Comparative leukocyte morphometric analysis between endemic Anurans from Brazil and the invasive species Lithobates catesbeianus / Análise morfométrica comparada entre Anuros endêmicos do Brasil e a espécie invasora Lithobates catesbeianus

Amphibians are potentially reliable and efficient bioindicators. Existing anuran white blood cell morphology studies are limited, with only a few morphometric studies available. We employed morphometric techniques to characterize leukocytes of selected Neotropical anurans from Brazil and compare our findings with the exotic American Bullfrog (Lithobates catesbeianus), genus Ranidae. We compared blood smears of 28 specimens from six different genera (Hyla, Phyllomedusa, Hypsiboas, Scinax, Physalaemus, and Proceratophrys) with samples from L. catesbeianus. Leukocyte average diameter was calculated by an image analysis software. One-way analyses of variance and Bonferroni tests were used on statistical analyses. Lymphocytes, neutrophils, eosinophils, and basophils were significantly smaller than the reference ranges reported for other amphibian genera, including Lithobathes, whereas monocyte diameters did not differ significantly between genera. This is the first study to evaluate leukocyte morphometrics of Brazilian anuran species. Our findings suggest that geographical separation could possibly influence leukocyte morphometry.(AU)

Anfíbios são indicadores ambientais potencialmente confiáveis e eficientes. Estudos referentes à morfologia de leucócitos de anuros são limitados, com poucos estudos morfométricos disponíveis em literatura. O presente estudo empregou técnicas morfométricas para caracterizar leucócitos de anuros Neotropicais brasileiros selecionados e compará-los com a espécie exótica rã-touro (Lithobates catesbeianus), família Ranidae. Esfregaços sanguíneos de 28 espécimes pertencentes a seis gêneros diferentes (Hyla, Phyllomedusa, Hypsiboas, Scinax, Physalaemus e Proceratophrys) foram comparados com amostras de esfregaços de L. catesbeianus. A média do diâmetro dos leucócitos foi calculada por um software de análise de imagens. One-way e teste de Bonferroni foram utilizados para avaliação estatística. Linfócitos, neutrófilos, eosinófilos e basófilos mostraram-se significativamente menores que os valores de referência reportados em outros gêneros de anfíbios, incluindo Lithobathes; por outro lado, a média do diâmetro dos monócitos não demonstrou variação significativa entre os gêneros. Esse é o primeiro estudo de avaliação morfométrica de leucócitos em espécies de anuros brasileiros. Nossos resultados sugerem que a separação geográfica possivelmente influencia a morfometria leucocitária.(AU)

Comparative leukocyte morphometric analysis between endemic Anurans from Brazil and the invasive species Lithobates catesbeianus / Análise morfométrica comparada entre Anuros endêmicos do Brasil e a espécie invasora Lithobates catesbeianus

Amphibians are potentially reliable and efficient bioindicators. Existing anuran white blood cell morphology studies are limited, with only a few morphometric studies available. We employed morphometric techniques to characterize leukocytes of selected Neotropical anurans from Brazil and compare our findings with the exotic American Bullfrog (Lithobates catesbeianus), genus Ranidae. We compared blood smears of 28 specimens from six different genera (Hyla, Phyllomedusa, Hypsiboas, Scinax, Physalaemus, and Proceratophrys) with samples from L. catesbeianus. Leukocyte average diameter was calculated by an image analysis software. One-way analyses of variance and Bonferroni tests were used on statistical analyses. Lymphocytes, neutrophils, eosinophils, and basophils were significantly smaller than the reference ranges reported for other amphibian genera, including Lithobathes, whereas monocyte diameters did not differ significantly between genera. This is the first study to evaluate leukocyte morphometrics of Brazilian anuran species. Our findings suggest that geographical separation could possibly influence leukocyte morphometry.(AU)

Anfíbios são indicadores ambientais potencialmente confiáveis e eficientes. Estudos referentes à morfologia de leucócitos de anuros são limitados, com poucos estudos morfométricos disponíveis em literatura. O presente estudo empregou técnicas morfométricas para caracterizar leucócitos de anuros Neotropicais brasileiros selecionados e compará-los com a espécie exótica rã-touro (Lithobates catesbeianus), família Ranidae. Esfregaços sanguíneos de 28 espécimes pertencentes a seis gêneros diferentes (Hyla, Phyllomedusa, Hypsiboas, Scinax, Physalaemus e Proceratophrys) foram comparados com amostras de esfregaços de L. catesbeianus. A média do diâmetro dos leucócitos foi calculada por um software de análise de imagens. One-way e teste de Bonferroni foram utilizados para avaliação estatística. Linfócitos, neutrófilos, eosinófilos e basófilos mostraram-se significativamente menores que os valores de referência reportados em outros gêneros de anfíbios, incluindo Lithobathes; por outro lado, a média do diâmetro dos monócitos não demonstrou variação significativa entre os gêneros. Esse é o primeiro estudo de avaliação morfométrica de leucócitos em espécies de anuros brasileiros. Nossos resultados sugerem que a separação geográfica possivelmente influencia a morfometria leucocitária.(AU)

The use of singleplex and nested PCR to detect Batrachochytrium dendrobatidis in free-living frogs

Many microorganisms are able to cause diseases in amphibians, and in the past few years one of the most reported has been Batrachochytrium dendrobatidis. This fungus was first reported in Brazil in 2005; following this, other reports were made in specimens deposited in museum collections, captive and free-living frogs. The aim of this study was to compare singleplex and nested-PCR techniques to detect B. dendrobatidis in free-living and apparently healthy adult frogs from the Brazilian Atlantic Forest. The sample collection area was a protected government park, with no general entrance permitted and no management of the animals there. Swabs were taken from the skin of 107 animals without macroscopic lesions and they were maintained in ethanol p.a. Fungal DNA was extracted and identification of B. dendrobatidis was performed using singleplex and nested-PCR techniques, employing specific primers sequences. B. dendrobatidis was detected in 61/107 (57%) and 18/107 (17%) animals, respectively by nested and singleplex-PCR. Nested-PCR was statistically more sensible than the conventional for the detection of B. dendrobatidis (Chi-square = 37.1; α = 1%) and the agreement between both techniques was considered just fair (Kappa = 0.27). The high prevalence obtained confirms that these fungi occur in free-living frogs from the Brazilian Atlantic Forest with no macroscopic lesions, characterizing the state of asymptomatic carrier. We concluded that the nested-PCR technique, due to its ease of execution and reproducibility, can be recommended as one of the alternatives in epidemiological surveys to detect B. dendrobatidis in healthy free-living frog populations.(AU)

Patologia comparada de infecções selecionadas de anfíbios anuros de vida livre do bioma da Mata Atlântica: estudo prospectivo / Comparative pathology of selected infections of free living anuran amphibians from the Atlantic Forest biome: prospective study

Os anfíbios apresentaram um severo declínio de suas populações nas últimas décadas. Dentre as diversas causas dos declínios estão as doenças infecciosas. O presente trabalho tem o objetivo de estudar a ocorrência de enfermidades selecionadas que podem acometer estes animais na Mata Atlântica brasileira, e, desta forma, contribuir para a melhor compreensão das conseqüências destas enfermidades para a conservação dos anfíbios em nosso meio. Foram coletados 120 animais da Estação Biológica da Boracéia e realizaram-se exames necroscópicos, histopatológicos, microbiológicos, parasitológicos e PCR convencional para Batrachochytrium dendrobatidis em grande parte dos animais. Coletou-se 33 espécies diferentes pertencentes a sete famílias diferentes. Encontrou-se, no exame necroscópico, endoparasitas em 45,8% (55/120) dos espécimes examinados e ectoparasita (sanguessuga) em um espécime. Do total de animais analisados para Batrachochytrium dendrobatidis, 19,1% (22/115) foram positivos para Bd. O exame necroscópico assim como o histopatologicos da grande maioria dos animais estudados não exibiu alterações relevantes, sendo que os sistemas mais acometidos foram o digestório e tegumentar seguidos pelos urinário e linfóide. A somatória dos resultados aqui exibidos sugere que, nas condições específicas deste trabalho, os agentes identificados não induziram processos patológicos relevantes, sinalizando uma relação hospedeiro x parasita simétrica. Porém, face ao frágil equilíbrio existente no ambiente da Mata Atlântica e a suscetibilidade dos anfíbios às mudanças dos ecossistemas, cremos que monitoramentos de longo prazo sejam necessários para que se possa acompanhar, com alguma margem de segurança, a evolução desta delicada relação

Amphibians suffered a severe decline of their populations in recent decades. Among the various causes of the declines are infectious diseases. The present work aims to study the occurrence of selected diseases that can affect these animals in the Brazilian Atlantic Forest, and thus contribute to a better understanding of the consequences of these diseases for the conservation of these animals. We collected 120 animals from the Biological Station of Boracéia and performed necropsy, histopathology, microbiology, parasitology and conventional PCR for Batrachochytrium dendrobatidis exams in most animals. We collected 33 different species belonging to seven different families. It was found at necropsy, endoparasites in 45.8% (55/120) of specimens examined and an ectoparasite in only one specimen. Of the total number of animals analyzed for Batrachochytrium dendrobatidis, 19.1% (22/115) were positive for this fungus. The necropsy and histopathological exams from the vast majority of animals studied did not show significant changes. The most affected systems were the digestive and integumentary followed by the lymphoid and urinary. The results shown in this work suggests that the infections agents did not induce relevant pathological processes in the specific conditions of this research. However, given the fragile balance of the Atlantic Forest and the susceptibility of amphibians to ecosystem change, we believe that long-term monitoring is needed to follow with some safety margin, the evolution of this delicate relationship