "Alizarin Red-S" (ARS) for visualization of cartilage and bone tissue, respectively. After evisceration, radiographic examination was performed. The deformities observed in cobia were atrophy of the operculum, disorganization of the gill lamellae, deformity of the lower jaw, kyphosis, and scoliosis. Groupers presented lower jaw deformity and saddleback syndrome. The farm studied in this case report had poor management standards, fed commercial feed for freshwater herbivorous fish and cooked sardines, high inbreeding and absence of adequately trained professionals to manage these species. The sum of these factors must have directly influenced the appearance of these deformities. It is necessary to control this situation to minimize the incidence of malformations that have economic impacts to farmers.(AU)

As deformidades esqueléticas são problemas frequentes em populações de peixes cultivados devido, principalmente, a condições abióticas desfavoráveis, nutrição inapropriada e fatores genéticos. Estas podem causar natação errática, diminuição do índice de conversão, do crescimento e do valor no mercado. O objetivo deste relato de caso foi apresentar a ocorrência de deformidades em cobias e garoupas juvenis provenientes de uma fazenda marinha em sistema offshore, em Ilhabela, São Paulo, Brasil. Nove cobias e sete garoupas juvenis, que apresentavam deformidades, foram sujeitos à eutanásia e fixados em formol a 10%. Os espécimes foram registrados, processados e corados com "Alcian Blue" (AB) e "Alizarin Red-S" (ARS) para visualização de tecido cartilaginoso e ósseo, respectivamente. Os peixes foram eviscerados para o exame radiográfico. As deformidades observadas em cobia foram: atrofia do opérculo, desorganização das lamelas branquiais, deformidade do maxilar inferior, cifose e escoliose. As garoupas apresentaram deformidade do maxilar inferior e síndrome de Saddleback. Os peixes deste relato de caso estiveram sob manejo deficiente, alimentados com ração comercial para peixes herbívoros de água doce e sardinhas cozinhadas, alta consanguinidade e ausência de profissionais adequadamente treinados para o manejo dessas espécies. A soma desses fatores influenciou diretamente na aparição dessas deformidades, precisando ser controlados para minimizar a incidência de malformações que tenham impacto econômico para os produtores.(AU)

Deformities in reared cobia, Rachycentron canadum L. and grouper, Epinephelus marginatus, in São Paulo state coast, Brazil: case report / Deformidades em cobias, Rachycentron canadum L, e garoupas, Epinephelus marginatus, cultivadas na costa do estado de São Paulo, Brasil: relato de caso

Skeletal deformities are frequent problems in cultured fish populations due mainly to unfavorable abiotic conditions, inappropriate nutrition, and genetic factors. These may cause erratic swimming, decrease of conversion rate, growth, and market value. The aim of this case report was to present the occurrence of deformities in juvenile cobia and groupers from an offshore marine farm in Ilhabela, São Paulo, Brazil. Nine cobias and seven juvenile groupers, that presented deformities, were euthanized and fixed in 10% formaldehyde. They were tagged, processed, and stained with "Alcian Blue" (AB) and "Alizarin Red-S" (ARS) for visualization of cartilage and bone tissue, respectively. After evisceration, radiographic examination was performed. The deformities observed in cobia were atrophy of the operculum, disorganization of the gill lamellae, deformity of the lower jaw, kyphosis, and scoliosis. Groupers presented lower jaw deformity and saddleback syndrome. The farm studied in this case report had poor management standards, fed commercial feed for freshwater herbivorous fish and cooked sardines, high inbreeding and absence of adequately trained professionals to manage these species. The sum of these factors must have directly influenced the appearance of these deformities. It is necessary to control this situation to minimize the incidence of malformations that have economic impacts to farmers.(AU)

As deformidades esqueléticas são problemas frequentes em populações de peixes cultivados devido, principalmente, a condições abióticas desfavoráveis, nutrição inapropriada e fatores genéticos. Estas podem causar natação errática, diminuição do índice de conversão, do crescimento e do valor no mercado. O objetivo deste relato de caso foi apresentar a ocorrência de deformidades em cobias e garoupas juvenis provenientes de uma fazenda marinha em sistema offshore, em Ilhabela, São Paulo, Brasil. Nove cobias e sete garoupas juvenis, que apresentavam deformidades, foram sujeitos à eutanásia e fixados em formol a 10%. Os espécimes foram registrados, processados e corados com "Alcian Blue" (AB) e "Alizarin Red-S" (ARS) para visualização de tecido cartilaginoso e ósseo, respectivamente. Os peixes foram eviscerados para o exame radiográfico. As deformidades observadas em cobia foram: atrofia do opérculo, desorganização das lamelas branquiais, deformidade do maxilar inferior, cifose e escoliose. As garoupas apresentaram deformidade do maxilar inferior e síndrome de Saddleback. Os peixes deste relato de caso estiveram sob manejo deficiente, alimentados com ração comercial para peixes herbívoros de água doce e sardinhas cozinhadas, alta consanguinidade e ausência de profissionais adequadamente treinados para o manejo dessas espécies. A soma desses fatores influenciou diretamente na aparição dessas deformidades, precisando ser controlados para minimizar a incidência de malformações que tenham impacto econômico para os produtores.(AU)

Ativação de células de memória na produção de anticorpos e na expressão de células IgM positivas no baço de tilápias-do-nilo / Activation of memory cells in the antibody production and the expression of IgM positive cells in Nile tilapia spleen

O presente trabalho avaliou o papel do baço no armazenamento e na reativação das linhagens de células B, representadas por células IgM positivas imunomarcadas no tecido esplênico, bem como a funcionalidade dessas células, sobre a cinética dos linfócitos e na produção sistêmica de anticorpos em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus). Foram separados dois grupos: grupo memória, constituído por peixes previamente imunizados com hemácia de carneiro a 2,5%, para a geração da memória imune, e o grupo naive, que recebeu o mesmo volume de solução salina a 0,65%. Após 32 dias, os dois grupos foram submetidos a uma nova dose do antígeno na mesma concentração, volume e via de inoculação. A reativação dos clones de memória foi evidenciada pelo aumento do número de células IgM positivas no baço do grupo memória no dia zero/pré-imune. Além disso, o mesmo grupo apresentou aumento dos títulos de anticorpos séricos no 14º dia e no número absoluto de linfócitos no 21º dia em relação ao grupo naive. Esses resultados sugerem que o baço não seja apenas um local de armazenamento, mas também de reativação de células B de memória em tilápia-do-nilo.(AU)

This work aimed to evaluate the role of the spleen in storage and reactivation of the memory B cells, represented by IgM positive cells and the systemic production of sheep antibodies anti-red cell in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Two groups were established: the memory group, containing fish previously immunized with a 2,5% sheep anti-red cell, to generate the immune memory; and the naive group, containing fish that received a 0,65% saline solution. After 32 days, both groups were subjected to a new dose of the same antigen at the same concentration, volume, and inoculation via. The memory clones reactivation was correlated to the increase of the IgM positive cells in the spleen in the memory group at 0 day. The memory group showed an increase in the absolute number of lymphocytes at 21 days and an increase in the antibodies at 14 days after inoculation when compared to the naive group. The results suggest that the spleen may be a storage and reactivation place of memory B cells in Nile tilapia.(AU)

Transferência passiva de soro hiperimune anti-Streptococcus agalactiae e seu efeito profilático em tilápias-do-nilo infectadas experimentalmente: sobrevivência e títulos de anticorpos / Passive transfer of hyperimmune serum anti Streptococcus agalactiae and its prophylactic effect on Nile tilapia experimentally infected

A bactéria Streptococcus agalactiae é um potente agente causador de surtos por doenças bacterianas em peixes. O estresse provocado pelo manejo zootécnico e pela má qualidade ambiental torna a tilápia susceptível às infecções por essa bactéria. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resistência de tilápias-do-nilo imunizadas com soro hiperimune anti-S. agalactiae, posteriormente desafiadas com cepa homóloga da mesma bactéria. Após determinação da DL 50 de S. agalactiae, 36 tilápias foram distribuídas em quatro aquários, dois para o grupo controle e dois para inoculação celomática para produção de anticorpos anti-S. agalactiae. No 21° e 28° dias, foi coletado sangue para obtenção de soro hiperimune utilizado na transferência passiva. Em seguida, 30 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos: GI: controle; GII: imunizadas com o soro inativado; GIII: imunizadas com soro ativo. Após 48 horas e sete, 14, 21, 28 e 35 dias, foram realizadas coletas de sangue para titulação de anticorpos anti-S. agalactiae utilizando-se o teste de aglutinação direta. Para avaliar a taxa de sobrevivência, outras 30 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos (GI: controle; GII: imunizadas com soro inativado; GIII: imunizadas com soro ativo). Após 48 horas da imunização, as tilápias foram desafiadas via celomática com 100µL de S. agalactiae e avaliadas duas vezes ao dia, pelo período de 35 dias. Os resultados dos títulos séricos de anticorpos foram detectados pela aglutinação direta até o 21° dia pós-transferência passiva, e, no mesmo período, houve proteção de 80% entre os grupos imunizados com soro inativado e soro ativo contendo anticorpos anti-S. agalactiae. Ao final, os grupos soro inativado e soro ativo apresentaram 60 e 80% de proteção, respectivamente, enquanto no grupo controle 100% dos peixes adoeceram, apresentando sinais graves da infecção, e foram eutanasiados. Não houve diferença estatística significativa na taxa de proteção entre os grupos imunizados.(AU)

The Streptococcus agalactiae bacteria is a potent agent which causes outbreaks of bacterial diseases in fish. The stress caused by management and poor environmental quality makes tilapia susceptible to infections, including by bacterium. The aim of this study was to evaluate the resistance of the Nile tilapia immunized with hyperimmune serum against S. agalactiae subsequently challenged with homologous strain of the same bacteria. After determining the DL 50 of S. agalactiae, 36 tilapias were distributed in 4 aquariums, 2 for the control group and 2 for the group via coelomic, inoculated with the DL 50 for anti-S. agalactiae antibodies production. On the 21st and 28th day blood was collected for the obtainment of hiperimmune serum used in passive transference. Then, 30 tilapias were distributed in 3 aquariums submitted to 3 treatments (GI: control; GII: immunized with inactivated-serum; GIII: immunized with non-inactivated serum). After 48 hours, 7, 14, 21, 28 and 35 days blood collections were done for anti-S. agalactiae antibodies titration using the direct agglutination test. For survival evaluation 30 tilapias were distributed in 3 aquariums and submitted to 3 treatments (GI: control; GII: immunized with inactivated-serum; GIII: immunized with non-inactivated serum). After 48 hours of inoculation tilapias were challenged with 100µL of S. agalactiae and monitored twice a day for 35 days. The results showed that titers of antibodies were detected by direct agglutination until the 21st day after passive transference and during the same period the protection between the groups immunized with inactivated serum and non-inactivated serum contending anti-S. agalactiae antibodies was of 80% after challenge with S. agalactiae. In the end, the serum-inactivated serum and active groups had 60 and 80% protection, respectively, while 100% of the fish in the control group developed severe signs of infection and were euthanized. There was no statistical difference in the survival rate between the immunized groups.(AU)

Challenge of pacu (Piaractus mesopotamicus) fed diets supplemented with vitamins C and E by Aeromonas hydrophila under different temperature / Desafio de pacus (Piaractus mesopotamicus) alimentados com dietas suplementadas com vitaminas C e E desafiados por Aeromonas hydrophila em diferentes temperaturas

Pacu Piaractus mesopotamicus fed diets supplemented with three vitamins C and E levels (zero, 250, and 500mg vitamin/kg diet) were challenged with Aeromonas hydrophila under different temperatures. Fish were kept in 300L plastic tanks and fed during the first 60 days with diets without vitamins C and E, in an attempt to reduce vitamin sources. After this period, fish were maintained at an initial density of 14 fish/tank and test diets were offered during 60 days. At the end of the experiment, all fish were infected with 6×10(6)CFU of A. hydrophila/fish, intraperitoneally injected. No interaction of dietary levels of vitamin C vs. E on mortality was observed. Supplementation with vitamins C and E did not decrease the mortality rate of fish challenged with A. hydrophila. Regardless of vitamin supplementation, after challenge, smaller fish showed higher mortality than larger ones and the fish group maintained in an environment under higher temperatures showed higher mortality rate.(AU)

Pacus Piaractus mesopotamicus alimentados com dietas contendo três níveis de vitaminas C e E (zero, 250 e 500mg/kg de ração) foram desafiados, em diferentes temperaturas, com Aeromonas hydrophila. Os peixes foram mantidos em caixas plásticas de 300L e, com o objetivo de reduzir as reservas vitamínicas, durante os primeiros 60 dias, foram alimentados com dietas isentas das vitaminas C e E. Após esse período, os peixes foram estocados na densidade inicial de 14 peixes/caixa e as dietas-teste foram oferecidas durante 60 dias. Ao final do experimento, todos os peixes foram infectados com 6×10(6) UFC de A. hydrophila/peixe, injetada intraperitonealmente. Não houve interação nível de vitamina C vs. nível de vitamina E quanto à mortalidade. A suplementação com as vitaminas C e E não reduziu a taxa de mortalidade dos peixes desafiados com A. hydrophila. Independentemente da suplementação vitamínica, após o desafio, os peixes menores apresentaram maior taxa de mortalidade que os maiores e o grupo mantido em ambiente com temperatura mais alta apresentou maior taxa de mortalidade após o desafio.(AU)

Renal involvement in canine leishmaniasis: a morphological and immunohistochemical study / Envolvimento renal na leishmaniose canina: estudo morfológico e imunoistoquímico

IgG and IgM deposits in kidneys of dogs with visceral leishmaniasis (VL) were studied in 25 symptomatic dogs (case) and 15 asymptomatic dogs (control) by an immunohistochemical method. All tested dogs were positive for VL by polymerase chain reaction, enzyme-linked immunosorbent assay, and indirect immunofluorescence test. Kidney fragments were submitted to immunohistochemical reaction. Many morphological patterns of distribution of subendothelial granules were identified for IgG and IgM in glomerular capillaries: global, segmental, diffuse, or focal. Intensity of immunohistochemical reaction to IgG was not significantly different when comparing the symptomatic and the asymptomatic animal groups by Fisher's exact test. IgM reactions were significantly different between groups (P<0.01). Deposits of IgM on mesangial cells and in inflammatory interstitial infiltrate were rarely seen, although IgG reactions were frequent at these sites. This study concluded that immunohistochemical reactions for IgM were more intense than those observed for IgG in canine VL, and these reactions were characterized by distribution of subendothelial granules in glomerular capillaries.(AU)

Caracterizou-se a deposição de IgG e IgM em rins de cães com leishmaniose visceral (LV) pelo uso da técnica imunoistoquímica. Foram estudados rins de 25 cães sintomáticos (caso) e de 15 cães assintomáticos (controle). Todos os animais foram positivos para leishmaniose pela reação em cadeia da polimerase, pelo ELISA e pela imunofluorescência indireta. Fragmentos renais foram submetidos à reação imunoistoquímica. Diversos padrões morfológicos de distribuição de grânulos subendoteliais de IgG e IgM foram identificados nos capilares glomerulares: global, segmentar, difuso ou focal. A intensidade da reação imunoistoquímica da IgG, medida pelo teste exato de Fisher não diferiu entre os grupos sintomáticos e assintomáticos e a intensidade de reação da IgM foi diferente entre os grupos (P<0,01). Depósitos de IgM nas células mesangiais e no infiltrado inflamatório raramente foram visualizados, no entanto as reações IgG foram freqüentemente visualizadas nesses locais. Concluiu-se que as reações de IgM foram mais intensas que as reações de IgG na LV canina e caracterizam-se pela distribuição de grânulos subendoteliais nos capilares glomerulares.(AU)

Protozoan parasites of Xiphophorus spp. (Poeciliidae) and their relation with water characteristics / Parasitos protozoários de Xiphophorus sp. (Poeciliidae) e a relação deles com as características da água

This work investigated the relationship between water characteristics and infestation of protozoan parasites, Icthyophthirius multifiliis and Trichodina sp., in swordtails (Xiphophorus helleri) and platy (Xiphophorus maculates) collected in an ornamental fish farm in São Paulo, Brazil. Fish were monthly collected from ponds and tanks for one year. The prevalence rates in fish from tanks and ponds were, respectively, 34.2 percent and 22.5 percent for I. multifiliis, and 13 percent and 54.2 percent for Trichodina sp. Increased electric conductivity and pH provoked reduction of I. multifiliis infestation. Low oxygen concentration increased Trichodina sp. infestation. The use of salt to increase the electric conductivity of water was a method to control I. multifiliis. Low dissolved oxygen and the addition of organic fertilizer favored the reproduction of Trichodina sp.(AU)

Investigou-se a relação entre as características da água e a infestação de protozoários parasitos, Icthyophthirius multifiliis e Trichodina sp., em peixe espada, Xiphophorus helleri e em plati, Xiphophorus maculatus, coletados em uma piscicultura de peixes ornamentais no Estado de São Paulo, Brasil. Os peixes foram coletados mensalmente, durante um ano, dos viveiros e das caixas de estocagem. A prevalência da infestação nos peixes das caixas e dos viveiros foram, respectivamente, 34,2 por cento e 22,5 por cento para I. multifiliis e 13 por cento e 54 por cento para Trichodina sp. A elevada condutividade elétrica e o pH da água reduziram a infestação por I. multifiliis. A baixa concentração de oxigênio resultou em aumento na infestação por Trichodina sp. O uso do sal, para aumentar a condutividade elétrica da água, consistiu em um método de controle de I. multifiliis. A redução do oxigênio dissolvido e a adição de fertilizante orgânico favoreceram a reprodução de Trichodina sp.(AU)

Experimental use of fibrin glue derived from snake venom in non-pregnant canine uterus

This study evaluated the use of fibrin glue derived from snake venom in the healing process after canine hysterorrhaphy. Three groups of four animals were submitted to uterine hysterotomy followed by wound closure. In Group 1, double-layer suture was used, the first with Schimieden pattern, the second with Cushing pattern; in Group 2, only fibrin glue; and in Group 3, the same as for Group 1 but with fibrin glue as suture reinforcement. Results indicated that fibrin glue produced less inflammation in the exudative phase, and exacerbated deposition of connective tissue and angiogenesis in the proliferative and maturation phases of the healing process, favoring its evolution.

A comparative study of lesions caused by different parasitic stages of Boophilus Microplus (Canestrini) in the skins of naturally infested taurine and zebuine hosts. The correlation of tick resistence with mast cell counts in the host"s skin / Estudo comparativo de lesões causadas pelos diferentes instares de Boophilus microplus (Canestrini ) na pele de taurinos e zebuínos em infestações naturais. Correlação entre a resistência do hospedeiro e o número de mastócitos dérmicos

Biopsies of skin injuries caused by larvae, nymphs, unengorged and engorged females of Boophilus microplus were collected from five Bos taurus and five Bos indicus steers, which had been bom on the same ranch, aged about 23 months and had been grazing together in the same pasture during the preceding 90 days. Their susceptibilities to the tick had been previously estimated, being the taurine animals around fifteen times as susceptible as the zebuine ones. The biopsies were made in such a manner that the mouth pieces were in the center of the skin fragments. These were immersed for 24 hours in 10% formalin, then processed through usual histopathological techniques and stained either by the haematoxilin-eosin or by Massons trichromic procedures. No morphological differences were found capable of explaining the higher tick susceptibility observed for the taurine hosts as compared to the zebuines. Biopsies from non parasitized skin from the groin region of five B. taurus and five B. indicus steers were fixed in 1% lead subacetate, plus 50% ethanol, plus 1% acetic acid, for 24 hours, which they were histologically processed and stained in 0.1 % toluidin blue. The mast cells were comparatively counted in 80 microscope fields per sample with 100 diameters of magnification and the counts averaged more than twice as high in the zebuine than in the taurine hosts skins. These results

Biópsias de pele lesada por larvas, ninfas e fêmeas engurgitadas de Boophilus microplus foram colhidas de cinco Bos taurus da raça Holandesa e de cinco Bos indicus da raça Gir, adquiridos na mesma propriedade, com aproximadamente 23 meses de idade, e colocados em convivência no mesmo pasto durante 90 dias que precederam este ensaio. O grau de susceptibilidade ao ácaro foi estimado previamente, sendo os zebuínos cerca de 15 vezes mais resistentes que os taurinos. As biópsias foram colhidas de modo que o parasito ficasse localizado no centro do fragmento de pele. Essas peças foram fixadas em formalina a 10% durante 24 h e processadas pelos métodos usuais em histologia seguindo-se a coloração pela técnica da Hematoxilin-Eosin ou do tricrômico de Masson. Não foram constatadas diferenças morfológicas que pudessem ser relacionadas aos diferentes graus de resistência ao parasito entre os taurinos e zebuinos. Biópsias foram colhidas de zonas não lesadas, na região da virilha dos cinco taurinos e dos cinco zebuínos, fixadas em subacetato de chumbo a 1% em solução de etanol 50%, contendo 1% de ácido acético, por 24 h. A seguir os fragmentos foram processados pelas técnicas usuais em histologia e corados pelo método do azul de toluidina 0,1%. Os mastócitos foram contados comparativamente em 80 campos microscópicos, em aumento de 100 vezes. Os resultados mostram que os zebuínos tem mais