In vitro efficacy of teat antiseptics against Staphylococcus aureus strains isolated from bovine mastitis / Eficácia in vitro de antissépticos utilizados no controle da mastite bovina frente a isolados de Staphylococcus aureus

The process of teat disinfection is a widely accepted component of successful mastitis control programs by reducing the number of bacteria on the teat skin and healing teat lesions. For contagious pathogens such as Staphylococcus aureus, post-milking teat disinfection remains a simple, effective and economical practice for prevention of new intramammary infections (IMIs) of lactating dairy cows. Despite the universal acceptance of teat dipping as a method of mastitis control, variations in the susceptibility and resistance profile of mastitis pathogens among antiseptics have been described. Thus, here we sought to explore the in vitro efficacy of the followings antiseptics against S. aureus isolated from IMIs: chlorhexidine (2.0%), chlorine (2.5%), quarternary ammonium (4.0%), lactic acid (2.0%) and iodine (0.6%). We used 50 S. aureus strains isolated from bovine IMIs from 50 dairy herds located at Minas Gerais, São Paulo, Paraná and Rio Grande do Sul States (Brazil). The antiseptics were evaluated at four different specific intervals (15, 30, 60 and 300 s). We found a higher activity for quarternary ammonium and chlorhexidine against S. aureus at all time-points, followed by iodine and then chlorine. Lactic acid treatment produced the worst results for all time-points and strains. Due to variations in the sensitivity and resistance profile of antiseptics against S. aureus isol

O processo de antissepsia dos tetos é uma prática amplamente recomendada no controle da mastite por reduzir o número de bactérias na pele do teto e curar lesões de teto pré-existentes. Para patógenos contagiosos como o Staphylococcus aureus, a antissepsia dos tetos após a ordenha permanece como uma prática simples, efetiva e economicamente viável na prevenção de novas infecções intramamárias (IMIs). No entanto, variações do perfil de susceptibilidade de patógenos causadores de mastite aos antissépticos têm sido descritas. Desta forma, o presente estudo objetivou avaliar a eficácia in vitro dos antissépticos a base de iodo (0,6%), cloro (2,0%), clorexidine (2,5%), compostos quartenários de amônio (4,0%) e ácido láctico (2,0%) utilizados no pré- e pós-dipping em isolados de Staphylococcus aureus de casos de IMIs. Utilizou-se 50 isolados de S. aureus provenientes de 50 propriedades leiteiras localizadas nos Estados de Minas Gerais, São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul Brasil. Os antissépticos foram avaliados em quatro tempos distintos (15 s, 30 s, 60 s e 300 s). Os resultados apontaram para maior eficácia dos compostos quartenário de amônio e do clorexidine, seguido pelo iodo e cloro contra os isolados de S. aureus nos momentos avaliados. O ácido láctico apresentou a menor atividade antisséptica em todos os momentos avaliados. Desta forma, devido a variações no perfil de suscep

Perfil proteico e metabolismo oxidativo de cordeiros experimentalmente infectados pelo Haemonchus contortus e suplementados com selênio e vitamina E

The objective of the present study was to describe the influence of supplementation with selenium and vitamin E on the protein and oxidative profiles of lambs experimentally infected with Haemonchus contortus. Thirty female lambs were divided into four groups as follows: G1 (n=10): infected animals; G2 (n=10): infected and supplemented; G3 (n=5): control; G4 (n=5): non-infected and supplemented. Groups 1 and 2 received 500 H. contortus larvae (L3) orally for a period of 20 days, with 2-day intervals between doses. Supplementation in groups 2 and 4 was performed on day zero by injecting 0.1mg kg-1 of sodium selenite solution (1.67%) and 2,000IU vitamin E through the intramuscular (IM) route. Vitamin E alone was injected once again on day thirty. The blood samples to determine the protein profile (total protein, albumin, alpha, beta and gamma) and oxidative metabolism (species reactive to thiobarbituric acid and glutathione peroxidase (GSPX) were performed on days zero, 20, 30, 45, 60 and 80. The OPG was quantified on days 0, 20, 45 and 80. Regarding the values of total proteins, albumin, beta and gamma globulins, the main differences were observed when the parasitized groups were compared to the supplemented, non-infected group, the latter exhibiting higher values. It is concluded that there is no influence of supplementation with vitamin E and selenium in the protein profile and oxidative metabolism when the lambs are severely parasitized with H. contortus.

Para avaliar a influência da suplementação com selênio e vitamina E sobre o perfil proteico e metabolismo oxidativo de cordeiros infectados experimentalmente pelo Haemonchus contortus, trinta cordeiros fêmeas foram distribuídos em quatro grupos: G1 (n=10): animais infectados; G2 (n=10): infectados e suplementados; G3 (n=5): controle; e G4 (n=5): não infectados e suplementados. Os grupos 1 e 2 receberam 500 larvas de H. contortus (L3), via oral, por um período de 20 dias, com intervalo de dois dias entre as doses. A suplementação nos grupos 2 e 4 foi realizada no dia zero, com 0,1mg kg-1 de Selenito de sódio (1,67%) e com 2.000UI de vitamina E por via intramuscular (IM). Somente a vitamina E foi reaplicada no dia 30. As coletas de sangue para determinação do perfil proteico (proteína total, albumina, alfa, beta e gamaglobulina) e metabolismo oxidativo (espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico-TBARS e a enzima glutationa peroxidase (GSPX) foram realizadas nos dias zero, 20, 30, 45, 60 e 80. OPG foi quantificado nos dias 0, 20 ,45 e 80. Em relação aos valores de proteínas totais, albumina, betaglobulina e gamaglobulina, as principais diferenças foram observadas quando os grupos parasitados foram comparados com o grupo somente suplementado; e este manteve valores mais elevados. Conclui-se que não há influência da suplementação com selênio e vitamina E no perfil proteico e metabolismo oxidativo quando os cordeiros se encontram severamente parasitados por H.contortus.

Perfil proteico e metabolismo oxidativo de cordeiros experimentalmente infectados pelo Haemonchus contortus e suplementados com selênio e vitamina E

The objective of the present study was to describe the influence of supplementation with selenium and vitamin E on the protein and oxidative profiles of lambs experimentally infected with Haemonchus contortus. Thirty female lambs were divided into four groups as follows: G1 (n=10): infected animals; G2 (n=10): infected and supplemented; G3 (n=5): control; G4 (n=5): non-infected and supplemented. Groups 1 and 2 received 500 H. contortus larvae (L3) orally for a period of 20 days, with 2-day intervals between doses. Supplementation in groups 2 and 4 was performed on day zero by injecting 0.1mg kg-1 of sodium selenite solution (1.67%) and 2,000IU vitamin E through the intramuscular (IM) route. Vitamin E alone was injected once again on day thirty. The blood samples to determine the protein profile (total protein, albumin, alpha, beta and gamma) and oxidative metabolism (species reactive to thiobarbituric acid and glutathione peroxidase (GSPX) were performed on days zero, 20, 30, 45, 60 and 80. The OPG was quantified on days 0, 20, 45 and 80. Regarding the values of total proteins, albumin, beta and gamma globulins, the main differences were observed when the parasitized groups were compared to the supplemented, non-infected group, the latter exhibiting higher values. It is concluded that there is no influence of supplementation with vitamin E and selenium in the protein profile and oxidative metabolism when the lambs are severely parasitized with H. contortus.

Para avaliar a influência da suplementação com selênio e vitamina E sobre o perfil proteico e metabolismo oxidativo de cordeiros infectados experimentalmente pelo Haemonchus contortus, trinta cordeiros fêmeas foram distribuídos em quatro grupos: G1 (n=10): animais infectados; G2 (n=10): infectados e suplementados; G3 (n=5): controle; e G4 (n=5): não infectados e suplementados. Os grupos 1 e 2 receberam 500 larvas de H. contortus (L3), via oral, por um período de 20 dias, com intervalo de dois dias entre as doses. A suplementação nos grupos 2 e 4 foi realizada no dia zero, com 0,1mg kg-1 de Selenito de sódio (1,67%) e com 2.000UI de vitamina E por via intramuscular (IM). Somente a vitamina E foi reaplicada no dia 30. As coletas de sangue para determinação do perfil proteico (proteína total, albumina, alfa, beta e gamaglobulina) e metabolismo oxidativo (espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico-TBARS e a enzima glutationa peroxidase (GSPX) foram realizadas nos dias zero, 20, 30, 45, 60 e 80. OPG foi quantificado nos dias 0, 20 ,45 e 80. Em relação aos valores de proteínas totais, albumina, betaglobulina e gamaglobulina, as principais diferenças foram observadas quando os grupos parasitados foram comparados com o grupo somente suplementado; e este manteve valores mais elevados. Conclui-se que não há influência da suplementação com selênio e vitamina E no perfil proteico e metabolismo oxidativo quando os cordeiros se encontram severamente parasitados por H.contortus.

Effect of freezing and preincubaton on isolation of coagulase-negative staphylococci from ewes milk samples / Efeito do congelamento e da pré-incubação sobre o isolamento de estafilococos coagulase-negativo em amostras de leite de ovelhas

Milk samples from 45 halves were collected from lactating ewes to evaluate the effect of freezing and incubation of the whole milk on the qualitative results of bacteriologic culture. Thus, these milk samples were submitted to the following treatments: standard culture technique (T1), incubation for 18h at 37C (T2) and thawing at -20C for 24h (T3). After these periods, the milk samples from T2 and T3 were submitted to standard culture technique. The T2 showed an increase in the proportion of coagulase-negative staphylococci (CNS) recovery compared to T1, although the same cannot be predicted by T3. Conversely, the T2 allows the growth of some bacteria present in clinically healthy teats ducts as Bacillus spp.. The results of the present study indicated that the incubation of the whole milk can be applied to detection of CNS in ewes milk in attempt to reduce the false-negative culture milk samples that can lead to a more efficient use of laboratory resources and reduce costs to herd owners.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do congelamento e da incubação do leite de ovelhas da raça Santa Inês sobre os resultados da cultura bacteriológica. Desta forma, 45 amostras de leite ovino foram coletadas, e submetidas aos seguintes tratamentos: cultura bacteriológica (T1), e simultaneamente incubadas a 37C por 18 horas (T2) e congeladas a -20C por 24 horas (T3). Após esses períodos, as amostras dos T2 e T3 foram submetidas à cultura bacteriológica. O T2 possibilitou aumento no isolamento de estafilococos coagulase-negativo (ECN) comparadas ao T1, não ocorrendo o mesmo com o T3. No entanto, o T2 permitiu o desenvolvimento de bactérias normalmente presentes na microbiota dos ductos dos tetos em ovelhas sadias, como o Bacillus spp.. Os resultados do presente estudo indicam que a incubação pode ser aplicada para a detecção de ECN na tentativa de reduzir resultados falso-negativos na cultura bacteriológica do leite de ovelhas da raça Santa Inês, determinando o uso mais eficiente dos recursos laboratoriais e a redução dos custos para os proprietários.

Quantificação da população de linfócitos B e das subpopulações de linfócitos T em bovinos infectados pelo vírus da leucose enzoótica bovina / Quantification of B cells and T lymphocyte subsets in bovine leukemia virus infected dairy cows

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a frequência e número absoluto de linfócitos B e das subpopulações de linfócitos T em bovinos infectados pelo vírus da leucemia bovina (BLV) com distintos perfis leucocitários conhecidos como não leucêmicos (AL) e com linfocitose persistente (LP). Deste modo, 15 animais foram selecionados e divididos uniformemente em três grupos (negativo, AL e LP). A infecção pelo vírus da BLV foi detectada por imunodifusão em ágar gel e por ensaio imunoenzimático. A quantificação das populações de linfócitos B e T foi determinada por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais. Os resultados do presente estudo apontaram para aumento da população de linfócitos B, e também das células CD5+ e CD11b+, que geralmente são alvo da infecção pelo vírus da BLV, nos animais com LP. Consequentemente pode-se observar redução da porcentagem de linfócitos T, T CD4+ no sangue periférico, e de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ nas células mononucleares do sangue periférico isoladas por gradiente de centrifugação. No entanto, nenhuma alteração no número absoluto de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ no sangue periférico foi encontrada nos animais manifestando LP. Entretanto, encontrou-se correlação alta e significativa entre o número absoluto de linfócitos T e T CD8+ e o número absoluto de linfócitos B no sangue periférico nos animais manifestando LP, não encontrand

The aim of the present trial was to determine the frequencies and absolute number of B and T lymphocytes subpopulations in bovine leukemia virus (BLV)-infected dairy cows with distinct lymphocyte profile known as non-leukemic (AL) and persistent lymphocytosis (PL). Thus, 15 animals were selected and divided uniformly in three groups (negative, AL, PL). The BLV infection was detected by agar gel immunodiffusion and enzyme-linked immunosorbent-assay. The lymphocytes subsets were evaluated using monoclonal antibodies by flow cytometry. The results of the present study pointed out to an increase in B lymphocytes, and also an augment in CD5+ and CD11b+ cells in animals showing PL. Consequently, it can be observed a decrease in the percentage of T cells subsets in these animals. Conversely, no significant alterations in the absolute number of the T lymphocytes, T CD4+ cells and T CD8+ lymphocytes were found in BLV-infected dairy cows with PL. Therefore, the correlation between the absolute numbers of B- and T cell subsets in the peripheral blood applied to each group showed a significant and positive strong correlation between numbers of B cells and T cells or T CD8+ cells in the PL animals, although the same cannot be predicted for T CD4+ lymphocytes. No such correlation was encountered for the AL and negative-control animals.

Effect of freezing and preincubaton on isolation of coagulase-negative staphylococci from ewes milk samples / Efeito do congelamento e da pré-incubação sobre o isolamento de estafilococos coagulase-negativo em amostras de leite de ovelhas

Milk samples from 45 halves were collected from lactating ewes to evaluate the effect of freezing and incubation of the whole milk on the qualitative results of bacteriologic culture. Thus, these milk samples were submitted to the following treatments: standard culture technique (T1), incubation for 18h at 37C (T2) and thawing at -20C for 24h (T3). After these periods, the milk samples from T2 and T3 were submitted to standard culture technique. The T2 showed an increase in the proportion of coagulase-negative staphylococci (CNS) recovery compared to T1, although the same cannot be predicted by T3. Conversely, the T2 allows the growth of some bacteria present in clinically healthy teats ducts as Bacillus spp.. The results of the present study indicated that the incubation of the whole milk can be applied to detection of CNS in ewes milk in attempt to reduce the false-negative culture milk samples that can lead to a more efficient use of laboratory resources and reduce costs to herd owners.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do congelamento e da incubação do leite de ovelhas da raça Santa Inês sobre os resultados da cultura bacteriológica. Desta forma, 45 amostras de leite ovino foram coletadas, e submetidas aos seguintes tratamentos: cultura bacteriológica (T1), e simultaneamente incubadas a 37C por 18 horas (T2) e congeladas a -20C por 24 horas (T3). Após esses períodos, as amostras dos T2 e T3 foram submetidas à cultura bacteriológica. O T2 possibilitou aumento no isolamento de estafilococos coagulase-negativo (ECN) comparadas ao T1, não ocorrendo o mesmo com o T3. No entanto, o T2 permitiu o desenvolvimento de bactérias normalmente presentes na microbiota dos ductos dos tetos em ovelhas sadias, como o Bacillus spp.. Os resultados do presente estudo indicam que a incubação pode ser aplicada para a detecção de ECN na tentativa de reduzir resultados falso-negativos na cultura bacteriológica do leite de ovelhas da raça Santa Inês, determinando o uso mais eficiente dos recursos laboratoriais e a redução dos custos para os proprietários.

Quantificação da população de linfócitos B e das subpopulações de linfócitos T em bovinos infectados pelo vírus da leucose enzoótica bovina / Quantification of B cells and T lymphocyte subsets in bovine leukemia virus infected dairy cows

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a frequência e número absoluto de linfócitos B e das subpopulações de linfócitos T em bovinos infectados pelo vírus da leucemia bovina (BLV) com distintos perfis leucocitários conhecidos como não leucêmicos (AL) e com linfocitose persistente (LP). Deste modo, 15 animais foram selecionados e divididos uniformemente em três grupos (negativo, AL e LP). A infecção pelo vírus da BLV foi detectada por imunodifusão em ágar gel e por ensaio imunoenzimático. A quantificação das populações de linfócitos B e T foi determinada por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais. Os resultados do presente estudo apontaram para aumento da população de linfócitos B, e também das células CD5+ e CD11b+, que geralmente são alvo da infecção pelo vírus da BLV, nos animais com LP. Consequentemente pode-se observar redução da porcentagem de linfócitos T, T CD4+ no sangue periférico, e de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ nas células mononucleares do sangue periférico isoladas por gradiente de centrifugação. No entanto, nenhuma alteração no número absoluto de linfócitos T, T CD4+ e T CD8+ no sangue periférico foi encontrada nos animais manifestando LP. Entretanto, encontrou-se correlação alta e significativa entre o número absoluto de linfócitos T e T CD8+ e o número absoluto de linfócitos B no sangue periférico nos animais manifestando LP, não encontrand

The aim of the present trial was to determine the frequencies and absolute number of B and T lymphocytes subpopulations in bovine leukemia virus (BLV)-infected dairy cows with distinct lymphocyte profile known as non-leukemic (AL) and persistent lymphocytosis (PL). Thus, 15 animals were selected and divided uniformly in three groups (negative, AL, PL). The BLV infection was detected by agar gel immunodiffusion and enzyme-linked immunosorbent-assay. The lymphocytes subsets were evaluated using monoclonal antibodies by flow cytometry. The results of the present study pointed out to an increase in B lymphocytes, and also an augment in CD5+ and CD11b+ cells in animals showing PL. Consequently, it can be observed a decrease in the percentage of T cells subsets in these animals. Conversely, no significant alterations in the absolute number of the T lymphocytes, T CD4+ cells and T CD8+ lymphocytes were found in BLV-infected dairy cows with PL. Therefore, the correlation between the absolute numbers of B- and T cell subsets in the peripheral blood applied to each group showed a significant and positive strong correlation between numbers of B cells and T cells or T CD8+ cells in the PL animals, although the same cannot be predicted for T CD4+ lymphocytes. No such correlation was encountered for the AL and negative-control animals.

In vitro efficacy of teat antiseptics against Staphylococcus aureus strains isolated from bovine mastitis / Eficácia in vitro de antissépticos utilizados no controle da mastite bovina frente a isolados de Staphylococcus aureus

The process of teat disinfection is a widely accepted component of successful mastitis control programs by reducing the number of bacteria on the teat skin and healing teat lesions. For contagious pathogens such as Staphylococcus aureus, post-milking teat disinfection remains a simple, effective and economical practice for prevention of new intramammary infections (IMIs) of lactating dairy cows. Despite the universal acceptance of teat dipping as a method of mastitis control, variations in the susceptibility and resistance profile of mastitis pathogens among antiseptics have been described. Thus, here we sought to explore the in vitro efficacy of the followings antiseptics against S. aureus isolated from IMIs: chlorhexidine (2.0%), chlorine (2.5%), quarternary ammonium (4.0%), lactic acid (2.0%) and iodine (0.6%). We used 50 S. aureus strains isolated from bovine IMIs from 50 dairy herds located at Minas Gerais, São Paulo, Paraná and Rio Grande do Sul States (Brazil). The antiseptics were evaluated at four different specific intervals (15, 30, 60 and 300 s). We found a higher activity for quarternary ammonium and chlorhexidine against S. aureus at all time-points, followed by iodine and then chlorine. Lactic acid treatment produced the worst results for all time-points and strains. Due to variations in the sensitivity and resistance profile of antiseptics against S. aureus isol

O processo de antissepsia dos tetos é uma prática amplamente recomendada no controle da mastite por reduzir o número de bactérias na pele do teto e curar lesões de teto pré-existentes. Para patógenos contagiosos como o Staphylococcus aureus, a antissepsia dos tetos após a ordenha permanece como uma prática simples, efetiva e economicamente viável na prevenção de novas infecções intramamárias (IMIs). No entanto, variações do perfil de susceptibilidade de patógenos causadores de mastite aos antissépticos têm sido descritas. Desta forma, o presente estudo objetivou avaliar a eficácia in vitro dos antissépticos a base de iodo (0,6%), cloro (2,0%), clorexidine (2,5%), compostos quartenários de amônio (4,0%) e ácido láctico (2,0%) utilizados no pré- e pós-dipping em isolados de Staphylococcus aureus de casos de IMIs. Utilizou-se 50 isolados de S. aureus provenientes de 50 propriedades leiteiras localizadas nos Estados de Minas Gerais, São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul Brasil. Os antissépticos foram avaliados em quatro tempos distintos (15 s, 30 s, 60 s e 300 s). Os resultados apontaram para maior eficácia dos compostos quartenário de amônio e do clorexidine, seguido pelo iodo e cloro contra os isolados de S. aureus nos momentos avaliados. O ácido láctico apresentou a menor atividade antisséptica em todos os momentos avaliados. Desta forma, devido a variações no perfil de suscep