Resumo
Avaliou-se a hipótese de que a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen innatura de touros da raça Nelore, previamente ao processo de criopreservação, melhora os parâmetros demotilidade, morfologia e integridade de membrana no sêmen congelado/descongelado. Foram obtidos poreletroejaculação, cinco ejaculados de cada touro, e fracionados em: grupo controle e adição de 2 mg e 3 mg deCCC para cada 120 x 106 espermatozoides. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, amostrasforam diluídas e submetidas à criopreservação por congelamento. Amostras congeladas/descongeladas foramavaliadas quanto aos aspectos físicos e morfológicos sob microscopia óptica e à cinética espermática pelosistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). A integridade de membrana foi avaliada pelo testehiposmótico e colorações supravital e de epifluorescência. Os resultados das análises de morfologia e testes deintegridade de membrana plasmática, bem como os valores de motilidade total (MT), motilidade progressiva(MP) e demais parâmetros avaliados pelo CASA, mostram que não houve diferença (P > 0,05) entre ostratamentos. Sendo assim, conclui-se que a adição de CCC ao ejaculado in natura de touros da raça Nelorepreviamente à criopreservação, não melhora os parâmetros de morfologia, integridade de membrana e cinéticaespermática.(AU)
It was evaluated if the addition of cyclodextrin loaded with cholesterol (CCC) to in natura semen ofNellore bulls prior to the cryopreservation process improves the parameters of membrane motility, morphologyand integrity in the frozen / thawed semen. Five ejaculates of each bull were obtained and fractionated in:control group and addition of 2 mg or 3 mg of CCC for each 120 x 106 spermatozoa. After 15 minutes ofincubation at room temperature, samples were diluted and subjected to cryopreservation. Frozen/thawedsamples were evaluated for physical and morphological aspects under optical microscopy and for spermatickinetics by the CASA system. For the evaluation of the plasma membrane integrity of the frozen / thawedspermatozoa, the hyposmotic test and the supravital and epifluorescent stains were used. The results of themorphology and plasma membrane integrity tests, as well as the values of total motility (MT), progressivemotility (MP) and other parameters of sperm kinetics evaluated by CASA, show that there was no statisticallysignificant difference (P > 0.05) among the treatments performed. Therefore, it is concluded that the addition ofCCC to the in natura ejaculate of Nellore bulls prior to cryopreservation, does not improve parameters ofmorphology, membrane integrity and sperm kinetics.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Ciclodextrinas/efeitos adversos , Ciclodextrinas/química , Análise do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterinária , Bovinos/embriologia , Bovinos/fisiologiaResumo
Avaliou-se a hipótese de que a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen innatura de touros da raça Nelore, previamente ao processo de criopreservação, melhora os parâmetros demotilidade, morfologia e integridade de membrana no sêmen congelado/descongelado. Foram obtidos poreletroejaculação, cinco ejaculados de cada touro, e fracionados em: grupo controle e adição de 2 mg e 3 mg deCCC para cada 120 x 106 espermatozoides. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, amostrasforam diluídas e submetidas à criopreservação por congelamento. Amostras congeladas/descongeladas foramavaliadas quanto aos aspectos físicos e morfológicos sob microscopia óptica e à cinética espermática pelosistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). A integridade de membrana foi avaliada pelo testehiposmótico e colorações supravital e de epifluorescência. Os resultados das análises de morfologia e testes deintegridade de membrana plasmática, bem como os valores de motilidade total (MT), motilidade progressiva(MP) e demais parâmetros avaliados pelo CASA, mostram que não houve diferença (P > 0,05) entre ostratamentos. Sendo assim, conclui-se que a adição de CCC ao ejaculado in natura de touros da raça Nelorepreviamente à criopreservação, não melhora os parâmetros de morfologia, integridade de membrana e cinéticaespermática.
It was evaluated if the addition of cyclodextrin loaded with cholesterol (CCC) to in natura semen ofNellore bulls prior to the cryopreservation process improves the parameters of membrane motility, morphologyand integrity in the frozen / thawed semen. Five ejaculates of each bull were obtained and fractionated in:control group and addition of 2 mg or 3 mg of CCC for each 120 x 106 spermatozoa. After 15 minutes ofincubation at room temperature, samples were diluted and subjected to cryopreservation. Frozen/thawedsamples were evaluated for physical and morphological aspects under optical microscopy and for spermatickinetics by the CASA system. For the evaluation of the plasma membrane integrity of the frozen / thawedspermatozoa, the hyposmotic test and the supravital and epifluorescent stains were used. The results of themorphology and plasma membrane integrity tests, as well as the values of total motility (MT), progressivemotility (MP) and other parameters of sperm kinetics evaluated by CASA, show that there was no statisticallysignificant difference (P > 0.05) among the treatments performed. Therefore, it is concluded that the addition ofCCC to the in natura ejaculate of Nellore bulls prior to cryopreservation, does not improve parameters ofmorphology, membrane integrity and sperm kinetics.
Assuntos
Animais , Bovinos , Análise do Sêmen/métodos , Bovinos/embriologia , Bovinos/fisiologia , Ciclodextrinas/efeitos adversos , Ciclodextrinas/química , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterináriaResumo
Pesquisas têm sido realizadas com o objetivo de prolongar a longevidade espermática por meio da refrigeração ou criopreservação do sêmen equino e com isso melhorar as taxas de fertilidade. Muitas dessas pesquisas têm como objetivo desenvolver diluidores, aditivos, curvas e protocolos de refrigeração, assim como tempos e temperaturas de estocagem que garantam a motilidade e integridade do sêmen equino submetido à refrigeração e com isso índices de fertilidade melhores e menos variáveis. Nos últimos anos, houve um aumento considerável na utilização de sêmen equino refrigerado, principalmente devido à aceitação de grande parte das associações de criadores de cavalos. A raça Mangalarga Marchador, de origem nacional, tem se mostrado extremamente sensível ao processo de manipulação, refrigeração e transporte de sêmen. Como em outras espécies de produção, o sucesso da inseminação artificial nos equinos depende da manutenção da viabilidade e fertilidade do sêmen durante o armazenamento. Além disso, quanto maior o tempo ao qual se mantem o potencial fertilizante do sêmen refrigerado, maior flexibilidade terá o médico veterinário para coletar e enviar o sêmen aos haras em que as éguas se encontram, resultando num maior êxito da técnica. O presente experimento teve por objetivo comparar as raças Mangalarga Marchador (MM) e Quarto de Milha (QM) quanto à resistência à refrigeração em duas temperaturas de armazenamento de sêmen refrigerado (5°C e 15°C). Os resultados deste trabalho demonstraram que não houve diferença entre as temperaturas de armazenamento (5ºC e 15°C), mostrando que ambas são eficientes na manutenção da viabilidade espermática pelo período de 24 horas para ambas as raças estudadas. Além disso, foi observada uma característica espermática superior dos garanhões da raça Quarto de Milha quando comparada aos da raça Mangalarga Marchador, tanto nos parâmetros de velocidade espermática, avaliado pelo CASA, revelando uma maior sensibilidade dos animais da raça Mangalarga ao processo de refrigeração do sêmen.
Studies have been conducted in order to prolong sperm longevity using cooling or frozen-thawed equine semen and in that way improve fertility rates. Many of these studies have focused on developing extenders, additives, cooling curves and protocols, as well as storage times and temperatures to ensure the integrity and motility of equine semen exposed to cooling. Recent years have increased the use of cooled equine semen, mainly due to the acceptance of the horse breeders associations. The Brazilian breed called "Mangalarga Marchador" has proven to be extremely sensitive to the cooling semen. As in other species, the success of artificial insemination in horses depends on maintaining the viability and fertility of semen during storage. Moreover, the longer you keep the cooling semen fertilizing potential, more flexibility will have the veterinarian to collect and send the semen samples, resulting in higher technique success. The aim of this study was to compare breeds Mangalarga Marchador (MM) and Quarter Horses (QM) for resistance to cooling in two semen storage systems (5°C and 15°C). The results showed no difference between the storage temperatures (5°C and 15°C), showing that both are effective in maintaining sperm viability for a period of 24 hours for both breeds studied. In addition, we observed superior sperm characteristics for Quarter Horse stallions when compared to the Mangalarga Marchador, evaluated by CASA, revealing a higher sensitivity for the cooling process by Mangalarga Marchador stallions.
Últimamente, varios estudios se han realizado con el fin de prolongar la longevidad de los espermatozoides mediante refrigeración o criopreservación del semen equino y de esa manera mejorar las tasas de fecundidad. Muchos de estos estudios se han centrado en los diluyentes, aditivos, curvas de enfriamiento y protocolos, así como los tiempos y temperaturas de almacenamiento para garantizar la integridad y la motilidad del semen equino expuestos al enfriamiento. En los últimos años han aumentado el uso de semen refrigerado equino, principalmente debido a la aceptación de las asociaciones de criadores de caballos. La raza brasileña "Mangalarga Marchador" ha demostrado ser extremadamente sensible a la refrigeración del semen. Como en otras especies, el éxito de la inseminación artificial en los caballos depende del mantenimiento de la viabilidad y fertilidad del semen durante el almacenamiento. Por otra parte, cuanto más tiempo se mantenga el potencial fertilizante, más flexibilidad tendrá el veterinario para colectar y enviar las muestras de semen, lo que resulta en mejores resultados de la técnica. El objetivo de este estudio fue comparar las razas Mangalarga Marchador (MM) y Caballos Cuarto de Milla (CM) para la resistencia a la refrigeración en dos temperaturas de almacenamiento de semen (5°C y 15°C). Los resultados no mostraron diferencia entre las temperaturas de almacenamiento (5°C y 15°C), mostrando que ambos son efectivos en el mantenimiento de la viabilidad espermática por un período de 24 horas para ambas las razas estudiadas. Además, se observó características espermáticas superiores de los sementales Cuarto de Milla en comparación con los Mangalargas Marchadores, evaluada por CASA, indicando una mayor sensibilidad para el proceso de refrigeración para la raza Mangalarga Marchador.
Assuntos
Animais , Masculino , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterinária , Criopreservação/métodos , Cavalos/genética , Criopreservação/veterináriaResumo
Parâmetros convencionais utilizados para a avaliação espermática têm se mostrado limitados quanto a capacidade de predizer o potencial de fertilidade do sêmen. Um único teste é pouco eficaz devido ao fato que cada espermatozóide apresenta múltiplos compartimentos com diferentes funções a serem avaliadas. Dentre os principais testes de análise espermática utilizados pode-se destacar: análise subjetiva da motilidade, análise computadorizada do movimento espermático e morfologia, testes de separação, análise morfofuncional por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo. Embora nenhuma técnica de avaliação tomada isoladamente apresente sensibilidade suficiente para a determinação da fertilidade, a combinação dos diversos métodos tem agregado maior precisão para a estimativa do potencial de fertilização das amostras de sêmen bovino. (AU)
Conventional parameters utilized for semen evaluation have proved to be limited in order to predict the sperm potential fertility. A single test is not effective due the fact of each sperm cell presents multiple parts performing different functions. Among the most important sperm analysis tests we can highlight: subjective motility, computerized motility and morphology analysis, separation tests, morpho-functional analysis through fluorescence microscopy or flow cytometry. Although none of the techniques alone present a high efficiency to predict fertility, their combination may present a more accurate scenery for the estimated fertilization potential from bovine semen samples. The objective of this review is to describe methods of laboratory analysis of bovine semen. (AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Bovinos , Inseminação Artificial/métodos , Inseminação Artificial/veterinária , Motilidade dos Espermatozoides/fisiologia , Citometria de Fluxo/veterinária , Acrossomo , BiotecnologiaResumo
Parâmetros convencionais utilizados para a avaliação espermática têm se mostrado limitados quanto a capacidade de predizer o potencial de fertilidade do sêmen. Um único teste é pouco eficaz devido ao fato que cada espermatozóide apresenta múltiplos compartimentos com diferentes funções a serem avaliadas. Dentre os principais testes de análise espermática utilizados pode-se destacar: análise subjetiva da motilidade, análise computadorizada do movimento espermático e morfologia, testes de separação, análise morfofuncional por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo. Embora nenhuma técnica de avaliação tomada isoladamente apresente sensibilidade suficiente para a determinação da fertilidade, a combinação dos diversos métodos tem agregado maior precisão para a estimativa do potencial de fertilização das amostras de sêmen bovino.
Conventional parameters utilized for semen evaluation have proved to be limited in order to predict the sperm potential fertility. A single test is not effective due the fact of each sperm cell presents multiple parts performing different functions. Among the most important sperm analysis tests we can highlight: subjective motility, computerized motility and morphology analysis, separation tests, morpho-functional analysis through fluorescence microscopy or flow cytometry. Although none of the techniques alone present a high efficiency to predict fertility, their combination may present a more accurate scenery for the estimated fertilization potential from bovine semen samples. The objective of this review is to describe methods of laboratory analysis of bovine semen.