Sphingosine 1-phosphate promotes activation of aprine preantral follicle in vitro / Esfingosina 1-fosfato promove ativação de folículos pré-antrais de caprinos in vitro

This study describes the effect of sphingosine 1-phosphate (S1P) for development of preantral follicle, therefore the activation and follicular viability of caprine follicles cultured in vitro. Ovarian fragments were cultured for 1 or 7 days in Minimum Essential Medium with different S1P concentrations (0, 1, 10, 50, 100 or 200ng/mL). All ovarian fragments were processed for histological analysis in optical microscopy, transmission electron microscopy and fluorescence analysis. The treatment using 1ng/mL of S1P was able to maintain the percentage of normal follicles with the progression of the culture from day 1 to 7. At end of the 7-day culture period there was a significant reduction (P<0.05) in the percentage of primordial follicles in all groups treated with S1P, compared with fresh control (FC) and Control Culture (CC), which was followed by an increase of activated follicles (intermediary, primary and secondary). In addition, the culture for 7 days with media supplemented with S1P with 1ng/mL preserved the ultrastructure of organelles and kept the preantral follicular viability when evaluated by fluorescence microscopy. In conclusion, after 7 days of culture, the 1ng/mL of S1P activates the development of preantral caprine follicles, cultured in situ and maintains the oocitary and follicular viability.(AU)

Este estudo descreve o efeito da esfingosina 1-fosfato (S1P) no desenvolvimento de folículos pré-antrais, portanto da ativação e viabilidade de folículos caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de ovários foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo com diferentes concentrações de S1P (0, 1, 10, 50, 100 ou 200ng/mL). Os fragmentos de ovário foram processados para análise histológica em microscopia óptica, microscopia eletrônica e microscopia de fluorescência. O tratamento usando 1ng/mL de S1P foi capaz de manter a porcentagem de folículos normais durante o período de cultivo de sete dias. Ao final do período de cultivo, houve uma redução significativa (p<0,05) na porcentagem de folículos primordiais em todos os grupos tratados com S1P, comparados com os grupos controle (FC e CC), seguida por um aumento do número de folículos ativados (intermediários, primários e secundários). Adicionalmente, na cultura por sete dias com meio suplementado com S1P (1ng/mL), houve preservação da ultraestrutura das organelas e manteve-se a viabilidade dos folículos pré-antrais avaliados por microscopia de fluorescência. Em conclusão, após sete dias de cultura, o meio suplementado com 1ng/mL de S1P ativa o desenvolvimento de folículos pré-antrais de caprino, cultivados in situ e mantém as viabilidades oocitária e folicular.(AU)

Avaliação do emprego do eCG em um programa hormonal de indução/sincronização de estro e ovulação em novilhas de corte entre 12 e 14 meses de idade / Evaluation of the use of eCG in at hormonal program for induction/synchronization of estrus and ovulation in 12- 14 months old beef heifers

O presente estudo realizou uma avaliação acerca do efeito do tratamento com eCG e acetato de medroxiprogesterona (MAP) sobre a eficiência reprodutiva em novilhas de corte. Para tanto, em uma primeira etapa (pré-experimento), foram utilizadas 64 novilhas cruzadas (Bos taurus x Bos índicus), de 12 a 14 meses de idade, divididas ao acaso em dois grupos: eCG (n = 32) e controle (n = 32). Na segunda etapa, utilizou-se um número maior de fêmeas (n = 92) da mesma idade e padrão fenotípico, a fim de confirmar os resultados alcançados no grupo eCG. Fêmeas dos grupos-tratamento (eCG e confirmação), no dia zero (início do tratamento), receberam durante sete dias um pessário vaginal contendo 250 mg de MAP, junto a uma injeção intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (BE) na dose de 2,5 mg. Nas 24 h antes da retirada do pessário (dia 6), foram aplicados 104 µg de cloprostenol sódico, via submucosa vulvar, e uma injeção IM de 250UI de eCG. Após a retirada dos pessários (dia 7), as fêmeas tiveram seu estro controlado pelo período de 48 h, sendo inseminadas nas 12 h da sua manifestação. As fêmeas que não manifestaram estro nesse período receberam uma injeção IM de 100 µg de GnRH e, após 16-18 h, foram inseminadas sem observação dele (IATF). As fêmeas do grupo-controle receberam o mesmo tratamento hormonal anterior sem o emprego do eCG.(AU)

The present study evaluated the effect of eCG and medroxyprogesterone acetate (MAP) on the reproductive efficiency of beef heifers. Initially, a preliminary experiment comprehending sixty-four 12-14 months old crossbred (Bos taurus x Bos indicus) beef heifers randomly assigned to groups eCG (n = 32) and control (n=32) was performed. In a second moment, ninety-two heifers of same age and fenotipic background were used as a replicate of the first experiment to confirm the preliminary results. Animals from group eCG received an intravaginal sponge pessary containing MAP (250 mg) on day 0 (beginning of treatment) for 7 days, along with an intramuscular (IM) injection of estradiol benzoate (2.5 mg). Twenty-four hours before sponge withdrawal (day 6), cloprostenol sodium (104 µg) was injected in the vulvar submucosa along with an IM injection of eCG (250 IU). After sponge withdrawal on day 7 estrous detection was carried out for forty-eight hours, and animals were inseminated twelve hours after being observed in estrous. Animals which did not manifested estrous received an IM injection of GnRH (100 µg) and were inseminated 16-18 hours later without estrous detection. Animals in the control group were treated according to the same hormonal protocol used for group eCG except for the eCG injection which it was administered.(AU)

Avaliação do emprego do eCG em um programa hormonal de indução/sincronização de estro e ovulação em novilhas de corte entre 12 e 14 meses de idade / Evaluation of the use of eCG in at hormonal program for induction/synchronization of estrus and ovulation in 12- 14 months old beef heifers

O presente estudo realizou uma avaliação acerca do efeito do tratamento com eCG e acetato de medroxiprogesterona (MAP) sobre a eficiência reprodutiva em novilhas de corte. Para tanto, em uma primeira etapa (pré-experimento), foram utilizadas 64 novilhas cruzadas (Bos taurus x Bos índicus), de 12 a 14 meses de idade, divididas ao acaso em dois grupos: eCG (n = 32) e controle (n = 32). Na segunda etapa, utilizou-se um número maior de fêmeas (n = 92) da mesma idade e padrão fenotípico, a fim de confirmar os resultados alcançados no grupo eCG. Fêmeas dos grupos-tratamento (eCG e confirmação), no dia zero (início do tratamento), receberam durante sete dias um pessário vaginal contendo 250 mg de MAP, junto a uma injeção intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (BE) na dose de 2,5 mg. Nas 24 h antes da retirada do pessário (dia 6), foram aplicados 104 µg de cloprostenol sódico, via submucosa vulvar, e uma injeção IM de 250UI de eCG. Após a retirada dos pessários (dia 7), as fêmeas tiveram seu estro controlado pelo período de 48 h, sendo inseminadas nas 12 h da sua manifestação. As fêmeas que não manifestaram estro nesse período receberam uma injeção IM de 100 µg de GnRH e, após 16-18 h, foram inseminadas sem observação dele (IATF). As fêmeas do grupo-controle receberam o mesmo tratamento hormonal anterior sem o emprego do eCG.

The present study evaluated the effect of eCG and medroxyprogesterone acetate (MAP) on the reproductive efficiency of beef heifers. Initially, a preliminary experiment comprehending sixty-four 12-14 months old crossbred (Bos taurus x Bos indicus) beef heifers randomly assigned to groups eCG (n = 32) and control (n=32) was performed. In a second moment, ninety-two heifers of same age and fenotipic background were used as a replicate of the first experiment to confirm the preliminary results. Animals from group eCG received an intravaginal sponge pessary containing MAP (250 mg) on day 0 (beginning of treatment) for 7 days, along with an intramuscular (IM) injection of estradiol benzoate (2.5 mg). Twenty-four hours before sponge withdrawal (day 6), cloprostenol sodium (104 µg) was injected in the vulvar submucosa along with an IM injection of eCG (250 IU). After sponge withdrawal on day 7 estrous detection was carried out for forty-eight hours, and animals were inseminated twelve hours after being observed in estrous. Animals which did not manifested estrous received an IM injection of GnRH (100 µg) and were inseminated 16-18 hours later without estrous detection. Animals in the control group were treated according to the same hormonal protocol used for group eCG except for the eCG injection which it was administered.

Profile and regulation of annexin II expression during early embryogenesis in cattle / Perfil e regulação da expressão da anexina II durante a embriogênese em bovinos

The presence of annexin II (Ann-II) during the initial stages of bovine embryo development and the regulation of Ann-II expression by retinol and insulin-like growth factor I (IGF-I) were studied. Bovine embryos at different stages of development were produced in vitro on Synthetic Oviductal Fluid (SOF) medium (control group), SOF supplemented with retinol (retinol group; 0.1ng/ml), or IGF-I (IGF-I group; 10ng/ml). The embryos were processed for mRNA extraction, cDNA production and polymerase chain reaction (PCR) using Ann-II-specific oligonucleotides. Ann-II was detected in all stages of early embryo development, except for the 16-cell stage. The blastocyst rates were significantly higher (P<0.05) in the group supplemented with retinol (37.8 percent, 45/119) during in vitro embryo culture (IVC) than in those cultured in SOF (20.5 percent, 24/117) or SOF with IGF-I (25.8 percent, 24/93). Semiquantitative analysis of Ann-II expression in embryos produced in medium supplemented with IGF-I or retinol revealed a lower expression of this gene when compared with embryos cultured in SOF (P<0.05). The Ann-II expression was not different in embryos cultured in the presence of retinol and IGF-I. The presence of retinol increased the production of embryos in vitro by decreasing the expression of Ann-II in early-stage of bovine embryo(AU)

Foram estudadas a presença de anexina II (Ann-II) durante a fase inicial do desenvolvimento embrionário bovino e sua regulação pelo retinol e pelo fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I). Embriões bovinos em diferentes estádios de desenvolvimento foram produzidos in vitro em fluido sintético de oviduto (SOF) sem suplementação (grupo-controle) ou suplementado com retinol (grupo retinol; 0,1ng/ml medium) ou IGF-I (grupo IGF-I; 10 ng/ml de meio). Os embriões foram processados para extração de mRNA, produção de cDNA e posterior análise por reação em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para Ann-II. Em todos os estádios de desenvolvimento embrionário, Ann-II foi detectada, exceto no estádio de 16 células. Os índices de blastocisto foram significativamente maiores (P<0,05) no grupo suplementado com retinol (37,8 por cento, 45/119) durante o cultivo in vitro de embriões (PIV) que aqueles obtidos no grupo controle (20,5 por cento, 24/117) ou no IGF-I (25,8 por cento, 24/93). Análise semiquantitativa da expressão de Ann-II em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I ou retinol revelou uma menor expressão desse gene quando comparado com embriões cultivados somente em SOF (P<0,05). A expressão de Ann-II não foi diferente em embriões cultivados na presença de retinol e IGF-I. A presença de retinol aumentou a produção de embriões in vitro, e diminuiu a expressão de Ann-II em estádios iniciais do desenvolvimento embrionário bovino(AU)

Associação entre polimorfismos do gene IGF-IR e características produtivas e reprodutivas em fêmeas bovinas da raça Holandesa / Association between IGF-IR gene polymorphisms and productive and reproductive traits in Holstein cows

Estudou-se a associação entre polimorfismos de conformação de fita simples (SSCP) no gene do receptor do fator-I de crescimento semelhante à insulina (IGF-IR) e idade ao primeiro parto (IPP), intervalo entre partos (IEP), duração da lactação (DL) e produção de leite (PL), em 106 fêmeas puras por cruza da raça Holandesa. A reação em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos iniciadores específicos gerou um fragmento de 335pb. A freqüência genotípica da população para o polimorfismo foi 82,1% de indivíduos homozigotos para o alelo A e 17,9% de heterozigotos (AB). A freqüência do alelo A foi 0,91 e a do alelo B, 0,09. Não foi encontrada associação entre o polimorfismo estudado e as características IPP, IEP e PL. A característica DL foi positivamente associada (P<0,05) à ausência do alelo B. A lactação dos animais portadores do genótipo AA foi mais longa.(AU)

The association between single-strand conformation polymorphism (SSCP) in the gene of insulin-like growth factor-I receptor (IGF-IR) and age at first calving (AFC), calving interval (CI), lactation length (LL), and milk yield (MY) was studied using 106 graded Holstein females. The polimerase chain reaction (PCR) with specific initiating oligonucleotides, resulted an amplified fragment of 335pb. The population genotypes frequencies were 82.1% and 17.9%, for AA and AB genotypes, respectively. The frequency of A allele was 0.91 and 0.09 of B allele. No association between the identified polymorphism and AFC, CI, and MY was observed. The LL was positively associated (P<0.05) with the absence of B allele. Animals carrying the AA genotype presented a longer lactation period.(AU)

Interação entre células do cumulus e atividade da proteína quinase C em diferentes fases da maturação nuclear de oócitos bovinos / Interaction between cumulus cells and the activity of protein kinase C at different stages of bovine oocyte nuclear maturation

Verificou-se a influência da proteína quinase C (PK-C) no reinício e na progressão da meiose em oócitos bovinos, determinando se as células do cumulus são mediadoras da PK-C na regulação da maturação dos oócitos. Complexos cumulus-oócitos (CCO) e oócitos desnudos (OD), distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos (T) com base na presença de um ativador da PK-C (PMA) (T1 e T2), de um forbol éster incapaz de ativar a PK-C (4a-PDD-controle) (T3 e T4) ou de apenas o meio básico (TCM-199-controle) (T5 e T6), foram cultivados por 7, 9, 12, 18 e 22 horas. A percentagem de rompimento da vesícula germinativa no grupo cultivado com PMA foi maior do que nos dois grupos controle, com e sem células do cumulus. O cultivo de CCO e OD por 12 e 18 horas demonstrou que a PK-C influencia a progressão para os estádios de metáfase I (MI) e metáfase II (MII) de maneira dependente das células do cumulus. Nos períodos de 9 e 22 horas, não foi possível observar diferença entre os grupos quanto aos diferentes estádios de maturação. A ativação da PK-C acelera o reinício da meiose independentemente das células somáticas e acelera a progressão até os estádios de MI e MII na dependência das células do cumulus.(AU)

The aim of this study was to evaluate the effect of protein kinase C (PK-C) on the meiotic resumption and progression in bovine oocyte, and to determine if the cumulus cells mediate the PK-C action in the regulation of bovine oocyte nuclear maturation. Cumulus-oocyte complexes (COC) and denuded oocytes (DO), randomly allotted to 6 treatments (T) based on the presence of an activator of PK-C (PMA) (T1 and T2), or a phorbol ester unable to activate PK-C (4aPDD-control) (T3 and T4) or a basic culture medium (T5 and T6), were cultivated for 7, 9, 12, 18 and 22 hours. The percentage of germinal vesicle breakdown (GVBD) was higher when the oocytes were cultured with PMA than in the control groups with and without cumulus cells. However, PK-C was dependent of cumulus cells to affect the progression to the stages of metaphase I (MI) and metaphase II (MII) at 12 and 18 hours of culture. At 9 and 22 hours, no difference among groups was detected. PK-C accelerates the meiotic resumption independently of the somatic cells but depends on cumulus cells for the progression to the stages of MI and MII.(AU)

Efeito da somatotrofina bovina (bST-r), do implante de progestágeno e do desmame por 72 horas na indução do estro e na taxa de prenhez em vacas

This study aimed to assess the efficiency of hormonal treatment in the postpartum fertility of nursing beef cows. Seventy-three cows (Hereford x Nellore) raised extensively, with body condition ranging from 2 to 4 were randomly allotted in three groups. The GSED group, with 25 cows, received an intravaginal device (ID) of 250mg of medroxiprogesteron acetate and 500mg of recombinant bovine somatotropin (bST-r; day 0). After the ID withdrawal (day 7), the cows received 0.5mg of estradiol cipionate; their calves were temporarily weaned for 72 hours. In the SED group, 25 cows received a similar treatment, however, somatotropin was not used. In the control group, 23 cows were temporarily separated from their calves for 72 hours and did not receive any hormonal treatment. The cows were put together with the bulls for 30 days just after ID withdrawal. The cows were weighted and assessed for body condition at day 0 and just after bulls withdrawal. The cows lost weight in an average of 0.648 kg/day, and 56.5%, 33.3%, and 26.1% of estrous rates were observed, respectively for the GSED, SED and control groups (GSED vs. SED, P=0.0001; GSED vs. control, P=0.0007; SED vs. control, P=0.53). The pregnancy rates were 21.7%, 8.3%, and 13.0%, respectively for the GSED, SED and control groups (P=0.16). The results showed that the hormonal program associated with temporary 72-hour calf removal did not increase conception rate of cows that loosed weight from 50 to 70 days postpartum.

Este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência de tratamentos hormonais sobre a fertilidade de vacas de corte no pós-parto com diferentes condições corporais, durante a estação de monta de outono. Setenta e três vacas pluríparas cruzadas (Hereford x Nelore) criadas extensivamente, com condição corporal entre 2 e 4, foram pesadas e distribuídas em três grupos experimentais. O grupo GSED, constituído por 25 vacas, recebeu pessário vaginal (dia 0) contendo 250mg de acetato de medroxiprogesterona e 500mg de somatotropina bovina recombinante (bST-r). Na retirada dos pessários (dia 7), as vacas receberam 0,5mg de cipionato de estradiol e procedeu-se o desmame temporário dos bezerros por 72 horas. No grupo SED, 25 vacas receberam tratamento semelhante ao grupo GSED, porém não receberam bST-r. No grupo-controle, as 23 vacas somente foram separadas dos seus bezerros por 72h. Quando da retirada dos pessários as vacas foram colocadas com touros por 30 dias. Os animais foram pesados e avaliados quanto à condição corporal no início do experimento e na retirada dos touros (dia 37). Foi constatada perda média de peso de 0,648 kg/dia e os percentuais de estro foram de 26,1%, 33,3% e 56,5%, respectivamente, para os grupos controle, SED e GSED. O diagnóstico de gestação, realizado pela palpação retal 60 dias após a retirada dos touros, indicou percentuais de prenhez de 13,0%, 8,3% e 21,7%, respectivamente, para os grupos controle, SED e GSED (P=0,16), demonstrando que os programas hormonais adotados não foram eficientes no incremento das taxas de prenhez de vacas que perdiam peso entre 50 e 70 dias após o parto.