Canine distemper diagnosis by RT-PCR in dog samples from São Paulo State submitted to rabies laboratory diagnosis / Diagnóstico de cinomose canina por RT-PCR em amostras de cães do estado de São Paulo enviadas para o diagnóstico laboratorial da raiva

Canine distemper (CD) is one of the most important infectious diseases in domestic dogs. In Brazil, CD is still the principal cause of mortality of dogs in some urban populations. Although different viral gene sequences have been identified for detecting the canine distemper virus (CDV), the N gene appears to be a better target for the amplification of specific fragments from all CDV strains. Using RT-PCR targeted to the CDV N gene, during the year 2014 we analyzed 190 central nervous system (CNS) samples of dogs from the state of São Paulo, Brazil, with symptoms suggestive of encephalitis and sent them to the Pasteur Institute for the diagnosis of rabies. Positivity for CD was over 50%, indicating that the disease remains an important cause of canine mortality.

A cinomose canina (CD) é uma das doenças infecciosas mais importantes dos cães domésticos. No Brasil é ainda a principal causa de mortalidade de cães em algumas populações urbanas. Embora sequências de diferentes genes do vírus sejam utilizadas como alvo para detecção do vírus da cinomose canina (CDV), o gene N parece ser o melhor para a amplificação de todas as suas linhagens. Utilizando-se a técnica de RT-PCR direcionada ao gene N do CDV, foram analisadas 190 amostras de sistema nervoso central (SNC) de cães do estado de São Paulo com quadros sugestivos de encefalite e que foram encaminhadas ao Instituto Pasteur para o diagnóstico da raiva, durante o ano de 2014. A positividade foi superior a 50% indicando que a cinomose continua a ser uma importante causa de mortalidade canina.

Canine distemper diagnosis by RT-PCR in dog samples from São Paulo State submitted to rabies laboratory diagnosis / Diagnóstico de cinomose canina por RT-PCR em amostras de cães do estado de São Paulo enviadas para o diagnóstico laboratorial da raiva

Canine distemper (CD) is one of the most important infectious diseases in domestic dogs. In Brazil, CD is still the principal cause of mortality of dogs in some urban populations. Although different viral gene sequences have been identified for detecting the canine distemper virus (CDV), the N gene appears to be a better target for the amplification of specific fragments from all CDV strains. Using RT-PCR targeted to the CDV N gene, during the year 2014 we analyzed 190 central nervous system (CNS) samples of dogs from the state of São Paulo, Brazil, with symptoms suggestive of encephalitis and sent them to the Pasteur Institute for the diagnosis of rabies. Positivity for CD was over 50%, indicating that the disease remains an important cause of canine mortality.(AU)

A cinomose canina (CD) é uma das doenças infecciosas mais importantes dos cães domésticos. No Brasil é ainda a principal causa de mortalidade de cães em algumas populações urbanas. Embora sequências de diferentes genes do vírus sejam utilizadas como alvo para detecção do vírus da cinomose canina (CDV), o gene N parece ser o melhor para a amplificação de todas as suas linhagens. Utilizando-se a técnica de RT-PCR direcionada ao gene N do CDV, foram analisadas 190 amostras de sistema nervoso central (SNC) de cães do estado de São Paulo com quadros sugestivos de encefalite e que foram encaminhadas ao Instituto Pasteur para o diagnóstico da raiva, durante o ano de 2014. A positividade foi superior a 50% indicando que a cinomose continua a ser uma importante causa de mortalidade canina.(AU)

Epidemiologia molecular de surto de raiva bovina na região central do Rio Grande do Sul, 2012 / Molecular epidemiology of an outbreak of bovine rabies in central Rio Grande do Sul, Brazil, 2012

A raiva é uma doença infecciosa do sistema nervoso central de mamíferos causada pelo vírus da raiva (RabV), geralmente, transmitido pela mordedura de animais infectados. No Brasil, os morcegos hematófagos Desmodus rotundus são as principais fontes de infecção do RabV para bovinos e equinos. Este artigo descreve uma investigação epidemiológica e molecular de surtos de raiva ocorridos na região central do Rio Grande do Sul, entre maio e agosto de 2012. Nesse período, 45 casos suspeitos de raiva foram relatados em 22 pequenos rebanhos, localizados dentro de um raio de 4,7km, no município de Pinhal Grande. Desses, 32 amostras foram submetidas para diagnóstico da raiva, sendo que o RabV e/ou antígenos virais foram identificados em 27 amostras. Em um segundo momento, 11 amostras foram submetidas à transcrição reversa/reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para o gene da nucleoproteína (N) do RabV, seguido de sequenciamento nucleotídico e análise filogenética. Sete das 11 amostras apresentaram sequências nucleotídicas idênticas e uma apresentou mutação sinônima, não-codificante, indicando uma provável origem comum dos vírus. Por outro lado, três amostras apresentaram mutações que resultaram em alterações de aminoácidos, sugerindo uma origem diferente do vírus. Esses resultados sugerem que RabV de diferentes origens/linhagens co-circulam na região e foram envolvidos nos surtos descritos. Investigações sobre a circulação de ambos os genótipos em morcegos na região estão em andamento.(AU)

Rabies is an infectious disease of the central nervous system of mammals caused by rabies virus (RabV), generally transmitted by the bite of rabid animals. In Brazil, vampire bats Desmodus rotundus are the main reservoirs of RabV for livestock. The present study describes a molecular and epidemiological investigation of outbreaks of bovine rabies occurring in the central region of Rio Grande do Sul state, Brazil, between May and August 2012. In this period, 45 cases suspected of rabies were reported in 22 small herds, located within a 4.7km range, in the county of Pinhal Grande. From these, 32 samples were submitted to rabies diagnosis and RabV and/or viral antigens were identified in 27 samples. Subsequently, 11 brain samples were submitted to reverse transcription/polymerase chain reaction (RT-PCR) for the nucleoprotein gene (N) followed by nucleotide sequencing and phylogenetic analysis. Seven out of 11 samples yielded identical sequences; one presented a synonymous, non-coding mutation, indicating a likely common origin of the virus. However, three other samples presented nucleotide mutations which resulted in amino acid changes, suggesting a different origin of the virus. In summary, these results suggest that RabV strains of different origin/lineages co-circulate in the region and were involved in the outbreaks. Investigations on the circulation of both genotypes in bats in the region are currently underway.(AU)

In vitro and in vivo inhibition of rabies virus replication by RNA interference

Rabies is a zoonotic disease that affects all mammals and leads to more than 55,000 human deaths every year, caused by rabies virus (RABV) (Mononegavirales: Rhabdoviridae: Lyssavirus). Currently, human rabies treatment is based on the Milwaukee Protocol which consists on the induction of coma and massive antiviral therapy. The aim of this study was to assess the decrease in the titer of rabies virus both in vitro and in vivo using short-interfering RNAs. To this end, three siRNAs were used with antisense strands complementary to rabies virus nucleoprotein (N) mRNA. BHK-21 cells monolayers were infected with 1000 to 0.1 TCID50 of PV and after 2 hours the cells were transfected with each of tree RNAs in separate using Lipofectamine-2000. All three siRNAs reduced the titer of PV strain in a least 0.72 logTCID50/mL and no cytotoxic effect was observed in the monolayers treated with Lipofectamine-2000. Swiss albino mice infected with 10.000 to 1 LD of PV strain by the intracerebral route were also transfected after two hours of infection with a pool 3 siRNAs with Lipofectamine-2000 by the intracerebral route, resulting in a survival rate of 30% in mice inoculated with 100 LD50, while the same dose led to 100% mortality in untreated animals. Lipofectamine-2000 showed no toxic effect in control mice. These results suggest that intracerebral administration of siRNAs might be an effective antiviral strategy for rabies.(AU)

Vírus da raiva em morcegos insetívoros: implicações em epidemiologia molecular da diversidade dos genes codificadores da nucleoproteína e glicoproteína / Rabies virus in insectivorous bats: implications in molecular epidemiology of the diversity of genes encoding nucleoprotein and glycoprotein

Com o controle da raiva nos cães do Estado de São Paulo nos últimos 20 anos, a raiva em animais silvestres, sobretudo nos quirópteros, assume crescente importância, visto que, atualmente, estes são os principais reservatórios para a raiva neste Estado. Apesar dos morcegos manterem ciclos epidemiológicos da raiva há centenas de anos, somente a partir da década de 50 a raiva em morcegos insetívoros foi reconhecida como um problema de saúde publica. Desde então foram feitos muitos avanços na compreensão da raiva nestes animais. Atualmente, o vírus da raiva (RABV) já foi detectado em 37 espécies de morcegos brasileiros, tendo sido determinadas quatro linhagens genéticas específicas associadas a quatros gênero/espécies destes morcegos, três destas exclusivas de morcegos insetívoros. Entretanto, apesar da importância da raiva em morcegos insetívoros, estudos voltados a um conhecimento mais amplo das implicações da diversidade de amostras de RABV detectadas nos mesmos aplicados à Epidemiologia Molecular são escassos. Assim, a presente investigação teve por objetivos estabelecer genealogias para amostras de RABV isoladas de diversas espécies de morcegos insetívoros do Estado de São Paulo a partir de seqüências parciais dos genes N (40 amostras) e G (45 amostras), avaliar a existência de linhagens gênero-específicas do RABV e determinar os marcadores moleculares para sua diferenciação. Foram encontradas linhagens específicas de RABV para os gêneros Myotis, Epitesicus e Nyctinomops e três prováveis linhagens circulantes nos gêneros Tadarida, Histiotus e Lasiurus. Além disso, esta pesquisa revelou marcadores moleculares de aminoácidos específicos para os gêneros Myotis, Eptesicus e Nyctinomops, contribuindo para um melhor entendimento da epidemiologia molecular da Raiva e da relação entre o RABV e gêneros diversos de quirópteros

As a result of the control of canine rabies in São Paulo State in the last 20 years, rabies in wild animals, mainly in bats, has assumed an increasing importance as the last are currently the most important rabies reservoirs in this State. Despite the fact that bats have maintained epidemiological cycles of rabies for centuries, only in the 50s rabies in insectivorous bats was recognized as a threat for Public Health and several advances have been achieved since then for the comprehension of rabies in these animals. Rabies virus (RABV) has already been detected in 37 species of Brazilian bats and four specific genetic lineages associated to four genera/ species of bats have been determined, three of these exclusive to insectivorous bats. Nonetheless, despite the importance of insectivorous bats rabies, studies on a more comprehensive knowledge on the implications of the diversity of RABV strains detected on these are scarce. Thus, the present investigation aimed to establish genealogies for RABV strains isolated from diverse species from insectivorous bats from São Paulo State based on partial N (40 strains) and G (45 strains ) genes, assess the existence of genus-specific lineages of RABV and to determine molecular markers for its differentiation. Specific RABV lineages where found for the genera Myotis, Epitesicus and Nyctinomops and three other probable lineages circulating in the genera Tadarida, Histiotus and Lasiurus where found as well. Furthermore, this investigation revealed amino acids molecular markers for the genera Myotis, Eptesicus and Nyctinomops, contributing to a better understanding of rabies molecular epidemiology and the relationship amongst RABV and diverse genera of bats