Reprodução ex situ de felinos silvestres e seus desafios / Challenges of ex situ reproduction in wild cats

A reprodução ex situ de felinos silvestres assegura a sobrevivência das espécies ameaçadas por meio do estabelecimento e manutenção de populações viáveis em cativeiro. O conhecimento da biologia reprodutiva básica é essencial para o desenvolvimento de planos de manejo reprodutivo (PMRs) eficientes, seja pela reprodução natural ou pela aplicação de técnicas de reprodução assistida (TRAs). Os PMRs visam garantir a representatividade das espécies quanto à variabilidade genética e demográfica baseada nos studbooks. Entretanto, o pareamento de animais selecionados pelos PMRs deve levar em conta, além de fatores genéticos e demográficos, fatores comportamentais e o fenótipo dos animais, uma vez que pode haver consequências negativas caso descendentes de gerações futuras sejam reintroduzidos na natureza. As TRAs estão cada vez mais sendo desenvolvidas para auxiliar na manutenção de populações geneticamente viáveis ex situ que possam contribuir geneticamente com populações in situ. A criopreservação de sêmen e a inseminação artificial (IA) são as TRAs utilizadas atualmente pelos PMR nacionais e internacionais, no entanto, são muitos os desafios para que as populações cativas se reproduzam de maneira adequada visando a manutenção de uma população viável que possa contribuir com populações de vida livre no futuro.(AU)

Reproductive management plans are essential to ensure that imperiled populations maintain adequate genetic and demographic variability and remain representative of the species as a whole. Basic reproductive biology knowledge is essential for the development of efficient reproductive management plans (PMPs), either through natural breeding or through assisted reproductive techniques (ARTs). The PMPs aim to ensure the representativeness of the species in terms of genetic and demographic variability based on studbooks. However, the specific animal pairings should be maintaining adequate genetic, behavioral and the phenotype of the animals, ensuring proper reintroduction of animals into the wild. ARTs have been explored as a means to enhance the conservation of endangered species, focused on maintaining genetic diversity through enhanced animal propagation. Semen cryopreservation and artificial insemination (AI) are used by national and international PMRs, however, there are many challenges for captive populations reproduction in order to maintain a viable population that can contribute for freeliving populations in the future.(AU)

Colheita de sêmen e inseminação artificial em onças-pintadas (Panthera onca) / Semen collection and artificial insemination in jaguars (Panthera onca)

A onça-pintada encontra-se classificada como "quase ameaçada" na lista vermelha de animais ameaçados da União Internacional para Conservação da Natureza (IUCN), com tendência ao declínio na América Latina, o que pode afetar o fluxo gênico elevando o risco de endogamia. Técnicas de reprodução assistida (TRAs) como colheita de sêmen e inseminação artificial (IA), são ferramentas que podem se tornar essenciais a manutenção da diversidade genética desses animais. A colheita de sêmen pode ser realizada por eletroejaculação (EEJ) ou colheita farmacológica (CF), sendo que podem ser aplicadas individualmente ou associadas, embora EEJ tenha se mostrado mais eficiente em inseminação artificial (IA) com sêmen a fresco. Para realização de IA a utilização de progestina oral (altrenogest), seguida da aplicação de gonadotropinas exógenas (Gonadotropina Coriônica equina-eCG e Hormônio Luteinizante suíno-pLH), tem se mostrado eficiente, promovendo ovulações consistentes. IA intratubárica (IA-IT) mostrou-se eficiente, tendo a vantagem de utilizar sêmen com baixo número de espermatozoides. O sucesso alcançado com o nascimento do primeiro filhote de Panthera onca utilizando TRAs se deve a vários fatores, dentre eles, a utilização de um novo protocolo hormonal ajustado à espécie; e a utilização da IA-IT, que possibilitou a utilização de sêmen com reduzido número de espermatozoides viáveis por inseminação.(AU)

The jaguar is classified as "near threatened" according International Union for Conservation of Nature red list, with a decreasing trend in the population of Latin America, increasing the risk of inbreeding. Assisted reproduction techniques (ARTs), such as semen collection and artificial insemination (AI), are tools that can become essential to maintain the genetic diversity of jaguars. Semen collection can be performed by electroejaculation (EEJ) or pharmacological collection (PC); and can be applied individually or associated, however EEJ was more efficient for artificial insemination (AI) with fresh semen. To perform Artificial Insemination (AI), oral progestin (altrenogest) followed exogenous gonadotropins (Gonadotropin Chorionic equine-eCG e Hormone Luteinizing porcine-pLH) application was efficient, promoting consistent ovulations. Similarly, laparoscopic oviductal insemination (IA-IT) was efficient, with the advantage to use low viable spermatozoa number by insemination. The success of jaguar cub birth using ARTs is due to several factors, among than, a new hormonal protocol adjusted to the species; and the use of IA-IT, which allowed the reduction in the number of sperm by insemination.(AU)

Técnicas alternativas para colheita de sêmen de cão / Alternative dog semen collection techniques

Métodos eficazes para a colheita de sêmen permitem avanços na inseminação artificial em cães domésticos e canídeos selvagens geneticamente valiosos, permitindo a manutenção de linhagens genéticas e possibilitando a propagação de material genético post-mortem, bem como, diminuindo os custos e os riscos de transporte de animais para reprodução. Dentre os métodos de colheita de sêmen utilizados em cães, podemos destacar os métodos ejaculatórios como a manipulação digital e a eletroejaculação; e os métodos não ejaculatórios, que compreendem aqueles que envolvem os espermatozóides coletados do epidídimo, em casos de óbito ou orquiectomia ou em animais submetidos a vasectomia. Mais recentemente a colheita farmacológica de sêmen foi descrita em cães como um método não ejaculatório eficiente. Essa nova metodologia de colheita de sêmen surge como mais uma alternativa para facilitar a colheita de sêmen em cães domésticos que não aceitam a manipulação digital e eliminar a necessidade da eletroejaculação em animais selvagens. No entanto, os protocolos anestésicos utilizados ainda apresentam alguns efeitos colaterais indesejáveis, indicando que novos protocolos, mais seguros para a colheita de sêmen via cateterismo uretral necessitam ser testados.

Effective methods for semen collection are determinant for artificial insemination advances in genetically valuable domestic dogs and wild canids, allowing the genetic maintenance and enabling the post-mortem genetic material use, as well as, reducing the animals transporting costs and risks for breeding. The semen collection methods used in canids are ejaculatory methods, such as digital manipulation in dogs and electroejaculation in wild canids; and non-ejaculatory methods, which include sperm collected from epididymis after death or vasectomy. More recently, pharmacological semen collection was described in dogs as an efficient non-ejaculatory method. This new semen collection methodology emerges as another alternative to facilitate semen collection in domestic dogs that do not accept digital manipulation and eliminate the electroejaculation in wild animals. However, side effects undesirable was observed indicating that new anesthetic protocols, safer for semen collection via urethral catheterization, need to be tested.

Influência de diferentes doses de butorfanol na anestesia com sevofluorano em papagaios-verdadeiros (Amazona aestiva) / Influence of different doses of butorphanol in anesthesia with sevoflurane in blue-fronted parrots (Amazona aestiva)

Background: Parrots frequently require veterinary medical care. To reduce their stress, it is necessary to use chemical restraint or anesthesia. The use of balanced anesthesia techniques such as combinations of inhaled and injectable drugs is recommended. However, there is a shortage of anesthetic and analgesic protocols and data on cardiovascular and respiratory variables in wild birds. The objective of the present study was to evaluate the analgesic, cardiovascular, and respiratory effects and the quality of anesthetic recovery in blue-front parrots (Amazona aestiva) anesthetized with sevoflurane in combination with various doses of butorphanol. Materials, Methods & Results: Twenty-four clinically healthy animals, based on their clinical and hematological results (hematocrit and total plasma protein), were divided into 3 groups: 1- sevofluoran alone (GS); 2- associated with butorphanol at 3 mg/kg (GB3), and 3- 6 mg/kg (GB6) doses administered via the intramuscular (IM) route; digital clamping was used as a nociceptive stimulus. Induction and anesthetic maintenance were performed with sevoflurane at 5 and 2.5 V%, respectively, administered through a calibrated vaporizer and an anesthetic system adequate for the weight of the animals that were kept under spontaneous ventilation. It took 15 min after induction for the expired sevoflurane concentration (EtSevo) to stabilize, after which one intramuscular treatment was applied. The digital clamping was continued as a supramaximal nociceptive stimulus; if it presented a positive response, EtSevo increased by 10%, and when the stimulus decreased by 20%, digital clamping was repeated every 15 min until a positive response to the stimulus was observed. Heart rate (HR) and rhythm, respiratory rate (f), systolic blood pressure (SBP), EtSevo, expired CO2 (EtCO2 ), and body temperature (T°C) were measured during digital clamping. At the end, anesthetic...

Coleta e criopreservação de células espermáticas do epidídimo de cervo dama (Dama dama): relato de caso / Fallow deer (Dama dama) epididymal sperm collection and cryopreservation: case report

O objetivo do presente relato foi avaliar a viabilidade da técnica de coleta de células espermáticas do epidídimo de um cervo dama (Dama dama) após orquiectomia e comparar sua capacidade de criopreservação utilizando dois diluidores comerciais diferentes, o Triladyl® e o Andromed®. Foram avaliados o volume testicular, a motilidade e vigor espermáticos e a morfologia das células espermáticas antes e após o processo de criopreservação. Ao se comparar os dois meios comerciais, pode-se constatar que a motilidade e vigor espermáticos foram melhores na alíquota congelada com Triladyl® (25% e 2) do que com Andromed® (10% e 1). Quanto a morfologia espermática os dois diluidores apresentaram valores semelhantes de defeitos totais (32.5% com Andromed® e 33% com Triladyl®, sendo a cabeça lanciforme o defeito predominante em ambos os casos). Diante desses resultados, a técnica de coleta de células espermáticas do epidídimo é viável para cervídeos Dama e mais estudos são necessários para se estabelecer o melhor meio diluidor para esta espécie criada em climas tropicais.(AU)

The aim of the present report was to evaluate the viability of epididymal sperm collection technique in a fallow deer (Dama dama) after orchiectomy and to compare its cryopreservation capacity using two different commercial extenders, Triladyl® and Andromed®. Thus, testicular volume, sperm motility and vigor, and sperm cell morphology were evaluated before and after the cryopreservation process. When comparing the two commercial media, sperm motility and vigor were better in the post-thawed aliquot extended with Triladyl® (25% and 2) than with Andromed® (10% and 1). Regarding sperm morphology, the two dilutors presented similar values of total defects (32.5% with Andromed® and 33% with Triladyl®, with the lanciform head being the predominant defect in both cases). Given these results, the epididymal sperm cell collection technique is viable for Dama cervids and further studies are needed to establish the best extender for this species raised under tropical conditions.(AU)

Coleta e criopreservação de células espermáticas do epidídimo de cervo dama (Dama dama): relato de caso / Fallow deer (Dama dama) epididymal sperm collection and cryopreservation: case report

O objetivo do presente relato foi avaliar a viabilidade da técnica de coleta de células espermáticas do epidídimo de um cervo dama (Dama dama) após orquiectomia e comparar sua capacidade de criopreservação utilizando dois diluidores comerciais diferentes, o Triladyl® e o Andromed®. Foram avaliados o volume testicular, a motilidade e vigor espermáticos e a morfologia das células espermáticas antes e após o processo de criopreservação. Ao se comparar os dois meios comerciais, pode-se constatar que a motilidade e vigor espermáticos foram melhores na alíquota congelada com Triladyl® (25% e 2) do que com Andromed® (10% e 1). Quanto a morfologia espermática os dois diluidores apresentaram valores semelhantes de defeitos totais (32.5% com Andromed® e 33% com Triladyl®, sendo a cabeça lanciforme o defeito predominante em ambos os casos). Diante desses resultados, a técnica de coleta de células espermáticas do epidídimo é viável para cervídeos Dama e mais estudos são necessários para se estabelecer o melhor meio diluidor para esta espécie criada em climas tropicais.

The aim of the present report was to evaluate the viability of epididymal sperm collection technique in a fallow deer (Dama dama) after orchiectomy and to compare its cryopreservation capacity using two different commercial extenders, Triladyl® and Andromed®. Thus, testicular volume, sperm motility and vigor, and sperm cell morphology were evaluated before and after the cryopreservation process. When comparing the two commercial media, sperm motility and vigor were better in the post-thawed aliquot extended with Triladyl® (25% and 2) than with Andromed® (10% and 1). Regarding sperm morphology, the two dilutors presented similar values of total defects (32.5% with Andromed® and 33% with Triladyl®, with the lanciform head being the predominant defect in both cases). Given these results, the epididymal sperm cell collection technique is viable for Dama cervids and further studies are needed to establish the best extender for this species raised under tropical conditions.

Detection of Toxoplasma gondii in a free-ranging giant anteater / Detecção de Toxoplasma gondii em tamanduá-bandeira de vida livre

ABSTRACT: Toxoplasmosis is caused by Toxoplasma gondii, an obligatory intracellular protozoan, which establishes acute and chronic infections in birds and mammals, including humans. This note reports, for the first time, the detection and sequencing of DNA from T. gondii in the peripheral blood of a young free range giant anteater (Myrmecophaga tridactyla). For the diagnosis, the following methods were used: polymerase chain reaction (PCR) and positive serology (1:800) by means of the modified agglutination test (MAT). Since this species may be consumed by humans and predated by wild felids, its importance is emphasized as a probable source of zoonotic infection, in addition to its possible participation in the infection enzootic cycle. Although, parasitemia has been confirmed in this specimen, it presented no clinical sign of infection.

RESUMO: A toxoplasmose é causada pelo Toxoplasma gondii, um protozoário intracelular obrigatório, que estabelece infecções agudas e crônicas em aves e mamíferos, incluindo humanos. Esta nota relata, pela primeira vez, a detecção e o sequenciamento do DNA de T. gondii em sangue periférico de um filhote de tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) de vida livre. Para o diagnóstico, os seguintes métodos foram utilizados: reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sorologia positiva (1:800) por meio de teste de aglutinação modificado (MAT). Por se tratar de uma espécie que pode ser consumida por humanos e predada por felídeos silvestres, sua importância é ressaltada como uma provável fonte de infecção zoonótica, além da sua possível participação no ciclo enzoótico de infecção. Embora a parasitemia tenha sido comprovada neste espécime, ele não apresentava sinais clínicos de infecção.

Different Dissociative Anesthesia Protocols For Coatis (Nasua Nasua)

This study evaluated the effects of various combinations of dissociative drugs, tranquilizers, and sedatives in four male coatis (Nasua nasua) with an average age and weight of 4.8 ± 1.3 years and 6.02 ± 0.56 kg, respectively. We studied six groups with different anesthetic protocols: CX (10 mg/kg ketamine-S and 2 mg/kg xylazine); CXA (10 mg/kg ketamine-S, 2 mg/kg xylazine, and 0.04 mg/kg atropine); CM (10 mg/kg ketamine-S and 0.5 mg/kg midazolam); CMAc (10 mg/kg ketamine-S, 0.5 mg/kg of midazolam, and 1 mg/kg acepromazine); C(20)M (20 mg/kg of ketamine-S and 0.5 mg/kg midazolam); and TZ (7 mg/kg of tiletamine and zolazepam), with a 30-day interval between the completion of each procedure. We evaluated heart rate (HR), respiratory rate (RR), saturation of oxyhemoglobin (SpO2), body temperature T (°C), and muscle relaxation, using a scoring system. There was no statistical difference for SpO2. T (°C) was progressively reduced over time in all groups (p< 0.0001). The groups CM, C(20)M, CMAc, and TZ demonstrated the greatest effect on HR and T (°C). With respect to respiratory rate reduction, groups CM and TZ showed similar results. The best degree of muscle relaxation was observed in groups CM and C(20)M. We concluded that the combination of 20 mg/kg ketamine and midazolam 0. 5 mg/kg (group C(20)M) is an option for dissociative anesthesia of coatis, producing smaller changes in T (°C) and HR, and promoting better muscular relaxation when compared to other combinations.

Different Dissociative Anesthesia Protocols For Coatis (Nasua Nasua)

This study evaluated the effects of various combinations of dissociative drugs, tranquilizers, and sedatives in four male coatis (Nasua nasua) with an average age and weight of 4.8 ± 1.3 years and 6.02 ± 0.56 kg, respectively. We studied six groups with different anesthetic protocols: CX (10 mg/kg ketamine-S and 2 mg/kg xylazine); CXA (10 mg/kg ketamine-S, 2 mg/kg xylazine, and 0.04 mg/kg atropine); CM (10 mg/kg ketamine-S and 0.5 mg/kg midazolam); CMAc (10 mg/kg ketamine-S, 0.5 mg/kg of midazolam, and 1 mg/kg acepromazine); C(20)M (20 mg/kg of ketamine-S and 0.5 mg/kg midazolam); and TZ (7 mg/kg of tiletamine and zolazepam), with a 30-day interval between the completion of each procedure. We evaluated heart rate (HR), respiratory rate (RR), saturation of oxyhemoglobin (SpO2), body temperature T (°C), and muscle relaxation, using a scoring system. There was no statistical difference for SpO2. T (°C) was progressively reduced over time in all groups (p< 0.0001). The groups CM, C(20)M, CMAc, and TZ demonstrated the greatest effect on HR and T (°C). With respect to respiratory rate reduction, groups CM and TZ showed similar results. The best degree of muscle relaxation was observed in groups CM and C(20)M. We concluded that the combination of 20 mg/kg ketamine and midazolam 0. 5 mg/kg (group C(20)M) is an option for dissociative anesthesia of coatis, producing smaller changes in T (°C) and HR, and promoting better muscular relaxation when compared to other combinations.(AU)

Detection of Toxoplasma gondii in a free-ranging giant anteater / Detecção de Toxoplasma gondii em tamanduá-bandeira de vida livre

ABSTRACT: Toxoplasmosis is caused by Toxoplasma gondii, an obligatory intracellular protozoan, which establishes acute and chronic infections in birds and mammals, including humans. This note reports, for the first time, the detection and sequencing of DNA from T. gondii in the peripheral blood of a young free range giant anteater (Myrmecophaga tridactyla). For the diagnosis, the following methods were used: polymerase chain reaction (PCR) and positive serology (1:800) by means of the modified agglutination test (MAT). Since this species may be consumed by humans and predated by wild felids, its importance is emphasized as a probable source of zoonotic infection, in addition to its possible participation in the infection enzootic cycle. Although, parasitemia has been confirmed in this specimen, it presented no clinical sign of infection.(AU)

RESUMO: A toxoplasmose é causada pelo Toxoplasma gondii, um protozoário intracelular obrigatório, que estabelece infecções agudas e crônicas em aves e mamíferos, incluindo humanos. Esta nota relata, pela primeira vez, a detecção e o sequenciamento do DNA de T. gondii em sangue periférico de um filhote de tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) de vida livre. Para o diagnóstico, os seguintes métodos foram utilizados: reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sorologia positiva (1:800) por meio de teste de aglutinação modificado (MAT). Por se tratar de uma espécie que pode ser consumida por humanos e predada por felídeos silvestres, sua importância é ressaltada como uma provável fonte de infecção zoonótica, além da sua possível participação no ciclo enzoótico de infecção. Embora a parasitemia tenha sido comprovada neste espécime, ele não apresentava sinais clínicos de infecção.(AU)

Detection of resistance genes and evaluation of water quality at zoo lakes in Brazil / Detecção de genes de resistência e qualidade da água dos lagos de zoológico, Brasil

The investigation of the presence of antibiotic-resistance genes in aquatic environments is important to identify possible reservoirs of resistant microorganisms that could be a threat to human and animal health. The aims of this study were to analyze the presence of genes conferring resistance to antimicrobials in the aquatic environment and to assess the quality of water in zoo lakes. Results showed a pattern of genes conferring resistance to multiple antibiotics and turbidity, which was expected to be due to the presence of contaminants. The most frequent genes were sul I and sul II (sulfonamides), which were present in all the lakes, followed by genes encoding -lactamases such as blaPSE I (77.8%) and ampC (66.7%). However, tet(K), tet(M), and ermC genes were not detected. There was a positive correlation between the number of Enterobacteriaceae and resistance genes. In conclusion, the source of contamination of all lakes was probably the neighboring urban sewage or wastewater that increased the frequency of the total coliforms and resistance genes, which in turn posed a threat to the conservation of the animal life inhabiting the zoo.(AU)

A investigação da presença de genes de resistência a antibióticos (ARGs) em ambientes aquáticos é importante para identificação de possíveis reservatórios de microrganismos resistentes que podem ser uma ameaça para a saúde humana e animal. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de genes de resistência a antimicrobianos e a qualidade da água de zoológico. Os resultados mostraram um padrão de genes de resistência a múltiplos antibióticos e turbidez da água, devido à presença de contaminantes. Os genes mais frequentes foram sul I e sul II (sulfonamidas) que estão presentes em todos os lagos, e -lactamases como blaPSE I (77,8%) e ampC (66,7%). Os genes tet(K), tet(M) e ermC não foram detectados. Houve correlação entre o número de Enterobacteriaceae e aumento na detecção de genes de resistência. As fontes de contaminação dos lagos são, provavelmente, esgoto urbano vizinho ou de águas residuais que aumentam a presença de coliformes totais e a frequência dos genes de resistência, que podem ser um risco para vida de animais silvestres em cativeiro.(AU)

Giant anteater's (Myrmecophaga tridactyla) semen analysis and eosin-nigrosin staining standardization / Análise seminal e padronização da coloração eosina-nigrosina em tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla)

Studies involving the reproductive aspects of the giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) can be contributed to the preservation of this specie. The aim of these study was accessed the reproductive physiology and describe physical and morphological giant anteaters sperm. We conducted three reproductive examination in two anteater maintained at the Federal University of Mato Grosso Zoo, Cuiaba/MT/Brazil. The method of semen collection used was electroejaculation. The volume average obtained was 2.62 ± 1.67 mL, the motility average was 50 ± 20% and the vigor was 2.17 ± 0.82. The pH mean was 7.29 ± 0.40. The sperm average concentration was 33.33 ± 12.52 x 106 sperm/mL. According sperm pathology we found 16.5% of larger defects, 20.5% of minor defects, amounting to 37 ± 4.2% of total defects. The preliminary tests of standardization of eosin-nigrosin staining proved to be effective to evaluate the integrity of plasma membrane of sperm in this species, in this research was 65 ± 7,77%.(AU)

Os estudos que envolvem os aspectos reprodutivos do tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) podem contribuir para a preservação da espécie auxiliando no desenvolvimento de um manejo reprodutivo mais eficiente em cativeiro. O presente estudo teve como objetivo obter uma melhor compreensão da fisiologia reprodutiva por meio da caracterização física e morfológica do sêmen de tamanduá-bandeira. Foram realizados três exames reprodutivos em dois tamanduás-bandeira mantidos no Zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Cuiabá/MT/Brasil. O método de coleta do sêmen foi a eletroejaculação. O volume médio obtido foi de 2,62 ± 1,67 mL, com motilidade média de 50 ± 20% e vigor de 2,17 ± 0,82. O pH médio foi de 7,29 ± 0,40. Quanto à patologia espermática foram encontrados 16,5% de defeitos maiores, 20,5 % de defeitos menores, perfazendo 37 ± 4,2% de defeitos totais. Os testes preliminares de padronização da coloração eosina-nigrosina mostraram-se eficazes para avaliar a integridade da membrana plasmática de espermatozoides nesta espécie, que nesta pesquisa foi de 65 ± 7,77%.(AU)

Validação de conjuntos diagnósticos comerciais para dosagem sérica de progesterona e estradiol em jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-matopequeno (Leopardus tigrinus) / Progesterone and estradiol commercial kits validation in serum of ocelots (Leopardus pardalis) and tigrina (Leopardus tigrinus)

Este estudo teve como objetivo validar os conjuntos diagnósticos m comerciais DPC (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA), em fase sólida, para dosagem de progesterona e DSL (Diagnostic System Laboratories INC/USA), em fase líquida, para dosagem de estradiol, por radioimunoensaio, em soro de Leopardus pardalis (n=5)e Leopardus tigrinus (n=4), antes (15-30 dias) e após (24-28 horas) tratamento com gonadotropinas exógenas (hCG/ Novormon® eeCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® e pLH/Lutropin-V®). A concentração sérica para Leopardus pardalis variou 0,005 a 0,151ng/ml para estradiol e 0,15-37,22ng/ml para progesterona. A concentração sérica para Leopardus tigrinus variou 0,012-0,147ng/ml para estradiol e 0,06-34,09ng/ml para progesterona. A sensibilidade mínima detectada foi 0,004 ng/ml para progesterona e 0,00014ng/ml para estradiol. Para progesterona o coeficiente intra-ensaio baixo foi 2,58% e alto6,36%, já o coeficiente inter-ensaio baixo foi 0,67% e alto 5,55%. Para o estradiol o coeficiente intra-ensaio baixo foi 0,69% e alto 4,15%,sendo o coeficiente inter-ensaio baixo 1,40% e alto 3,00%. Paralelismo foi encontrado para progesterona e conjunto comercial DPC com r = 0,96 para Leopardus pardalis e r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Para estradiol em conjunto comercial DSL paralelismo foi encontrado com r = 0,98 para Leopardus pardalis e com r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Com estes resultados podemos concluir que o conjunto diagnóstico comercial DPC para dosagem de progesterona e DSL para dosagem de estradiol foram validados para utilização em soro de Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus, podendo ser utilizado como ferramenta no manejo reprodutivo destas espécies visando à conservação.(AU)

DPC commercial kit (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA) and DSL commercial kit (Diagnostic System Laboratories INC/USA) were used for progesterone and estradiol radioimmunoassay validation in serum of two endangered Brazilian felids: Leopardus pardalis (n=5) and Leopardus tigrinus (n=4) before (15-30 days) and after (24-28 hours) exogenous gonadotrophins treatment(hCG/ Novormon® and eCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® andpLH/Lutropin-V®). Variation of estradiol concentration was 0.005 -0.151 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus pardalis. Variation of estradiol concentration was 0.012 -0.147 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus tigrinus. Minimum sensibility detected for progesterone was 0.004 ng/ml and for estradiol was 0.00014 ng/ml. Progesterone intra-assay coefficient was 2.58% and 6.36% and inter-assay was 0.67% and 5.55%. Estradiol intra-assay coefficient was 0.69% and 4.15%,and inter-assay was 1.40% and 3.00%. Parallelism was used for kits validation. Progesterone and DPC commercial kit Parallelism wasr = 0.96 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. Estradiol and DSL commercial kit Parallelism was r = 0.98 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. In conclusion, these results showed that DPC commercial kit for serum progesterone dosages and DSL commercial kit for serum estradiol dosages can be used for Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus. These findings are potentially valuable for the reproductive management and conservation of endangered felid populations.(AU)

Análise citogenética de oócitos de jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) coletados após estimulação ovariana / Cytogenetic analyses of ocelot (Leopardus pardalis) and tigrinus (Leopardus tigrinus) oocytes collected after ovarian stimulation

Este estudo representa a primeira avaliação da maturação nuclear de oócitos por análise citogenética realizada em duas espécies de felídeos brasileiros ameaçados de extinção: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4).Os animais foram submetidos à estimulação ovariana alternada come CG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo-laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Dos 33 oócitos de jaguatirica avaliados 12% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior e dos 11 oócitos de gato-do-mato-pequeno avaliados 36% (n=4)apresentaram cromossomos condensados em seu interior, no entanto,nenhum oócito encontrava-se em metáfase II. Avaliação morfológica dos oócitos mostrou as mesmas características encontradas em outros mamíferos. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa(p>0,05) no número total de estruturas ovarianas (folículos e corpos lúteos recentes) observadas em estimulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento(5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (2,6±0,7eCG/hCG; 2,0±0,5 pFSH/pLH) para L. tigrinus. Apesar das limitações deste experimento e do número reduzido de oócitos avaliados podemos sugerir que a aspiração folicular após estimulação ovariana com eCG/hCG e pFSH/pLH alternadamente resulta na recuperação de oócitos imaturos, que necessitam de cultivo em meios específicos para atingir o estágio de Metáfase II.(AU)

This study represents the first assessment of oocytes nuclear maturation by cytogenetical analysis in two endangered Brazilian felids:L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4). Females were treated 6 times with alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of 4 months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the morphological and cytogenetical analysis in order to evaluate the meiotic cycle and maturation (metaphase II), respectively. In 33 ocelots oocytes observed 12% (n=4) showed condensed chromosomes and in 11 tigrinus oocytes observed 36% (n=4) showed condensed chromosomes. However no oocytes in metaphase II were observed.O ocytes morphological evaluation showed the same characteristics were observed in others mammals. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences (p>0.05)were found regarding to the number of total ovarian structures (total follicles and CL) during successive gonadotropin treatments. There were no differences (p>0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 eCG/hCG and 7.9 ± 0.9 pFSH/pLH) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 eCG/hCG and 2.0 ± 0.5 pFSH/pLH).With these results we can suggest that follicular aspiration after ovarian stimulation with exogenous gonadotrophins results in immature oocytes, needing in vitro culture in specific mediums for metaphase II stage was observed.(AU)

Frozen Jaguar (Panthera onca) sperm capacitation and ability to penetrate zona free hamster oocytes / Capacitação espermática de sêmem congelado de onça pintada (Panthera onca) e ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida

Assisted reproductive technologies in endangered species, such as artificial insemination, in vitro fertilization and embryo transfer, can be viewed as one potential approach for safeguarding species. Toward this aim, the objective of this study was to evaluate the fertility of frozen jaguar (Panthera onca) sperm and Tyrod's Talp PVA capacitation medium using the hamster zona free oocyte penetration assay. Ejaculates were collected from nine animals using electroejaculation and cryopreserved. Sperm capacitation was performed by swim-up technique using Tyrod's Talp PVA medium at room temperature. Penetration was considered when the spermatozoa head decondensation was visualized within the oocyte. This assay showed 15.4 % penetrations (350/2275 oocytes). Results of this study showed high sperm abnormalities, low sperm quality after cryopreservation, and low percentage of penetrations. However, the penetration results showed lhat the cryopreserved jaguar's semen can be used for artificial insemination, in vitro fertilization and intra cytoplasmatic sperm injection, supporting the semen bank creation for this specie.(AU)

Biotecnologias reprodutivas aplicadas a espécies selvagens, como inseminação artificial, fertilização in vitro e transferência de embriões, são vistas como um potencial caminho para proteção das espécies ameaçadas de extinção. Devido a isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a fertilidade do sêmen congelado de onças pintadas (Panthera onca) e o meio de capacitação espermática usando o ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Ejaculados de nove animais foram coletados por eletroejaculação e criopreservados. Para determinar a capacitação espermática foi utilizada a técnica swin-up com meio Tyrods Talp PVA a temperatura ambiente. No ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida foram considerados como oócitos penetrados aqueles que apresentaram em seu interior a cabeça do espermatozóide descondensada. O ensaio foi realizado em um total de 2275 oócitos, dos quais 350 apresentaram em seu interior a cabeça do espermatozóide descondensada, perfazendo um total de 15.4% de penetração. Os resultados deste estudo demonstraram alto índice de anormalidades espermáticas, baixa qualidade do sêmen e baixa porcentagem de penetrações. Entretanto, os resultados de penetração espermática demonstraram que sêmen congelado de onça pintada poderá ser utilizado para inseminação artificial, fertilização in vitro e injeção intracitoplasmática dando suporte para a criação de um banco de sêmen para esta espécie.(AU)

Comparação de método para análise de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas (Leopardus pardalis) submetidas a tratamento hormonal e vídeo-laparoscopia / Comparison of methods fecal glucocorticoids metabolite analyses in ocelots (Leopardus pardalis) submited to hormonal treatment and video-laparoscopy

Dois metódos de extração de metabólitos fecais32,33 e dois conjuntos comerciais (“ImmuChem Doubly Antibody Corticosterone 125I RIA”-ICN Biomedicals e “Coat-a-count Cortisol 125I RIE” - DPC) foram utilizados na mensuração dos metabólitos de glicocorticóides (cortisole corticosterona) em amostras de fezes de jaguatiricas (Leopardus pardalis)(n=3), antes e após tratamento hormonal e procedimentos de vídeo-laparoscopia. O objetivo desse estudo foi comparar e validar fisiologicamente os diferentes protocolos de extração e diferentes conjuntos comerciais na mensuração hormonal. Não houve diferença significativa com relação ao método de extração dos metabólitos. O conjunto comercial ICN Biomedicals provou ser melhor na detecção de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas.(AU)

The objective of this study was to compare two different fecal metabolites extraction protocols32,33 and two commercial kits used to analyse fecal glucocorticoids (cortisol and corticosterone) in ocelots (Leopardus pardalis)submitted to hormonal treatment and video-laparoscopy procedure. Based on hormonal analyses, both extraction protocols exhibited similar performance. One commercial kit (ICN Biomedicals) had better results than another (DPC) on glucocorticoids metabolites evaluation.(AU)

Avaliação das características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro, antes e após vasectomia bilateral / Semen characteristics evaluation in capuchin monkey (Cebus apella) incaptivity, before and after bilateral vasectomy

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da vasectomia bilateral nas características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro. Foram utilizados seis animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral dos animais. A primeira colheita foi realizada 15 dias antes da vasectomia e as colheitas posteriores foram realizadas com intervalo de 30 dias até o momento da eliminação completa de espermatozóides do líquido seminal. Imediatamente após a ejaculação, o sêmen foi avaliado quanto suas características físicas, iniciando-se pelo volume (ml) da fração líquida e medição do pH. Posteriormente foram avaliados motilidade (%) e vigor espermático (0-5). Uma fração do sêmen foi diluída em formol salina 10%, para posterior avaliação da concentração espermática (cel/ml) e das características morfológicas (%). A integridade do acrossoma foi avaliada apenas na primeira colheita e a concentração espermática foi avaliada em apenas quatro animais na colheita antes da vasectomia devido ao fato de não haver quantidade suficiente de sêmen. Na primeira colheita após a vasectomia, todos os animais apresentaram espermatozóides com motilidade e vigor iguais a zero. No entanto, a concentração espermática pode ser avaliada até a segunda colheita pós-vasectomia, apresentando as Médias/EP 2.8±1.3 x 10 elevado a 6ª /ml antes da vasectomia e 4.7±1.6 e 0.8±0.7 x 10 elevado a 6ª /ml, após a vasectomia, respectivamente. Apenas na terceira colheita a média da concentração espermática foi igual a zero. Os resultados sugerem que machos vasectomizados devam voltar ao grupo, sem risco de fecundação acidental, após três meses da realização da vasectomia.(AU)

The effects of bilateral vasectomy on the seminal characteristics were assessed in capuchin monkeys (Cebus apella). Six adult male monkeys were housed separately in outdoor pens at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Semen samples were collected by electroejaculation, after anesthetized the animals, 15 days before and once a month from 1 to 5 months after vasectomy. Immediately after the ejaculation, semen was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigour (0-5), concentration (cells / ml), defects (%) and percentage of intact acrosoma (%). The percentage of intact acrossoma was analyzed only in the collection before the vasectomy and the concentration was done in only four males in these collection because have no semen enough for all analyses. One month after the vasectomy ejaculated spermatozoa were non-motilite and non-vigour in all vasectomized males. In addition the Mean/SEM of cells/ml before the vasectomy was 2.8±1.3 x10 involution 6ª /ml and after two months of the vasectomy was 4.7±1.6 x10 involution 6ª/ml, 0.8±0.7 x106/ml,respectively. Only after the thirty month the number of cells/ml was zero. Our results suggest that the vasectomized males may be back to the group, without risks of accidental fecundating, only 3 months after vasectomy.(AU)

O efeito das enzimas hialuronidase e tripsina na liquefação do sêmen de macacos pregos (Cebus apella) / The effect of hyaluronidase and trypsin ensymes on liquefaction of semen in capuchin monkey (Cebus apella)

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apeiia), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p > 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p < 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p > 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo.(AU)

The effect of the enzymes hyaluronidase and trypsin were recorded on the motility, vigor and acrosome integrity in the semen of capuchin monkey (Cebus apella). The animals (n=6) were maintained at Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Under anesthesia semen samples were collected by electroejaculation. Immediately after the ejaculation, the semen liquid fraction was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigor (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosome (%). The coagulated fraction was treated with a solution of hyaluronidase or trypsin, 1mg/ml in commercial medium (199-Nutricel, Campinas/SP, Brazil) in a proportion of 1:4 and the samples were examined after 5 and 15 minutes. The Student T Test (95%) was used to compare the treatments. There was no significant difference in the motility, vigor or acrossome integrity (p > 0.05) between coagulated fraction diluted either in trypsin or in hyaluronidase, after 5 or 15 minutes. However, there was significant difference in motility and vigor between liquid and coagulated fraction, after 15 minutes, for both treatments (p<0.05), but there were no difference in acrosome integrity (p > 0.05). In conclusion, there were no apparent effects in the coagulum for both treatments regarding motility, vigor and acrosome integrity. There were significant differences between liquid and coagulated fractions regarding motility and vigor, but not for acrosome integrity. In both enzyme treatments there were no complete dissolution of the coagulum.(AU)

Citologia aspirativa por agulha fina (CAAF), em testículo de onça pintada (Panthera onca), utilizada como ferramenta no diagnóstico de infertilidade / Testicular fine needle aspiration cytology as a diagnostic tool in jaguar (Panthera onca) infertility

Técnicas de biópsia, caracterizadas pela remoção de segmentos de órgãos e tecidos para análise histopatológica, não são indicadas no auxílio diagnóstico de alterações testiculares para animais ameaçados de extinção, por não serem totalmente isentas de riscos. Neste sentido, é de grande interesse que se desenvolvam técnicas de biópsia testicular cada vez mais seguras e com o mínimo de conseqüências negativas. Com este intuito três onças pintadas (Panthera onca) foram submetidas a exames de Citologia Aspirativa por Agulha Fina (CAAF). Amostras foram obtidas através da punção aspirativa dos testículos, esfregaços foram confeccionados, corados com Panótico e analisados sob Microscopia Optica. Simultaneamente foram realizadas coletas de sêmen para avaliação do volume, pH, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto à avaliação espermática, os animais apresentaram valores semelhantes aos encontrados na literatura quanto ao volume, pH, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto a concentração espermática os animais apresentaram valores abaixo dos encontrados na literatura. Nos exames de CAAF, todas as gerações de células germinativas foram identificadas, indicando espermatogênese normal em todos os animais, com exceção das espermátides finais duplas que ainda não foram relatadas como achados em punções testiculares de outras espécies, o que vem confirmar a elevada porcentagem de células teratológicas encontradas nesses animais. Desta forma, podemos concluir que a CAAF testicular é um método diagnóstico auxiliar importante na detecção de alterações testiculares em casos de sub ou infertilidade, podendo ser utilizados na rotina de investigação do trato reprodutivo masculino, quando o exame histopatológico, por ser um método altamente invasivo, é desaconselhável(AU)

Biotecnologias da reprodução utilizadas como ferramentas auxiliares no manejo e conservação de duas espécies de felinos selvagens: Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus / Reproductive biotechnology as an important tool in the management and conservation of wild cats: Leopardus pardalis and Leopardus tigrinus

Este estudo representa a primeira avaliação ovariana, imunológica e hormonal realizada em duas espécies de felinos brasileiros ameaçados: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4), antes e após 4 a 6 tratamentos alternados com as gonadotrofinas exógenas eCG/hCG e pFSH/pLH. Os animais foram submetidos a superovulação alternada com eCG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Avaliação ultra-estrutural por microscopia eletrônica de transmissão e varredura foi realizada para caracterização da morfologia dos oócitos. Antes e após cada intervenção sangue foi colhido e utilizado em análises hormonais séricas (progesterona e estradiol) por RIE e pesquisa de anticorpos para gonadotrofinas exógenas por ELISA. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa (p>0,05) no número total de estruturas ovarianas observadas em superovulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento (5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (eCG/hCG 2,6±0,7; pFSH/pLH 2,0±0,5) para L. tigrinus. Embora L. pardalis tenham apresentado maior número de estruturas ovarianas por estimulação que L. tigrinus (p<0,05), a porcentagem de oócitos maduros em relação aos oócitos totais não diferiu, indicando que a metodologia utilizada foi eficiente. L. pardalis apresentaram maior número de oócitos totais e maduros nos tratamentos com pFSH/pLH (p<0,05), sendo que em L. tigrinus ambos tratamentos se comportaram de maneira semelhante (p>0,05). Não foi possível a caracterização dos estágios do ciclo meiótico pela avaliação da configuração cromossômica nos oócitos, sendo que nenhum oócito apresentou-se em metáfase II. Ultraestruturalmente os oócitos apresentaram características semelhantes aos observados em mamíferos de maneira geral. Dosagens hormonais séricas demonstraram um aumento de estradiol após as superovulações. Elevações de progesterona foram observadas em alguns momentos pré e pós superovulações. Embora alguns animais tenham demonstrado desenvolvimento de títulos para imunoglobulinas anti-gonadotrofinas exógenas, essa resposta imune humoral não parece interferir com a indução da atividade ovariana produzida pela superovulação, já que os animais responderam bem aos tratamentos alternados. Com estes resultados podemos concluir que essas espécies podem ser manejadas intensivamente usando tratamentos alternados com gonadotrofinas exógenas para procedimentos de reprodução assistida sem comprometer a resposta ovariana a esses hormônios

This study represents the first assessment of ovarian, immunological and hormonal responses of two endangered Brazilian felids: L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4), treated with two exogenous gonadotropin regimens eCG/hCG and pFSH/pLH. Females were treated with four to six times alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of four months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the cytogenetical analysis and to the electron microscopy in order to evaluate the maturation (metaphase II) and the morphological and ultrastructural status, respectively. Blood samples were collected before each treatment and during the laparoscopy in order to measure progesterone and estradiol by RIA and to evaluate the immunological response to the exogenous gonadotropins by ELISA. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences were found regarding to the number of total ovarian structures (p>0.05) during successive gonadotropin treatments. When comparing the eCG/hCG and the pFSH/pLH treatments, there were no differences (p>0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 and 7.9 ± 0.9, respectively) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 and 2.0 ± 0.5, respectively). Despite the fact that the L. pardalis showed a higher number of follicles and CLs per stimulation (p<0.05) when compared to the L. tigrinus, no differences were found when analyzing the percentage of mature oocytes (p>0.05). Within species, both gonadotropin regimens were equally effective (p>0.05) to induce the follicular growth. No decreases (p>0.05) on the total number of ovarian structures and on the oocyte maturation percentages were observed between the sequential stimulations, but. L. pardalis showed a higher number of mature and total oocytes when treated with pFSH/pLH (p<0.05). L. Tigrinus didnt show any differences regarding to the number of total and mature oocytes (p>0.05) when comparing both gonadotropin regimens. No oocytes in metaphase II were observed in the cytogenetic analyses. Oocytes histological evaluation showed that morphological characteristics were the same observed in others mammals. Hormonal analyses showed increased estradiol levels after superovulations. Higher levels of progesterone were observed before and after superovulations. Although some of these cats do demonstrate the development of anti-gonadotropin immunoglobulin titers, these humoral immune responses do not appear to interfere with gonadotropininduced ovarian stimulation. In this study, animals treated repeatedly with alternating regimens of eCG/hCG and pFSH/pLH showed no decrease in total ovarian structures after four to six successive treatments. These findings are potentially valuable for the ongoing efforts to develop and apply assisted reproductive technologies to the management and conservation of endangered felid populations